TECNICAS SEPARATIVAS

Precipitación.

líquido - líquido
Extracción
Clasificación: en fase sólida

Destilación

Cromatografía
1
 Estado I Proceso 1 Estado II
A,B A+B
Sistema Homogéneo Sistema Heterogéneo

Transformaciones
físicas y/o químicas

Estado III Proceso 2

A/B
Mecánico, físico o
Dos fases separadas
raramente químico

2
 CROMATOGRAFIA

Definición:

“Es una técnica capaz de separar compuestos

en base a diferencias de su afinidad por una
fase estacionaria y una móvil”.

Sistema Cromatografico: Soluto

Fase Móvil

Fase Estacionaria

3
Proceso Cromatográfico (1)

Proceso físico - químico que rige la separación:

-Adsorción:

El soluto se adsorbe en la superficie de las partículas

sólidas de la fase estacionaria. Es un fenómeno
superficial, aumentado con la formación de puentes
de hidrógeno.
- Partición o Reparto:

El soluto se equilibra entre el líquido de la fase

estacionaria y la fase móvil, por diferencia de
solubilidad. Hasta llegar a un equilibrio
4
 Proceso Cromatográfico (2)
- Intercambio Iónico:

Los aniones o cationes se separan en base a

una columna rellena con un intercambiador de
iones ( resina)

- Exclusión Molecular, Filtración o Permeación en Gel:

No existen interacciones entre la fase

estacionaria y el soluto. Se separa por tamaño
de partícula.

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 Fase Fase Técnica Proceso
estacionaria móvil cromatográfica cromatográfico
Adsorción
Capa fina
Líquida I. Iónico
Sólida Columna
Exc. Molecular
Gas Columna Adsorción

Papel
Líquida Capa fina Partición
Líquida
Columna

Gas Columna Partición

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 Métodos Cromatográficos

Fundamento:

* Son métodos en los que los componentes de una

mezcla se van repartiendo de forma diferenciada
entre dos fases: una móvil y otra estacionaria.
* La fase móvil puede ser un gas (cromatografía de
gases) o un líquido (cromatografía líquida).
(cromatografía líquida)
* La fase estacionaria es generalmente un líquido, que
recubre la superficie de partículas sólidas, o en ocasiones
el mismo sólido.

La fase estacionaria, puede ser un lecho plano

(Cromatografía de capa
(cromatografía de capa fina o fina
sobreopapel)
sobre papel)
o desarrollarse sobre una columna
(Cromatografía
CROMATOGRAFIA SOBRE columnar)
COLUMNA

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TERMINOLOGÍA Y PARÁMETROS CROMATOGRÁFICOS

Eluyente : Así se denomina a la fase móvil portadora de la muestra

Eluato: es el término con el que se define la salida del eluyente

ELUYENTE ELUATO
(entra) columna (sale)
(proceso de ELUCIÓN

Flujo: mide la velocidad de la fase móvil, se expresa como gasto

en volumen ( ml disolvente/minuto de recorrido de la columna)
o gasto lineal (cm de recorrido/minuto)

CROMATOGRAMA: Gráfica que expresa la respuesta del detector

en función del tiempo de elución

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 Análisis Cromatográfico

*La cromatografía, permite no sólo separar los componentes

de una muestra, sinó tambien su identificación y cuantificación.

Análisis cualitativo

Esta basado en la medida de parámetros cromatográficos

( tiempos y volúmenes de retención)

Análisis cuantitativo

Está basado en la medida de alturas u áreas de picos

cromatográficos que se relacionan con la concentración.

La columna cromatográfica y la forma con la que

se diseña, constituye el corazón de la separación.

El detector situado al final de la columna es el

que garantiza la respuesta de los componentes
que se separan ( los hay de muy diversos tipos)
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 Análisis cualitativo cromatográfico

Los parámetros cromatográficos que se utilizan en el análisis cualitativo

son dos: tiempo de retención(tR) y volumen de retención (vR)

Procedimiento: ambos parámetros han de ser comparados con los de una

sustancia patrón

Inconvenientes: No se tiene siempre certeza de que ambos parámetros

sean reproducibles, ni aún manteniendo condiciones de trabajo constantes.
Es preferible utilizar valores relativos, en vez de absolutos.

Bajo condiciones de flujo

de fase móvil Fc constante:

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 Tiempo de retención

tiempo de retención ajustado = t’r = tr - tm

retención relativa =  = t’r2 / t’r1 11

 CROMATOGRAFIA PLANA
Es muy semejante a la Cromatografía líquida
tanto en aplicaciones como en funcionamiento

La fase móvil se mueve por capilaridad, gravedad

o bajo la acción de un campo eléctrico (electro-cromatografía)

a - distancia recorrida por el

a analito.
b Rf 
a b
b - distancia recorrida por el
x frente

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 Cromatografía en Papel y Capa Fina (TLC)

Sembrado:

Puntiforme Banda

Forma de sembrado: Manual (capilares jeringas)

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Cualitativa

x x x x x x

Identificación Pureza Ausencia

Cuantitativa Preparativa

x x x x

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 Compuesto a
Polaridad Disolventes Técnica
Cromatografiar
Compuestos

ción
Agua
iónicos Metanol
Acidos

Parti
Etanol
Fenoles Acetona
Alcoholes Piridina
Aminas Eter dietil.

ción
Esteres Cloroformo
Aldehídos Benceno

or
Cetonas Tetracloruro

Ads
Nitro deriv. de Carbono
Deriv. halogenados Ciclohexano
Hidrocarburos Eter de
alifáticos petróleo
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Cromatografía en columnas
•Cromatografía Gas- Líquido o Gas -Sólido
•Cromatografía Líquida de Alta Resolución (High
Performance Liquid Chromatography = HPLC)
(líquido-líquido)

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 Fundamento
Todo el proceso de separación acontece en una columna

A la salida de la columna existe un detector que

detecta cada componente eluído

La respuesta adopta la forma de un pico mas

o menos Gaussiano.

La separación es tanto mas eficaz cuanto mas

resueltos aparezcan los picos.
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21
CROMATOGRAFIA DE GASES (G.C.)

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 Columnas (1)

Columnas empaquetadas

Son de acero inoxidable o vidrio, tienen un diámetro de 3 a 6

mm y una longitud de 1 a 5 m.
Se rellenan con la fase estacionaria sólida o un soporte inerte
recubierto con la fase estacionaria
Columnas tubulares abiertas o capilares
Son de sílice fundida, son mucho más finas y mas largas que
las empaquetadas.
Tienen mayor resolución y sensibilidad.
Tienen menor tiempo de análisis y se maneja menor cantidad
de muestra 23
Columnas (2)

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 Gases Portadores

La elección de la fase móvil influye en el funcionamiento de la

columna y el detector. Los gases más utilizados son: H2, He y
N2. Los flujos son distintos, mientras que el de N2 es 10 cm/s,
el H2 y el He pueden utilizarse a un flujo mayor.

Por lo tanto se debe mantener el el flujo del gas portador a una

velocidad constante.

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 Inyección de la muestra (1)

La muestra se inyecta con un jeringa a través de un septup de

goma y se vaporiza. Generalmente 0.1 a 10 L.
Se controla la temperatura del horno de inyección.
Para columnas tubulares se usan puertos de inyección más
elaborados pues no pueden manejarse muestras tan grande.

La inyección se fraciona: Sólo el 0.1 a 10 % del volumen de

0.1 a 2 L de muestra inyectada llega a la columna; el resto
se elimina.
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 (CG)

Ejemplos:
Conductividad térmica ( general-no destructivo)
Ionización en llama (destructivo)
Captura electrónica (específico-no destructivo)
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Detector de Conductividad Térmica (1)

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 Detector de Conductividad Térmica (2)

Consiste en un filamento caliente de tungsteno.

La resistencia eléctrica del filamento aumenta con su
temperatura.

Cuando de la columna emerge un soluto, la conductividad

térmica de la corriente de gas disminuye, de modo que el
filamento se enfría, baja la resistencia y se observa un
cambio en la señal de salida.

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 Detector de Conductividad Térmica (3)

1- Responde linealmente en cuarto órdenes de magnitud de

concentración del soluto.

2- El H2 y He producen la mayor sensibilidad. Por ser los gases

con mayor conductividad térmica.

3- Para aumentar la sensibilidad:

a- Se eleva la corriente del filamento
b- Se reduce el gasto en el detector

c- Se reduce la temperatura en el cuerpo del detector

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Detector de Ionización de Llama (1)

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 Detector de Ionización de Llama (2)
1- La señal es proporcional al número de carbonos susceptibles
de ionizarse
Los átomos de carbono de compuestos orgánicos pueden producir
radicales CH, los cuales a su vez producen iones CHO+ en la llama
CH + O CHO+ + e-

2- La respuesta es lineal en siete órdenes de magnitud de

concentración del soluto.
3- La señal de fondo (valor de referencia) es muy estable.
4- La sensibilidad es mas de 100 veces mayor que la del
detector de conductividad térmica. También es unas 2 veces
mayor cuando el gas portador es N2 que cuando es He.

No es sensible a CO2, H2O y NH3 34

 Otros detectores :

Detector fotométrico de llama

Es un fotómetro de emisión óptica, útil para el análisis de
compuestos que contienen fósforo (536 nm) y azufre (394 nm).

Espectrofotómetros de masa

Espectrofotómetros de infrarrojo de transformada de Fourier

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 Métodos Analíticos (1)

Análisis Cualitativo

Comparar el tiempo de retención del pico del problema

con el de un patrón.

Se agrega al problema una muestra conocida. Si el

tiempo de retención es idéntico al de un componente
del problema, el área de ese pico aumentará.

Se debe identificar en dos o más tipos de columnas.

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 Métodos Analíticos (2)

Análisis Cuantitativo

El área de un pico es proporcional a la cantidad de ese

componente.
1- Los cromatógrafos modernos tienen integradores y
computadoras que calculan las áreas
2- Planímetro.
3- Para un pico gaussiano, el producto de la altura por el ancho
medido a la altura media es igual al 84 % del área total
4- Puede dibujarse un triángulo con dos lados tangentes a los
puntos de inflexión en cada lado del pico. El área es 96 % del
área de un pico gaussiano.

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 Métodos Analíticos (3)

Cómo los detectores no responden de la misma manera a

todos los solutos, debe medirse un factor de respuesta
empírico F

Concentración del soluto Área del soluto

=F
Concentración del patrón Área del patrón

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INSTRUMENTACIÓN

39
 CROMATOGAFIA LIQUIDA DE ALTA PERFORMANCE
(H.P.L.C.)
Jeringa o válvula
Gases
para la muestra
disueltos
Introducción
Desgasificador Preco- de la muestra
lumna
de disolventes Espacio térmico
Abastecimiento
de disolvente Columna analítica
Medidor
Filtro de presión Lectura

Bomba
Amplificador
Válvula de
seguridad y purga Descarga Recolección
40
o descarga
Fase estacionaria

Todos los tipos de cromatografía pueden realizarse en el

modo de alta resolución.

Un soporte común es el partículas microporosas de sílice

con diámetro de 5 a 10 m.

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Disolventes

Los disolventes utilizados deben ser muy puros.

Se puede utilizar un solo disolvente (elección isocrática).

Se puede cambiar un solo disolvente por otro luego de

un tiempo apropiado.

Se puede cambiar continuamente de composición del

disolvente (elección por gradiente).

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Bombas

La calidad de una bomba es determinada por el grado

de estabilidad y reproducibilidad del flujo que genera

Se trabaja hasta 10 mL/min a presiones hasta de

40 Mpa (400 atm)

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Válvula de Inyección:

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 HPLC

(Detector de índice de refracción)

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Detector Ultravioleta (1)

Celda de flujo:
0.5 cm de camino óptico
y 10 L de capacidad

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 Detector Ultravioleta (2)

Es el detector más utilizado, porque muchos solutos absorben

dicha radiación y es bastante sensible a ella

El sistema más simple emplea la emisión a 254 nm de una

lámpara de mercurio y detección a una sola longitud de onda.

También se utilizan una lámpara de deuterio y un monocromador

para mediciones a longitud de onda variable.

El intervalo lineal comprende cinco órdenes de magnitud de

concentración de soluto

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 Detector de Índice de Refracción

Es casi universal, responde a casi cualquier soluto.

La sensibilidad es unas mil veces menor que la de un detector

ultravioleta, y no es útil en gradiente.

Detector Electroquímico

Es bastante selectivo, porque sólo cientos analitos se oxidan o

se reducen con facilidad.

Pueden detectarse por oxidación: fenoles, aminas aromáticas,

peróxido y mercaptanos. Y por reducción: cetonas, aldehidos y
nitrilos.
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 Otros detectores:

Límite de ¿Util con

Detector detección gradiente?
ultravioleta 0.1 - 1 si
índice de refracción 100 - 1000 no
elctroquímico 0.01 - 1 no
fluorescencia 0.001 - 0.01 si
conductividad 0.5 - 1 no
espectrofotometría de masa 0.1 - 1 si
infrarrojo de tranformada de Fourier 1000 si

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 CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA vs CROMATOGRAFIA DE GASES

Son al día de hoy dos poderosísimas herramientas de análisis

Ambas admiten acoplamiento con otras técnicas de detección

(hibridación de técnicas, por ejemplo con espectrometría de
masas o plasmas..etc)

La cromatografía de gases, requiere muestras gaseosas o

fácilmente volatilizables.

El resto de muestras que no poseen esas características pueden

ser analizadas por HPLC.

Ambas técnicas por su versatilidad, y por las diversas posibilidades que

ofrece la selección de la columna cromatográfica, permiten abordar
análisis de multicomponentes en muestras de diversa procedencia, con
elevada precisión y sensibilidad (dependiendo del detector).

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EJEMPLO CG

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