LAS TECNICAS HISTOLOGICAS

TECNICAS
Son las diversas maneras en
que se pueden preparar los cortes
HISTOLOGICAS
de tejido para adecuarlo a la
observación microscópica.
 PASOS DE LA TECNICAS
HISTOLOGICAS
1- Obtención de la Muestra
2- Fijación
 Deshidratación y Aclaramiento
3- Inclusión
4- Corte
5- Coloración
6- Montaje
 Obtención de la
Muestra:
Consiste en la toma del material
biológico a estudiar. La fuente ideal
es el material animal (humano)
anestesiado o inmediatamente
después de la muerte.
 Fijación de la Muestra:
Tratamiento del tejido con agentes químicos
que retarden la aparición de las alteraciones del
tejido y que conservan además su estructura
normal.
Fijadores
Simples: Formalina, Alcohol, Ácidos Pícrico,
Acético, Osmico. Bicloruro de Mercurio y
Bicromato de Potasio.
Compuestos: Líquido de Bouin (Formalina,
Acido Pícrico y Acido Acético).
Líquido de Zenker (Formalina, Bicloruro de
Mercurio y Bicromato de Potasio).
 Deshidratación y Aclaramiento:
Consiste en la eliminación el exceso
de fijador y agua, pasándolo por baños o
soluciones de concentración creciente de
alcohol (desde 50% a 100%) luego se
trata con una sustancia química
(aclaradora) que permita que pueda
mezclarse con el medio de inclusión.
Agentes Aclaradores:
Xilol, Cloroformo, Benceno, Tolueno y
Aceite de Cedro.
 Embebimiento o Inclusión:
Consiste en infiltrar el tejido con
un medio de inclusión que se deja
solidificar para obtener una masa
homogénea firme que tiene como
objetivo proporcionar un soporte
rígido al tejido para facilitar el corte.
Medios de Inclusión:
Parafina, Celoidina, otros.
Casete
Casete
 Corte:
Consiste en obtener, en un
Micrótomo, rebanadas delgadas (de
3 a 10 micras de espesor) del bloque
de tejido que luego son colocadas en
un portaobjeto o lámina de cristal
cubierta con un material adherente.
Micrótomo
 Tinción:
Consiste en destacar el contraste
natural y hacer más evidentes los
diversos componentes celulares y
tisulares, así como el material
extrínseco. Para ello el tejido debe
estar bien hidratado (desparafinar,
rehidratar).
 Montaje:
Consiste en colocar sobre el
tejido coloreado una gota de
medio de montaje (índice de
refracción semejante al vidrio).
Se cubre la preparación con un
cubreobjeto y se deja secar.
Medio de Montaje: Bálsamo
de Canadá.
 COLORANTES
 Son sustancias químicas
orgánicas complejas que se usan para
conferir color a otros cuerpos.
 Son sales neutras que tienen
radicales tanto ácidos como básicos.
 Existen varios tipos de tinción las cuales
pueden ser categorisadas un tres grupos:
 Tinciones que distinguen entre los
componentes acido y básicos de las células.
(h/e)
 Tinciones especializadas que distinguen a
los componentes fibrosos de la matriz
extracelular y sales metálicas que precipitan en
los tejidos y forman depósitos metálicos en
ellos.
Ej. Tricrómico de Mallory, Mallory-Azan y
Tricrómico de Masson.
Orceina, Resorcina, Verhoff.
Sales de Plata o Impregnación Argéntica.
 Colorantes de uso General
Según su composición Química
Ácido: Sal neutra cuya propiedad colorante está en el
radical ácido. Las estructuras que estos tiñen son Acidófilas y se
tiñen de rojo o rosado (Citoplasma). Ejemplo: Eosina, Eosinato
de Sodio, Acido Pícrico, Colorantes Azoicos (Cromotropo) y
Diazoicos (Azul de Trípano y Rojo de Trípano) ,etc.
Básico: Sal neutra cuya propiedad colorante está en el
radical básico. Las estructuras que estos tiñen son Basófilas y se
tiñen de azul intenso o morado (Núcleo). Ejemplo:
Hematoxilina, Hematoxilina Férrica, Colorantes Básicos de
Anilina (Azul de Alcian, Azul de Toluidina y Azul de Metilino) ,
Azul Brillante de Cresilo, Rojo Neutro, Verde Janus, etc.
Neutros: Sales cuya propiedad colorante está tanto en el
radical ácido como en el básico.
 Otra Clasificación

Sintéticos
Por su origen Animales: Carmín
Naturales
Hematoxilina
Vegetales Orceína
Azafrán
 Por otro lado, las coloraciones
pueden ser
Indiferentes: No son sales. Tiñen
aquellas sustancias que tienen un poder
disolvente superior al del líquido que ha
servido para preparar la solución colorante
(Sudán III, Rojo Escarlata).
Ortocromáticas: Los tejidos
adquieren un color igual al de la solución
colorante empleada.
 MÉTODOS DE COLORACIÓN

Coloración Directa: Existe afinidad entre el colorante y el objeto.

Coloración Indirecta: Requiere la intervención de intermediarios
o mordientes para que la coloración tenga lugar.
Coloración Progresiva: Se hace actuar el colorante hasta que
llegue a su punto óptimo.
Coloración Regresiva: Se realiza primero una sobrecoloración y
luego se elimina el resto del colorante por medio de diferenciadores.
A este proceso se lo denomina Diferenciación.
Coloración Simple: Se colorean solamente algunos elementos del
preparado (núcleo, fibras elásticas, etc.).
Coloración Combinada: se tiñen los elementos nucleares y
citoplasmáticos recurriéndose, generalmente, al empleo sucesivo de
colores básicos y ácidos que contrastan por sus colores. Ej.: H/E
Coloración Panóptica: es una coloración combinada realizada
sucesivamente por colorantes neutros (May- Grünwald-Giemsa).
Coloración Pancrómica: en un solo baño colorante actúan todos
los colorantes neutros que se necesiten.
 EL
MICROSCOPIO
CELULA
CICLO
CELULAR
DIVISION CELULAR