Gentica Forense: Un delator llamado DNA

QU GENTICA FORENSE? Con la denominacin de gentica forense se define el uso de

ES LA

ciertas tcnicas empleadas en gentica para la identificacin de los individuos en base al anlisis del DNA. El cido desoxirribonucleico o DNA, es una sustancia qumica que se

encuentra en el ncleo de todas las clulas del cuerpo y permanece invariable; por ello en la actualidad es muy usado en ciencia forense como una herramienta fundamental para la determinacin del vinculo filial1 ya que el DNA proviene un 50% del vulo materno y el 50% restante, del espermatozoide paterno. La funcin del DNA dentro de la clula es transmitir los caracteres hereditarios y esto lo realiza ordenndole a la clula (codificando) que fabrique determinadas protenas. A un sector de la cadena de DNA que codifica la fabricacin de una protena se la denomina Gen; por ejemplo, el color de los ojos, color del pelo, grupo sanguneo, etc., son manifestaciones de los genes que poseemos. Los genes, de todos los seres humanos son poco variables y constituyen un gran porcentaje de la informacin contenida en la molcula de DNA; la informacin restante, incluye sectores que pueden exhibir un cierto grado de variabilidad entre los individuos, en consecuencia: todos los seres humanos tenemos sectores del DNA en comn y otros que no lo son. El llamado Anlisis de DNA es un conjunto de tcnicas utilizadas para detectar sectores en la cadena de DNA que son variables en la poblacin. Estas regiones son denominadas regiones polimrficas o polimorfismos. Al analizar un determinado nmero de regiones polimrficas
la probabilidad de que dos individuos sean genticamente iguales es prcticamente nula, excepto en los gemelos univitelinos.

Nace una nueva especialidad, nace la Gentica Forense.

La Hemogentica Forense nace a principios del siglo pasado, cuando Karl Landsteiner describe el sistema ABO de los eritrocitos y Von Durgen y Hirschfeld descubren su transmisin hereditaria. Esta ciencia surgi como una rama de la Criminalstica cuyo objetivo era la identificacin gentica tanto en casos de investigacin criminal como en estudios biolgicos de la paternidad. Inicialmente, las investigaciones se centraban en el estudio de antgenos eritrocitarios (sistema ABO, Rh, MN), enzimas eritrocitarias y sistema HLA. Con el estudio de dichos marcadores poda incluirse o excluirse a una persona como

vnculo jurdico, determinado por la procreacin, entre los progenitores y sus hijos

posible sospechoso por poseer una combinacin gentica igual o diferente a la del vestigio biolgico hallado en el lugar de los hechos.

Pero fue a mediados del siglo pasado cuando gracias al descubrimiento del DNA y de su estructura y al posterior avance en las tcnicas de anlisis de dicha molcula, que la Hemogentica Forense evolucion considerablemente hasta el punto de que hoy en da puede hablarse de una nueva subespecialidad dentro de la Medicina Forense: la Gentica Forense.

Esta subespecialidad se centra bsicamente en tres reas:

Identificacin de personas desaparecidas a partir del cadver.

Investigacin de la filiacion, tanto desde el punto de vista de la reclamacin como de la impugnacin.

Criminologa, anlisis de restos orgnicos como pelos, semen, saliva, sangre, etc. que han quedado en la escena de un crimen o de un delito sexual.

Para realizar su objetivo la Gentica Forense emplea dos tcnicas principalmente: la RFLPs (Fragmentos de restriccin de longitud polimrfica) y la PCR y la eleccin de la tcnica a aplicar estar determinada por la cantidad y calidad del DNA presente siendo la segunda la ms utilizada, ya que la RFLPs presenta grandes restricciones en estos aspectos.

Estas limitaciones son superadas por la PCR o amplificacin en cadena de la polimerasa2, ya que esta permite amplificar ms de un milln de veces una muestra de ADN. Con el uso de la PCR muestras tan mnimas como pueden ser las halladas en un pelo con raz, una minscula mancha de sangre o semen e incluso caspa son suficientes en muchos casos para llevar a cabo un anlisis de identificacin gentica. Las regiones o fragmentos utilizados son los llamados marcadores genticos, microsatlites o STRs.

Estos marcadores genticos son regiones conocidas del DNA, muy variables de un individuo a otro y que se heredan sin cambios de una generacin a la siguiente. A las

distintas formas heredables de estos marcadores genticos se les denomina alelos, por lo

La polimerasa es una enzima que cataliza la unin de las subunidades nucleotdicas en el DNA

tanto constituyen una herramienta muy valiosa en los estudios de identificacin gentica y filiacin ya que: cada individuo tendr unos marcadores genticos distintos a los del resto, tendr sus propios alelos.

La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR), es una tcnica de biologa molecular mediante la cual un pequeo fragmento de cido desoxirribonucleico se clona o duplica varias veces para obtener copias mltiples.

La PCR fue ideada por el bioqumico estadounidense Kary B. Mullis en 1983 y desarrollada posteriormente por Mullis y su colaborador Fred A. Faloona en la Cetus Corporation de Emeryville, California. Aunque la utilidad de esta tcnica no se reconoci inmediatamente, en 1991 su uso ya se haba generalizado. En 1993 Mullis obtuvo el Premio Nobel de Qumica por este trabajo.

La PCR opera en forma de ciclos. Cada ciclo duplica la cantidad de DNA, por lo que permite obtener hasta mil millones de copias de un solo fragmento en unas pocas horas. La tcnica es sencilla y pueden utilizarla cientficos sin demasiada formacin en biologa molecular.

La reaccin en cadena de la polimerasa imita el fenmeno de replicacin o reproduccin del DNA que ocurre de forma natural en las clulas vivas. La mayor parte del DNA es de doble cadena (es decir, cada cadena de DNA est apareada con otra complementaria). Durante la replicacin las dos cadenas se separan y una enzima (una protena que inicia reacciones qumicas) especializada llamada polimerasa hace una copia de cada una de las cadenas, utilizando la original como plantilla o modelo. Normalmente este proceso de copia tiene lugar cuando la clula se divide y da lugar a la formacin de un par de cadenas hijas por cada una de las cadenas parentales.

La polimerasa necesita otros dos ingredientes para copiar DNA. El primero es una reserva de los cuatro bloques bsicos que constituyen la molcula de DNA, llamados nucletidos o bases (ATP, GTP, CTP, TTP). El segundo es un cebador oligonucleotdico o primer3. La PCR utiliza estos mismos ingredientes para copiar ADN en una ampolla.

fibra corta de RNA formado por varios nucletidos a partir de la cual la polimerasa comienza la sntesis de DNA.

La reaccin tiene lugar en tres fases: Desnaturalizacin: la plantilla o fragmento original de DNA se calienta hasta una temperatura de 90 a 95 C durante 30 segundos; esto provoca la separacin de las dos cadenas.
Cebador

Templado: la temperatura de la mezcla se rebaja hasta 55 C durante 20 segundos para que los cebadores oligonucleotdicos se enlacen con el DNA escindido.

Polimerizacin: la temperatura de la mezcla se eleva hasta 75 C para que la polimerasa copie rpidamente la molcula de DNA.
Base nucleotdica

Estas tres fases tienen lugar en la misma ampolla y constituyen un ciclo completo de PCR, que se realiza en menos de dos minutos. Tericamente, el ciclo de PCR se puede repetir sin lmite, pero la polimerasa, los nucletidos y los cebadores suelen renovarse al cabo de unos 30 ciclos. Estos 30 ciclos, que duran menos de tres horas, bastan para producir mil millones de copias de DNA.

La polimerasa utilizada en los primeros experimentos de PCR resultaba fcilmente destruida por el calor, lo que obligaba a aadir ms enzima en cada ciclo para sustituir a la inactivada por las elevadas temperaturas de la primera fase. Pero en las versiones modernas de la PCR se utiliza una polimerasa termoestable llamada Taq polimerasa, extraida de una bacteria termofila, como sta protena no resulta destruida por las elevadas temperaturas a las que transcurre la PCR, basta con aadirla una vez, al principio de la reaccin. La Taq polimerasa hoy en da se fabrica con bacterias modificadas genticamente.

El uso de la PCR exige mucho cuidado. Lo ms importante es evitar la contaminacin de la mezcla reactiva. Es tan sensible, que permite multiplicar accidentalmente cantidades mnimas de DNA contaminante. Se utilizan procedimientos especiales para evitar la contaminacin.

Una vez amplificado el DNA, los fragmentos resultantes son separados por medio de un proceso de electroforesis, proceso en el que se utiliza una corriente elctrica controlada con la finalidad de separar biomolculas segn su tamao y carga elctrica a travs de una matriz gelatinosa. La electroforesis consta de las siguientes etapas:

El DNA extrado de la muestra se trata con una endonucleasa de restriccin, que es

una enzima que corta el DNA en donde tenga una secuencia caracterstica. La enzima que se usa ms frecuentemente para el anlisis legal es HaeIII, que corta el DNA en la secuencia 5'GGCC-3'.

Tras la digestin del DNA, los fragmentos resultantes se separan segn su tamao

mediante electroforesis en geles de agarosa, que es un carbohidrato extrado de un alga. Durante la electroforesis, las molculas de DNA, que poseen carga negativa, migran hacia el electrodo positivo. Al avanzar las molculas de DNA, su velocidad de migracin se ve reducida por la matriz del gel de agarosa. Las molculas menores se mueven ms deprisa a travs de los poros del gel que las de mayor tamao. Como resultado, se produce una separacin continua de los fragmentos de DNA de acuerdo con su tamao, de modo que los fragmentos ms pequeos avanzan la mayor distancia con referencia al origen o punto de aplicacin de la muestra.

Debido a que se analizan regiones polimrficas que varan de un individuo a otro segn la distribucin de nucletidos estas describen distintos distribuciones de las bandas originadas por la electroforesis de acuerdo al peso de los fragmentos, llamada huella

RESULTADO

FINAL DE LA

PCR

ELECTROFORESIS.

Las zonas que se encuentran ms abajo tienen menor peso. La distribucin de las bandas es nica para cada individuo si se analizan regiones polimrficas.

genetica.

Genetica.

La ciencia ha entrado en los mbitos judicial y policial por la puerta de las investigaciones de crmenes violentos y de desaparecidos, pero su uso no ha hecho ms que empezar.

El procedimiento de investigacin para la identificacin forense comienza cuando se comparan patrones genticos del sospechoso o la vctima, con aquellos derivados de una muestra o evidencia; con slo uno de los dos alelos que sean distintos, ya es suficiente para excluir en forma categrica al sospechoso.

El examen de estos polimorfismos o de patrones caractersticos presentes en las secuencias de nucletidos es hoy la herramienta ms poderosa para confirmar o descartar la existencia de parentesco entre individuos. El anlisis del DNA nuclear por mtodos como la tcnica PCR, particularmente considerada en el presente trabajo, permite detectar

determinados fragmentos de DNA que difieren en su longitud, segn los individuos, porque se trata de secuencias cuyo nmero vara de una a otra persona. Estos polimorfismos, se heredan siguiendo las leyes de Mendel y dan lugar, en el anlisis por electroforesis que separa los segmentos de ADN por su masa o longitud, a un patrn de bandas que constituye lo que se ha llamado "huella gentica". Este patrn, resulta de la combinacin de patrones de bandas de los padres, por la tanto de acuerdo a las coincidencias con ellos se puede excluir o incluir a un presunto padre. El uso adecuado de esta metodologa permite establecer la inclusin de la paternidad con una certeza mayor del 99,99%.

Existe un ADN, el de las mitocondrias (ADN mt), que se hereda slo a travs de la madre. El ADN mitocondrial est constituido por dos hebras circulares: H (heavy) y L (light). Cada molcula se aloja en los recovecos externos de la membrana interna de la mitocondria. El mayor peso de la hebra exterior se debe a su adjuncin a esta membrana. Una burbuja de iniciacin en la cadena pesada, llamada D-loop, parece ser un mecanismo de control. Es una

regin polimrfica con dos regiones hipervariables, muy tiles para seguir linajes maternos. siendo por lo tanto apropiada para determinar la individualidad gentica. Cabe sealar que si bien esta regin evoluciona con la suficiente rapidez como para que pueda tener una funcin caracterizadora, lo hace en una medida tal que permite el reconocimiento de patrones comunes con parientes maternos prximos.

La amplificacin del loop D mediante la tcnica PCR y su posterior secuenciacin permiten evaluar si dos individuos son hijos de la misma madre. La probabilidad de que dos personas no emparentadas tengan la misma secuencia de nucletidos en el loop D del ADNmt es muy baja, slo del 0,27 % . Sin embargo, a pesar de la importancia implcita en este hecho, es otro el rasgo que concede un valor inestimable a este mtodo: cuando hay slo un pariente sobreviviente y ste se encuentra a ms de una generacin de distancia del individuo en cuestin, la identidad slo puede ser resuelta mediante este procedimiento, en cuyo caso el parentesco debe ocurrir por va materna. Este mtodo a sido de mucha utilidad para identificar cadveres NN hallados en fosas comunes.

En Chile desde la segunda mitad de los aos 90, se incorporan las pruebas de DNA cuando se establecen dos laboratorios: la Polica de Investigaciones, dedicado a los aspectos de criminalstica, y el Servicio Mdico legal, encargado de la identificacin de personas.

Por medio de la utilizacin de las pruebas de DNA se han podido resolver casos emblemticos en nuestro pas, como por ejemplo el caso Matute Johns y se han logrado identificar los restos de detenidos desaparecidos. En ambos casos exista la posibilidad de comparar la huella gentica con las muestras aportadas por sus familiares, lo que en el caso de los segundos se ha estructurado en un banco de DNA para evitar que los decesos de las parientes de ms edad impidan seguir este arduo proceso.

En Chile operar en un futuro no muy lejano un sistema de registro de DNA por ley, el que funcionar de la siguiente forma: si un individuo comete un delito deber entregar una muestra de DNA con lo que se obtiene un perfil que se incorporar a un registro estatal, entonces si despus es responsable de otro delito y se obtiene su huella gentica a partir de la muestra hallada en la escena del crimen, ste va a coincidir con la que ya existe registrada y se va a saber a quin se culpa.

Hay crmenes que quedan en la memoria colectiva como la idea de que la justicia no lleg a la verdad, que se castig a inocentes o que no pagaron todos los culpables. Esta es otra

aplicacin de la Gentica Forense, demostrar que ciertas personas condenadas no son las responsables de los crmenes.

La incorporacin de las pruebas de DNA ha revolucionado la investigacin policial y los sistemas de identificacin, gracias a el descubrimiento del DNA y la creacin tcnicas de identificacin de individuos hoy en da se pueden resolver casos que hace algunos aos atrs hubieran quedado en el misterio dando un consuelo a los familiares de las victimas pagando los verdaderos responsables del crimen, o en el caso de identificacin de cuerpos los

familiares tienen la seguridad de que realmente son sus familiares.

Los hijos pueden crecer con una mejor calidad de vida al saber que quien es realmente su padre, tambin se benefician tanto a las mujeres que buscan reconocimiento de filiacin para sus hijos como los hombres que desean demostrar que estn siendo acusados falsamente de ser padres biolgicos de un nio que es imputado como suyo.

Creemos que los estudios realizados pueden ser de gran utilidad no slo en el campo forense para el esclarecimiento de hechos delictivos, identificacin de cadveres y pruebas de paternidad, sino tambin en el entorno de la zoologa, la antropologa, la paleontologa y la arqueologa, a pesar de que el estudio de ADN antiguo ha generado siempre controversia debido a la elevada probabilidad de contaminacin. Creemos que este es un campo en el cual queda mucho por descubrir.