ESTERILIZACION /

DESINFECCION
E. P. FARMACIA Y BIOQUIMICA
MICROBIOLOGIA I
Q. F. JUAN RAMIREZ ORELLANA
Generalidades

 Esterilizar significa eliminar de un objeto o una sustancia todas las formas de

vida, en consecuencia el equipo de laboratorio queda libre de microorganismos
vivos.
 La esterilización es un proceso que implica la total inactivación de todas las
formas de vida microbiana.
 La esterilización de una población microbiana por medio del calor es un
proceso gradual y la cinética de destrucción es exponencial
 ´la inactivación de primer orden por calor significa que una fracción constante
de los organismos sufre un cambio químico en cada unidad de tiempo capaz de
inactivar un organismo.
 El tiempo para la esterilización es inversamente relacionado con la
temperatura de exposición se expresa como tiempo de muerte térmica.
Propósitos de esterilización

 Preparar materiales de laboratorio para la recolección de muestras como agujas,

jeringas, tubos en el campo clínico
 Desinfectar los materiales contaminados
 Preparar los utensilios empleados en los cultivos bacterianos como
cajas de Petri, pipetas Pasteur, tubos de ensayo, asas de siembra.
Antes de cualquier esterilización , el material deberá estar limpio o desinfectado.
El material de uso aséptico deberá guardarse separado del de uso séptico.
Es conveniente si es necesario utilizar material desechable.
Objetivos de practica
 Conocer los diferentes procedimientos para la esterilización de los materiales
de laboratorio
 Desarrollar técnicas en el manejo de autoclave ( calor húmedo ) y horno de
aire caliente ( calor seco ) para esterilizar materiales.
 Comparar la eficacia microbicida del calor húmedo y seco.
 Obtener un conocimiento global sobre los principios básicos de
descontaminación
 Desinfección

 La limpieza de residuos en el suelo, mesas de trabajo, cualquier superficie

del laboratorio se realizara mediante desinfección y de manera periódica,
detectando el riesgo de posible contaminación ambiental.
 En un laboratorio de microbiología se deberá trabajar en condiciones de total
asepsia, conocer y aplicar los métodos de descontaminación.
 La manipulación de todo material o muestra deberá ser la adecuada siguiendo
el protocolo de trabajo, tener en cuenta las mediadas cautelares para la
prevención de accidentes laborales
Desinfección

 Proceso empleado para descontaminar materiales, superficies inertes, las

manos, mucosas, piel etc.
 Los materiales de vidrio, superficies inertes como el suelo, mesa de
laboratorio, se descontamina por métodos químicos empleando
desinfectantes como detergentes, hipocloritos que producen la destrucción de
todos los gérmenes patógenos.
 La desinfección de las manos, piel, mucosas utiliza sustancias antisépticas
para destruir gérmenes patógenos.
 Limpieza
 la limpieza en microbiología es esencial, primero se
destruye el germen por técnicas de esterilización o
desinfección luego se limpia,
 Separar el material séptico de los asépticos, luego
se limpia los instrumentos con agua fría o caliente y
detergentes y agua corriente.
 Tras el lavado y enjuagado se completa con agua
destilada, se seca y se comprueba su estado.
 El material se envuelve y protege con papel krap
para evitar su contaminación del medio ambiente
Esterilización por calor seco
 Se requiere temperaturas elevadas y tiempo prolongado,
 Su uso esta limitado a la esterilización de material de vidrio como placas
Petri, pipetas, tubos.
 El calor actúa desnaturalizando y coagulando las proteínas.
 El mecanismo e acción sobre los microorganismos es debido a la desecación
en general, lesión por oxidación, efectos toxicas de los niveles de electrolitos
den el interior del citoplasma.
 En ausencia de agua, disminuye el numero de grupos polares de la cadena
peptídica y se requiere mas energía para abrir las moléculas.
 Se aplica una temperatura de 160 a 1670 °C durante 1 hora.
 Se emplea el horno o estufa de esterilización.
Esterilización por radiación ultravioleta
 La radiación UV de 260 nm puede ser letal, pero no atraviesa muy
eficazmente el cristal, películas de suciedad, otras sustancias, por esta
razón la radiación UV se emplea muy poco ,
 Las lámparas UV se coloca en los techos de los laboratorios o en
cabinas de seguridad biológica para esterilizar el aire.
 Como la radiación UV quema la piel y lesiona los ojos, se trabaja
cuando las lámparas están apagadas.
 Existen unidades UV para el tratamiento de aguas, los gérmenes
patógenos se destruyen al pasar por radiaciones UV.
 La radiación ionizante penetra los objetos, la radiación gamma de una
fuente de cobalto 60 se utiliza para esterilizar en frio antibióticos,
hormonas, suturas, dispositivos médicos como jeringas.
 La radiación ionizante se emplea como agente para conservar
alimentos como frutas y verduras, productos marinos, productos
cárnicos.
Esterilización por calor húmedo
 El vapor de agua distribuye el calor de manera uniforme destruyendo las
bacterias e manera eficaz, el vapor debe tener una presión de mayos a 1
atmosfera y una temperatura de 115 a 130°C.
 El calor húmedo desnaturaliza y coagula las proteínas, rompe las cadenas de
ADN por activación enzimática de nucleasas.
 El calor húmedo produce perdida de función de la membrana y filtración de
moléculas orgánicas pequeñas.
 El material orgánico es de origen ribosómico y es resultado de la degradación
de los ribosomas por la activación de ribo nucleasas.
 Existe degradación del ARN ribosómico y la perdida de la viabilidad de las
células expuestas a temperaturas elevadas.
 Se emplea el autoclave para esterilizar medios de cultivo, material de jebe,
líquidos.
Sistemas de filtración
 Son dispositivos para separar del medio estructuras de mayor
tamaño según el tipo de filtro.
 Le efectividad de un filtro es proporcional al tamaño de poro
del filtro se puede conseguir esterilización.
 Se caracteriza por la presión, vacío e incluso carga del filtro
que suele ser positivo, las bacterias en medio neutro tienen
carga negativa.
 Filtros de membrana,-son filtros de celulosa con tamaño de
poro muy fino, a veces están acoplados a una bomba de vacío
para la succión.
 Filtros de vidrio poroso,-se emplea en casos especiales.
 Filtros de flujo laminar,-son dispositivos de filtrado donde
entra aire contaminado y sale estéril, se utilizan en
quirófanos, investigación.
 Métodos químicos de desinfección
 Son sustancias químicas que destruyen gérmenes patógenos,
cuando se aplican en superficies y objetos se dice
desinfectantes, aplicados sobre la piel y mucosas se conoce
como antisépticos.
 Detergentes catiónicos,-se emplean al 1% para desinfectar las
manos.
 Cloro fenoles,-son muy eficaces se asocian con detergentes
catiónicos para mejorar el grado de desinfección
 Compuestos clorados,-se usan diluidos en agua como los
hipocloritos
 Acido fenico,- diluidas al 5 % para limpieza de objetos,
superficies.
 Alcoholes,-para la limpieza y desinfección de la piel, manos.
 Derivados yodados,-se emplean antes de intervención
quirúrgica, son muy eficaces ejercen su acción por oxidación.
Preparación de material para
esterilización
 Los tubos, matraces, frascos antes de su esterilización llevan tapones de
algodón, los cuales deben cerrar , no flojos, ni apretados.
 De acuerdo al tapón se toma el pedazo de algodón de fibra ,extendida,
rectangular, practicar un dobles a lo largo de la fibra.
 Enrollar de un extremo presionando sobre si mismo hasta completar la
longitud.
 Formar un cono truncado con el diámetro a la medida del recipiente taponar
donde la mitad queda dentro del frasco y la otra mitad fuera.
 Se pueden preparar tapones envueltos en gasa para evitar la perdida de
forma del tapón.
Esterilización por flameado
Esterilización con calor seco
 Poner el termostato a 175 ºC y encender el
horno
 Si existe un ventilador verifique que este
funcionando
 Vigile el termómetro , cuando llegue a 175 ºC
seguir calentando por espacio de 60 minutos.
 Apagar el horno y espere que la temperatura
descienda a 60 ºC, abrir la puerta del horno.
 Observar los colores del papel, si mantiene
color amarillo indica que el horno no se ha
calentado suficiente, negro indica
calentamiento excesivo,
Esterilización con calor húmedo

 Llenar con agua destilada el fondo del autoclave, el

exceso de agua se elimina abriendo la espita del
drenaje.
 Introducir en el autoclave los materiales que se van
esterilizar.
 Cerrar la tapa del autoclave verificando que la
goma de seguridad se encuentre seco, .
 Iniciar el calentamiento y verifique observando las
condiciones de esterilización de 120 ºC / 1.5 At / 15
minutos.
 Con el tiempo cumplido , hacer descender la
temperatura a 80 ºC y abrir la válvula.
 Dejar enfriar el autoclave y retirar la canasta con
los utensilios esteriles
CAMARA DE FLUJO LAMINAR