Problemas propuestos.

1 Explique la diferencia que existe entre un espectro de emisión fluorescente y un espectro de

excitación fluorescente. ¿Cuál de ellos se parece más a un espectro de absorción?

2 Defina los términos siguientes: a) fluorescencia, b) relajación vibracional, c) conversión interna,

d) conversión externa, e) cruce entre sistemas, f) eficiencia cuántica y g) quimioluminiscencia.

3 ¿Por qué la espectrofluorometría es potencialmente más sensible que la espectrofotometría? 4

4¿Para cuál de los siguientes pares de compuestos se espera una mayor eficacia cuántica de
fluorescencia? Explique.

Fluoresceína y fenolftaleína b) bis, dihidroxiazobenceno y ( o.o)di hidroxifenil hidracina

5 ¿Por qué algunos compuestos absorbentes manifiestan fluorescencia y otros no?

6. La forma reducida del dinucleótido de adenina y nicotinamida (NADH) es una importante

coenzima muy fluorescente. Tiene un máximo de absorción de 340 nm y un máximo de emisión de
465 nm. Unas soluciones patrón de NADH dieron las siguientes intensidades de fluorescencia:

Conc. NADH, μmol/L Intensidad relativa

0.100 2.24

0.200 4.52

0.300 6.63

0.400 9.01

0.500 10.94

0.600 13.71

0.700 15.49

0.800 17.91

Construya una hoja de cálculo y utilícela para trazar una curva de calibración para el NADH.
Calcule mediante mínimos cuadrados la pendiente y la ordenada al origen de la gráfica Si una
solución problema presenta una intensidad de fluorescencia relativa de 12.16. Determine
mediante la hoja de cálculo la concentración de NADH.

R: Pendiente: 22,34 interc. 3,5710-4 [ ] = 0,544 μmol/L

7. Los volúmenes de una solución que contenía 1.10 ppm de Zn2 que se muestran en la tabla se
vaciaron con una pipeta en ampollas de decantación que contenían cada una 5.00 mL de una
solución de cinc desconocida. Cada una de ellas fue extraída con tres alícuotas de 5 mL de CCl4
que contenía un exceso de 8-hidroxiquinolina. Los extractos se diluyeron luego a 25.0 mL y se
midió su fluorescencia con un fluorómetro. Los resultados fueron los siguientes:
Volumen de Lectura del Zn2 patrón, mL fluorómetro

0.000 6.12

4.00 11.16

8.00 15.68

12.00 20.64

Calcule la concentración de cinc en la muestra. R :1,32 Ds = 0,028

8. La quinina de una tableta anti malaria de 1.664 g se disolvió en suficiente HCl 0.10 M para
obtener 500 ml de solución. Una alícuota de 20.00 mL se diluyó luego a 100.0 mL con el ácido. La
intensidad de la fluorescencia para la muestra diluida a 347.5 nm dio una lectura de 245 en una
escala arbitraria. Una solución patrón de quinina de 100 ppm registró 125 cuando se midió en
condiciones idénticas a las de la muestra diluida. Determine la masa en miligramos de la quinina
en la tableta.

R: 490 mg.

9. La determinación del problema 8 se modificó para usar el método de adición estándar. En este
caso, una tableta de 4.236 g se disolvió en suficiente HCl 0.10 M para obtener 1.000 litros. Se
disuelve una alícuota de 20.00 mL hasta 100 mL para originar una solución que dio una lectura de
448 a 347.5 nm. Una segunda alícuota de 20.00 mL se mezcló con 10.0 mL de una solución de
quinina de 50 ppm antes de diluirla hasta 100 mL. La intensidad de la fluorescencia de esta
solución fue de 525. Calcule el porcentaje de quinina en la tableta.

R 145,45 ppm

10. Los iones de hierro(II) catalizan la oxidación del luminol con H2O2. Está comprobado que la
intensidad de la quimioluminiscencia resultante aumenta en forma lineal con la concentración de
hierro(II) desde 10-10 a 10-8 M. A una alícuota de 2.00 mL de una solución problema de Fe(II) se le
adicionó 1.00 mL exacto de agua, seguido de 2.00 mL de una solución diluida de H2O2 y 1.00 mL de
una solución alcalina de luminol. La señal quimioluminiscente de la mezcla se integró durante un
periodo de 10.0 s y se encontró que era de 14.3.

A una segunda alícuota de 2.00 mL de la muestra se le añadió 1.00 mL de una solución de

Fe(II)3.58x10-5 M seguido del mismo volumen de H2O2 y luminol. La intensidad integrada fue de
33.3. Calcule la concentración de Fe(II) en la muestra.

R: 1,35 10-5 M.
11. La quinina es una de las moléculas fluorescentes mejor conocidas y las sensibilidades de los
fluorómetros a menudo se especifican en términos del límite de detección para esta molécula. La
estructura de la quinina se da a continuación. Pronostique qué parte de la molécula tiene la mayor
probabilidad de comportarse como cromóforo y como centro fluorescente.