Mtodos en Microbiologa

Ing. Edwin H. Valle

Microbiologa
Carrera de Zootecnia-CUNOR

Microscopios y Microscopa

Microscopa de campo claro

En la microscopa de
campo claro, el campo
microscpico o rea
observada est
brillantemente iluminada
y los objetos en estudio
aparecen ms oscuros
que el fondo.

Microscopa de campo oscuro

En la microscopa
de campo oscuro,
se usa el mismo
microscopio, solo
que se agrega un
condensador de
campo oscuro.

Microscopa de fluorescencia

Es importante y muy
utilizado en el laboratorio
hospitalario. Se usa para
examinar muestras que
han sido teidas con
colorantes de
fluorocromo.

Microscopa de fluorescencia
Permite un mayor contraste entre sustancias de diferente
grosor o ndice de refraccin. Se logra mediante el uso de un
condensador y un objetivo especiales que controlan la
iluminacin del objeto.

Se logran acentuar las ligeras diferencias en el espesor o

en los ndices de refraccin de las estructuras celulares.

Microscopa electrnica
Proporciona ampliaciones mucho mayores, que el
con el microscopio ptico.
Las ampliaciones que se logran llegan a 1x106 veces

Preparaciones para el examen por

microscopa ptica
Suspensin en lquido

Frotis

Gota pendiente

Tcnicas de Tincin
Se utilizan muchos colorantes orgnicos para teir
los microorganismos para su observacin al
microscopio, con el objeto de:
Observar mejor el aspecto morfolgico
Identificar partes estructurales
Ayudar a identificar y/o diferencias organismos
similares

Los principales pasos para preparar una muestra

teida para su observacin al microscopio son:
1. Colocar un frotis o una pelcula fina sobre el
portaobjetos
2. Fijacin del frotis por calor
3. Aplicacin de un solo colorante (tincin
simple), o una serie de reactivos (tincin
diferencial)

Tincin simple
En esta se utiliza solo una solucin
colorante.
El frotis se inunda con la solucin
colorante y se deja actuar por un tiempo
determinado.
Se lava con agua y se seca.
Generalmente las clulas se tien de
forma uniforme

Tincin diferencial
En este tipo de tincin, los
microorganismos son expuestos a ms de
un reactivo, con el objeto de poner de
manifiesto diferencias entre distintos tipos
de clulas.

Tincin de Gram
Es una de las tcnicas de tincin
diferencial, mas importante y utilizada en
microbiologa.
El procedimiento es el siguiente:

Soluciones en el
orden de
aplicacin

Gram positivas

Gram negativas

Cristal violeta

Las clulas se tien

de violeta

Las clulas se tien de

violeta

Solucin de yodo

Se forma un complejo Se forma un complejo

cv-I, las culas
cv-I, las culas siguen
siguen violeta
violeta

Alcohol

Las paredes
celulares se
deshidratan, la
permeabilidad de la
pared celular
disminuye, las clulas
permanecen violeta

Se extraen lpidos de
las paredes celulares,
los poros se agrandan y
el complejo CV-I se
elimina, las clulas
quedan incoloras

Safranina

Las clulas no se
afectan

Las clulas toman este

colorante y se tien de
rojo

Tcnicas de cultivo puro

Un cultivo puro consta de una poblacin de clulas,
provenientes de una sola clula progenitora.
Nuestro ambiente alberga una gran cantidad de
microorganismos, un estudio adecuado requiere de
tcnicas que permitan conocer y ordenar la compleja
poblacin (cultivo mixto) y separarla en sus distintas
especies (cultivo puro).

Cultivo y aislamiento de cultivos puros

Los microorganismos se cultivan sobre materiales
nutritivos llamados medios.
Para aislar cultivos puros, primero se debe tomar una
muestra en un recipiente estril.
Luego se inocula o siembre sobre un medio de cultivo,
de forma que todas las clulas queden localizadas
dentro del medio, en forma separada.
Al sembrar por estras las clulas se van separando,
para facilitar una posterior toma de muestra.

 Las clulas crecen rpidamente, que en 18 a

24 horas luego de la inoculacin se tienen
masas visibles de clulas llamadas colonias.
Cada colonia es un cultivo puro de una sola
clase de microorganismo.
Una vez obtenidos los cultivos puros, puede ser
necesario mantener en condiciones el cultivo
para que sigan creciendo durnate cierto perodo
de tiempo.

Corto tiempo
Conservacin
del cultivo

Refrigeracin
de 0 a 10 C

Nitrgeno
lquido a
Largo tiempo

-196 C
Deshidratados
y congelados
(Liofilizados)

Mtodos para el aislamiento de

cultivos puros

 Siembra en placas por estras

Siembra por agotamiento

Extensin en placas

Siembra en masa en placa

Siembra en tubo
En estras

Siembra con aguja por picadura

Cultivo de enriquecimiento

Aislamiento de una sola bacteria

Mtodos para caracterizar

microorganismos
Caractersticas

Mtodos
Observacin al microscopio,
teidos o sin teir.

Determinacin de sustancias
qumicas especficas y de las
condiciones fsicas (luz, calor,
etc.) que se necesitan para
permitir el desarrollo del
microorganismo

Determinacin del aspecto del

crecimiento del cultivo
microbiano, tanto en medios
lquidos como slidos.
Identificacin de los cambios
qumicos realizados por los
microorganismos

Determinacin de la composicin
qumica de los componentes
celulares

Caracterizacin mediante el
estudio de antgenos, presentes
en su superficie.

Determinacin del potencial de

producir enfermedades,
mediante la inoculacin en
animales o plantas