IMMUNOHISTOCHEMICAL EXPRESSION OF HEAT SHOCK PROTEINS IN THE MOUSE PERIODONTAL TISSUES DUE TO ORTHODONTIC MECHANICAL STRESS

EXPRESIN INMUNOHISTOQUMICA DE LAS PROTENAS DE SHOCKTRMICO EN LOS TEJIDOS PERIODONTALES DE RATN DEBIDO AL ESTRS MECNICO DE ORTODONCIA

INTRODUCCION
Los resultados del tratamiento de ortodoncia al estrs mecnico induce la reorganizacin del ligamento periodontal (PDL) y haces de colgeno. Como consecuencia, los tejidos periodontales de soporte, el movimiento del diente llamados lado de presin reacciona con la aparicin de los osteoclastos responsables de la resorcin sea. En el lado opuesto, conocido como el lado de tensin, la activacin de los osteoblastos aade fijacin al hueso a la vez una reorganizacin se produce en los tejidos periodontales. El estrs mecnico transferido al PDL provoca reaccin tisular provocando el movimiento del diente. Esta reaccin del PDL es para el mantenimiento de la homeostasis. Se ha vuelto claro que el mantenimiento de la homeostasis puede provocar a la remodelacin de tejido periodontal y la expresin de molculas activas en respuesta a diversos estrs mecnico y la inflamacin. Tradicionalmente, grandes protenas expresadas en diversos tejidos y rganos debido a la carga mecnica y la estimulacin de estrs citotxico que se expresa transitoriamente se conocen como protenas de shock trmico (HSP). HSPs inducidas tambin por diversos cambios patolgicos tales como la isquemia, infecciones e inflamaciones; radiacin, el estrs fsico como la luz, enzima; iones de metales pesados como el arsnico, el etanol, los radicales libres, derivados de aminocidos, diversos productos qumicos inducidos por el estrs. HSPs se cree que participan en la regulacin de la funcin celular y la defensa, as como contra el dao a la clula. HSP se clasifica en dos tipos HSP27 y HSP27 fosfolirado (p-HSP27) se examinaron simultneamente despus de someter los tejidos periodontales al estrs mecnico por el movimiento de ortodoncia. Cambios histopatolgicos de PDL en los lados de presin y la tensin se estudiaron usando animales experimentales de ratn.

MATERIAL Y METODOS
Animales de experimentacin Un total de 30,8 semanas de edad, los ratones macho ddY de peso 35 5 g (30-40g) fueron adquiridos de Japn. Los animales fueron alojados en contenedores de metal forrados con una en una habitacin con aire acondicionado (24 1 c). Los animales fueron alimentados libremente con agua y dieta slida durante la cra Para mantener la boca abierta, el maxilar superior se fij con un hilo atado en el incisivo superior por encima de la mesa y el caucho fue utilizando para fijar la mandbula. Mientras que la boca abierta, el separador fue insertado a la molar superior para inducir estrs mecnico persistente por el mtodo de Waldo. El maxilar superior tiene 3 molares; primer molar (M1), segundos molares (M2) y tercer molar (M3. Adems, M1 y M2 tienen 3 races y M3 tiene de 2 a 3 races. Separador fue inserta entre M1 y M2 de los molares superiores adecuadas para asegurar las estrs mecnico debido a la presin durante un perodo de tiempo. Animales de experimentacin fueron divididos en 6 grupos, 10 minutos, 20 minutos, 1 hora, 3 horas, 9 horas, 24 horas con 5 animales por grupo. Despus de cada tiempo experimental, los animales anestesiados fueron asesinados por inhalacin de ter, y los tejidos correspondientes fueron retirados como secuencia. Los tejidos periodontales de la regin molar superior izquierdo (lado sin tratar) se utilizaron como controles.

PREPARACIN DE TEJIDOS El molar maxilar con los tejidos periodontales fueron retirados y se fijaron en paraformaldehdo al 4% con tampn de fosfato 0,05 M durante 24 horas y descalcificada en solucin al 10% de EDTA durante 3 semanas. Despus de incrustar en parafina, se realizaron cortes seriados de 5 micras para estudios histopatolgicos e inmunohistoqumicos.

cortes histopatolgicos de M1, M2 y M3.

INMUNOHISTOQUMICA Slides fueron sometidos a desparafinacin y luego sometidos a un tratamiento previo durante 30 minutos en incubadora a 60 c. La inmunohistoqumica se realiz con Dako Envision + Kit-K4006. Los anticuerpos primarios utilizados fueron HSP27 anticuerpo monoclonal de ratn (HSP27 (SPM252). Los especmenes fueron de contraste con hematoxilina. para los controles negativos, las muestras se tieron sin anticuerpos primarios.

Conclusion.
Cortes de parafina se hicieron para el analisis inmunohistoqumica empleando HSP27 y pHSP27. En el grupo control, los fibroblastos del ligamento periodontal expresaron bajo HSP27 y pHSP27. Sin embargo, en el grupo experimental, los fibroblastos del ligamento periodontal expresaron HSP27 10 minutos despus de la aplicacin de la carga mecnica en el lado de tensin. La expresin ms fuerte se detect 9 horas despus de la induccin de carga mecnica, pHSP27 se expres tambin de una manera dependiente del tiempo, aunque ms dbil que la HSP27. Los resultados sugieren que la HSP27 y pHSP27 fueron expresadas para el mantenimiento de la homeostasis de ligamento periodontal mediante la activacin de los fibroblastos del ligamento periodontal en el lado de tensin. Tambin sugiere que estas protenas actan como chaperones moleculares para la activacin de osteoblastos y el mantenimiento de la homeostasis.