NEFROLOGIA. Vol. XIX. Suplemento 1.

1999

II. BASES MOLECULARES DEL ENVEJECIMIENTO RENAL

Bases moleculares de la apoptosis celular y

su relación con la patología renal
J. X. Comella, N. Llecha, V. J. Yuste, J. Boix, I. Sánchez y J. R. Bayascas
Sección de Apoptosis del Grupo de Neurobiología Molecular. Universitat de Lleida. Lleida.

INTRODUCCION micos son el reflejo de la activación de una maqui-

naria intracelular específica que controla este proce-
La apoptosis o muerte celular programada (por con- so, de la que son especialmente importantes un con-
traposición a la necrosis o muerte accidental) es un junto de enzimas proteolíticos llamados caspasas que
mecanismo desarrollado por los organismos plurice- se describirán con detalle más adelante.
lulares, muy conservado evolutivamente y que se pre-
senta, prácticamente en todos los modelos animales
estudiados. Este fenómeno es un mecanismo de «sui- MODELOS PRIMITIVOS PARA EL ESTUDIO DE
cidio» celular genéticamente regulado implicado en LA APOPTOSIS: CAENORHABDITIS ELEGANS
procesos de desarrollo y de conservación de la ho-
meostasis funcional del organismo. Presenta unas ca- Sin duda, el modelo animal que más ha contri-
racterísticas morfológicas muy bien definidas que fue- buido a entender los mecanismos moleculares que
ron las que inicialmente permitieron identificarlo y ca- regulan la apoptosis ha sido el nematodo Caenor-
racterizarlo. De forma breve, el fenómeno consiste en habditis elegans. Se ha podido comprobar que exis-
una alta condensación, tanto del citoplasma como del ten tres genes esenciales que controlan la ejecución
núcleo, con aparición de protuberancias citoplasmá- del proceso apoptótico en este animal: ced-3 y ced-
ticas envueltas por membrana. Estos cambios inicia- 4 promueven la apoptosis y ced-9 la inhibe (fig. 1)
les se continúan con una fragmentación nuclear y ci-
toplasmática, en forma de cuerpos apoptóticos en-
vueltos por membrana celular que son rápidamente
fagocitados por células especializadas (macrófagos) o,
en algunos casos, por las células adyacentes a la cé- Célula sana
Célula
lula apoptótica. Como consecuencia final, y al cabo Célula decidida a Célula
sana fagocítica
de unas pocas horas, la célula apoptótica ha desapa- morir muerta
recido sin dejar rastro alguno de su existencia previa 1. DECISION EJECUCION
Desde un punto de vista bioquímico, este proceso no DE MORIR DE LA MUERTE FAGOCITOSIS DEGRADACION

se analizó hasta mucho tiempo después de haber sido ces-2

nuc-1
ces-1 ced-3 ced-1
descrito morfológicamente. Las células apoptóticas se ces-3 ced-9 ced-4 ced-7
ced-6
caracterizan por presentar una reducción en su po- ced-2
egl-1 ced-8 ced-5
tencial mitocondrial, acidificación intracelular, pro- ced-11
ducción de radicales oxidantes, externalización de re- ced-10?
siduos de fosfatidilserina de la bicapa lipídica mem-
branaria, proteolisis selectiva de determinadas proteí-
Fig. 1.—La vía genética de la muerte celular programada en C.
nas celulares y degradación de la cromatina en frag- elegans. Las líneas acabadas en punta de flecha (→) indican in-
mentos oligonucleosomales 2. Estos cambios bioquí- teracción reguladora positiva y las líneas perpendiculares (¬) re-
flejan interacciones que regulan negativamente el proceso de
muerte. La decisión de morir depende de cada tipo celular en
Correspondencia: Dr. Joan X. Comella particular; pero una vez que la célula está ya destinada a morir,
Dpto. Ciències Mèdiques Bàsiques el programa genético que desarrolla es universal. Es decir, que la
Universitat de Lleida maquinaria intracelular efectora de muerte es común a todas las
Rovira Roure, 44 células de C. elegans, pero la determinación de morir es una «de-
25198 Lleida cisión» particular de cada célula.

21
J. X. COMELLA y cols.

(ced de Caenorhabditis elegans death genes) 3, 4. Ini- ser funcionalmente activos requieren que el proenzi-
cialmente se caracterizaron porque las mutaciones ma sea fragmentado en los residuos Asp que sepa-
inactivantes de ced-9, siempre y cuando ced-3 y ran cada unos de estos tres dominios 12, 13. En reali-
ced-4 fueran funcionales, incrementaban de forma dad, son las propias caspasas las encargadas de ac-
extraordinaria el número de células que morían du- tivar por proteolisis a otras caspasas. Cuando esto
rante el desarrollo normal del organismo 3. Además, ocurre, las subunidades mayor y menor forman un
la sobreexpresión, tanto de ced-3 como de ced-4, heterodímero: las moléculas activas están formadas
inducía muerte celular y ésta podía ser inhibida por por tetrámeros constituidos por 2 subunidades ma-
ced-9. Se pudo comprobar también que, en C. ele- yores y 2 menores 13. El prodominio, no presente ya
gans, estos tres genes estaban relacionados funcio- en el enzima activo, juega un papel fundamental en
nalmente; así, por ejemplo, se ha demostrado que el mecanismo de activación de la caspasa, ya que
CED-4 puede unirse a CED-3, a CED-9 o a ambos permite la interacción de ésta con otras proteínas re-
simultáneamente. La muerte mediada por sobreex- guladoras del proceso de activación de la vía apop-
presión de CED-4 requiere la presencia de CED-3; tótica. Las caspasas pueden ser clasificadas de tres
mientras que la muerte por sobreexpresión de CED- formas distintas: 1) según la especificidad de corte,
3 es independiente de CED-4, sugiriendo que CED- 2) según el tamaño de su prodominio, y 3) desde un
3 es un mediador de los efectos de CED-4. Del punto de vista funcional (tabla I).
mismo modo, se ha demostrado que la capacidad
de CED-9 para inhibir la muerte mediada por CED-
3 depende de la presencia de un CED-4 funcional, Especificidad de corte
es decir, que, probablemente, las acciones antia-
poptóticas de CED-9 estén mediadas por una inhi- A pesar de que todas las caspasas presentan es-
bición directa de CED-4 5. Después de estos estudios pecificidad por residuos Asp, se establece una pre-
en nematodo, se identificaron los homólogos de ferencia en función del aminoácido que ocupa la
estos genes en mamífero superior. Se identificó Bcl-2 posición 4 en sentido amino-terminal, con respecto
(B-cell leukemia protein-2) como el homólogo del al Asp que será procesado. Según lo dicho, se po-
producto génico CED-9 6, caspasa-3 como homólo- drán dividir las caspasas en tres grupos: un primer
go de CED-3 7 y Apaf-1 (apoptotic protease activa- grupo que presenta aminoácidos hidrofóbicos (tipo
ting factor-1) como homólogo de CED-4 8. A conti- tirosina, Tyr, Y) en esta posición; un segundo grupo
nuación se describirán cada uno de estos homólo-
gos de vertebrados superiores con más detalle.

Tabla I. Clasificación de las caspasas humanas iden-

PROTEASAS TIPO CASPASA tificadas hasta el momento. Existen tres for-
mas diferentes de clasificar las caspasas: por
En realidad, el primer homólogo de CED-3 que se especificidad de corte (tres grupos posibles:
caracterizó en vertebrados superiores fue el enzima I, II y III), por el tipo de prodominio (largo
conversor de la interleucina-1β o ICE debido a una o corto) y según su función de inducción o
moderada homología de secuencia entre ambos de ejecución de la apoptosis
genes 4. Este enzima es el encargado de procesar la Caspasa Grupo Prodominio Instigadora/efectora
proIL-β en IL-β madura 9, 10. Tanto CED-3 como ICE
presentan destacadas características comunes como 1 I L I/E
2 II L I/E
el hecho de ser enzimas proteolíticos con especifici- 3 II C E
dad para residuos de aspartato (Asp, D), presentar un 4 I L I/E
5 I L I/E
residuo cisteína (Cys, C) en su centro activo e indu- 6 III C E
cir muerte apoptótica cuando son sobreexpresadas en 7 II C E
células de mamífero. Se ha podido observar que, en 8 III L I
9 III L I
humanos, estos dos genes iniciales presentan hasta 10 III L I
10 homólogos distintos que han sido secuencial-
mente numerados y llamados caspasas. Esta deno- Grupo
I: WEXD
minación proviene de ser enzimas cisteína, asparta- II: DEXD
sas 11. Estos enzimas se sintetizan como proenzimas III: (L/V) EXD
inactivos que presentan un dominio, en su extremo
Prodominio
amino, de longitud variable, seguido de una subuni- L: Largo
dad mayor y, finalmente, una subunidad menor. Para C: Corto

22
 BASES MOLECULARES DE LA APOPTOSIS CELULAR

que presenta un Asp y un último grupo que no mues- ha mencionado anteriormente, su sobreexpresión en
tra una preferencia clara por ningún aminoácido en sistemas celulares de mamíferos comporta la muer-
especial. Esta preferencia de corte en función del te de la célula que las sobreexpresa. También se ha
aminoácido presente en esta posición 4, hace que demostrado que algunas procaspasas (-1, -2, -3, -6,
determinados substratos proteicos sean más propen- -7 y -8) son procesadas a enzimas activos como con-
sos que otros a sufrir la proteolisis específica por de- secuencia del desencadenamiento del proceso apop-
terminadas caspasas 14, 15. tótico. Además, muchas de las proteínas que se de-
gradan durante el proceso apoptótico presentan dia-
nas de corte propias de caspasa y su proteòlisis se
Tamaño del prodominio realiza en estas dianas. Otras evidencias incluyen
que determinados inhibidores de corte de las cas-
Según este criterio, pueden diferenciarse «caspa- pasas (como por ejemplo, péptidos o proteínas víri-
sas de prodominio largo» (caspasas-1, -2, -4, -5, -8, cas) son capaces de bloquear muchos de los proce-
-9 y -10) y «caspasas de prodominio corto» (caspa- sos apoptóticos in vivo; sin embargo, las evidencias
sas-3, -6, -7 y -11). En general, las caspasas con pro- más concluyentes de su función vienen derivadas de
dominios largos permiten una mayor regulación de los estudios en los que estos genes han sido muta-
su activación, por ejemplo, en estos prodominios se dos en ratones transgénicos: los animales carentes
han encontrado alternativamente, dos tipos de se- de caspasa-3, son los que presentan unos defectos
cuencias. La primera es la llamada «dominio efec- más evidentes en relación con el proceso apoptóti-
tor de muerte» (DED o death efector domain), con- co. En éstos, se presentan áreas del sistema nervio-
sistente en un dominio proteico que permite la in- so en las que existe un considerable incremento de
teracción de la caspasa con moléculas adaptadoras, celularidad como consecuencia de un déficit en el
conectadas, a su vez, a receptores inductores de proceso de muerte y que ocurre de forma fisiológi-
muerte (ver más adelante). Este tipo de dominio se ca en el sistema nervioso. No obstante, en muchos
ha descrito para las caspasas -8 y -10. El segundo otros casos en los que una sola caspasa ha sido eli-
tipo de secuencia encontrada en este prodominio es minada, el fenotipo final del ratón no es muy ma-
el «dominio de reclutamiento de caspasa» (CARD o nifiesto. Esto, sin duda, puede atribuirse a una re-
caspase recruitment domain), una secuencia protei- dundancia funcional del conjunto de caspasas.
ca que permite la interacción de la caspasa con
Apaf-1, es decir, el equivalente de CED-4 en mamí-
feros superiores (ver más adelante). Las caspasas-1, Nuevas funciones para el citocromo C
-2, -4 y -9, junto con CED-3, son las que contienen
CARD en su prodominio 2. Desde hace muchos años, se conoce que el cito-
cromo C está implicado, como uno de los elementos
más importantes de la fosforilación oxidativa, en la gé-
Según la funcionalidad nesis de ATP mitocondrial. En los últimos dos años,
sin embargo, el citocromo C se ha convertido en uno
Funcionalmente, las caspasas pueden dividirse en de los elementos más relevantes en la regulación del
«caspasas inductoras» y «caspasas ejecutoras». Las proceso apoptótico (Revisado por Reed, 1997) 17. El ci-
primeras suelen tener prodominios largos y estar lo- tocromo C se sintetiza en el citoplasma celular a par-
calizadas muy al principio de la cascada de activi- tir de tránscritos nucleares y, más tarde, se transporta
dades proteásicas de tipo caspasa que regulan el pro- al espacio intermembranario mitocondrial donde resi-
ceso apoptótico. Presentan una especificidad de corte de de forma fisiológica. Uno de los principales acon-
que suele estar presente en la secuencia de otras cas- tecimientos que tienen lugar después de inducirse el
pasas, de tal forma que la actividad de las caspasas proceso apoptótico es una redistribución del citocro-
inductoras comporta el corte y la consiguiente acti- mo C desde su posición habitual hacia el citoplasma
vación de las caspasas ejecutoras. Estas, en cambio, celular. Allí esta molécula desencadenará la activación
suelen tener un prodominio corto y su especificidad de las primeras caspasas 18, 19. Las evidencias en favor
de corte se corresponde, fundamentalmente, con una de la función reguladora de citocromo C se basan en
gran cantidad de substratos proteicos, a los que frag- que la salida de esta molécula de la mitocondria hacia
mentarán durante el proceso apoptótico 2. el citoplasma precede a la activación de la caspasa-3
Las evidencias que existen a favor de la implica- y a la degradación de la cromatina. Además, los ex-
ción de las caspasas en la regulación y ejecución tractos citoplasmáticos en los que el citocromo C ha
del proceso apoptótico son múltiples (Revisado por sido eliminado por inmunoprecipitación, son incapa-
Cryns y Yuan, 1998) 16. Por una parte, y como ya se ces de inducir activación de caspasa 3 o fragmenta-

23
J. X. COMELLA y cols.

ción cromatínica, restaurándose esta capacidad cuan- mente conservado con CED-4 capaz de unir nucleó-
do se añade citocromo C a los mismos 20. Bcl-2 impi- tidos y es el lugar de unión del dATP y, finalmente,
de la salida del citocromo C19 y, en cambio, ésta se en el extremo carboxilo presenta una zona rica en re-
ve potenciada por Bax 21, ambas proteínas localizadas siduos triptófano (Trp, W) y Asp (este doblete amino-
en la membrana mitocondrial. Sin embargo, los ex- acídico se repite unas 40 veces), gracias a este último
perimentos más clarificadores sobre la relevancia de dominio, que posiblemente pueda corresponder a un
citocromo C se han realizado en el laboratorio del Dr. dominio de unión proteína-proteína, el citocomo C es
Wang 8, 20, 22. Estos investigadores partieron de extrac- capaz de unirse con Apaf-1. El dominio CARD es el
tos citosólicos de células normales y observaron que responsable de que Apaf-1 se una a procaspasa-9. Para
cuando se les añadía dATP, la caspasa 3 se activaba. que ello sea posible Apaf-1 habrá tenido que unirse a
Si a los extractos se les añadían núcleos, éstos pre- citocromo C y a dATP. Cuando la procaspasa-9 se une
sentaban el típico patrón de degradación apoptótica a Apaf-1, aquella se autocataliza y se activa para pro-
de la cromatina en forma de ladder. Cuando se puri- ceder, posteriormente, del mismo modo con la pro-
ficaron los elementos esenciales mínimos para re- caspasa-3 y continuar así la cascada proteolítica hasta
constituir la activación de la caspasa 3 y la degrada- los substratos, cuya proteolisis conducirá al desman-
ción de la cromatina, se pudo observar que con 4 ele- telamiento celular.
mentos ya era suficiente para reproducir esos fenó-
menos (fig. 2). El primero era dATP, el segundo cito-
cromo C, el tercero caspasa-9 y al último se le llamó Regulación de la apoptosis: receptores de muerte
Apaf-1. Al conjunto de los cuatro elementos se les co-
noce con el nombre de «apoptosoma». Si bien podía El entorno que envuelve a una célula, desde el mo-
resultar más o menos sorprendente que los tres pri- mento en que ésta forma parte de un organismo plu-
meros elementos estuviesen implicados en la regula- ricelular, es de vital importancia en el destino de la
ción de la apoptosis, lo realmente importante fue ca- misma: la ausencia de factores proteicos que pro-
racterizar la última molécula. Ésta resultó ser el ho- mueven la supervivencia, la carencia de nutrientes o
mólogo de CED-4 de C. elegans en mamíferos supe- la presencia de determinadas moléculas en el exte-
riores. Apaf-1 presenta 3 dominios funcionales: en el rior celular producidas por las propias células veci-
extremo amino hay una secuencia CARD con homo- nas puede condicionar la vida de aquella. Los ma-
logías a otras secuencias CARD de CED-3 y otras cas- míferos superiores han adoptado, a lo largo de la evo-
pasas; en la zona central presenta un dominio alta- lución, un sistema por el cual una célula que recibe
señales conflictivas de forma simultánea, atenúe o
pare su crecimiento y acabe sufriendo apoptosis. Pero,
para que la aniquilación de una o varias células sea
beneficiosa al organismo del que formaban parte, el
Apaf-1 proceso de muerte ocurrido ha tenido que ser, de al-
guna forma, selectivo. A este proceso se le conoce
dominio CARD
como apoptosis instructiva, en el que los receptores
ESTIMULO de muerte (DR, death receptor) juegan un papel cru-
Procaspasa-9 APOPTOTICO cial, ya que serán ellos los que se encargarán de trans-
Citocromo c
dominio mitir las señales apoptóticas, provocadas de su unión
CARD
dATP con ligandos de muerte (DL, death ligands) específi-
cos. Los DRs son proteínas intermembranarias que
pertenecen a la superfamilia de los receptores del fac-
tor de necrosis tumoral (TNFR, tumor necrosis factor
Fig. 2.—Activación de la cascada intracelular de caspasas gracias receptor) y del factor de crecimiento nervioso
a la aportación de la mitocondria. Cuatro elementos son sufi- (p75NGFR, nerve growth factor receptor), definida por
cientes para activar las caspasas y desencadenar la respuesta la presencia de dominios extracelulares ricos en cis-
apoptótica: Apaf-1, procaspasa-9, citocromo C y dATP. En el es-
quema viene representado el complejo ternario que resulta de la
teínas en todos los miembros de esta superfamilia. Los
unión de estos elementos después del estímulo apoptótico. De DRs mejor caracterizados son el CD95 (también lla-
este complejo se obtendrá caspasa-9 (procaspasa-9 activa) que mado Fas o Apo1) y el TNFR1 (conocido también
constituirá el primer elemento de activación de la cascada de como p55 o CD120a) 23, aunque se han descrito al-
caspasas procesando y activando a la procaspasa-3, la cual pro- gunos otros DRs. El mecanismo por el cual estos re-
cederá del mismo modo con la procaspasa-6 y ésta última con
la procaspasa-7. Todas ellas se encargarán de proteolizar los di- ceptores señalizan muerte, tendrá como punto cen-
ferentes substratos para acabar, de este modo, con la vida de la tral la activación intracelular de una cascada proteo-
célula. lítica (caspasas) (fig. 3). De este modo, la homotri-

24
 BASES MOLECULARES DE LA APOPTOSIS CELULAR

merización de FasL (ligando de Fas), de TNF (ligan- medio de sus respectivos DEDs. Finalmente, y por un
do de TNFR1) o de otros DL, provocan que tres mo- mecanismo poco definido que, probablemente, sea
léculas de DR trimericen 23. Esto conlleva la activa- autoproteólisis, estas procaspasas son cortadas en re-
ción de estos receptores, lo que provoca un recluta- siduos Asp pasando a formas activas y desencade-
miento de proteínas adaptadoras (AP, adaptor protein) nando la activación del resto de caspasas efectoras.
que contienen un dominio de muerte (DD, death do-
main) en el extremo carboxilo. Este reclutamiento
puede llevarse a cabo, bien directamente (como es el Substratos de caspasas y ejecución de la apoptosis
caso de Fas y, posiblemente, de DR4 y DR5) o bien
de forma indirecta a través de moléculas adaptadoras Uno de los temas que ha merecido mayor atención
como TRADD (TNFR-associated death domain). Esto en el estudio de la apoptosis ha sido el determinar qué
ocurre en el caso de TNFR1 y DR3. Las proteínas moléculas son cortadas por la acción de las caspasas
adaptadoras constituyen el puente entre el complejo y cual es la relevancia de estos cortes respecto al fe-
DL-DR y la cascada proteolítica de caspasas. Al com- notipo apoptótico final. La lista de substratos de cas-
plejo DL-DR-AP se le conoce con el nombre de com- pasas incluye más de 30 proteínas (tabla II), sin em-
plejo señalizador de la inducción de muerte o DISC bargo, la relación que existe entre el procesamiento de
(death-inducing signaling complex). Una vez consti- la mayor parte de ellas y el proceso apoptótico, está
tuido el DISC, el extremo amino de las APs deja al todavía por definir 2. Conceptualmente, un substrato de
descubierto un nuevo módulo de interacción proteí- caspasa sería relevante en el proceso apoptótico si,
na-proteína llamado dominio efector de muerte (DED, 1. su corte se produjese antes de las manifesta-
death efector domain) que es un ejemplo específico ciones morfológicas o bioquímicas del proceso
de un dominio de interacción homofílica más gene- apoptótico,
ral, llamado dominio de reclutamiento de caspasa 2. después de ser cortado por la caspasa, su ac-
(CARD, caspase recruitment domain), presente en al- tividad funcional variara (aumentando, en substratos
gunas de las caspasas que contienen un prodominio proapoptóticos, o disminuyendo, en proteínas nece-
largo (tabla I) 24, 25. De forma específica, FADD reclu- sarias para la supervivencia o la integridad estruc-
ta procaspasa-8 y/o procaspasa-10 hacia el DISC por tural de la célula) y,

Tabla II. Substratos de caspasas proteolizados du-

LIGANDO (a) DISC + procaspasa
rante el transcurso de la apoptosis y su po-
DE MUERTE sible funcionalidad
RECEPTOR DE I. Substratos relacionados funcionalmente a la inducción de la
MUERTE (b) apoptosis:
Substratos
adaptadores proteicos clave A. Activación de «proteínas asesinas»
(homeostáticos,
(d) estructurales y PKC δ y θ PAK2/hPAK65
(c) de reparación)
procaspasa-8, MEKK-1 pro-caspasas
-10, -2 (g) B. Desmantelamiento estructural
caspasa-8, -10, -2 (f)
(e) láminas nucleares
APOPTOSIS Gas2
gelsolina
procaspasa-3, -6, -7 (e)
C. Eliminación de antagonistas de muerte/disrupción del apa-
caspasa-3, -6, -7 rato de muerte celular
Bcl-2 DFF45/ICAD
Bcl-XL p28 Bap31
II. Substratos de significado funcional incierto en la apoptosis:
Fig. 3.—Activación de la cascada intracelular de caspasas a tra-
vés de ligandos y receptores de muerte. Tres moléculas de ligando PARP RB
de muerte provocan la homotrimerización de su receptor (a), lo DNA-PKCS PITSLRE
que conlleva a que moléculas adaptadoras (p. ej., FADD) se unan U1-70kD PRK2
a él gracias a los dominios DD, presentes tanto en éstos últimos hnRP C1 y C2 fosfolipasa A2
como en el propio receptor (b). Gracias a otro dominio de inter- DSEB/RF-C140 IkB-α
acción, el DED, el adaptador recluta dos moléculas de procas- Sp1 rabaptina-5
pasa de prodominio largo (c), también con dominios DED, pro- fodrina MDM2
vocando el procesamiento y la consiguiente activación de éstas actina Huntingtina
keratinas presenelinas 1 y 2
(d). Una vez activadas, estas caspasas procederán del mismo
FAK DRPLA
modo con las caspasas ejecutoras, responsables directas de las β-catenina SREBPS
proteòlisis de determinados substratos (e), lo que conducirá a la D4-GDI
célula hacia una inevitable apoptosis (f).

25
J. X. COMELLA y cols.

3. la mutación funcional del substrato impidiera ban porque las células neoplásicas no presentaban un
o alterara alguna de las características propias de la incremento en su velocidad de crecimiento, sino por
apoptosis. ser resistentes a la apoptosis. En realidad, existe toda
Recientemente, se ha demostrado que algunos una familia de genes relacionados estructuralmente
substratos de caspasas cumplen con estos requisitos. con bcl-2 —más de quince— que pueden tener fun-
Entre estos, cabe destacar PAK2, proteínas estructu- ciones similares a Bcl-2 (protectoras), como por ejem-
rales como las láminas nucleares y una endonuclea- plo Bcl-XL o incluso funciones antagónicas (proapop-
sa llamada CAD. tóticas), como por ejemplo Bax. La conservación de
PAK2 es una quinasa que presenta un dominio re- la homología estructural entre los distintos miembros
gulador en el extremo amino que puede ser elimi- de la familia se concentra en cuatro dominios que re-
nado por la acción de las caspasas. Cuando esto ciben el nombre de BH (Bcl-2 homology domains)
ocurre la molécula se activa. La sobreexpresión del (fig. 4). Los distintos miembros son capaces de formar
fragmento carboxilo de PAK2, induce condensación dímeros en interacciones homo y heterofílicas. Este
citoplasmática y nuclear, desadhesión del substrato tipo de interacción depende, fundamentalmente, de
y externalización de residuos de fosfatidilserina, cam- los dominios BH1, BH2 y BH3. Por otra parte, pare-
bios todos ellos propios del fenómeno apoptótico. ce que la función proapoptótica reside en el dominio
Además, los inhibidores de caspasas no son capa- BH3 e incluso hay miembros proapoptóticos de la fa-
ces de bloquear los cambios inducidos por una PAK2 milia cuya única homología entre ellos es la de po-
constitutivamente activa, demostrándose así que seer un dominio BH3 (fig. 4). Aparentemente, el do-
PAK2 está ubicada funcionalmente por debajo de las minio BH4 está funcionalmente implicado en el ca-
caspasas dentro de la cascada apoptótica 26. rácter inhibidor de la apoptosis de Bcl-2 y Bcl-XL. Este
Las láminas son componentes de la membrana nu- último, es capaz de unirse a Apaf-1 a través de este
clear y son cortadas por caspasa-6 durante el pro- dominio. Cuando esto ocurre se altera la unión de
ceso apoptótico. Si la lámina se modifica para que Apaf-1 con caspasa-9 y, por tanto, impide la activa-
sea resistente al corte de caspasa, se impiden o re- ción de ésta última. Por otra parte, Bcl-2 es capaz,
trasan muchas de las características estructurales de directa o indirectamente, de impedir la salida de ci-
la apoptosis. Entre ellas se incluye la condensación tocromo c desde la mitocondria al citoplasma. Esta
cromatínica, la fragmentación del ADN en forma de podría ser una de las principales vías por las cuales
ladder y la formación de cuerpos apoptóticos. Esto Bcl-2 impide la apoptosis. Sin embargo, no es la
sugiere que estas proteínas están vinculadas a cam- única, ya que se ha demostrado que Bcl-2 sigue sien-
bios apoptóticos a nivel nuclear y que, probable- do capaz de proteger de la apoptosis aun cuando se
mente, también estén involucradas en el acceso de consigue incrementar la concentración de citocromo
nucleasas del citoplasma al núcleo celular 27.
CAD, es una endonucleasa que se encuentra, de
forma fisiológica, secuestrada en el citoplasma celu-
lar a través de su interacción con ICAD que además MIEMBROS ANTI-APOPTOTICOS
inhibe su actividad funcional. Cuando se induce el
proceso apoptótico, ICAD es degradada e inactivada Bcl-2

por caspasa-3, quedando CAD, de este modo, libera- Clase I BH4 BH1 BH2 TM Bcl-XL

Mcl-1 (no BH4)

do y funcional. Cuando esto ocurre, CAD atraviesa la Bcl-w

membrana nuclear y degrada la cromatina nuclear en Clase II BH4 BH3 BH1 BH2 TM A-1 (no BH4)
E1B 19k

forma de ladder. Estos experimentos ha puesto de ma- (no BH4)

(no TM)

nifiesto de forma clara una relación directa entre la MIEMBROS PRO-APOPTOTICOS CED-9

activación de las caspasas y la degradación oligonu- Bax

cleosomal de la cromatina nuclear 28, 29. Clase I BH4? BH3 BH1 BH2 TM Bak
Mtd/Bok

Clase II BH4 BH3 TM Bcl-xs

Regulación de la apoptosis: genes antiapoptóticos Bik

Hrk
BH3 TM
Bim
Como se ha comentado anteriormente, otro de los Clase III Blk
Bad
genes esenciales en la regulación del proceso apop- BH3 Bid

tótico es CED-9. El homólogo en vertebrados supe-

riores de este gen es Bcl-2 (Revisado por Adams y
Fig. 4.—Clasificación de la familia de proteínas Bcl-2 basada en
Cory, 1998) 30. Este gen fue descrito por primera vez la organización de los dominios. Están resaltados los llamados
como una mutación oncogénica propia de determi- «dominios de homología a Bcl-2» (BH o Bcl-2 homology) y el
nados linfomas centrofoliculares, que se caracteriza- dominio transmembranario (TM o transmembrane domain).

26
 BASES MOLECULARES DE LA APOPTOSIS CELULAR

C en el citoplasma, por ejemplo, microinyectándolo.

Se cree que la mayor parte de los homólogos de Bcl- 100
2 con funciones proapoptóticas realizan esta función 84
por antagonismo directo (unión) con los genes pro- 80
tectores, llevándolo a cabo a través del dominio BH3. 67
63

N.º artículos
60

Implicaciones en patología renal

40 34
Si nos guiamos por el número de artículos publi-
cados y registrados por MEDLINE que presentan como 20
11
palabras claves «apoptosis», «riñón» y «patología», la 4 5 6
8
2 0 1 0 3
implicación de la apoptosis en patología renal pare- 0
ce escasa (288 artículos en total). Este dato puede 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98
compararse con el obtenido en otros ámbitos como, Año
(En-Oct.)
por ejemplo, el cáncer (6.308 artículos), el sistema in-
mune (1.431 artículos) o el hematopoyético (4.312 ar- Fig. 5.—Gráfica representativa del número de apoptosis y pato-
tículos). Sin embargo, quizá lo más sorprendente es logía renal (datos obtenidos mediante búsqueda realizada sobre
la distribución temporal de estos artículos. Así, si ana- los artículos registrados en MEDLINE).
lizamos la figura 5 veremos que la mayor parte de
estos artículos se han realizado en los 2 últimos años. de interleuquina-1β y de TNF-α citoquinas que se en-
Más concretamente, desde enero de 1996 hasta oc- cuentran elevadas en procesos de insuficiencia renal
tubre de 1998 se publicaron 214 artículos (un 75% crónica, podría explicar el incremento en la expresión
del total). Por tanto, podemos concluir que este es un de Fas en estas células. Por otra parte, el ligando de
campo en clara expansión y que, probablemente, en Fas es expresado constitutivamente por este mismo
el futuro inmediato haya multitud de nuevos estudios tipo celular con lo cual, la inducción de Fas en una
para explicar la patogenia de determinadas enferme- célula sería suicida para ella 31. A partir de estos re-
dades renales y, porque no, posibles nuevas estrate- sultados, parece claro que uno de los mecanismos
gias terapéuticas basadas en alteraciones apoptóticas. para luchar contra la progresión de esta enfermedad
La insuficiencia renal crónica se inicia, en muchos serían las estrategias encaminadas a prevenir la apop-
casos, con alteraciones glomerulares, sin embargo, la tosis mediada por el incremento de expresión de Fas.
fibrosis intersticial y la atrofia tubular son mejores in- En el caso de la nefritis mesangial proliferativa tam-
dicadores pronósticos de la progresión de la enferme- bién se ha podido comprobar que, además de un in-
dad que la patología glomerular. La atrofia tubular cremento en la proliferación celular, existe una sobre-
suele ser una descripción patológica caracterizada por expresión de bcl-2 que conduciría a una mayor resis-
la ausencia de células epiteliales de los túbulos rena- tencia a la apoptosis de estas células. Esto contribuiría,
les. Sin embargo, los mecanismos que regulan este a su vez, a un incremento de la celularidad total 32.
proceso de atrofia tubular permanece sin esclarecer. Otros estudios en los que se ha asociado patología
La imagen clásica de la fisiopatogenia de este fenó- renal con alteración en el número de células apop-
meno indicaba que las células epiteliales desaparecí- tóticas incluyen la poliquistosis renal 33, nefropatía for
an debido a una muerte isquémica que era conse- IgA 34 o la esclerosis glomerular 35. Sin embargo, en
cuencia de la disminución de flujo sanguíneo de los estos estudios no existe una explicación fisiopatoló-
vasos rectos. Sin embargo, la muerte isquémica suele gica que justifique el incremento de apoptosis.
cursar con muerte necrótica y un alto grado de infla- En definitiva, el campo de estudio del fenómeno
mación; estos fenómenos no son observados, normal- apoptótico y de los mecanismos moleculares que lo
mente, en la mayor parte de insuficiencias renales cró- regulan está en clara expansión. Su mayor implica-
nicas. Una alternativa a este modelo fue propuesta, ción en patología renal es, simplemente, una cues-
más recientemente, indicando que la desaparición de tión de tiempo.
células epiteliales tubulares podría ser consecuencia
de fenómenos apoptóticos; demostrado en determina-
das patologías renales humanas y en modelos anima- Agradecimientos
les de insuficiencia renal crónica. Esta apoptosis, como
base fisiopatológica de la desaparición de células epi- El trabajo del grupo de neurobiología molecular
teliales tubulares, se basa en incrementos de la ex- está financiado por CICYT PN-SAF (97-0094), Unión
presión de Fas por parte de estas células. La elevación Europea Biotech (BIO4-CT96-0433), Fundación Fran-

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