CURSO: Tcnicas en Biologa Molecular

M.C. Rosa Mara Zavaleta Martnez Como parte del 3er. Congreso Nacional de Ingeniera Bioqumica

La Biologa Molecular
Constituye un tributo a la curiosidad humana en

su aspiracin a realizar descubrimientos, y a la inteligencia creativa del ser humano para disear los complejos instrumentos y las elaboradas tcnicas mediante las cuales se pueden efectuar esos descubrimientos.

Objeto de estudio
Estudio de la estructura, funcin y composicin

de las molculas biolgicamente importantes.

Protenas Enzimas cidos nucleicos

reas relacionadas

Relacin con la IBQ

Procesos de fermentacin
BIORREACTORES BIOSEPARACIONES CINTICA ENZIMTICA QUMICA

BIOQUMICA

Produccin de quimosina en Kluyveromyces lactis. La quimosina se clon entre las secuencias promotoras y terminadoras de gen LAC4 (lactasa de Kluyveromyces). Se insert en pUC19, el plasmido se integr en el cromosoma -la quimosina se secret al sobrenadante de cultivo (80%), el rendimiento fue de 100U de enzima/ml, lo que corresponde al 10% de las protenas celulares.

Quimosina a partir de OMG.

Actualmente mas del

90% del queso que se hace en Inglaterra se obtiene con quimosina obtenida a partir de un OMG (Organismo modificado genticamente).
Sin embargo el queso

no esta hecho con un OMG, sino con el producto de un OMG (la enzima).

Tecnologa basada en la Biologa Molecular

Fundamento:

aprovechar las caractersticas estructurales y funcionales de los cidos nucleicos que constituyen el material gentico de los seres vivos y en cuya secuencia de bases est contenida toda la informacin que requiere un organismo para llevar a cabo sus funciones vitales.

Generalidades sobre el ADN

DNA y RNA son polmeros de los nucletidos

A,C,T,G.

 El polmero es lineal y los nucletidos estn

unidos por enlaces fosfodister 3-5.

Observando el DNA

Micrografa electrnica del DNA liberado de la cabeza rota del bacterifago T2. Peso molecular de 180kb y 68m de longitud, unas 600 veces ms largo que la cabeza del fago

Electroforesis en gel de agarosa.

DNA genmico plasmdico

DNA

Plsmidos
Molcula de DNA

pequea Circular Presente en la mayora de los procariotas Suelen contener genes que confieren propiedades especiales a la clula No llevan los genes esenciales para la sobrevivencia del microorganismo

 Usualmente el material gentico de los organismos

est constitudo por DNA, la excepcin son algunos virus.

ALFABETO BIOLGICO: A, G, C, T.

 La secuencia de DNA es estable y cada vez que

una clula se reproduce, se pasa una copia a cada clula hija.

 Durante el proceso de copiado como

consecuencia de factores ambientales se pueden producir pequeas variaciones en la secuencia: mutaciones variaciones silenciosas. Distancia gentica.

Algunas propiedades del DNA

DESNATURALIZACIN: cuando se eleva

lentamente la temperatura de una solucin de DNA, se alcanza una temperatura especfica a la cual se inicia la separacin de las cadenas.

 RENATURALIZACIN:

las molculas de DNA tienen capacidad para volver a asociarse. Esta propiedad condujo a desarrollar la metodologa de hibridacin del cido nucleico.

Tecnologa del DNA recombinante.

DNA recombinante
Molculas que contienen secuencias derivadas

de ms de una fuente. -uso de enzimas de restriccin: Durante los 70s se observ que las bacterias contienen nucleasas capaces de reconocer secuencias cortas de nucletidos del DNA doble y desdoblar el esqueleto principal de la molcula en sitios muy especficos sobre ambas cadenas del doblete. Las secuencias reconocidas por estas enzimas son de 4 a 8 nucletidos de largo.

Enzimas de restriccin

Enzimas de restriccin

RFLP
Polimorfismo en la longitud de los fragmentos de

restriccin.

Clonacin de DNA
Tcnica fundamental

para producir grandes cantidades de un segmento de DNA especfico.

PCR
EN 1983, Kary Mullis,

desarroll una nueva tcnica que actualmente se usa para amplificar un fragmento especfico sin necesidad de clulas bacterianas.

Secuenciacin de DNA
En 1977 se public la

secuencia completa de nucletidos de un genoma viral ntegro, el de el fago X174 de 5375 nt de longitud. Este acontecimiento decisivo en Biologa Molecular. Se logr en el laboratorio de Frederick Sanger, quien 25 aos antes haba determinado la primera secuencia de aminocidos de un polipptido (insulina).

Manejo de la informacin
www.ncbi.nlm.nih.gov/ CENTRO NACIONAL

DE INFORMACIN EN BIOTECNOLOGA.
Base

de datos que contiene informacin sobre secuenciacin, avances biotecnolgicos en diferentes organismos, herramientas para el manejo de secuencias nucleotdicas y proteicas.

Ejemplo de bsqueda

Secuencia nucleotdica de un gen.

Anlisis BLAST
Basic Local Alignment Search Tool , esta herramienta encuentra regiones de similitud local entre secuencias. El programa compara nucletidos secuencias de protenas con las secuencias registradas en la base de datos. Puede ser usado para determinar relaciones evolutivas y funcionales entre secuencias, as como para ayudar a identificarmiembros de familias de genes.