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26/08/2016

Mutaciones = cambios en el ADN


Son cambios permanentes en la secuencia de bases
del ADN
Frecuencia: en humanos aproximadamente 1 nt por
109 nt por generacin
No se incluyen como mutaciones a los cambios
cromosmicos numricos o estructurales

Replicacin del ADN

26/08/2016

Origen de replicacin

Los cinco tipos de ADN polimerasas de los mamferos

Lectura de prueba o proofreading solo hacen la DNA pol III y la II

Origen de las mutaciones


Espontneas = errores en la replicacin del ADN
o por agentes ambientales (radiacin csmica, sustancias
endgenas)
Existe una tasa basal de mutaciones espontneas

Inducidas =

por agentes mutagnicos

- radiacin ionizante (rayos X, lluvia radiactiva) afecta a todas las cels


- radiacin no ionizante (UV) causa dmeros de T en epidermis
- qumicos:
anlogos de bases (5-bromouracilo)
intercalantes (Bromuro de etidio)
c. Nitroso (C a U)
Cloruro de vinilo, formaldehdo, sacarina,etc

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Clasificaciones
- Segn el tipo celular . Germinal
. Somtica

- Segn criterio morfolgico


. Puntuales:

Sustituciones
Delecin
Insercin

. De extensin variable o segmentarias:


Deleciones
Inserciones
Expansin de repeticiones de tripletes

- Segn criterio funcional


en exones

en intrones
en promotor

. Silenciosas
. Sin sentido
. De cambio de sentido
. De cambio del marco de lectura
. De expansin de tripletes
. De sitio de corte y empalme (5 GT..AG3)
. De cajas TATA otras

Mutaciones puntuales por sustitucin:


Transiciones y transversiones
En teora las transversiones deberan ser dos
veces ms frecuentes que las transiciones

Transiciones

Transversiones

En realidad las transiciones son ms


comunes que las transversiones

Consecuencias de la sustitucin

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Ejemplos: Anemia Drepanoctica

Mutacin cambio de sentido en posicion 6 Glu por Val en globina

Consecuencias de la insercin

Por expansin de tripletes

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Modificaciones de las bases

Desaminacin
Sitios Apurnicos (AP)
Dmeros de Pirimidinas
Metilacin: por metilnitrosoguanidina,
nitrosaminas, dimetilsulfato.

Formacin de sitios AP

por hidrlisis espontnea (se


forman sitios apurnicos), o por
cido nitroso.

Desaminacin
5-metil citosina

Timina

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Dmeros de timina

Reparacin del ADN

Sistemas de reparacin del ADN


1- ADN polimerasa lectura de prueba
2- MMR:(miss-matches repair )
Elimina una o unas pocas bases mal apareadas despus de la replicacin.
Son cinco protenas. La ms representativa es la h MSH2
3- BER: (base excision repair)
No es inmediato como el anterior. Repara bases. Utiliza glicosidasas y
luego una APE (endonucleasa) que corta donde falta la base.
4- NER:(repair excision nucleotide)
Es el ms complejo (30 protenas) con muchos pasos y acta en cualquier
momento. Es el que habitualmente soluciona los dmeros de timina. Detecta y
elimina las alteraciones que deforman la doble hlice. Muchas veces acta asociado
al complejo de transcripcin (FTIIH)
5- SISTEMA DE REPARACIN POR RECOMBINACIN:
Vinculado a la reparacin de rupturas de la doble cadena de ADN. Opera
en la recombinacin mittica y meitica. Utiliza como molde otra molcula de ADN
hermana u homloga. Protenas BRCA 1 y BRCA 2

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Sistemas de reparacin del ADN

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Tasa de mutacin espontnea


Frecuencia de mutacin nueva en humanos aprox 1 nt
por cada 109 nt por generacin (1x10-9).
En los distintos genes vara entre 1x10-4 a 1x 10-7 por
locus por divisin celular.
Factores que influyen en la tasa de mutacin
- Tamao del gen
- Tipo de secuencias de bases (puntos calientes CG)

Mtodo directo: enfermos con padres sanos

Distintos genes tienen distintas


tasas de mutacin
No silenciosas

Silenciosas

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DEFINICIN DE POLIMORFISMO
EXISTENCIA SIMULTNEA, EN UNA POBLACIN, DE GENOMAS CON
DISTINTOS ALELOS PARA UN LOCUS DETERMINADO

VARIACIONES DE SECUENCIA DEL ADN

POSICIN DEFINIDA EN UN CROMOSOMA

MUTACIN = POLIMORFISMO?
Si bien la causa de la presencia de polimorfismos es la mutacin, la
distincin entre ambos trminos no es clara:

Mutacin: habitualmente, se asocia con situaciones excepcionales,


en especial patolgicas.

Polimorfismo: cuando la presencia de la variacin gentica es:


-razonablemente comn en la poblacin y estable
-nada o poco perjudicial

Se considera que un locus es polimrfico cuando la variabilidad


afecta a ms del 1% de la poblacin

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POLIMORFISMO

Consecuencias moleculares de
las mutaciones
Ganancia de funcin:
expresin de una nueva proteina o sobreepresin de una proteina ya
existente= enfermedades dominantes

Prdida de funcin:
no se sintetiza la proteina = enfermedades recesivas (los dos alelos
mutados)
Pero: Insuficiencia haploide (heterocigota enfermo, 50% no alcanza)
Dominancia negativa (proteina no funcional que anula la funcin
de otras protenas, protenas multimricas)

Deteccin de las
mutaciones

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TCNICAS DE BIOLOGA MOLECULAR


Permiten detectar las distintas macromolculas
biolgicas: protenas, ARN y ADN.
Son herramientas que ayudan a analizar las variaciones
genticas
Primer paso: hay que realizar una semipurificacin del
material a procesar

Geles

1 ELECTROFORESIS

- es una tcnica que permite separar molculas por su peso


molecular o por su carga
- se puede realizar en geles de agarosa o de poliacrilamida
- se realiza en una cuba horizontal (agarosa) y vertical
(poliacrilamida)
- las molculas cargadas negativamente van a desplazarse
hacia un polo positivo
- ADN y ARN tienen cargas negativas naturalmente
- para que las protenas se desplacen o corran hacia el
polo positivo se las hace negativas usando el pH y
agregando un detergente SDS (dodecilsulfato de sodio)
SDS-PAGE

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1 ELECTROFORESIS

gel agarosa

Electroforesis en gel de agarosa al


1% de fragmentos de ARNm.

Electroforesis en gel de agarosa al


0,8% de fragmentos de ADN de 500
a 20.000 pares de bases.

ADN

ARN

Tincin Bromuro de Etidio

Tincin Bromuro de Etidio

1 ELECTROFORESIS

gel poliacrilamida

PROTENAS
tincin Coomasie Blue

2 DETECCIN
ADN
Southern

PROTENAS
Western

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Southern
Sonda= cDNA regin repetida en el
gen de interes

RFLP= polimorfismos de la longitud


de fragmentos de restriccin
Corto al ADN con EcoRI = veo las
variaciones en el sitio de corte (o
de restriccin) de la enzima
ADN del paciente 1

8,3

4,4

2,9

2,5

Fingerprinting o huella
digital (VNTR)
Variabilidad del nmero de
repeticiones en tandem
del ADN minisatlite

Corto al ADN con EcoRI = veo


las variaciones en el sitio de
corte (o de restriccin) de la
enzima
Si la sonda es un fragmento
de ADN minisatlite
Detecto variaciones en el
patrn ADN minisatlite

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PCR (reaccin en cadena de la


polimerasa)
Ventajas
Se puede emplear cantidades muy pequeas de ADN
No usa sondas radioactivas
Pero
hay que conocer la secuencia de interes
no puede utilizarse para secuencias muy largas

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FIN

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