Documentos de Académico
Documentos de Profesional
Documentos de Cultura
Biotecnologia Aplicada en La Medicina
Biotecnologia Aplicada en La Medicina
Tcnicas de modificacin
gentica
I.
II.
III.
IV.
Esquema General
Obtencin y preparacin de la muestra
Liberacin del material gentico
Purificacin del material extrado
Cuantificacin y amplificacin del material gentico
Aplicacin de tcnicas moleculares
Aislamiento y purificacin de
ADN
Un procedimiento suave
de lisis de las clulas y
de
solubilizacin
del
ADN.
Una segunda fase con
uno o varios mtodos
enzimticos o qumicos
de
eliminacin
de
contaminantes
(protenas, ARN y otras
macromolculas).
Purificacin de ARN
La lisis de las clulas se
produce por:
La
utilizacin
de
detergentes.
La lisis celular utilizando
tiocianato de guanidinio,
que es el mtodo ms
utilizado
para
la
extraccin de ARN de
tejidos.
Cuantificacin de cidos
Nucleicos
Determinacin por espectrofotometra
ADN y ARN: Absorcin de Luz UV 260 nm.
Utilizar cubetas de cuarzo.
ADN: 50 g/mL; ARN: 40 g/mL
Mtodo de tincin con Bromuro de etidio
Bromuro de etidio Compuesto fluorescente.
Al unirse al ADN su fluorescencia aumenta.
La fluorescencia obtenida es proporcional a la
cantidad de ADN presente.