Actividad

proteolítica
en leche
Concentración
peptidica total
4
Método de Bradford

5
a. Preparación de la curva estándar

0,009 0,006 0,003 0,001 Ecuación de regresión

[ BSA]
mg/ ml-1 mg/ml-1 mg/ml-1 mg/ml-1

Reactivo de
1 ml 1ml 1ml 1ml
Bradford

Reposo 5 minutos En los filtrados de bebida (FB)

solamente existían los
péptidos filtrados
UV-595 nm

6
b. Análisis de las muestras
Estándar BCT1 MM101 RR22L40 Control

Volumen 0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml

Reactivo de
1 ml 1ml 1ml 1ml 1ml
Bradford

Agitar una vez por inmersión

Reaccionar en la oscuridad
T°ambiente UV-595 nm Espectrofotómetro
5 min (UV-1800 Shimadzu)

7
Actividad
proteolítica
8
 Método de Church et al.
Cuantificación de la actividad proteolítica por medio de la determinación espectrofotométrica

OPA

β-mercaptoetanol
Aminas primarias libres
(O-phthaldialdehído)

50 µl
de cada FB Incubación
Absorbancia
2 min
+ T° ambiente
340 nm
1 ml OPA

Grado de proteólisis = Diferencia entre las actividades proteolíticas de la muestra control con cada tratamiento

9
Análisis
estadístico
10
11