FOTOSINTESIS

Temas

 Generalidades sobre el metabolismo

fotosintético
 Foto asimilación de Carbono

 Fluorescencia

 Métodos para evaluar Fotosíntesis

 Curvas Fotosíntesis x Irradiancia

 FLUJO DE ENERGIA

Calor
(17 – 18%)

Luz Fotosíntesis
(100%) (~ 80%)

Fluorescencia
(1 – 2%)
 Donde Ocurre?
 Cloroplastos

Corte de una Hoja Celula Vegetal

Hoja

LM 2,600 
Cloroplasto

CO2 O2

Membrana Externa
TEM 9,750 

Stroma Membrana Interna

Grana Stroma Granum Thylakoid Thylakoid

space
Cloroplasto
 Estructura del Cloroplasto
 3 compartimientos:
1. Espacio “inter membranas”
2. Estroma: fluido compuesto de azucares que
contiene los tilacoides
3. Espacio de los tilacoides
 Tilacoides: membranas interconectadas
 Grana: componen los tilacoides; grupos de discos
(membranas) donde ocurre la fotosintesis

Stroma
Membranas
Internas &
externas
Granum

Cloroplasto
1 tilacoide
 Plantas producen O2 a partir del agua

6CO2  12H 2O  C6 H12O6  6H 2O  6O2

6 CO2 12 H2O
Reactivos:

Productos: C6H12O6 6 H2O 6 O2

La fotosintesis es un proceso redox
Reducción

Fotosintesis 6CO2  6 H 2O  C6 H12O6  6O2

Oxidación

 e- mueven de una molecula a otra

 H2O se oxida

 CO2 se reduce

 e- gana energia potencial

 H2O CO2
Cloroplasto

Light
REACCIONES DE CLARO
NADP+
ADP
+ P

FOTOSINTESISREACCIONES
DE LUZ
CICLO
DE CALVIN
(tIlacoides) (stroma)

ATP

REACCIONES DE OSCURO
NADPH
(Ciclo de Calvin-Benson)

O2 Azucar
Reacciones de Claro: Flujo de Electrones
En Resumen:

1. Los fotones inciden inicialmente en los

pigmentos accesorios
2. Estos transfieren la energía, molécula a
molécula, hacia los CR

CR están formados por clorofila –a

excitable a 680 (P680 en PSII) y 700
nm (P700 en PSI)

Pigment Trap Longitud de Onda que

permite llegar al primer
estado de excitación
(singlet excited state)

 Aun siendo Clorofilas, P680 y P700 tienen características de

absorción MUY diferentes … esto debido a que están ligadas a
aminoácidos muy específicos de las proteínas del CR.
 Clorofila-a
• La clorofila-a es una molécula estructurada en dos partes: un anillo
de porfirina y una cadena larga llamada fitol.
• El anillo de porfirina es un tetrapirrol con una molecula de Mg
quelada en el centro.
• El grupo tetrapirrolico absorbe en el AZUL (Banda B o Soret) y la
cadena fitol en el ROJO (Banda Q) del espectro electromagnetico.
 e- Ionizacion

Calor
Estado Excitado
e–

Energia del electron

Calor

Fluorescencia Foton

Foton
(fluorescencia)

Ground state

Molecula
Clorofila
 Diagrama Z

Donor side Acceptor side of PSII Acceptor side

Of PSII Donor side of PS I Of PSI
Estructura del tilacoide y
localización de los CR
 Nomenclatura:
 Tyr: molecula del aminoacido Tyrosina (Yz)
 Pheo: moelcula de feofitina (aceptor primario del PSII)
 QA: platoquinona. Primer aceptor primaria estable que acepta un electrón por vez
 QB: plastoquinona “inestable” que acepta 2 electrones a la vez y toma 2 protones antes de
desprenderse y “transformarse” en la llamada PQ. En esta forma es móvil y se difunde en la
membrana del tilacoide.
 FeS: proteina hierro-sulfura
 Cyt f: citocromo f
 Cyt b6L y Cytb6H citocromos b
 PC: plastocianina
 AO: tipo especial de clorofila-a que es el aceptor primario del PSI
 A1: molecula de filoquinona (Vitamina K)
 Fx, FA y FB proteinas hierro-sulfuro inmoviles
 FD: proteina feredoxina
 FNR: enzima ferredoxina-NADP
 NADP+: forma oxidada de la Nicotiamida-Adenina Dinucleotido fosfato
 NADPH: forma reducida.
 ATP: Adenosina Tri Fosfato
 Números
1. Se requieren 4 moles de fotones para la síntesis
de un mol de O2 + 2H+ (lumen)
2. Durante el transporte de 2 electrones entre el
PSII y PSI se introducen 4H+ al lumen
3. 6H+ se bombean (ATPasa) a través de la
membrana tilacoidal y se sintetizan: - 1.5 ATP
- 1 NADPH
 Acoplamiento fase lumínica y oscura

• La función principal de
la fase lumínica es la
síntesis de ATP y NADPH

• Estas moléculas de alta

energía son utilizadas
para activar las enzimas
del ciclo de Calvin-
Benson durante la
fijación de CO2
 El Ciclo de Calvin-Benson-Bassham

 Ciclo de Calvin: CO2

Input ATP
Ocurre en el estroma NADPH
Usa C proveniente del CO2, e- del
NADPH, y energia de ATP para
sintetizar Glicerato 3 fosfato (G3P)
G3P es usado para sintetizar glucosa
CICLO
y otras moleculas organicas DE
 Pasos: CALVIN

 1. Fijar CO2
 2. Reduccion del carbono
 3. Liberar G3P
 4. Regeneracion de RuBP (ribulose 1,5- Output: G3P
bifosfato)
 Enzima RUBISCO: encargada de catalizar la
fijacion de Carbono (ribulosa-1,5 bifosfato
carboxilasa/oxigenasa (Enzima mas
abundante en el mundo)
 Ecuacion del Ciclo de Calvin


CO2  2 NADPH  2 H  3 ATP 

1 / 6C6 H12O6  H 2 0  2 NADP  3 ADP  3Pi
 Ciclo de Calvin: paso a paso
Paso 1 : Asimilacion de
Carbono.
- La enzima rubisco “atrapa” el
Input: 3 CO2
CO2 para agregar el C al
azucar de 5 C RuBP.
- El producto de 6 C es
inestable y se rompe en 2
moleculas del acido organico
3-PGA.
1
3 P P 6 P
RuBP 3-PGA
6 ATP
3 ADP
CICLO 6ADP + P
3 ATP DE
4 CALVIN 2
6 NADPH

6 NADP+

5 P 6 P
G3P G3P
3

Glucose
Output: 1 P and other
G3P compounds
 Ciclo de Calvin: paso a paso
Paso 1 : Asimilacion de
Paso 2 : Reduccion.
Carbono.
- La enzima rubisco
Input: 3 CO2 - NADPH es usado
(oxidado) para reducir
“atrapa” el CO2 para
3-PGA al azuzar rico
agregar el C al azucar de 5
en energia 3-PGA.
C RuBP.
-ATP es usado como
- El producto de 6 C es
fuente de energia.
inestable y se rompe en 2
moleculas del acido organico
1
3-PGA. 3 P P 6 P
RuBP 3-PGA
6 ATP
3 ADP
CICLO 6ADP + P
3 ATP DE
4 CALVIN 2
6 NADPH

6 NADP+

5 P 6 P
G3P G3P
3

Glucose
Output: 1 P and other
G3P compounds
 Ciclo de Calvin: paso a paso
Paso 1 : Asimilacion de
Carbono. Paso 2 : Reduccion.
- La enzima rubisco
Input: 3 CO2
- NADPH es usado
“atrapa” el CO2 para (oxidado) para reducir
agregar el C al azucar de 5 3-PGA al azuzar rico
C RuBP. en energia 3-PGA.
- El producto de 6 C es -ATP es usado como
inestable y se rompe en 2
moleculas del acido organico
1 fuente de energia.
3-PGA. 3 P P 6 P
RuBP 3-PGA
6 ATP
3 ADP
CICLO 6ADP + P
3 ATP DE
4 CALVIN 2
6 NADPH

6 NADP+

5 P 6 P Paso 3 : Libera 1
G3P G3P molecula de G3P.
3 -Para cada 3 CO2
fijadas, 1 G3P es
liberada como
producto.
-Las otras G3P
Glucosa continuan en la etapa
Output: 1 P y otros (Paso) 4.
G3P compuestos
 Ciclo de Calvin: paso a paso
Paso 1 : Asimilacion de
Carbono. Paso 2 : Reduccion.
- La enzima rubisco, azucar de
Input: 3 CO2
- NADPH es usado
5 C, atrapa el CO2. (oxidado) para reducir
- El producto de 6 C es 3-PGA al azuzar rico
inestable y se rompe en 2 en energia 3-PGA.
moleculas del acido organico -ATP es usado como
3-PGA.
1 fuente de energia.
3 P P 6 P
RuBP 3-PGA
6 ATP
3 ADP
CICLO 6ADP + P
3 ATP DE
4 CALVIN 2
6 NADPH
Paso 4 : 6 NADP+
Regeneracion de
RuBP.
-5 moleculas de G3P 5 P 6 P Paso 3 : Libera 1
son reacomodadas para G3P G3P molecula de G3P.
formar 3 moleculas de 3 -Para cada 3 CO2
RuBP. fijadas, 1 G3P es
-RuBP es regenerada liberada como
para iniciar otro ciclo. producto.
-ATP es usado como -Las otras G3P
fuente de energia. Glucosa continuan en la etapa
Output: 1 P Y otros (Paso 4).
G3P compuestos
 Números
El resultado de la Fotosíntesis es:

 9 ADP  8Pi  6 NADP   Triosafosf ato(G3P / DHAP )

3CO2  9 ATP  6 NADPH  6H 

* Triosas fosfato sintetizan FRUCTOSA 6 FOSFATO y posteriormente

GLUCOSA
 REVISION
H2O CO2
Cloroplasto
Luz

NADP+
ADP
+P
RUBP
Fotosistema II
CICLO
Cadena DE 3-PGA
Transporte CALVIN
Electrones (en stroma)
Membranas Fotosistema I
Tilacoides ATP Stroma

NADPH Respiracion
G3P
Celular
Celulosa
Almidon
O2 Azucares Otros compuestos
organicos
REACCIONES DE LUZ CICLO DE CALVIN
Fotosintesis x Productividad x Produccion

 Proceso que lleva a la incorporacion de

carbono inorganico (CO2) en los oceanos
es la FOTOSINTESIS.

 El producto de la fotosintesis, esto es, la

cantidad de biomasa producida, es
definida como PRODUCCION PRIMARIA

 La tasa de variacion de la produccion

primaria en el tiempo es la
PRODUCTIVIDAD PRIMARIA (Ej. mg
C.m-3.h-1)
 PP Bruta X PP Neta

 PPB = La cantidad total de materia

organica producida por los productores
primarios

 PPN = PPB menos la energia utilizada (o

materia organica respirada) por el
fitoplancton
 Materia organica usada por el
70 – 90% fitoplancton como fuente
de energia

PP Bruta
(produccion total)

10-30 %
PP Neta
 METODOS PARA EVALUAR FOTOSINTESIS

6CO2  6 H 2O 
 C6 H12O6  6O2
LUZ
Nutrientes
COMO MEDIR?

 Produccion de Oxigeno (titulacion de

Winkler o electrodos de oxigeno)

 Asimilacion de Carbono-14 (Steeman

Nielsen, 1952)

 Emision de Fluorecencia (PAM)

EVOLUCIÓN DE OXIGENO
 En principio para cada molécula de oxigeno evolucionada, 1 molecula de
CO2 es incorporada

 En realidad 1.2 molecula de O2 ≈ 1 molecula de CO2

 En sistemas acuáticos la evolución de O2 al agua es determinada mediante

titulaciones químicas (botella clara y obscura) o mediante técnicas
polarograficas (electrodos de oxigeno)
EN GENERAL

 Concentración inicial de Oxigeno/CO2

 Incubación por periodo conocido
 Determinación de concentración final después de
periodo en exposición a luz
BOTELLAS CLARA Y OSCURA EN O2

 Uso de dos botellas: clara y oscura

 La botella clara es expuesta a luz y la
concentración final nos va a indicar la
evolución del O2
 La perdida de oxigeno en la botella oscura nos
indica respiración

 Producción Neta = Prod. Bruta - Respiración

 (1)
EL METODO DE CARBONO-14

NaH14CO3 Filtrado

Incubador
14
CO2

Filtro

Contador de
Centelleo Liquido Vial de centelleo
Vapores de
HCL
INOCULO

 Concentración de fitoplancton en la muestra

Corriente de California : 0.3 mCi/ml (~4 mCi/ml)

Cultivos: 0.2 mCi/ml

BOTELLAS

Vial de Centelleo
DBO 20 ml
100-250 ml
INCUBACION/INCUBADORAS

0
5
10
15
In situ

Profundidad Z (m)
20
25
30
35
40
45
50
Figura 6.- Diagrama de incubaciones in situ para
generar experimento P-E
INCUBADORAS

In situ

Figura 7.- Canasta de incubación. Permite incubar varias botellas

a la misma Z
INCUBADORAS

In situ

Figura 8.- Incubador in situ del tipo Araña

INCUBADORAS

Figura 9.- Incubador de luz natural

In situ-simulado
INCUBADORAS

Luz
Artificial

Lewis et al, 1983

Figura 14. Detalles de la vista total del Fotosintetrón.
 se guarda en Vial con 10 ml
de liquido de centelleo

Vapores de HCL
PRINCIPIOS DE MEDICIÓN DE RADIACTIVIDAD
Principales tipos de radiación:
Partículas-a: 2p2n (nucleos de He)
Partículas-b: electrones (e-)
Partículas-g: fotones (hv)

14N + n 14C + p+
7 6

14C 14N + b (e-) + neutrino

6 7

 Autoradiografia (exposicion a una emulsion fotografica)

 Contadores Geiger

 Espectrofotometria de centelleo
 Principios de medición de radiactividad en muestras

14C

e- e- e- e-

SOLVENTE

Intensidad de la luz

Num. de emisiones
200-300 nm
de luz
FLUOR.
Registro de
numero de conteos
(desintegraciones)
340-400 nm por nivel de energía
(canales)
 = CPM (conteos por minuto)

=H
  
E = k1   k2 * H   k3 * H  k4 * H
2 3


CPM
DPM =
E

 Rs  Rb  W *1.05 *1000
PP   *
 V  Ri * N

PP = mg C asimilado/volumen/tiempo

PP = mg C/m-3/h
  Rs  Rb  W *1.05 *1000
PP   *
 V  Ri * N

 Rs – radioactividad de la muestra en dpm

 Rb – radioactividad del blanco en dpm
 Ri – radioactividad del inoculo en dpm
 V – volumen filtrado (litros)
 W – concentración inicial de CO2 en la muestra (mg/l), determinada
mediante la alcalinidad ó conociendo el pH y la salinidad
(Strickland y Parsons, 1978).
 1.05 - factor para considerar que el 14C tiene mas masa que el 12C
y es asimilado 5% mas despacio
 1000 - para transformar mg C L-1 h-1 en mg C m-3 h-1.
 N – tiempo de incubación en horas

Rb – Blanco con filtración luego que se adiciona el inoculo a la muestra

Ri – adición de cantidad conocida de inoculo al liquido de centelleo

CONSIDERACIONES FINALES

 Lavado del material

 Concentración del inoculo

 Tiempo de incubación–Que medimos?

Cortos periodos de incubación (hasta 2 hs): P >> R PPB

Largos periodos de incubacion (2-6 hs): P > R PPN

Periodos >>> largos (hasta 24 hs): P = R Producción Neta de la
Comunidad y aumento
de biomasa