Bacteriologia

Clase N° 12
Teoria/Practica
Genitales (Parte I)
Muestras Que podemos procesar:
• Hisopados vaginales y perianales para Streptococo agalactiae
• Exudados Uretrales
• Hispado Vaginal (Fondo de saco)
Hisopado Introito Vaginal y perianal
para S. agalactiae: Consideraciones
Preliminares
• Se trata de un Hisopado de las zonas perianal y vaginal (Sin especulo) para la
búsqueda de Streptococo agalactiae.
• Se utiliza para evitar infecciones neonatales.
• Objetivo final: la dosificación de penicilina intraparto como tratamiento
profiláctico, ya que el tratamiento antibiótico anteparto no se ha mostrado eficaz
en erradicar el estado de portadora, sin embargo, la profilaxis antibiótica
intraparto ha mostrado ser muy efectiva para reducir la incidencia de la infección
neonatal precoz. La administración de antibióticos intraparto se debe restringir a
los casos en los que existan factores de riesgo.
Factores de Riesgo Infeccion por
SGB
• Además de la colonización materna intraparto por SGB, que es el
principal factor de riesgo, existen otros factores que incrementan el
riesgo de infección neonatal precoz por SGB :
• Prematuridad (< 37 semanas)
• Ruptura prolongada de membranas (≥ 12 horas)
• Temperatura materna >37.8ºC
• Urocultivo positivo para SGB durante la gestación
• Hijo anterior con infección neonatal precoz por SGB
Cultivo Perianal y Vaginal para SGB
• Existen dos estrategias para identificar a las pacientes con indicación
de profilaxis antibiótica intraparto: la administración de antibióticos
sólo a las mujeres con factores de riesgo, y la investigacion de las
gestantes y tratamiento de las pacientes con cultivo positivo (además
de las pacientes de riesgo), que es el la estrategia que parece ser más
efectiva (80% reducción estimada de infección neonatal precoz)
Cultivo Perianal y Vaginal para SGB
• El cultivo de SGB se realizará a todas las gestantes,
independientemente de su riesgo obstétrico, en la visita comprendida
entre las 35 y las 37 semanas (de preferencia en la semana 36). En
gestaciones gemelares se adelantará a las 33-35 semanas.
Exclusiones del Cultivo
• Gestantes con un hijo anterior con infección neonatal precoz por SGB
La profilaxis antibiótica está indicada incluso si se realiza frotis vagino-
rectal con resultado negativo.
• Gestantes en las que se detecte SGB en orina (> 104 UFC/ml) durante
la gestación. La profilaxis antibiótica está indicada incluso si se realiza
frotis vagino-rectal con resultado negativo
• Gestantes con cultivo vaginal-rectal positivo para SGB en algún
momento previo de la gestación actual
• El cultivo vaginal-rectal debe recogerse también en gestantes en las
que se programe una cesárea electiva. La cesárea no protege de la
infección neonatal por SGB, pero la frecuencia es muy baja cuando se
trata de una cesárea electiva con membranas íntegras y sin trabajo de
parto previo. No obstante, estas pacientes pueden ingresar de
urgencias, ya sea por ruptura prematura de membranas o por inicio
de trabajo de parto y, en caso de presentar cultivo para SGB positivo,
deberán recibir a ser posible la profilaxis antibiótica durante 4 horas,
antes de proceder a la extracción fetal.
Consideraciones finales:
• Dado el carácter transitorio y cambiante de la colonización
genitourinaria y gastrointestinal materna por SGB, los cultivos
realizados más de 5 semanas antes del parto no predicen
correctamente la colonización materna, por lo que un resultado
negativo tiene una validez máxima 5 semanas. En caso de que no se
produjese el parto desde la toma del cultivo hasta pasado este
período, deberá recogerse una nueva muestra para cultivo.
• Un cultivo no realizado, o realizado en un periodo de más de 5
semanas antes del parto obliga a someter al RN a un control mínimo
de 48 horas e impide el alta
NORMAS PARA UNA CORRECTA OBTENCIÓN
DE LA MUESTRA VAGINAL-RECTAL
• Para la recogida de la muestra, se utilizará un hisopo, que se colocará
en un tubo con gel (Medio de transporte Stuart)
• Se obtendrá una primera muestra del tercio externo vaginal (sin usar
espéculo) y, utilizando un hisopo distinto, se tomará la segunda
muestra rectal. Ambos se envían al Laboratorio debidamente
rotulados.
• Se pide además, en lo posible, que se envíen dos vidrios para la
observación al directo o posible coloración. (Trichomonas)
PAUTAS ANTIBIÓTICAS EN LA
PROFILAXIS INTRAPARTO
• Para que la pauta antibiótica profiláctica sea considerada adecuada, el
antibiótico debe ser administrado por vía endovenosa y por lo menos
4 horas antes del nacimiento para que se puedan administrar 2 dosis.
Debería evitarse la amniorrexis hasta haber alcanzado este margen
horario y la administración de las 2 dosis de antibiótico.
Penicilina Intraparto
• El antibiótico se iniciará al ingreso de la gestante en trabajo de parto y
se administrará hasta el expulsivo. En caso de tratarse de una
inducción, el antibiótico se iniciará cuando se inicie la dinámica de
parto.
Penicilina Intraparto
• En caso de ruptura prematura de membranas, el antibiótico se inicia
al ingreso de la paciente. En gestantes con SGB desconocido (o
resultado negativo > 5 semanas), el antibiótico se inicia a las 12 horas
de la RPM en las gestantes a término, y en el momento del ingreso en
las gestantes pretérmino .
Pacientes sin alergia a la penicilina
(Dosis)
• Penicilina G (5 M UI + 2,5 M UI/4 horas EV) es el antibiótico de
elección.
Pacientes sin alergia a la penicilina
(Dosis)
• Ampicilina (2 g y seguir con 1g/4 horas EV) presenta la misma
efectividad terapéutica, pero no es el antibiótico de elección debido a
su más amplio espectro con mayor posibilidad de crear resistencias.
• No obstante, ampicilina se considera el antibiótico de elección en
caso de RPM pretérmino (<37.0 semanas) 1 gr/6h EV asociado a
Gentamicina 80 mg/8h EV + Azitromicina 1g VO dosis única.
Pacientes sin alergia a la penicilina
(Dosis)
• Amoxicilina-Clavulánico (1g/6 horas EV) se utiliza en las RPM a
término porque presenta una cobertura más adecuada que la
penicilina. No recomendado en gestaciones < 37.0 semanas por riesgo
incrementado de enterocolitis necrotizante en el recién nacido.
Alergia a la penicilina
• Debido a la frecuencia de cepas SGB resistentes a los antibióticos que
se utilizaban habitualmente (Eritromicina: 25% cepas resistentes y
Clindamicina: 13-20%) el tratamiento debe ser administrado en
función del resultado del antibiograma.
Alergia a la penicilina
• Clindamicina 900mg/8 horas EV es el antibiótico de elección en caso
de resultar sensible.
• Vancomicina 1g/12 horas EV: De elección en caso de cepas resistentes
o si no se dispone de antibiograma. Se debe administrar a una
concentración màxima de 5 mg/ml y de forma lenta (velocidad
màxima: 10 mg/mn) o como mínimo en 60 mn. La administración EV
en bolo rápido puede inducir hipotensión grave y un fenómeno de
eritema de la porción superior del cuerpo.
Alergia a la penicilina
• Eritromicina ya no se considera una alternativa terapéutica aceptable
• Debe recordarse que, pese a una administración adecuada de estas
pautas antibióticas en pacientes alérgicas a los betalactámicos, debido
a una mayor dificultad para alcanzar niveles bactericidas en la
circulación fetal, los neonatólogos las consideran pautas terapéuticas
no adecuadas y los recién nacidos deberán permanecer en
observación durante 48 horas con control analítico
Streptococo agalactiae
• Estreptococo del grupo B (EGB), es una bacteria que puede ocasionar
infecciones muy graves en recién nacidos y adultos. EGB es un
coco gram positivo que al microscopio se dispone en cadenas
(estreptococo), beta-hemolítico, catalasa negativo, oxidasa negativo
y anaerobio facultativo, caracterizado por presentar en su pared el
grupo B de antígenos del sistema de Lancefield. El EGB posee
una cápsula bacteriana de polisacárido rica en ácido siálico y según su
estructura se distinguen 10 serotipos antigénicamente diferentes (Ia,
Ib, II-IX). El EGB es un constituyente de la flora intestinal.
Virulencia
• EGB puede encontrarse, como comensal, sin producir enfermedad en
el aparato digestivo, urinario y genital hasta en un 30% de los adultos,
(colonización), incluyendo la mujer embarazada. Sin embargo, en
ocasiones, el EGB es capaz de burlar los mecanismos de defensa del
huésped humano, invadir los tejidos y causar infecciones graves
(Infección por estreptococo grupo B). Entre los principales factores
de virulencia del EGB pueden citarse el polisacárido capsular y la beta
hemolisina (considerada idéntica al pigmento
Trabajo de mesada
• Se utiliza, en la mayoría de los casos posibles, un cromogenico
diferencial para esta bacteria.
• Nombre: Chrom ID Strepto B
• Podemos utilizar agar sangre, para ver su B hemolisis.
• Cocos en cadena Gram Positivos.
• Colonias blancas “mantecosas”
Cromogenico Diferencial
• La identificación de todos los estreptococos del grupo B (EGB) es clara
y fácil con chromID® Strepto B, gracias a tres sustratos cromogénicos
que distinguen rosa pálido y colonias rojas EGB que son redondas y
nacarada después de la incubación de 18-24 horas. La coloración hace
que sea fácil ver las colonias, incluso si son pocos en una placa o si
hay cultivos mixtos
Cromogenico Diferencial
• Excelente rendimiento para el screening prenatal EGB en términos de
capacidad de nutrientes y la sensibilidad para la detección
• La detección de cepas de EGB, incluyendo cepas no beta
hemolíticas.
• Inhibición selectiva de la mayoría de las bacterias, no
pertenecientes a la especie S. agalactiae, así como levaduras
Entonces… Solo con el Cromogenico
puedo sembrar?
Todd Hewitt Caldo

• Medio de cultivo utilizado para propósitos generales, ya que permite

el desarrollo de la mayoría de los microorganismos, tanto de bacterias
de rápido crecimiento como exigentes, a partir de diversas muestras.
Es especialmente útil para el cultivo de estreptococos beta
hemolíticos antes de su tipificación serológica.
Fundamento
• Las peptonas (proveen la fuente de nitrógeno, vitaminas y
aminoácidos) y la glucosa son la fuente nutritiva, y estimulan el
crecimiento bacteriano. Debido a la fermentación de glucosa se
generan productos ácidos, que son neutralizados por fosfato de sodio
y carbonato de sodio, evitándose así la destrucción de las
hemolisinas. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico del
medio.
Pasos:
• 01 – Luego de la recepción de la muestra, inocular los hisopos en el
caldo Todd Hewitt durante 24 hs en estufa a 37°.
• 02 – Luego del enriquecimiento, realizar siembra masiva en Chrom ID
y Agar sangre Humana.
• 03 - Dejar en Estufa a 37° 24 hs mas.
• 04 - Observacion de colonias rosa palido en el Chrom, o colonias beta
hemolíticas en el Agar Sangre.
• Si optamos por solo sembrar agar sangre, debemos tener a mano
serología para detección de estreptococos.
Prueba de CAMP
• Prueba de CAMP para Streptococcus Beta-Hemolíticos. Los
estreptococos del grupo B (S. agalactiae) producen una proteína
difusible y termoestable (factor CAMP) que aumenta la beta-
hemólisis de Staphylococcus aureus.
• Siglas de Christie- Atkins- Munch-Peterson test
• Se utiliza colonias de S. Aureus para su realización.
CAMP Fundamento
• Los estreptococos del grupo B (S. agalactiae) producen una proteína
difusible y termoestable (factor CAMP) que aumenta la beta-hemólisis
de Staphylococcus aureus. Es el nico Streptococcus beta Hemolitico
que produce una prueba de CAMP positiva.
S. aureus (sembrado desde la parte superior hasta la parte inferior de
la placa) produce esfingomielinasa C que se puede unir a las
membranas de los eritrocitos. Cuando son expuestas al factor CAMP
del grupo B, las células sufren hemólisis.
CAMP Pasos:
• Se estria una “Raya” de S. aureus en medio de la placa de agar sangre
ovina. (ASO)
• De forma perpendicular, de estria otra “Raya” pero de nuestra colonia
hallada, la que sospechamos es un Agalactiae.
• Podemos, y es valido hacerlo, colocar una estria de S. agalactiae de
modo paralelo a nuestra muestra como control positivo.
• Dejamos Incubar 24 hs a estufa 37°.
CAMP Observacion y conclusión de
la prueba
• Una prueba positiva para el factor CAMP aparece como “Hemólisis
punta de flecha entre la unión de crecimiento de S. aureus y nuesgro
supuesto Streptococcus del grupo B.