MORFOLOGÍA COLONIAL Y

MICROSCÓPICA DE
MICROORGANISMOS

Colonia Microbiana: son individuos de la misma especie que provienen de una misma célula.
Aislado de colonias: Es cuando podemos distinguir entre colonias bien aisladas entre sí para poder describir su
morfología.
 Descripción Morfológica Colonial
Tamaño: Milímetros
Color: Blancas, rosas, rojas, incoloras.
Forma: puntiforme, circular, filamentosa.
Bordes: entero o irregular, lobulados, filamentosos.
Elevación: plana, elevada, convexa, pulvinada,
umbilicante.
Superficie: Lisa rugosa o granular
Aspecto: húmedo o seco
Luz reflejada: brillante o mate
Luz transmitida: Transparente, translúcida u opaca
Producción de pigmento
Consistencia: dura, o suave (butirosa, mucoide o
friable)

LUZ TRANSMITIDA ( observar a través de la colonia) Opaca: no permite el paso de luz Traslúcida: Deja pasar
la luz sin permitir la completa visibilidad de los objetos observados a través de la colonia. Transparente: Deja
pasar la luz permitiendo ver claramente los objetos observados a través de la colonia.
 Cultivo puro
 Es para la caracterización e identificación correcta de microorganismos capaz de causar una infección en el
hombre , animales o plantas, o bien para producción de vacunas , sueros, antibióticos, hormonas, enzima,
colorantes o productos de interés en la industria alimentaria como vinos, queso, pan, cerveza.
 Características de actinomicetos
 Pertenecen al grupo de las bacterias Gran positivas. Poseen un alto contenido de
Guanina y citosina en su genoma.
 Actinos: proyecciones radiales y mikes hongo.
 Las colonias de este grupo bacteriano son secas, duras, mate lisas o bien
ornamentadas, hundidas en el medio de cultivo e hidrofóbicas. Algunas son
productoras de pigmentos que son excretados al medio de cultivo.
Características coloniales de los
micoplasmas
 Son un grupo de bacterias que carecen de micoplasma.
 Los micoplasmas son protoplastos de vida libre que disponen de membrana
citoplasmáticas muy resistentes (poseen esteroles) o bien viven en medios
protegidos osmóticamente.
 Cuando crecen en agar estos microorganismos tienden a incrustarse en el medio y
las colonias adoptan un aspecto característico de huevo frito. Debido a la
formación de un núcleo denso, que penetra en el agar, rodeado de una área
circular de dispersión, de color menos intenso.
Características coloniales de
Mixobacterias
 Estas bacterias son Gram negativas y aerobias, caracterizadas por tener movilidad
por deslizamiento, tener un ciclo vital complejo con producción de cuerpos
fructíferos y formar mixosporas.
 Cuando tiene fuente nutrientes, estas bacterias migran a lo largo de la superficie
sólida alimentándose y dejando tras sí un rastro mucoide. Durante esta fase las
células suelen constituir un grupo, y se mueven de manera coordinan. Algunas se
congregan para producir una lámina de células que se desplazan de forma rítmica
y generan ondas. ]
cuando se agota si aporte de nutrientes, las Mixobacterias se reúnen y forman un
cuerpo fructífero.
 Bacterias que producen swarming
 Hay bacterias móviles que forman colonias que crecen invadiendo toda la caja Petri.
 Este tipo de crecimiento se llama swarming es característico de algunos géneros de Proteus.
 Las células del extremo se mueven más rápido que las del centro.se mueven en masa una corta
distancia alejándose de la colonia y luego experimentan una disminución de la movilidad, se
detienen y se dividen .Como resultado la colonia madura tiene aspecto de discos concéntricos con
una alternancia de altas y bajas concentraciones de células.
 Morfología microscópica de las bacterias
 A la forma de una célula se le llama morfología celular.
 Las bacterias poseen una considerable variedad en su forma, agrupación y tamaño.
 La mayoría de ellas exhiben tres formas generales: cocos, bacilos y espirilos.
 Si la célula es esférica se denomina cocos.
 A las células cilíndricas se le denominan bacilos y se observan con extremos diversos ( curvos,
bulboso, rectos, ahusados, bifurcados).
 Los cocobacilos son bacilos cortos y regordetes.
 Los bacilos ligeramente curvos se llaman vibrios.
 Las bacterias que tienen la forma de un cilindro en forma de espiral rígida se llaman espirilos
y las que tienen una forma mas flexible y se asemejan a un resorte se llaman espiroquetas.
 También es posible observar bacterias triangulares, cuadradas en forma de estrella de David.
 Agrupación de bacterias
 Las bacterias pueden existir como células individuales, pero también puedes estar asociadas en
agrupaciones que podemos identificar.
 Los cocos pueden crecer como células aisladas o bien agruparse en pares dando lugar a los
Diplococos Neisseria. Cuando las células permanecen adheridas después de dividirse en un
plano, se forman largas cadenas de cocos llamadas estreptococos: este modelo se observa en los
géneros de Streptococcus, Enterococcus y Lactococus
 Las bacterias del género Staphylococcus se dividen en planos aleatorios para generar
agrupaciones irregulares en forma de racimos de uvas llamas estafilococos. Las divisiones en dos
o tres planos pueden producir grupos simétricos de cocos. Los miembros del género Micrococcus
a menudo se dividen a menudo en dos planos para formar grupos cuadrados de cuatro células
denominadas tétradas. En el género Sarcina, los cocos se dividen en tres planos, formando
paquetes cúbicos de ocho células denominados precisamente sarcinas.
 Agrupación de las Bacterias
 Aunque muchos bacilos aparecen aislados, pueden permanecer juntos después de dividirse para
formar pares constituyendo los diplobacilos o cadenas de distinta longitud llamados
estreptobacilos. Algunos se agrupan formando una especie de valla que se describe como
empalizada y otros mas toman agrupaciones irregulares conocidas como letras chinas.
 Pleomorfismo
 Es muy común que células de la misma especie muestren ligeras variaciones en forma y tamaño.
Este fenómeno se denomina Pleomorfismo y se debe a variaciones individuales en la estructura
de la pared celular por diferencias nutricionales o hereditarias. Corynebacterium diphteriae es un
bacilo pero en cultivo muestra una amplia variación en su forma observándose curvo,
filamentoso, cocoide.
 El Pleomorfismo alcanza su punto extremo con los micoplasmas que no poseen pared celular y
muestran por lo tanto una gran versatilidad en su forma.
 Tamaño de las bacterias

Las bacterias varian de tamaño como de forma. Las más pequeñas son del género
Mycoplasma miden aproximadamente 0.3 micras. Hay bacterias mas pequeñas como
nanobacterias 0.2-0.0.5 micras.
E. coli es de tamaño mediano mide 1.0 a 1.5 micras de ancho por 2-6 micras de largo.
 Tinción

 Solo se utiliza un solo colorante, se cubre el frotis previamente fijado al calor, con
un colorante durante el tiempo adecuado, se lava el exceso de colorante con agua
y se deja secar al aire. La tinción simple se emplea con frecuencia para
determinar.
 El tamaño
 La forma
 La agrupación
 La presencia de esporas
TINCIONES DIFERENCIALES

 Estas tinciones diferenciales clasifican a las bacterias en grupos distintos según

sus propiedades tintoriales.
 Las tinciones diferenciales mas usadas son la tinción de Gram o de Zielhl-
Neelsen.
La tinción de Gram es un método diferencial por que divide a las bacterias en dos
grandes grupos: Gram positivas (+) y Gram negativas (-).
Tinción de Gram
 El frotis se cubre con colorante básico cristal violeta llamado colorante primario. Se deja que
actúe por un minuto, y se enjuaga el exceso de colorante con agua corriente, se adiciona lugol
que es una solución yodada que actúa como mordente. Esto es el Yodo aumenta la interacción
entre la célula y el colorante, de forma que la célula se tiñe intensamente. Luego se decolora el
frotis lavándolo con una mezcla de etanol-acetona. Este es el paso crítico de la tinción. Ya que
las bacterias G+ retiene el cristal violeta y las G- lo pierden y se decoloran. Finalmente el frotis se
tiñe de nuevo con un colorante distinto al cristal violeta. La safranina es el colorante
secundario o de contraste mas común. Y tiñe a las bacterias
G- de rosa o rojo dejando a las bacterias G + de color violeta.
 Fundamento de la técnica de Gram

 La bacterias Gram positivas poseen una gruesa pared de peptidoglicana que es capaz de retener el
complejo de cristal violeta-yodo. Durante la decoloración con etanol-acetona, ya que se provoca una
deshidratación de esta gruesa pared y se reduce la porosidad atrapando entonces al complejo dentro
de la célula. En cambio en las Gram negativas, la delgada capa de peptidoglicana no puede retener al
complejo cristal violeta-yodo y es por eso que es teñida por el colorante secundario o de contraste
safranina.
Pared celular de Gram ( + ) y (-)
 Tinción Ziehl-Neelsen
 Es una tinción que fue utilizada para la búsqueda de bacilos de tuberculosis en muestras clínicas.
Por lo que se considera una tinción diferencial.
 Algunas especias de este género son Mycobacterium y Norcardia no son teñidas con colorantes
comunes y se requiere de tratamientos drásticos que incluyen calentamientos y el uso de mezcla
decolorantes en soluciones alcalinas con una pequeña cantidad de fenol. Una vez penetrado el
colorante , las células llamadas alcohol ácido resistente no son decoloradas por la mezcla alcohol-
ácido y permanecen teñidas con el colorante primario. Las no ácido alcohol resistentes son
fácilmente decoloradas y toman el colorante secundario o de contraste.
 Técnica de tinción de ZiehlNeelsen
 Hacer un frotis con la cepa prueba, dejar secaral aire y fijarlo al calor.
 Cubrir el porta objetos con fucsina fenicada.
 Calentar suavemente con el mechero hasta la emisión de vapores .El colorante no debe hervir, ni
secarse, añadir más si es necesario.
 Lavar con agua
 Decolorar exhaustivamente con alcohol-ácido
 Lavar con agua
 Cubrir el frotis con azul de metileno durante un minuto
 Lavar con agua, escurrir, dejar secar
 Observar con el microscopio con el objetivo de inmersión .
 Las bacterias las bacterias BAAR se observan teñidas intensamente de color rojo.
 Y las bacterias BAAR (-) se tienen de color azul
Fundamento de la tinción Ziehl-Neeelsen
 Los géneros de bacterias Mycobacterium y Nocardia presentan en su pared un alto contenido de
ácidos grasos de cadena muy larga constituidos en ceras, ácidos micólicos y nocárdicos,
respectivamente.
 Se ha postulado que el alto contenido de ácidos grasos intervienen decisivamente en la coloración
ya que al calentar la preparación con el colorante primario hasta emisión de vapores se favorece
la fusión de ceras y se aumenta la energía cinética de las moléculas facilitándose la penetración
del colorante a la célula ; al suspender el calentamiento y lavar con agua fría se provoca la
solidificación de las ceras de modo que el colorante ya no puede salir. También se ha dicho que la
mezcla del colorante – fenol es mas soluble en los lípidos bacterianos que el agente decolorante ,
lo que contribuye a su permanecía en el interior de la célula.
 Puesto que el proceso de decoloración es muy energético, cualquier bacteria que no contenga
abundante lípidos perderá el colorante primario durante la decoloración y formará el colorante
de contraste.
Importancia de la técnica de Ziehl-Neelsen

 Las bacterias que resisten la decoloración por alcohol-ácido se denomina bacilo

ácido alcohol resistente (BAAR)
 Esta tinción tiene importancia en el diagnóstico de enfermedades de tuberculosis
y lepra causadas por agentes etiológicos como Mycobacterium tuberculosis y
Mycobacterium leprae.
 Tinciones Selectivas
 Las tinciones selectivas tienen por objeto poner de manifiesto las estructuras de las células
aprovechando las propiedades químicas o físicas de algunos de sus componentes o bien,
proporcionar información acerca de la naturaleza de ciertas estructuras a través de su
comportamiento tintorial. Estas técnicas de tinción se basan en el hecho de que la estructura
celular que se desea poner de manifiesto tiene afinidad mayor por los colorantes utilizados que el
resto de la célula.
 Se puede entonces demostrar estructuras como la pared celular, cápsula, flagelos, material
nuclear e inclusiones como depósitos de materiales de reserva de poli-β-Hidroxibutirato,
glucógeno y gránulos metacrómaticos.
 Observación de esporas
 Algunas bacterias producen endosporas en un estadio particular de su ciclo de vida. Las
endosporas son las estructuras más resistentes que se conocen a agentes físicos y químicos
debido al número y estructura química de las cubiertas. Por ese motivo las endosporas son
impermeables a los colorantes, por lo que cuando se hace una tinción, se observa al
microscopio como cuerpos altamente refringentes y sin teñir. Las endosporas se pueden teñir
aplicando calor a la preparación previamente cubierta con una solución de colorante que en la
técnica de Shaffer y Fulton es el verde de malaquita. El lavado con agua elimina este colorante de
las células vegetativas y la aplicación de un colorante de contraste permitirá distinguir claramente
a las esporas de color verde.
 Tinción de Shaeffer y Fulton
 Hacer un frotis con la cepa de prueba. Dejar secar al aire y fijarlo al calor.
 Cubrir todo el portaobjetos con verde de malaquita y calentar suavemente a emisión de vapores
durante 5 minutos. El colorante no debe hervir ni calentarse si es necesario agregar mas
colorante.
 Lavar la preparación exhaustivamente con agua de la llave.
 Cubrir la preparación con safranina y dejarlo actuar por un minuto
 Lavar de nuevo con agua , dejar secar al aire y observar con el objetivos de inmersión.
 Las esporas se observan intensamente teñidas de color verde y la célula vegetativa toma el
color secundario mostrándose de color rojo.
Tinción de Shaeffer y Fulton
Observación de capsula
 Los colorantes ácidos, que no tiñen a la célula, son a veces útiles para revelar las capas
superficiales con bajo índice de refracción, como la cápsula, que se encuentra sobre la pared
celular envolviendo a los microorganismos. La cápsula puede hacerse visible con una tinción
negativa con el método de rogo congo o añadiendo tinta china o nigrosina al medio de
suspensión y como las partículas coloidales de carbón o las moléculas del colorante no pueden
penetrar a través de la cápsula, esta se observa como una zona clara que rodea a la célula.
 Método de Rojo Congo para cápsula
 Con el asa estéril tomar un poco del cultivo de una bacteria capsulada, suspenderlo es una gota de
Rojo Congo y hacer un frotis.
 Dejar secar al aire
 Sin fijar al calor, cubrir el frotis con mordente de capsula y dejarlo actuar durante un minuto.
Lavar con agua destilada y dejar secar al aire.
 Observar la preparación al microscopio. La capsula se observa como una zona clara alrededor de
la bacteria de color rojo en un campo de azul oscuro.
Método de la tinta china para cápsula
 En el centro del portaobjetos se coloca una gota, otra de tinta china y un poco de cultivo de una
cepa capsulada. Se mezcla suavemente hasta extender.
 Se coloca un cubreobjetos sobre la suspensión y se presiona suavemente evitando que queden
burbujas.
 Observar inmediatamente al microscopio.
 Desechar la preparación en un recipiente con antiséptico
 La capsula se observa como una gran estructura alrededor de la célula delimitada por los
pequeños fragmentos de carbón de la tintachina.
Tinción de tinta china para capsula
 Observación de Pared
 La pared celular bacteriana puede teñirse por un colorante básico después de aplicar ácido tánico
y alumbre de potasio como mordente. Este tratamiento permite observar la pared como una
estructura engrosada.
 TECNICA DE KNAYSI
 Hacer un frotis con la cepa de estudio en la forma usual y fijarlo al calor.
 Cubrir el frotis con un mordente de Knaysi y dejarlo actuar durante 10 minutos.
 Lavar con agua destilada
 Colocar en el asa una gota de fucsina sobre la preparación.
 Poner un cubreobjetos y observar al microscopio. La pared se observa de color rojo intenso
alrededor de la bacteria cuyo citoplasma se verá de color rosa o rojo intenso.
Observación de gránulos metacrómaticos

 Los gránulos metacrómaticos de polimetafosfatos o volutina se encuentran en

muchas bacterias , hongos, algas, y protozoarios, están formados de cúmulos de
polimetafosfatos y sirven como material de reserva de energía de la célula. Se
ponen de manifiesto con el colorante azul de metileno de Löeffler y se tiñe de
color rojo violeta en tanto que la célula se observa de color azul tenue.
Tinción de Flagelos