Universidad Santo Tomas
Facultad de Salud * Nutrición y Dietética * NUT-046 * Microbiología y Parasitología Alimentaria
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LABORATORIO Nº 1
NORMAS DE BIOSEGURIDAD Y BUENAS PRACTICAS DE LABORATORIO
Los laboratorios de microbiología constituyen ambientes de trabajo especiales, que pueden presentar
riesgos de enfermedades infecciosas para las personas que se encuentren en o cerca de ellos. El
trabajo diario en el laboratorio es un trabajo de grupo, en donde la actitud de cada uno de los
integrantes ante las prácticas, así como el entrenamiento que posean en las técnicas requeridas para
el manejo de material contaminado, determinan su propia seguridad, así como la de sus compañeros
y la de la colectividad en general.
Para trabajar en el laboratorio de Microbiología tenga presente lo siguiente:
1. En el laboratorio el o la estudiante debe permanecer con delantal blanco y el cabello recogido
y debe utilizar siempre mascarilla.
2. Usar un cuaderno solo para los pasos prácticos. DEBE TRAERLO AL LABORATORIO.
3. Cada estudiante debe anotar en su cuaderno: fecha, número del laboratorio, las actividades
con sus observaciones y resultados
4. Leer la correspondiente Guía del paso práctico para rendir la Prueba de laboratorio y luego
realizar las actividades prácticas aplicando las normas de Bioseguridad y Buenas Prácticas
5. Mantener el celular en silencio y guardado
6. Prohibido comer y beber dentro del laboratorio
7. Lavarse las manos con agua y jabón antes de comenzar a trabajar y después de terminadas las
actividades prácticas. No llevarse las manos a la cara, ojos y cabello.
8. Mantenerse en su lugar de trabajo y no deambular por el laboratorio. No debe cambiarse de
mesón
9. Seguir instrucciones y avisar al profesor los problemas.
10. Aplique buenas prácticas para evitar la contaminación de materiales por aerosoles y partículas
inertes suspendidas en el aire que luego caen por acción de la gravedad.
11. Microorganismos adheridos a los aerosoles y partículas inertes son virus, bacterias, esporas de
bacterias y esporas de hongos
12. El piso del laboratorio contiene suciedad con microorganismos y esporas transportadas en los
zapatos.
13. La Microbiota normal de la piel de las manos y la mucosa de boca y nariz contienen
microorganismos. No hablar mientras se trabaja. Solamente la microbiota transitoria de la piel
se elimina con el lavado de manos.
LAB1: actividad
CONCEPTOS, MATERIALES Y EQUIPOS DE USO FRECUENTE DURANTE EL DESARROLLO
DE LA ACTIVIDAD PRÁCTICA
Para llevar a cabo las actividades del semestre en el laboratorio debemos familiarizarnos e
interiorizarnos con los conceptos, términos, materiales y equipos de uso frecuente en microbiología,
ya que estará en contacto con distintas poblaciones microbianas y debe saber manejar en forma
fluida la información que le permita discernir en forma satisfactoria con el conocimiento de los
fundamentos de lo realizado.
(A) …TERMINOS:
1. La técnica aséptica la constituyen un conjunto de medidas, procedimientos y actividades,
destinados a disminuir la contaminación microbiana de materiales y el operador. Ej. Higiene de
manos, área de trabajo alrededor del mechero, etc.
2. Esterilización es el proceso que garantiza la eliminación completa de toda forma de vida
microbiana de objetos inanimados incluyendo las esporas. Puede conseguirse a través de
métodos físicos, químicos o gaseosos.
3. Material estéril corresponde a todos los insumos que se han sometido a un proceso de
esterilización. Por ejemplo: Calor húmedo (autoclave 121°C por 15 minutos a 15 Lb/pug 2 ) o
calor seco (Pupinel u horno 160-180°C por 1 -2 horas) o gas de Óxido de Etileno o radiaciones
ionizantes de alta energía.
4. La limpieza es el proceso físico, químico y mecánico que conlleva a remover, separar y
eliminar la suciedad orgánica e inorgánica o detritus de la superficie del material o equipos.
5. La descontaminación se refiere a las medidas adoptadas para asegurar que el manejo de un
material de uso microbiológico sea inocuo al reducir su contaminación con microbios o
gérmenes. Por ejemplo, flamear la boca de los tubos sobre la llama superior del mechero
antes de realizar un procedimiento de siembra.
6. Desinfección es la destrucción de formas vegetativas de microorganismos en objetos
inanimados y no necesariamente esporas. Se realiza por métodos químicos o físicos. Ejemplo
soluciones de cloro, yodo, ácido peracético, etc.
7. Asepsia es la ausencia de microorganismos.
8. Antisepsia: uso de sustancias químicas sobre la piel y/o mucosa para disminuir la cantidad de
microorganismos por ejemplo alcohol gel, povidona yodada, alcohol 70% son considerados
antisépticos.
9. Area aséptica del mechero Bunsen: es el área alrededor del mechero equivalente a una
cerámica del mesón (aprox. 20x30 cm), donde se distribuyen los materiales y que tiene como
propósito el de disponer de una área libre de contaminación, debido a que la llama del
mechero calienta el aire y este asciende desplazando los aerosoles y partículas suspendidas en
el aire del laboratorio.
(B)…MATERIALES Y EQUIPOS:
En conjunto con el Profesor, conocerán los principales materiales y equipos del laboratorio de
Microbiología:
1. Microscopio óptico permite una imagen aumentada de los microorganismos (sinónimos:
microbios o gérmenes) que no pueden ser observados con el ojo desnudo. Responda en su
cuaderno las siguientes preguntas:
a) ¿Cuál es la unidad de medida usada para expresar el tamaño de los microbios?
b) ¿Cuál es el aumento total de un microscopio óptico que permite observar bacterias y
levaduras?
c) ¿Cuál es el aumento de la lente inmersión y por qué se debe usar con aceite para
microscopía?
d) ¿Cuál es la posición correcta del condensador y del diafragma para observar preparaciones
realizadas con una muestra líquida?
2. Tinciones y colorantes son usados para colorear los microorganismos y así aumentar el
contraste con el entorno cuando los observamos en el microscopio óptico, es decir los
colorantes hacen visible los objetos transparentes. Es necesario preparar un frotis con la
muestra que consiste en extenderla sobre un portaobjeto, luego dejar secar la muestra para
luego fijarla con calor suave pasando el portaobjeto sobre la llama del mechero. Las técnicas
de tinción con diversos colorantes facilitan la observación al aumentar notablemente el
contraste, así, por ejemplo en la tinción de Gram el contraste se fundamenta en la diferente
composición química de la pared celular que presentan las bacterias Gram positiva y Gram
negativas. Cuando se usa un solo colorante para teñir microbios se denomina tinción simple,
por ejemplo con cristal violeta o con azul de metileno. Responda en su cuaderno las siguientes
preguntas:
a) ¿Por qué en microbiología se usan “colorantes básicos”?
b) ¿Cuáles son las etapas para preparar un frotis?
c) ¿Cuáles son las recomendaciones para observar un frotis teñido al microscopio?
d) Describa las etapas de la tinción de Gram
e) ¿Cuál es la posición correcta del condensador y del diafragma para observar preparaciones
teñidas con la Tinción de Gram?
f) ¿Por qué la Tinción de Ziehl-Neelsen es considerada una Tinción diferencial al igual que la
Tinción de Gram?
3. Medios de cultivo son usados para que los microorganismos se multipliquen bajo condiciones
de laboratorio. Algunos medios son líquidos (caldos), otros son sólidos (agares) o semi-sólidos
(Medio). El medio de cultivo provee los nutrientes, incluyendo el agua, sales, fuente de
carbono, nitrógeno, fosforo, azufre, necesarios para permitir el crecimiento y multiplicación
de los microorganismos estudiados. Usted dispone de un frasco comercial de un medio de
cultivo en polvo y usando la información contenida en la etiqueta, responda las siguientes
preguntas en su cuaderno:
a) ¿Cuál es el uso previsto del medio de cultivo sugerido en la etiqueta?
b) Resuma las etapas requeridas para su preparación
c) ¿Cuáles son los ingredientes del medio de cultivo y cuál sería el aporte nutricional de cada
uno de ellos para los microorganismos?
d) ¿Cuál es el pH final del medio preparado?
e) ¿Por qué este medio es clasificado como sólido e indique los recipientes en los cuales puede
ser dispensado para sembrar muestras o cultivos puros?
f) ¿Cómo clasifica su medio de cultivo?
g) ¿Cuál es la función que cumple el agar agregado en los medios de cultivo?
4. Placa Petri es un recipiente de 2 partes redondas de cristal o plástico. La cubierta de la misma
forma que la placa, pero algo más grande de diámetro se denomina “tapa”, para que se pueda
colocar encima de la parte más pequeña denominada “contratapa”, aunque no de forma
hermética. Se utiliza en Microbiología para cultivar los microorganismos. Las placas estériles se
usan para contener medios de cultivos sólidos. Se mantiene en posición invertida de modo que
la contratapa quede hacia arriba y de esta forma evitar la deshidratación del medio de cultivo.
Responda en su cuaderno las siguientes preguntas:
a) ¿Cuál es la parte de la placa Petri que contiene el medio de cultivo?
b) Dibuje una placa Petri con medio de cultivo y en posición de uso correcto, además escriba el
nombre de cada parte.
c) ¿Cuál es el método de esterilización usado para placas Petri de plástico y de vidrio?
5. Tubos de ensayo son materiales de vidrio que se usan con tapa rosca o tapa metálica a presión
para contener medios de cultivo sólidos, líquidos y semisólidos. Responda en su cuaderno las
siguientes preguntas:
a) ¿Por qué se usan los tubos con tapa?
b) ¿Cuál es el proceso de esterilización al cual se someten los tubos de vidrio que contienen el
medio de cultivo que se usará?
c) ¿Cuál es el propósito de flamear la boca del tubo de ensayo?
d) ¿Cómo se manipulan los tubos con tapa cuando se procede a sembrar una muestra o cepa
microbiana alrededor del mechero?
6. Mechero Bunsen es un aparato que genera una llama de alto poder calórico que sirve para
esterilizar por incineración o descontaminar por flameado. Responda en su cuaderno las
siguientes preguntas:
a) ¿Por qué es necesario trabajar alrededor del mechero?
b) ¿Por qué la llama amarilla no es útil para el trabajo microbiológico?
c) ¿Cómo deben estar los orificios del cañón del mechero para obtener una llama de base azul
y otra área superior incolora?
7. Asa de inoculación o asa bacteriológica es una herramienta usada en el laboratorio de
microbiología que consta de un mango metálico que sostiene en su extremo de un alambre
terminado en argolla. Se usa para diseminar en zig-zag la muestra o cultivo de microorganismos
sobre la superficie de un medio de cultivo en placa Petri o transferir cultivo líquido desde un
tubo con caldo. Antes de usarla debe esterilizarse el alambre en la llama alta del mechero hasta
lograr un rojo incandescente. Después de usarla se debe volver a esterilizar para destruir toda
forma contaminante que tenga adherido el alambre. Responda en su cuaderno las siguientes
preguntas:
a) ¿Cuál es el volumen de líquido que puede retener la argolla del asa?
b) ¿Cómo se esterilizan las asa plásticas desechables y calibradas?
c) ¿Por qué la incineración es un método de esterilización?
d) Por que el filamento metálico del asa debe adquirir un color rojo incandescente cuando
realizamos la esterilización del asa?
e) ¿Dónde debe permanecer el asa cuando no se está usando?
8. Estufa de cultivo es uno de los equipos necesario para incubar los medios de cultivos que han
sido inoculados con muestras o cultivos. El equipo permite termo regular la temperatura
necesaria para permitir la multiplicación de los microorganismos. El tiempo de incubación o
permanencia del cultivo dentro de la estufa está determinado por el desarrollo de colonias en
los medios sólidos o turbidez en los tubos con caldo. Las estufas para cultivo generalmente
constan de una puerta interior de vidrio que evita los cambios de temperatura. Responda en
su cuaderno las siguientes preguntas:
a) ¿Cuál es la temperatura recomendada para aislar microorganismos mesófilos y tiempo de
incubación?
b) ¿Cuál es la temperatura recomendada para aislar microorganismos termófilos y tiempo de
incubación?
c) ¿Cuál es la posición de las placas Petri dentro de la estufa de cultivo?
9. Horno esterilizador o Pupinel es un equipo a base de calor seco que elimina microorganismos
por coagulación de las proteínas. Su uso en el laboratorio se limita a material que no puede ser
esterilizado en el autoclave, por ejemplo placas Petri y tubos de vidrio. El proceso de
esterilización se realiza a 160°C por 2 horas o 180°C por 1 hora. El material lleva controles
químicos que garantizan el proceso de esterilización. Responda en su cuaderno las siguientes
preguntas:
a) ¿Cómo se sabe que el material está estéril?
b) ¿Por qué se debe esterilizar?
c) ¿Por qué la ebullición no sirva para esterilizar?
d) ¿Qué son las esporas
10. Autoclave es un equipo que funciona con vapor de agua a presión, tal cual lo hace la olla a
presión casera. La presión elevada generada por el vapor de agua (15 Lb/pug 2 ), permite
alcanzar temperaturas de 121°C, que por 15 minutos garantizan el proceso de esterilización.
Responda en su cuaderno las siguientes preguntas:
a) ¿Cuáles son los controles que se usan para garantizar el proceso de esterilización?
b) ¿Cuáles son los materiales que se someten al proceso de autoclavación?
c) ¿Por qué es obligatorio autoclavar el material contaminado antes de eliminarlo a la basura o
lavarlo?
