Métodos y técnicas de cultivo microbiano

La nutrición
microbiana consiste
en sumistrar a la
células los
ingredientes
químicos que
necesitan para
sintetizar sus
monómeros.
MEDIOS DE CULTIVO
Los medios de cultivo son soluciones nutritivas que su usan en el laboratorio para el cultivo de los
microorganismos. En microbiología se usan dos tipos de medios de cultivo. Los químicamente definidos
y los complejos.
POR SU COMPOSICIÓN
Medios de cultivo definidos
• Se preparan añadiendo a agua destilada
cantidades precisas de compuestos orgánicos o
inorgánicos purificados. Por consiguiente, en un
medio definido se conoce la composición química
exacta.
• La fuente de carbono es de capital importancia en
cualquier medio de cultivo, ya que todas las
células necesitan grandes cantidades de carbono
para hacer nuevo material celular. En un medio
definido simple normalmente está presente una
sola fuente de carbono, cuya naturaleza y
concentración depende del organismo cultivado.
En muchos casos, la composición exacta de un
medio no es importante para el crecimiento de
muchos organismos.
 Medios complejo
Emplean hidrolizados de productos
animales o vegetales, como caseína (la
proteína de la leche), carne, soja,
extracto de levaduras u otras
sustancias muy nutritivas, pero sin
embargo no definidas químicamente.
Tales hidrolizados están disponibles
comercialmente en forma de polvo y
pueden ser pesados con facilidad y
disueltos en agua destilada para
producir un medio. No obstante, una
importante limitación al usar un medio
complejo es que no se puede controlar
su composición nutritiva exacta.
Medios naturales
POR SU ESTADO FISICO
Medios liquido
• Contienen nutrientes, como la
glucosa, la peptona de caseína,
extracto de malta, etc. Que
aportan al microorganismos
para que se multiplique y
aumente la biomasa.

Cianobacteria
phormidium
CULTIVO EN MEDIO LIQUIDO: En los medios líquidos las características de la
bacteria sembrada se reflejan en las características que presenta el caldo
inoculado como son: Turbidez, formación de película, sedimento.
E. Coli en caldo E. Coli en caldo
Lauril sulfato de verde brillante al
sodio 2%
Medios solidos
• Contienen un agente
gelificante, que es el agar
bacteriológico en una
proporción 1.5 al 2%..
• Los medios sólidos inmovilizan
a las células, permitiéndolas
crecer y formar masas aisladas
visibles llamadas colonias. Las
colonias bacterianas pueden
ser de forma y tamaño variable
dependiendo del organismo,
de las condiciones.
Rodotorula en
medio YM Penicillium en
medio PDA
Medios semi solidos
• Contiene agar
bacteriológico en una
proporción 0.2 a 0.8%.
• Permiten identificar
características específicas
en los microorganismos,
como la movilidad.

E. Coli en medio
SIM
POR SU USO
Medios enriquecidos o
nutritivos: Contiene
componentes como sangre,
suero, o extracto de tejidos de
animales o plantas, que permiten
el desarrollo de microorganismos
exigentes.
 Medio Selectivo: Contienen sustancias químicas especificas que favorecen el
desarrollo de un grupo de microorganismos e inhibe el crecimiento de otros grupos.

Cristal Violeta: inhiben a los Gram + y

favorece el desarrollo de Gram -
Carbohidratos: lactosa, Maltosa, Manitol.
Solo se desarrollan m.o que utilicen esos
carbohidratos como fuente de carbono.
Sales biliares: Favorece el crecimiento de
Gram -
Verde brillante: Inhibe a los Gram +
Eosina y azul de metileno
E. Coli en EMB
Antibióticos
Altas concentraciones de NaCl
MEDIOS DIFERENCIALES: Son medios de cultivo que
contiene indicadores y permiten diferenciar entre grupos
microbianos por diferencias metabólicas (reacciones químicas)
que ocurren durante el crecimiento. No inhiben el desarrollo
microbiano.

Indicadores de PH:
Rojo de fenol: Acido-Amarillo Básico-Rojo
Azul de bromotimol: Acido-Amarillo Básico- Azul
Azul de bromocresol: Acido-Amarillo Básico Violeta
Rojo neutro Acido-Rojo Básico-Amarillo
E. coli
AGAR SAL Y MANITOL

S. aures y S. epidermidis
ASM
CULTIVO DE MICROORGANISMOS EN EL
LABORATORIO

 Aislamiento de cultivos puros de

microorganismos
 Transferencia aséptica
 Siembra en placa por extensión
 Estrías cruzada
 Diluciones y vaciado en placa
 Morfología y crecimiento de las colonias
 Transferencia aséptica
Consiste en una serie de procedimientos que evitan la contaminación durante la manipulación de los cultivos
y de los medios de cultivo estériles.
Es uno de los primeros métodos que tiene que dominar un microbiólogo.
a. Se calienta el asa de
siembra hasta
incandescencia y se deja
enfriar.
b. El tubo se destapa
c. Se pasa el extremo del tubo
por la llama
d. Se extrae la muestra con el
asa esterilizada.
e. Se vuelve a flamear la boca
del tubo y la muestra se
deposita en un medio
estéril
f. Se vuelve a tapar el tubo y
se calienta el asa de
nuevo al final
Inoculación masiva
Inoculación por estría cruzada obtención de cultivos
puros
Esta técnica es usada para aislar cepas puras. A partir de un
inoculo, consiste colocar un muestra inicial en un primer cuadrante,
e ir agotando la muestra en los otros haciendo estrías.
Aislamiento por diluciones sucesivas y vaciado en
placa
EVALUCIÓN DE LA MORFOLOGIA
COLONIAL
 Morfología y crecimiento de las colonias
• Las colonias microbianas son masas
visibles de células que se forman por
división de una o varias células.
• El desarrollo de colonias sobre superficies
de agar permite al microbiólogo identificar
las bacterias porque las especies forman a
menudo colonias con una forma y aspecto
característico.
• El tamaño, forma, textura y color de una
colonia es propio de cada organismo.
• La morfología de la colonia de una
bacteria puede variar según el medio en
que crezca la bacteria.
Forma. Está determinada por su borde y su espesor
La CONSISTENCIA de las colonias puede variar desde una colonia
seca que puede moverse sobre el agar con el asa, hasta una colonia
viscosa que se pega al asa y forma filamentos o hilos mucosos
cuando se trata de separarla del agar..

la consistencia mucosa de algunas colonias esta se deriva de la

sustancia capsular en aquellas bacterias con cápsula muy grande.

El COLOR: Se usan términos comunes para definirlo y especifica la

pigmentación aparente de la colonia.