CAPITULO 1 INTRODUCCION La Ingenieria Boquimic integra los conocimientos de boquinice y biologta con 1a estratogia y metodologla dela Ingenieria Quimica, aprovecha las capacidades ogradantes y sint@tcas de los microorganamos y apéca estos conocimventos, fen Ia produceién, procesamiento y conservacion de mateisies de. valor econdmico, mediante agentes biolégicos tales como mecroorgansmos, cus, enaimas y anticuerpo. Los procesos biogquimices diferen de los procesos quinicos wadicionles, ‘brincipalmente en le sensibiided dels reactivos y los productos hacia las cond: ‘ones ambiantales 'y en la complaided de las reacciones bioquimicas que ‘pormaimante tole toleran pequetisimos cambios de temperatura, DH 0 inten: ‘ded sonics. ‘Cuando se examina o crecimiento de células soparadas del organism vivo tal, ‘como un cultvo de céilas vegeales, de células animales, 0 de organismos nicellares, 4 encustra que las estreohes condiciones ambiantales proporcio- ‘nadus por at organismo vivo deben wer proviets wriciaimente, Y aunque ‘muchos reactores comerciales no requieren un control on estos bmitados ndrgenes de tolranci, las c@ulas dobon ser protegidas de cambios repentines ‘elas condiciones ambientales, de los elevados estueros cortantes producidos ‘or a agitacién del caldoy de los microrgenismos extrafios,1.1 LA CELULA, a cla 0s ta mantestacion més sencila de Is vida. En le ctlle se unen ‘tomos pare formar moléculas, se conectan molécuas para formar estructuras 'y 30 coordinan estrecturas para producir mas células. La clu crea y mantene. ‘orden, organizacién, y compljidad De acuerdo con Is Segunda Ley de la Termodinémice, ls entropis auments, invanablemente en cuelqvier lugar del universo. La esttegia de ls vida es. ‘front esta tendencia dela naturaeza hacia ol azar y generat orden mediante 1a creacion de estados inestabes, Estos procesos requieren energia. ya sea ‘Gectamente de la uz solar 0 de las sustancias nuivas que rodean Ia cela 1.1.1 Tipos biisicos de células Los dos pos bésicos de céllas, procarotes.y aucatioss| diieren en la ‘compleidad de su organizacén celuar (Figura 1.1). Lae céilas eucarioticas ‘venen estructuras intracelulares. limitadas por membranas, danominadas organs Entre tos orgénuiosesté ndceo (contione el genoma cela), los mitocondrios {sito de sintesis y wansporte de energial los isosomas (conten las enzimas ‘egredantes), y los cloropastos wn los organismos fotositétcos. EI Unto cxosul comin procera yevcarots el rbowom ode ste de proteinas) En ta Tabla 1.1 ae presenta ts clasificacion de los microorganisms del reino ‘rotsta. El reino de los protstas estdformado por organssmos dotados de una ‘xganizacion biologics muy simple comparada con lade las planta y animales. Pertenecen a este reno todos los orgeiamos unicebares, y los mukiceluares {ormados por céllas del mismo tipo. ‘Solomons, G. L., (1968). Matarisis and Methods in Fermentation, Academic Press, Londres, Inglaterra, ‘Staniar, FLY, Doudorott, M., ond Adelbera,E.A. (1975). "The microbial word” ‘4h. Prentice Hal, ne. Englewood Cis. NJ. Stewart, P'S, and Roberston, CR. (1988). 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A) componentes {60 una célule tiea; 8) Paramecium, microorganismo, tipo animal, de una sola ‘cela: Cl Euglena, microorganiamo tino vegetal, uricehta 0) Célula bacteriana (Polezar, e a, 1977) 1.1.2 La Informacion genética 1 bcido desoxiribomuceice, ADN, es e! depostario de la intormecion que Instruye 2 la cdlula sobre la deposicién correcta de sus stores, molécuas, cadenas y estucturas, para convertrse en una céhula completa ransmiirse de ‘Generacién en generacién, y voWer a iniciar el proceso. EI ADN os una larga cadena molecular formads por cuatre 8pes de eslabones: adenine, quanina, Citosing. y timing, Estas cuatro bases, o letras, se unen formando secuercias, © palabras, con los cusles puede escribirse el nimaroinfinto de frases que consuuyen Ia informacion genttica‘Table 1.1. Casiiccién de microorganisms del reino Protisa, (Bailey y Otis, 19861 =] | promise (pROcemOTES| MTS ‘aewies | | Biwe rrees aes] [ Protons l —— J wenos | [vaca] “Todas las céltas contenen unos orginulos denominadde bosoms donde se ‘copia fragmentot, 0 genes de la informacion del ADN, con la ayuda de una proteins, enzima, que acta como catalzador. Esta copia dela informacion os {1 teido ribonveteco mensajero, ARN,...Es un mensajro porque transports el rmonsaye de los genes, desde el nocio, donde se encuentra et AON, haste o! ftoplesme, espacio cellar akededor dol nucleo, donde se encuentran 1s fibonomas. Las meMiclas de AAN, mis conas que las de ADN, contionen racio en lugar de tina. nel ribosome se ee la secuencla de los nucediidos del ARN, 30 produce une proteina, Ensimas muy eepecticas unen cada aminoscdo con una molécula Dequeta de dcidorbonucilco de transterencia, ARN,. El ibosome selecione ‘cada ARN, con Bu aminoscide agregado, de acuerdo con el orden indicado en {ARN, leido on eae momento. De esta manera, cada nuevo eminoscid, y su ‘comespondiente ARN, entran en el ibosoma y se stdan de modo que dicho ‘minoseide quads quimicamenteigedo con et aminodcido quale precede en a! ‘bonoma. Ast ls eslabones quedan unidos secuencialmente, y cuando termina fa lectura de Ia cadena del ARN,, se libera ta cadena grotenica. Cada gene codiica une proteins LUptak, 8. G.,K. Venczsl (ed), (1988). Process Cont Instrument Engineer's Handbook, Chiton Book Co., Pennsylvania Estados Unidos. Ludwing, € ., (1974). Applied Project Management forthe Process Industries, ‘Gut Publishing Company, Houston. Estados Unidos, Maioeta, 8, G.Dotin, A. Calon, yD. Harano. (1981), “Crossflow microfitre ‘on of animal eels." Biotechnol. Bloeng. 37: 121-126. Martinaen, A, Skisk Brak, Gand Smiderad. 0. 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Benjamin Inc., New York Las prouinas son cadena molecularesformadss por vente cases de eslabones, los eminogcidos. ) orden, © secuencia de los aminoscidos on la cadens os ‘exacto y determina ol tipa de protena. Cada protein tne funciones biologics ‘especiales. Ast, po ejemplo, lahemoglobina es una protena que se plega segun ‘una configuraci tidimensionl a Unica capaz de aceptar y lberar el oxigeno, 1.2 METABOLISMO MICROBIAL La energia obtenida porla cla apart dels sustancias nustivas del entorno, (0'¢e i lr solar, es utilzada on la realizacin de wabajo quinico, n la biostn- tasis de les protenas, dcidos mucleicos, lipids, poesctridos y demés ‘Componentes ceuiares importantes para su desarrollo yrepicacién. También se requore energia para la realzacién de vabsjo oEmético, en el wanspore de sustancian nuritvas a través de la membrana cebiary en el wabajo mecdnico {e contraccieny lacomecién, ‘Merabotismo 0s of conhuto de todas las secuancias de reacciones catakzadas ‘rsimaticamente que ocurren en a ctl. Cade sacuencia se conoce como ruta ‘metabéica ¥ los productos de estas roacciones son los metabolites. Un {adecuado conocimianto dela estequiometta dela diferentes rutas metabolicas {actta ia apicacion dat andiaia estadlatico en la evaluacion de los datos ‘btenidos durante ol desarrailo de una fermentacién, Tsai y Lee, 1987. Algunos {vbproductos dal metabolsme celular tales come alcohdes, Sidos organicos ‘los aminoseides, #09 aperentamente innecesaios para la funcién celular. ‘208, como los antibictics y enzimas extracelulares, satistacen un propésit, Desde of punto de vista dela Ingenieria Bloquimics von importantes aqullas réacciones.celulores biolégicamenteineficientas que producen sustancies \idqumices en cantidedes superores alas necesidades dela cA. Innumera- ‘bles reacciones mantienen la via colar en la Tabla 1.2 se present, a manera azdcares A0P.cON.> ATP nao )13)—aacerit- CoA, fora tf ciato_ (2) aconirato Tscetato — Icon aLas enzimas que intervianen an l ciclo del Sido wricarboxfico son: (1) citrato sinwetasa; (2) y (3): aconitasa: (6) y (5) isoetrato deshidrogenasa: (6) 2 ‘oxogluconato deshirogenasa; (7) succinato doauinasa; (8) succinato deshiaro: ‘genase; (9) fumarase; (10) maleto deshidrogenasa; (11) isocitrato hasa; (12) ‘malato sintasa; (13) fostoenal pruvato carboqunase 1.2.1.2.2 Transporte electrénico y fostorilacion oxidativa 1 transporte slactenico y la fostorlacén oxidative epresentan le uiine fase de la oxidacion bolégica. Los electrones, separados de los intarmediarios det ‘cclo del bedo wicerboxtice, fuyen por una cadena de multiples estebones, cofsttuidos por las enzimas de transporte eectrénico con nveles de eneroie "sucesivamente menores, hasta acanzar el oxigeno molecular, dtimo aceptante ‘ectrénico en la respracien En esto proceso se conserva la mayor parte dele energie libre de los slectrones, ‘mediante el proceso de fstorlacion oxidative, como energie asocids a enlace fostato del A7P. Enos teidos animales y vegetal, las nzimas catalzadoras {el transporte electénicoy la fostortacion oxidative estin locaizadas en los ‘mmocondri. 1.2.1.2.3 Reacclones de oxidacién-reguccién Numerosos procesos biolégicos de conversién de energie incluyenreacciones: ( oxidacionreduccidn. Oxidacion es una plrdida de elecrones reduce ot ‘una ganancia de elecwones Un sistema tpico de oxidacion reduccion (OR) se puede expresar como: na Donde, 2: némero de wlectrones ransteridos en ia reaccién. Si un oactrodo de {La esteriizacién continua se puede realizar medantsinyeccién directa de vapor {de aqua a una presion entre 6.8 y 8 atmésteras, o mediante Intercambiadores 4 placas 0 de tubos. En el primar caso dabe preverse la dlucién del medio, ‘entre 10 y 15 %, por le condensacién del vapor inyectado. El enfamiento det ‘madi esteritzado s0logra en forma indrecta mediante camisas, serpentines 0 Intercambiaderes de cal. 1.4.4.3 Esteritzacion de sire 2 pumto de paride de ls produccién de antibiotcos, vtaminas y enzimas y ‘muchos otros procesos de importancia industri as una fermentacion aerobics ‘donde se require un suminisvo continuo de aire Kre de contaminantes que varia ipicamente entre 0.5 y 1 voluman de sre por volumen de cor cAds ‘minuto. Todos los métodos de esteriizacion de medios pueden ser empleados con aie. Sin embargo, la estertzacion de sire mediante calor no soo es Imprictica sin ineficiente debido a los bajos valores dela capacidad calortiea '¥ de la conductvidad temica del aire. Uno de los métodos mas eficientes es a estarizacion de aire con ftrosfbrosos y fits membrana, ‘Se nan ensayado diferentes tos de materiales firantes tales como sigodén, carbén, lana de vidrio, papel, nylon, tefién, polalcohol de vino, ésteres de coh losa, vidio sintrizado, broncesinterzado y meteiles cerémicos. Actualmente los fitros ms empleados son los de poliicohol de vino, formados por pacas e 1 cm de espesor, de attra y ddmetro varieble desde § hasta 110 em: fos ftros de placas de acetato de cohiosa: los fitios de vela o cartucho de Certmica poross y vidro sinterizado: le fio de mambranas porosas de stores do cebuosa, y los fitros de microfibras clindricas de borosiicato ‘nvuetas en malls de polpropeno. En a préctca, a dimensionamiento de un {tro para un determinedo caudel de site, incuye la evaluacion del eapesor y ‘roa transversal dl lecho, y lepérdida de presi del aie. Esta pled se rela- ‘clona con el consume dela enerpaeldctca requeida para comorimi ol aie. En 1 caso de fitzos empacados con lana de vdrio siemore exist i posbilded de Lblzar deferontes ddmetroa de fibra, menor didmatro de fibvasigrfica menor fespesordellecho. Por otra parte un aumento del grado de compactacién de las ‘bas disminuye el espesor del lecho pero aumenta ls perdi de presion.1.4.4.2 Esterilizacion de medios 1 objetivo dela esterikzacén de un medio es la remocién 0 eiminacisn de tods {forma de vide animal o vegeta, mecroscéoics 0 microscépica, saprofita © no, ‘existente en ef medio, El grado de estertizacion de un medio depende de proceso. Algunas aplicaciones como la fermentacionlética de horalizas 0 | \watamientobiol6gco de residuos no requieren estriizacén. En ows procesos las condiciones del med favorecen la actividad del miroorganiamo deseado y {afectan la actividad de los contaminantes. Este es of caso de la fermentacion ‘coholica donde las condiciones normales de asepsia permtn ol desarrollo de Broceso sin une reduccién aprecable del rendimiento. En el caso de la ‘roduceidn de levadura para panificacion. gracias af bajo pH requerdo, basta una simple ebulicion dela molaza y su posterior diucién con agua de buena calidad pera une fermentacion normal Por el contrano, hay procesos muy exigentes como los de prodecion de andbiticos, enzimas, vitaminas, acetona y butanol. La peniciina, por ejemplo, ede ser parcial o completamente destruide por Ia accion de la encima penici nasa producida por microorganismos contaminantes. Otro ejemplo os Ia {ermentacion dela melazs con Clostrium acetobutiicum para la produccién de solventes: etanol, butanol, acetona,y gases: CO, y H,. En este caso el micro- ‘rganiamo ademés de sor un ansercbio esticto es muy sensible wl» accion de los bactenotagos. La esteiizacion de medios a nivel industrial ve reaiza preteriblemente mediante calentamiento con vapor de agua en los propios reactores 0 por separado. En 1 primer caso se estaritza el equipo mediarie un proceso discontinue oe ‘esterizacin, y también el medio, con el propéaito de evita 1 riesgos de ontaminacion durante la ansferencia del modo hacia el reactor. En la ‘steriizacion discontinua a temperatura del vapor de agus, del ocden do 121 °C 2 1 atmésfere de sobrepresion, garaniza la destruccién a las esporas. Sin embargo. el calentamiento dal medio a elevadas temperaturas por perodos rolongedos favorece la descomposicion de los nutientes. Ei proceso continue esteriizacion se ealiza amayores temperatura, vpicamente ene 130 y 165, C. Elmenor tiempo de esteritzacion ee traduce en una menor dascomposicnn {6 nutrentes, una mayor productividad del proceso, y un manor reqverimiento fe agua de retrigeracion ‘metal inere (plating © plata) se sumerge en un sistema OR, s0 establece una Gterencia de potencial ene los elactrones en la solucion y los del metal, conoeida como potencil de electrodo e+ BT pylon 3 wae + BT agieet Donde, es une constante especial par un sistema dado, conocida como potencil de electodo patién, © fuerza slectomotri patron; R = 6,914 ‘Timmol.X)": conetante do los gases: F = 96,485 kJ.(mol.V)": constante de Faraday: 7: temperatura absolute, K; [or] y (red.|: concentraciones de las formas oxidada y reducida del sistema Un electrodo sumerpido en una solucién de un sistems OR forma lo que se ‘conoce como semipila, cuya diferencia de potencal os imposible de medi. a ‘ave se rata de un electrodo simole. Para media ae combina con ote semipia, ‘btenéndose entonces una pla completa. La cferencia de potencial entre ‘embes semiplas se mide con un potenciémetr. En a determinacién del potencis! de elactrodo do un compuesto #8 requere un ‘lectrodo de hidrogeno como patron de reterencia cuyo potencial es aria fiamente defirido como caro. En lugar dal electrodo de hidrogeno puede lullzaree un electrodo de consiruccin mis sencila, como ol de calomelano. ‘cuya diferencia de potencial con relcion a la semipila de hidrogeno se conoce ‘exactament Por consiguiente hay necesidad de defini un nuevo simbolo: Ey, donde h indica ‘Que el electrodo de comparacion ha sido calbxade con cespect a de hidr6peno: nko Ey nat Donde E, 08! potencial de electrode del hidrégeno que, por definiién, es cro. or tanto, la ecuacion general para calcula el potencial de electrode de un sistema OR es: we BT led oe BE led ns1 valor de, varia de acuerdo con el vaor de la retain ante las concenacio- ‘es del forms oxidada vl forma reducida. Cuando estas concentaciones son ‘guales: = Si se conoce a valor de Ese puede calcular el potencial de elecrodo det ‘atema on cusauier grado de oxidacién oreduceién. Por ot lao, el grado de ‘onidacion se puede obtener» parti de la mediién del potencial de eactrodo. teeming E* se refiere « medicines realizades « pH cero, una condicin ditt { lograr en la practice. El termi E” se utiiza para indicat que el potencial de lectrodo pation fue establecido # un dedo valor de oH 6 potencial de reduccion de una media reacién, en a cua las formas oxidada Y reducida estin presentes en concentraciones no patron, se calcula a parte de Is ecuncion de Neenst Ar, fox) eer Bly ws ae ed] (Ove forme de ta Ecvecién (1.6) 8: = (WP.ME) + = RTIN Ky nt Donde Kes Ia constante de aquilrio. El téemino dela derecha de la Ecuaeisn 11.71 coincide con of mismo término dela Ecuacion (1-3), or tanto: AG,» - FAB, ns Donde, n: numero de electiones wansterdos; F: constante de Faraday (F = 96,5 KJ.imol.VI"l; QE": eambio de potencal estindar, V: AG": cambio de energia bre estén, Jmol En la Ecuacién {1.8} el valor de AE” debe s0r postive, con el propéeito obtener un AG" negatvo, © 40, un valor positvo de BE” indica une reaceion fespontinea, De acuerdo con la Ecuacion (1.8) el cambio de enegia #Dre cesténder de una reeccion puede calularse @ partir de la cferencia entre los valores de E°. De igual manera, puede caleusarse una variacion de energia Wore ara sistemas indviuales y, de esos datos, ealelarse una variacén de energia ce dels sistemas combnados: Aigunos procesos requieren la recirculacién del contenido det reactor. Las ctlulae son separadas dol caklo mediante centrfugecién, sedimentacion fieracion y luego devuetas al reactor para mantener una elevada concentacion ‘celia. Los resctorasenzimaticos con enzimas inmoviizades son operados de maners similar Ion reactores quimicos catalicos heterogéneos. En este caso o8 ‘ecerario deterrinas la vide media dela enzima y su desactvacion en funcion el vempo los ofectos dela ransterencia de mass y de calor como consecuen- ‘8 6e eu inmovitzacion. La prodkctividad de un biotreactordepende de tipo de ‘peracion del rector y de lae velocdades de crecimiento de biomasa y de formaciéa de producto. 1.4.4 Estoriizacion 1.4.4.1. Esteriizacién de equipo Generaimante el equipo se estetliza con vapor de agua a presion. Cuando las Imitaciones de temperatura impiden la uUlzacion de este método ve emplean ‘agentes quimicos luidos y gaseosos de acverdo con las crcunstancies, La ie itvaviolet, las radiacionesionizantesy las vibraciones wltrascnicas encuentran aplicacién como agentes ausiares potenciadores de otros procesos estertzan- tes. Una combinscion de diferentes métodos tal como vapor de agua. agentes fquimicos y redicién, es ficient, En algunos casos une esterlizaciin por ‘tapas, donde se utlizan diferentes agentes esterizantes en cada lote, puede ‘ter més eticaz que cuando se emplean los mismos agentes. En cada caso ‘espetico deben considerarae la naturalazs del equipo, los requerimientos de 8 ‘eteriizacion la economia del proceso. E! agente is condicion estertzante ‘debe actuareficientomente durante el proceso de esteiizxcion pero une var ‘inakzado este proceso no debe presentarse una accién residual. Enel caso de tune fermentacién industrial una posibie acca residual puede ser tanto 0 més perudicil para el proceso que la presencia de ciertos contaminantes.Una de lat etapas on of diseRo de un biowreactor es ln seleccion de las ‘epecficacones del sistema: ssteme viable © un sistema enzimiico 90 vivo: tetera serdbico © anaerdbico; condiciones asépticas 0 no asepticas:cuivos simples omezciados; clus simples o agregados multicebares; mesos simples o muttauseato. (Oue etapa es le seleccion del mado de operaciin: cOhuas suspendides 0 ‘emoviczadae, enrimas dvelts o wmovikzadas ustatos solsles oinsolubes: sustates monoméricos 0 pokménicos: operacin continua 0 por lots; process Imiento en tanque agitado 0 en flujo tapén: sisteme sencilo 0 de mutietaps: ‘operacién an corinte sencila © con reewtacin, Uno de los ranctores mas amptamente ublzados en la industria Bloguimic 1 reactor de mezcia completa (STM) operado en forma continua (CSTR) © B+ Accptante de protnes (1.10) Raacciones de oxdo-redvecion Donante de clectrones + Aeaptante de elecrones oan La tendencia de un reductor & perder electrones se express mediante of potencil de reduccién estindar, definido como la fuerza electomotrz, en ‘Volos, suministrada por un electrodo an una dislucion de un reductor y de su ‘oxidante conjugado, cuando la concantracién de ambos es 1 M, a 25°C y pH 70. Ena Tabla 1.4 se presenta un resumen de los potenciles de oxirreduccion de ‘sigunas reacciones bioquimicas. En esta Tabla se observa que ol acetaldehido ‘ene una tendencia muy alta a perder electrones y oxidarse hasta deio acetco, {euentemente se requiere un catalzador con el propdsito de lograr une reaccion ‘entre ambos sistemas. La mayor de ls pares electrics que ingresan 3 la ‘cadena respiratoria proviene de algunas enzimas concidas como deshidroge- ‘asasligadas al pina, catalizadoras de as siguientes reacciones ganeraes: