Recuento de linfocitos B y de clulas

de memoria. Respuesta a mitgenos

Mayma Aguirre Kevin Jess

Evaluacin de la Inmunidad Celular

Hemograma

Recuento linfocitario

Evaluacin de sub-poblaciones linfocitarias (Citometra de Flujo)

Evaluacin de la respuesta proliferativa in vitro

Estudios Complementarios

Determinacin de citoquinas ( IL2, IFN, IL4, IL12)

Post cultivo con distintos estmulos (ELISA, Citometra de Flujo)

Up-regulacin de protenas post estmulo

CD40 L, CD25, ICOS , etc. Citometra de Flujo

Evaluacin de los linfocitos B

Cuantificacin de linfocitos B (CD19, CD20)
Cuantificacin linfocitos B vrgenes y de
memoria

LINFOCITO B

Citometra de Flujo
Es una tecnologa rpida que permite el
anlisis de un gran nmero de clulas y los
datos que se obtienen son de cada partcula
individual en la suspensin y no datos
promedios del total de clulas.

Citometra de Flujo
permite la medida simultnea de mltiples parmetros de clulas en suspensin
cuando estn encolumnadas en un flujo son incididas por un lser

Clulas en suspensin

Celda de Flujo

Clulas pasan
en fila
Fluorescencia emitida de
clulas marcadas

LASER
FSC
SSC

Punto de
interaccin

Tcnica estndar de marcacin

con anticuerpos monoclonales
Lisante (Ac. Frmico)

100 uL +
10 uL

Incubacin 15

Muestra

Tamb
Anticuerpos Monoclonales
(Anti-CD19) + FITC o RD1

Lavados

Resuspender

Adquisicin

Datos obtenidos del Citmetro de Flujo

Parmetros de dispersin de luz

FSC (Forward scatter) : relacionado con el tamao de la clula

SSC (Side Scatter) : relacionado con la complejidad interna
(granularidad) de la clula

Datos obtenidos del Citmetro de Flujo

Parmetros de Fluorescencia
Seales emitidas por fluorocromos
(Anticuerpos conjugados , colorantes)

PercP

PE

FITC

Lser

Anlisis de leucocitos de Sangre Perifrica

SSC vs CD45

FSC vs SSC
Leucocitos normales SP

Eo

SSC

Lin

Leucocitos normales SP

R3

PMN
Mo
Bas

R2

R1

Lin

CD45 FITC

CD45:
Antgeno Comn Leucocitario

Sub - poblaciones
linfocitarias

B:24%
CD19

T:68%

NK:6%

R2

CD56

T:68%
T+ B+ NK 100%
CD3

Phenothyping

Mitgenos
Son agentes capaces de inducir proliferacin
de clones de Lin T y/o B de modo inespecfico.
Lectinas: activador policlonal de clulas T, B o
de ambas;
ConA (Cl. T)
PHA (Cl. T)
PWM (Cl. T y/o B)

Evaluacin de la respuesta
Proliferacin de linfocitos: prueba de la
inmunidad celular que examina con qu
eficacia se dividen los linfocitos estimulados
por sustancias llamadas mitgenos.
Se asume que una mayor proliferacin
indica una funcin celular ms efectiva. Los
mitgenos ms utilizados son PHA
(fitohemaglutinina), ConA (concanavalina A)
y mitgeno 'pokewed' (PWM).