ESPECTROFOTOMETRIA

FA CTO R D E CA L I B RA C I Ó N , CO N CEN TR A CI Ó N D E L A
MU E ST RA P RO BLE M A , CU RVA D E C A L I BR A CI Ó N

DOCENTE: INTEGRANTES:
CABRERA YAÑEZ, TAPIA CONTRERAS, JAMES
MATERIA: QUISPE QUINTO, TAMY
MARIAN JAZMIN BIOQUIMICA
PRACTICA

2020-
II
 Espectrofotometría.
Método científico utilizado para medir la luz absorbida por una sustancia
química. Cuantificando la intensidad de luz que atraviesa la muestra problema

Los rangos
que pueden
captar el ojo
humano:

400 a 700 nm

La absorción de las radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas depende de la

estructura de las moléculas, y es característica de cada sustancia química..
 Determinar la
cantidad de
concentración en una
solución de algún
compuesto utilizando
las fórmulas ya
mencionadas

Estandarización de
colores de diversos Ayudar en la
materiales, como determinación de
plásticos y pinturas estructuras
moleculares

Aplicacione
s

La identificación de
Determinar unidades estructurales
constantes de específicas, ya que
disociación de estas tienen distintos
indicadores ácido- tipos de absorbancia
base (grupos funcionales o
isomerías)
 ESPECTROFOTÓMETRO

El equipo capaz de realizar la captura

de un espectro de energía radiante, el
cual puede ser configurado para
realizar mediciones de absorción,
reflexión y transmitancia en función de
las necesidades del usuario.
Su función principal se centra en medir
la absorbancia.
La fuente de luz Una rejilla 1. El haz de luz
Incide con el
pasa por el adicional atravesara la
prisma
primer lente; permitirá el pase muestra problema.
(monocromador)
permitiendo el a solo un tipo de 2. Cierta cantidad
reflejando la luz
paso a una luz, acorde a lo será absorbida por
visible.
porción de luz. digitado. las moléculas.
 T=100% T= -100%
A= 0% A= +0%

T RA N S MI TA N C I A A BS O RB A N C I A

Relación entre la cantidad de luz transmitida que
llega al detector una vez que ha atravesado la
muestra (It), y la cantidad de luz que incidió
sobre ella (Io).
% T = It/Io x 100
Concepto más relacionado con la muestra, puesto
que nos indica la cantidad de luz absorbida por la
misma, y se define como el logaritmo de 1/T
A = log 1/T = -log T = -log It/ Io.
 LEY DE LAMBERT

Expresa la proporcionalidad que existe

entre la absorbancia de una solución
coloreada y la distancia que recorre el haz
de luz monocromática en ella.
Absorbancia = a . longitud

LEY DE BEER

Expresa la proporcionalidad que existe Ley de Lambert-Beer

entre la absorbancia de una solución
coloreada y la concentración de ésta en un
haz de luz monocromática.
Absorbancia= a . concentración
Expresa la relación entre absorbancia de
luz monocromática (de longitud de onda
fija) y concentración de un cromóforo en
solución:
A = log I/Io = ε·c·l
 CURVAS DE CALIBRACIÓN

Regresión lineal que sirve para

determinar la concentración de una
sustancia (analito) en una muestra
desconocida, sobre todo en
disoluciones. El método se basa en
la relación proporcional entre la
concentración y una determinada señal
analítica (propiedad)

- Las concentraciones de las

soluciones patrones.
- Las absorbancias que son
determinada al medirlas en el equipo
UV.
 FACTOR DE CALIBRACIÓN

Relación matemática entre una

sustancia de valor o concentración
conocida y que se utiliza para
FC = [ST] / AbST
determinar la concentración de otras
substancias desconocidas. Donde:
[ST]= Concentración Estándar
[Concentración = FC . Ab AbST= Absorción Estándar
de la muestra]
MUESTRAS PROBLEMAS
EJEMPLO
 MATERIALES Y EQUIPOS

- Gradillas y tubos de ensayo.

- Pipetas de vidrio.
- Espectrofotómetro.
- Celdas de lectura.

REACTIVOS

- Solución de KMnO4 al 4mg%

- Muestra problema de KMnO4 Xmg%
 PROCEDIMIENTO RESULTADOS

Se lleva la muestra problema (KMnO4 - Obtención del factor de calibración promedio. -

X%) a leer al espectrofotómetro para Determinar la concentración de la muestra
realizar la lectura. problema, usando el factor de calibración.

C
 TABLA DE VALORES CURVA DE CALIBRACION

Concentración Absorbancia 0.7

0.001 0.24 0.6

0.0015 0.312 0.5

0.002 0.356 0.4

0.0025 0.391 0.3

0.003 0.446 0.2

0.0035 0.504 0.1

0.004 0.648 0
0 0 0 0 0 0 0
 TABLA DE VALORES FACTOR DE CALIBRACION

Concentración Absorbancia
FC = [ST] / AbST
0.001 0.24
Fc= 0.001 / 0.24
0.0015 0.312 Fc= 0.0041 Fc promedio:
Fc= 0.003 / 0.446
0.002 0.356 Fc= 0.0015 / 0.312
Fc= 0.0067
(0.0041+0.0048+
Fc= 0.0048 Fc= 0.0035 / 0.504 0.0056+0.0063+0
0.0025 0.391 Fc= 0.0069 .0067+0.0069+0.
Fc= 0.002 / 0.356 0061) / 7
0.003 0.446 Fc= 0.0056 Fc= 0.0040 / 0.648 = 0.0405 / 7
Fc= 0.0061 = 0.0057
Fc= 0.0025 / 0.391
0.0035 0.504 Fc= 0.0063
0.004 0.648