UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN ANTONIO ABAD

DEL CUSCO
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
Escuela profesional de Biología

Trabajo de investigación Monográfica

“Terapia de bacteriófagos”

Asignatura: Estrategias de Aprendizaje Autónomo

Docente: Sofia Visa Quispe

Integrantes:

Ascuña Choquehuayta Fabiola Tamara

Huayta Ramos Cesia Abigail

Manrique Quillahuaman Almendra

Santillana Flores Rubi Avigail

Sutta Mamani Delvia

CUSCO- 2023
 La Fagoterapia

DEDICATORIA
Quiero dedicar este trabajo a mis padres, de quienes siempre he recibido su apoyo en el

transcurso de mi preparación académica y una vez más en esta investigación monográfica. Su amor

incondicional ha sido fundamental para este proceso, así mismo dedico este trabajo a mis amigos, ya

que el objetivo de este trabajo más allá de informar es concientizar y promover los cambios positivos

que genera la ciencia y seguir aplicando en la biología.

Dedico este trabajo de investigación monográfica (terapia de fagos) a mis padres,

hermanas(os) por haber sembrado en mí el deseo de triunfar en la vida y superarme diariamente que

también durante el tiempo de mi preparación académica siempre estaban conmigo apoyándome en los

diferentes aspectos para salir adelante, también agradezco a mis familiares, amigas(os) que les tome

como un gran ejemplo para sobresalir adelante de que todo en esta vida se puede.

Este trabajo de investigación monográfica está dedicado a mis padres que me dieron la vida y

están haciendo el gran esfuerzo de permitirme estudiar de la mejor manera y con la mayor comodidad

en una entidad de educación universitaria superior, a nuestra maestra que nos dio las herramientas

suficientes para que este proyecto pudiera concretarse y a todas las integrantes del grupo que

apoyaron de forma moral, económica y racional al desarrollo de la presente monografía.

Dedico este trabajo a Dios y a mi familia por ser mi motivación para seguir mis sueños, de

igual manera a mis compañeras del grupo y docente por su ayuda en el trabajo colaborativo de nuestra

primera investigación monográfica.

El presente trabajo de investigación se lo dedico a mis padres y hermano que siempre me

motivaron, no me dejaron nunca rendirme, y siempre me dieron palabras de aliento, para que en un

futuro sea una persona de bien, es por eso que con mucho cariño este trabajo va para ellos. Fabiola.
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AGRADECIMIENTO

Quiero extender mi más sincero agradecimiento a la profesora Sofia Visa Quispe, por su

disposición y tiempo, brindándonos, el apoyo académico para realizar esta investigación monográfica

y de esta manera enriquecer mis conocimientos para mi formación profesional. Por último, agradecer

a mis compañeras, por su interés y empeño para desarrollar esta monografía.

A lo largo de estas líneas quiero expresar mi más sentido agradecimiento a la profesora

encargada del curso a razón de que a lo largo del desarrollo del presente proyecto siempre nos brindó

los suficientes alcances de forma personal y colectiva para que este tenga coherencia, cohesión y

cumpliera con las exigencias que las normas Apa nos imponen, esto a fin de ir formándonos para ser

capaces de realizar trabajos de investigación haciendo uso de este formato, que es el formato más

usado tanto a nivel universitario como en la vida profesional aplicada a nuestro campo de estudio

como futuros biólogos.

Mi agradecimiento va dirigido a mi inspiración diaria que es mi familia y a mi docente como

compañeras del grupo que me ayudaron a realizar este trabajo colaborativo de investigación

monográfica.

Agradezco a la profesora Sofía Visa Quispe por haberme brindado sus conocimientos para

realizar este trabajo de investigación monografía también a las personas que me dieron sus ideas de

cómo realizar este trabajo , las cuales también me apoyaron en los diferentes aspectos de este trabajo

monográfico.

Primeramente, agradecer a Dios por siempre iluminar mi camino, también agradezco a mis

padres por siempre estar a mi lado, y a mis compañeras de grupo porque sin ellas este trabajo no se

hubiera llevado a cabo.

 La Fagoterapia

INTRODUCCIÓN

El presente trabajo de investigación monográfica titulado “Terapia de bacteriófagos”, tiene

por propósito indagar la aplicación de los fagos en un tratamiento dedicado a combatir infecciones

bacterianas y la resistencia a los antibióticos. De igual manera es importante conocer el

funcionamiento de los fagos para poder abordar de mejor manera la investigación monográfica, los ya

mencionados fagos son virus que infectan específicamente a las bacterias, liberando su material

genético al interior de estás, permitiendo debilitar o destruir la membrana bacteriana, por ende se

consideran como una alternativa prometedora para sustituir a los antibióticos tradicionales, con el

objetivo de regular las poblaciones bacterianas en el tratamiento de infecciones en humanos y

animales.

La estructura del presente trabajo monográfico consta de 3 capítulos, en la cual el primer

capítulo tiene como título “Generalidades de la fagoterapia”, donde se desarrolla el principio de

terapia de fagos, origen de la fagoterapia, tipos de terapia de fagos y su situación actual.

Seguidamente del segundo capítulo titulado “Proceso de la terapia de fagos, hablaremos

acerca de los siguientes pasos para la fagoterapia: la selección de bacteriófagos, su producción,

administración y evaluación de la eficacia terapéutica.

Consecutivamente, el tercer capítulo, “Ventajas y desventajas de la terapia de bacteriófagos”,

trataremos cada uno de los beneficios de este tratamiento las cuales son: la seguridad, la especificidad

y el uso combinado de bacteriófagos y antibióticos; así como las desventajas: conocimiento limitado,

estrecho espectro de actividad, aparición de resistencia bacteriana, falta de datos, ensayos clínicos y

respuesta inmune.

Finalmente, nuestro trabajo monográfico presenta citas y referencias vinculadas a esta

temática, que nos brindarán soporte para la verificación y validación de nuestra información, por otro

lado, tuvimos dificultades sobre el hallazgo de fuentes bibliográficas acerca de la terapia de

bacteriófagos, ya que se encuentra en una etapa inicial de investigación.

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TABLA DE CONTENIDO

1. CAPÍTULO I: GENERALIDADES DE LA TERAPIA DE FAGOS ............................ 6

1.1 ¿Qué es la terapia de fagos? ............................................................................ 6

1.2 Historia,orígen y evolución de la terapia de fagos ........................................................ 6

1.3 Los bacteriófagos como agentes terapéuticos ............................................................... 8

1.3.1 Terapia de fagos vs antibióticos ........................................................................... 8

1.3.2 Terapia monofágica ............................................................................................. 9

1.3.3 Terapia polifágica ................................................................................................ 9

Es una selección de un espectro mayor de bacteriófagos para que entre ellos

compensen las resistencias que puedan desarrollar las bacterias patógenas

causantes de las infecciones de los seres vivos. ....................................................... 9

1.4 Terapia Combinada con Bacteriófagos y Antibióticos ...................................................... 11

1.4.1¿Qué es la tipificación de fagos? ........................................................................ 12

1.5 Situación actual de la terapia de fagos ........................................................................ 13

CAPÍTULO II: PROCESO DE LA TERAPIA DE FAGOS ........................................ 14

2.1 Aislamiento y purificacion de bacteriofagos ................................................. 14

2.2 Producción de bacteriófagos........................................................................ 15

2.2.1 Replicación ......................................................................................... 15

2.2.2 Endolisinas.......................................................................................... 16

2.2.3 Productos de fagos ............................................................................. 17

2.3 Formulación y administración ...................................................................... 18

2.3.1 Formas de administración ................................................................... 18

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2.3.2 Cóctel de fagos ................................................................................... 19

2.3.4 Conservación de fagos ....................................................................... 20

3.1 VENTAJAS DE LA TERAPIA DE FAGOS.................................................... 21

3.1.1 Seguridad ........................................................................................... 21

3.1.2 Especificidad ....................................................................................... 22

3.1.3 Versatilidad ................................................................................... 25

3.1.4 Fácil de administrar ................................................................. 25

3.1.5 Económico .......................................................................................... 26

3.2 Desventajas ..................................................................................................... 27

3.2.1 Conocimiento limitado........................................................ 27

3.2.2 Dificultad en la producción y almacenamiento ................... 27

3.2.3 Estrecho espectro de actividad ............................................... 28

3.2.4 Aparición de resistencia bacteriana ......................................... 28

3.2.5.Falta de datos y ensayos clínicos........................................................ 34

3.2.6 Respuesta inmune .............................................................................. 35

Conclusión ............................................................................................................. 37

Referencias ............................................................................................................ 38
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1. CAPÍTULO I: GENERALIDADES DE LA TERAPIA DE FAGOS

1.1 ¿Qué es la terapia de fagos?

Los bacteriófagos son los virus que infectan y parasitan a las bacterias. Estos pueden

presentar un ciclo lítico que determine la lisis de la bacteria infectada. Cada fago es específico de un

determinado género o especie bacteriana.

Según (Reina & Reina, 2018) el incremento actual en la incidencia de resistencia antibiótica

en las bacterias humanas ha favorecido el estudio de los fagos como alternativa terapéutica

(fagoterapia). Los estudios previos habían demostrado la eficacia de estos elementos en las

infecciones cutáneas e intestinales. Están en marcha diferentes ensayos clínicos para establecer la

seguridad, reactogenicidad y eficacia terapéutica de múltiples fagos.

1.2 Historia, origen y evolución de la terapia de fagos

La terapia de fagos comienza, cuando:

Felix d’Herelle y Edward Twort en 1915, informaron el hallazgo de entidades

filabres con la habilidad de destruir bacterias, mediante la investigación de cultivos de

Staphylococcus sp. y de las vacunas de virus vaccinia en los cuales observó zonas en

las que no se había producido crecimiento bacteriano, a esto lo designó como un

«agente bacteriolítico». (D’Herelle, 1917, pp.373-375)

Posteriormente en 1917, Felix d’Herelle utilizó satisfactoriamente

una preparación de fagos para tratar la disentería bacteriana en humanos y

después de analizar cultivos de Salmonella gallinarum, acuñó el término

«bacteriófago» haciendo referencia a ciertas entidades que podían lisar

células bacterianas. (Twort, 1915, pp.1241-1243)

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La fagoterapia comenzó a aplicarse :

En el siglo XX en la década del 40 inicio la comercialización exitosa

de fagos terapéuticos para tratar infecciones bacterianas en humanos en

Francia por d’Herelle y en los Estados Unidos por la compañía farmacéutica

Eli Lilly. (Bruynogue & Essais, 1921,pp.1120-1 )

También, varias compañías en los Estados Unidos, Alemania y

Francia produjeron grandes cantidades de preparaciones de lisados de fagos.

(Straub & Appelbaum, 1932, pp. 110-113.)

La terapia con fagos permaneció como un tratamiento estándar del

sistema de la salud en la antigua Unión Soviética (URSS); a pesar de que el

uso de los antibióticos estaba en su esplendor en el oeste. En ese estado,

utilizaron las preparaciones de fagos para la terapia, profilaxis o el

diagnóstico de infecciones bacterianas como disentería, diarreas, fiebre

tifoidea, infecciones sépticas-purulentas relacionadas con quemaduras,

inflamación de órganos y heridas.(Kutateladze & Adamia, 2010,pp.591-595

La disminución del interés y aprobación para el uso de los fagos

terapéuticos fueron causados por factores,como:

La controversia sobre la eficacia de las propiedades de los fagos

líticos en el uso de la profilaxis o terapia antimicrobiana a nivel internacional.

Muchos factores han contribuido a esta situación; entre ellos: la identificación

incorrecta de los agentes etiológicos, pureza insuficiente de las preparaciones

de fagos, carencia de conocimientos sobre la heterogeneidad (fagos líticos vs

lisogénicos) y su modo de acción, fallo en el establecimiento de evidencias

científicas sobre la eficacia clínica del tratamiento con fagos, pobre

La Fagoterapia

estabilidad, entre otros. Estos factores, unidos a que los antibióticos de

amplio espectro pueden actuar eficientemente en ausencia del diagnóstico

confirmado del agente patógeno, condujeron a la disminución del interés en

el uso de los fagos terapéuticos.

Las preparaciones de fagos fueron ampliamente utilizadas en

dermatología, estomatología, otorrinolaringología, oftalmología, ginecología,

pediatría, cirugía, gastroenterología, urología y neumología, después de la

Segunda Guerra Mundial, y se mantiene actualmente en Rusia.

Uno de los institutos más conocidos por estudiar y producir

preparaciones de fagos terapéuticos fue el Instituto Tibilisi en la República de

Georgia, fundado en 1923 por Georgi Eliava y Felix d’Herelle. Desde su

fundación hasta los años 90, el instituto suplió a toda la URSS con

preparaciones de fagos terapéuticos. Este Instituto ha producido fagos para el

tratamiento y profilaxis de infecciones sépticas purulentas e intestinales. Las

preparaciones de fagos han sido aplicadas por vía oral (líquidas o tabletas),

local (en tampones, enjuagues y cremas), rectal, aerosol, por nebulizador y

endovenosa.

En sus inicios, varios factores afectaron la aprobación internacional

de la terapia de bacteriofagos, entre ellos: la ignorancia sobre la variedad,

modo de acción y naturaleza heterogénea de los fagos (ciclo lítico y

lisogénico), pureza insuficiente de sus preparaciones, la no obtención de

títulos apropiados, escasa estabilidad y viabilidad de las preparaciones de

fagos. También influyó la falta de herramientas apropiadas para la rápida

identificación de los patógenos bacterianos y la no neutralización del pH

gástrico para la administración oral de las preparaciones de fagos.

Posteriormente, las preparaciones de fagos fueron sometidas a ensayos

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clínicos y se publicaron artículos sobre sus resultados. Sin embargo, los

estándares soviéticos de los ensayos clínicos no cumplían con las

regulaciones internacionales vigentes. La mayoría de los reportes fallaron en

el establecimiento de evidencias científicas sobre la eficacia clínica del

tratamiento con fagos, ya que fueron generalmente realizados sin controles de

placebo. Además, la literatura soviética (fundamentalmente difundida en ruso

y georgiano) no estuvo frecuentemente disponible para el resto del mundo.

Recientemente, algunos de los antiguos resultados soviéticos sobre los

ensayos clínicos de la terapia con fagos en adultos e infantes fueron

publicados en una monografía en idioma inglés.

El análisis de los datos mostró la efectividad de los fagos contra

sepsis estafilocócica, infección séptica de los pulmones (abscesos agudos y

crónicos, neumonía crónica y bronquitis crónica) y osteomielitis. Los

resultados de estos estudios también revelaron que el tratamiento combinado

de fagos y antibióticos fue más efectivo que la monoterapia. (Pimienta

Rodrígez, 2013, pp.3-6)

1.3 Los bacteriófagos como agentes terapéuticos

1.3.1 Terapia de fagos vs antibióticos

Según (Castillo, junio del 2020) nos da a conocer como la terapia de fagos tiene más

seguridad y eficacia frente a los antibióticos.

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11

1.3.2 Terapia monofágica

La terapia monofágica se refiere a un enfoque de tratamiento que utiliza un solo tipo de fago

(bacteriófago) para tratar una infección bacteriana específica. Los fagos son virus que infectan

bacterias de manera específica, y la terapia monofágica se centra en seleccionar y utilizar un fago

particular que sea efectivo contra la cepa específica de bacterias causantes de la infección

(Fagoterapia ¿Una Alternativa a La Antibioticoterapia? - PMC, n.d.)

 La Fagoterapia

12

Al utilizar un solo tipo de fago, la terapia monofágica es altamente específica para

una especie o incluso una cepa particular de bacterias. Esto contrasta con los antibióticos

convencionales, que pueden tener un espectro más amplio y afectar a diversas bacterias,

incluyendo las beneficiosas.

1.3.3 Terapia polifágica

Es una selección de un espectro mayor de bacteriófagos para que entre ellos compensen

las resistencias que puedan desarrollar las bacterias patógenas causantes de las infecciones de los seres

vivos.

La terapia polifágica es un método que emplea varios bacteriófagos (virus que infectan a

las bacterias) para luchar contra las infecciones bacterianas. La ventaja de este método es que puede

dirigirse a diferenciar los tipos de bacterias simultáneamente, lo que disminuye el riesgo de resistencia

y aumenta la efectividad de los resultados en la terapia de los bacteriófagos.

La terapia polifagica se puede combinar con antibióticos, pero se debe tener cuidado con el

tiempo y la dosis adecuados para cada situación, por ello la terapia polifagica es una alternativa que

nos puede traer muchas esperanzas para tratar las infecciones bacterianas que son difíciles de curar

con los antibióticos tradicionales que se tiene es estos tiempos.

Como los bacteriófagos son virus que se hallan de forma natural en el ambiente y que se

especializan en infectar y eliminar bacterias específicas, por ello los bacteriófagos se adhieren a la

superficie de las bacterias y les inyectan su material genético, lo que provoca que las bacterias se

llenen de nuevos virus y se desintegran. así, los bacteriófagos se multiplican y eliminan las bacterias

causantes de la infección. Los bacteriófagos tienen la habilidad de adaptarse a las mutaciones de las

bacterias, lo que les permite vencer la resistencia que éstas puedan generar a los diferentes antibióticos
 La Fagoterapia

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que existen. Además, los bacteriófagos son selectivos y no dañan las bacterias beneficiosas ni las

células humanas.

De esta manera la terapia polifágica consiste en usar una mezcla de diferentes

bacteriófagos que puedan atacar a varias cepas o especies de bacterias. Esto incrementa la

probabilidad de que la terapia sea efectiva y evita que las bacterias escapen a la acción de los virus. La

terapia polifágica se puede administrar por vía oral, intravenosa, tópica o mediante nebulización,

dependiendo del tipo y la localización de la infección. Del mismo modo se puede usar sola o en

combinación con antibióticos para obtener unos resultados más eficientes, lo que puede reforzar el

efecto de ambos tratamientos. Sin embargo, es importante determinar el tiempo y la dosis óptimos

para cada antibiótico en relación con el fago, ya que algunos antibióticos pueden interferir con la

actividad de los virus o viceversa.

La terapia polifágica tiene varias ventajas sobre la terapia antibiótica convencional. Entre

ellas, se pueden mencionar las siguientes:

La terapia polifágica es más segura y tiene menos efectos secundarios que los antibióticos, ya

que los bacteriófagos son específicos y no afectan a las bacterias beneficiosas ni a las células

humanas. La terapia polifagica es más eficaz contra las bacterias multirresistentes, ya que los

bacteriófagos pueden adaptarse a las mutaciones de las bacterias y vencer sus mecanismos de defensa,

es más económica y ecológica que los antibióticos, ya que los bacteriófagos se pueden obtener de

fuentes naturales y se pueden producir fácilmente en el laboratorio, es más duradera que los

antibióticos, ya que los bacteriófagos se replican en el lugar de la infección y no requieren dosis

adicionales, es una opción terapéutica innovadora y prometedora para el tratamiento de las

infecciones bacterianas. Sin embargo, todavía se necesitan más estudios clínicos para evaluar su

eficacia, seguridad y aplicabilidad en diferentes casos. Además, se deben considerar los aspectos

éticos, legales y sociales relacionados con el uso de virus modificados genéticamente que con lo que

van mutando cada vez más se hacen más fuertes.

 La Fagoterapia

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Según a lo que se ha estado observado en diferentes estudios a largo del tiempo van

evolucionando con distintas cepas de bacteriófagos, como el PP01 y el E. coli O157: H7, el Phi2 y el

P. fluorescens, y el RIM8 y el Synechococcus marino (Barceló, 2018). Sin embargo, esto no quiere

decir que se pueda descuidar el control y la prevención de la resistencia a cualquier tratamiento. Por

eso, se deben evitar los bacteriófagos temperados y ex-temperados, así como los que producen toxinas

potenciales, para fines terapéuticos (Barceló, 2018). Existen protocolos sencillos y accesibles para

aislar y purificar los bacteriófagos que se usan para tratar enfermedades (O’Neill, 2016, Robert T.

Schooley et al, 2017). Además, se ha demostrado que el uso de tratamientos personalizados de

mezclas de bacteriófagos (polifágicos) puede controlar las infecciones bacterianas múltiples o

resistentes a ciertas cepas de bacteriófagos, como ocurre en las infecciones del tracto urinario

relacionadas con el catéter de Aeruginosa y Proteus mirabilis (Barceló, 2018).

1.4 Terapia Combinada con Bacteriófagos y Antibióticos

La terapia con fagos ha recibido gran aceptación por parte de la comunidad científica

puesto que ha abierto una serie de indagaciones y formas de implementar estrategias para mejorar la

terapia, ya que es una gran respuesta ante la futura crisis de resistencia antimicrobiana

(ALEXANDRA, 2021)

Por ende, en las pruebas realizadas sobre la combinación de bacteriófagos y antibióticos

con los grupos de bacterias que son resistentes a antibióticos, donde se realizaron distintas pruebas

que al combinar los bacteriófagos y antibióticos nos dan una alternativa de solución muy buena, ya

que solo con la utilización de fago terapia no se puede combatir de una manera precisa a los virus

bacterianas. Pero en cambio cuando hay una combinación de estas resulta un producto que tiene una

fuerte eficacia o potencia para combatir las bacterias que infectan a los seres vivos principalmente hoy

en día. En estos años, la combinación de bacteriófagos con ciprofloxinas se obtuvo buenos resultados

óptimas con un trabajo en equipo y dio como resultado que 7 de 10 cultivos de válvulas de corazones
 La Fagoterapia

15

de ratones que estaban infectado con virus de bacterianas, dieran negativo en tan solo poco tiempo en

una aproximación de 6 horas. Donde este resultado no tiene precedente en la terapia antimicrobiana

prácticamente con ningún fármaco especialmente con p, aeruginosa (Oechslin, f, et al, 2017).

La principal de la combinación de los antibióticos con los bacteriófagos nos lleva a

observar unos resultados muy buenos donde una de las principales ventajas es una mejora en la

eliminación de los virus de bacterianas y así estar evolucionando con el transcurso de los tiempos en

el tratamiento de los bacteriófagos que va estar disminuyendo la resistencia que tiene las bacterias a

los antibióticos del mismo modo también a los bacteriófagos que brinda una posibilidad de

tratamiento muy bueno incluso con las bacterias fuertes a los antibióticos de hoy en día, aunque no

siempre esta combinación puede dar buenos resultados como se podría esperar, para que los terapias

combinadas resulten de una manera efectiva, por ende se tendría de cuidar cuidadosamente las dosis

y con frecuencia a los que se inoculan tanto como los antibióticos y los bacteriófagos.

La combinación de fagos y antibióticos tuvo diferentes efectos terapéuticos según el momento

de su administración. Cuando se aplicó el fago primero y luego se añadió tobramicina o gentamicina a las

24 horas, se produjo una sinergia notable. Sin embargo, cuando se aplicó el fago primero y luego se añadió

ciprofloxacina o ceftazidima, no hubo una mejora significativa respecto a la administración conjunta. Por

eso, es esencial saber la dosis y el tiempo adecuados para cada antibiótico en relación con el fago para

lograr una combinación exitosa.

Por eso la combinación de bacteriófagos y antibióticos abre nuevas posibilidades para la

investigación clínica en muchos casos. Además, “los bacteriófagos tienen la ventaja de que se replican

por sí mismos en el lugar de la infección, sin necesidad de más dosis”(Oechslin, F. et al, 2017). Para

mejorar aún más los resultados, se podría recurrir a bacteriófagos modificados genéticamente según el

tipo de antibiótico y la situación. Sin embargo, esto plantea un obstáculo importante, que es el rechazo

público a los OGM (organismos modificados genéticamente) aplicados directamente en humanos. A

 La Fagoterapia

16

pesar de ello, se pueden conseguir resultados óptimos con bacteriófagos naturales (previamente

seleccionados). (O’Neill, 2016, Andrzej Górski et al, 2018)

1.4.1¿Qué es la tipificación de fagos?

Es un método de investigación que a los investigadores o científicos les permite

ubicar las cepas (grupo) de las bacterias donde hay más brotes fuertes de las infecciones que causan

las bacterias y de esta manera encontrar el lugar donde se encuentran estas.

Por ello la tipificación de fagos es un método que permite clasificar y distinguir grupos de

bacterias según la reacción que pueden tener a distintos bacteriófagos. Los bacteriófagos son virus que

atacan y eliminan bacterias específicas. Algunos bacteriófagos solo pueden infectar un tipo de

bacteria, mientras que otros pueden infectar varios tipos o especies de bacterias. Por ende, al sembrar

las bacterias en un medio apropiado y someterlas a una serie de bacteriófagos conocidos, se puede ver

qué bacteriófagos provocan lisis (destrucción) de las bacterias y cuáles no. Si tiene un gran resultado

se formulan unas placas de lisis La alternativa de lisis se usa para asignar un número o tipo de fago a

las bacterias dependiendo de la cantidad de estas. Por eso la tipificación de fagos se usa para rastrear

el origen de brotes de infecciones, determinando la relación entre especies y grupos de bacterias según

dependiendo de las cuales son, y evaluar la efectividad de la terapia con fagos.

Aunque el fago tipificación se ha estado utilizando en las décadas pasadas para la

subtipificación de algunas especies de bacterias para de este modo determinar los aislamientos de las

bacterias y se han estado realizando diferentes técnicas para permitir la tipificación y uno de ellos es

la especificidad inherente.

La tipificación de bacteriófagos tiene algunas ventajas y limitaciones. Entre las ventajas, se

puede mencionar que es un método rápido, sencillo, barato y específico, que no requiere de equipos

sofisticados ni de personal especializado. Además, permite detectar cambios genéticos en las bacterias
 La Fagoterapia

17

que pueden afectar a su patogenicidad o a su resistencia a los antibióticos. Entre las limitaciones, se

puede señalar que es un método dependiente de la disponibilidad y la calidad de los bacteriófagos, que

pueden ser difíciles de aislar, purificar y conservar. Además, puede haber variaciones en la

sensibilidad de las bacterias a los bacteriófagos debido a factores ambientales o a la presencia de

plásmidos o profagos.

1.5 Situación actual de la terapia de fagos

Situación actual en de hoy en día de la terapia de bacteriófagos se está tomando el interés

nuevamente debido a que la información de la Organización Mundial de la Salud de EE.UU dio a

conocer que una aproximación de 14.000 millones de personas mueren anualmente por las

infecciones de bacterias, porque un aproximado de 60% de las infecciones son resistentes a los

antibióticos, (pimienta rodriges-, 2013) por ello hay un cambio muy importante en la terapia de fagos

cada vez las informes, artículos están más interesantes sobre la terapia de fagos que nos pueden

brindar una solución principalmente a aquellos personas que los antibióticos no les favoreció por esta

situación se han estado desarrollando centros de investigación a nivel mundial como en el caso de

Europa ya tiene formas farmacéuticas a base de fagos del mismo modo en EE.UU ya existen dos

empresas que ya comercializan fagos en preparaciones (aditivos) las cuales ya son aprobados por la

FDA (administración de alimentos y medicamentos) para su respectivo venta para la fago terapia

contra las infecciones de los seres humanos causadas por las bacterias.

El Instituto Eliava (el antiguo Instituto Tbilisi de Bacteriófagos, Microbiología y Virología

de la República de Georgia) posee probablemente la mayor colección de bacteriófagos del mundo.

Elaboran bacteriófagos para curar todo tipo de infecciones como: sepsis, peritonitis, mastitis, abscesos

purulentos, neumonías y bronquitis, quemaduras, etc. Y en todo tipo de formatos: líquido, pastillas,

pomadas, aerosoles y nebulizadores e incluso supositorios. Preparan cócteles de combinaciones de

 La Fagoterapia

18

fagos para serotipos distintos de Escherichia, Enterococos, Proteus, Pseudomonas, Shigella,

Salmonella, Staphylococcus y Estreptococus.

Actualmente, hay solo unos pocos cientos de fagos descritos en las bases de datos, pero se

calcula que ahí fuera, en la naturaleza, puede haber 10³¹ viriones. Conocemos solo una gota en el

océano y las posibilidades terapéuticas futuras de los fagos son impresionantes. Es muy probable que

en el futuro el médico nos recete un preparado de virus para acabar con alguna infección. Además, se

están estudiando nuevas estrategias para mejorar y superar las limitaciones del fago terapia: el diseño

de nuevas combinaciones de varios fagos al mismo tiempo, la combinación sinérgica de fangoterapia

y antibióticos, el empleo de productos del fago en vez del fago completo (como las endolisinas), el

uso nuevas tecnologías de dispensación de medicamentos como liposomas o la manipulación genética

de los propios fagos.

Y así los fagos se pueden modificar genéticamente para cambiar la especificidad de la

bacteria huésped, reducir su inmunogenicidad y evitar que liberen toxinas bacterianas para minimizar

su respuesta inflamatoria. Además, pueden extender su supervivencia después de su administración

(fagos que duren más tiempo en el torrente circulatorio), mejorar su acción frente a biopelículas

bacterianas con enzimas que degraden esas biopelículas, mejorar la lisis de las bacterias, etc.

De todas formas, la extensión del uso de fagos para curar enfermedades infecciosas va a

requerir una regulación específica de los nuevos productos terapéuticos y algo de “marketing” debido

a que se está despertando de nuevo las infecciones que va produciendo los bacteriófagos: quizá

algunas personas no reciban con buenos ojos eso de inyectarse unos virus para acabar con la

infección. Habrá que explicarlo bien, los virus no siempre son malos y algunos nos pueden salvar la

vida en muchos aspectos.

 La Fagoterapia

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CAPÍTULO II: PROCESO DE LA TERAPIA DE FAGOS

2.1 Aislamiento y purificacion de bacteriofagos

Para el aislamiento de bacteriófagos se realizan procedimiento en las cuales permiten

aislar los bacteriófagos dependiendo a qué tipo de bacteriófagos es la que se quiere aislar, Los

científicos a través de estudios rigurosos, donde se han aislado bacteriófagos y posterior a esto se han

caracterizado de forma específica, siendo utilizados respectivamente de acuerdo con el interés

investigativo ,y de este modo existen diferentes tipos de aislamiento que nos puede llevar a encontrar

los diferentes tipos de fagos, según (Von, 2017)

El bacteriófago fue aislado del líquido ascítico procedente de un

ejemplar de Paralichthys adspersus "lenguado", con signos aparentes de enfermedad

que estaba teniendo, y de este modo las cuales son procedente del laboratorio de

Cultivo de Peces del Instituto del Mar del Perú.

Para la purificación de bacteriófagos del mismo modo se utiliza algunas técnicas que nos

permite realizar este proceso, “La purificación del bacteriófago se realizó mediante la técnica de la

doble capa” (Von, 2017)

A partir del sobrenadante filtrado, se realizaron diluciones seriadas en

buffer fosfato salino (PBS). Un mililitro de cada dilución fue mezclado con 1 mL de

un cultivo de V. alginolyticus ATCC® 33787 en tubos estériles conteniendo 3 mL de

TSA (70%) con 1 mL de ClCa2 20 mM (45 °C), los cuales se vertieron sobre placas

con agar TSA (100%) y se incubaron a 25 °C por 24 horas. Transcurrido el tiempo de

incubación, se evidenció la formación de placas de lisis las cuales fueron recortadas

con ayuda de un asa de siembra con el aro de nicrom en ángulo recto, trasladadas y

depositadas en microtubos de 2 mL conteniendo PBS estéril. En seguida, se agregaron

 La Fagoterapia

20

3 gotas de cloroformo y se agitaron en vortex por 1 minuto. Posteriormente, las

muestras se centrifugaron a 3300xg a 4 °C por 10 minutos y se filtraron a 0.22 µm. El

filtrado fue almacenado en microtubos estériles de 1.5 mL a 4 °C. (Von, 2017)

Realizando los diferentes métodos o aspectos de la purificación de bacterias nos lleva a

encontrar diferentes muestras para purificar a los bacteriófagos para que de esta manera sea eficiente

en la en las enfermedades que se vayan utilizar.

2.2 Producción de bacteriófagos

2.2.1 Replicación

Al igual que cualquier otro tipo de virus los bacteriófagos sólo pueden replicarse

dentro de una célula huésped. (Azeredo & Sutherland, 2008) aclaran que existen

principalmente dos tipos de fagos: temperados y virulentos (líticos). Los fagos virulentos

tienen una mejor respuesta al ser usados para la descontaminación de patógenos ya que, bajo

condiciones específicas, provocan la lisis celular de la bacteria y no incluye su ADN (ácido

desoxirribonucleico) a la bacteria huésped. Por otro lado, los fagos temperados incluyen su

ADN al material genético del huésped y se dividen siendo el ciclo natural de la bacteria

(Abedon, 2008). En consecuencia, el uso de fagos virulentos (líticos) puede evitar que los

genes de resistencia bacteriana se transfieran de forma horizontal, producción de toxinas, etc.

qué ocurriría con el uso de fagos temperados.

El proceso de multiplicación o propagación de los fagos líticos consta de varias fases.

La primera etapa es de fijación, cuando el virus se une a la posible bacteria huésped. La gran

parte de los bacteriófagos poseen cola, cuya punta se une a receptores específicos (proteínas,

lipopolisacáridos y carbohidratos) sobre la superficie de la bacteria huésped. Esta

especificidad hace que el bacteriófago solo pueda infectar a determinadas bacterias que tienen

el receptor, así se determina la variedad de huéspedes del fago. Mayormente la fijación se da

 La Fagoterapia

21

en la pared celular de la bacteria, sin embargo, existen otro tipo de receptores como el Pili,

flagelo o cápsulas de la célula huésped. Una vez fijado a la superficie de la célula, los fagos

inyectan sus ácido nucleico dentro de su huésped. Esto probablemente es incentivado por la

acción de la lisozima que está incorporada en la cola del fago. Teniendo el genoma del virus

disponible, este es utilizado en la fase de biosíntesis donde se dirige a la expresión de los

genes y proteínas para ensamblar las nuevas partículas virales. Por último, la liberación de las

partículas virales del huésped es posible por la lisis celular a través de la producción de

enzimas inducidas por los fagos. Luego, los nuevos virus, buscan otras bacterias para iniciar

de nuevo el proceso. Dependiendo de las especies y condiciones, cada fago “padre” puede

producir en promedio alrededor de 200 “hijos” por ciclo lítico.

En la lisis bacteriana ocurren dos fenómenos, “lisis desde dentro” y “lisis desde

fuera”. El tipo de lisis depende de la proporción entre fagos y bacterias, multiplicidad de

infección (MOI). Con un MOI bajo, los fagos infectan a las bacterias, se multiplican y lisan

las células desde dentro. Pero, cuando en MOI es alto, un gran número de fagos se unen a la

superficie de la célula y su pared celular se debilita, por lo tanto, las bacterias son lisadas

directamente sin multiplicación de fago y, en lugar de un incremento en el título del fago, se

produce una disminución.

2.2.2 Endolisinas

Las endolisinas son proteínas de los fagos encargadas de llevar a cabo la etapa final

del ciclo lítico de los fagos no filamentosos, donde se libera la progenie viral. En fagos que

poseen un ADN de doble cadena se sintetizan dos proteínas: holina y endolisina.

La primera es compatible con la membrana bacteriana, en la cual se inserta haciendo

poros, mediante los cuales pasará la endolisina al espacio periplasmático, desde donde se

degrada el peptidoglicano de la pared de la célula.

 La Fagoterapia

22

Esto provoca que la presión osmótica aumenta al interior de la célula, lo que provoca

la lisis de la misma. En algunos fagos las holinas forman poros muy pequeños que no

permiten el paso de las endolisinas, sin embargo, son lo suficientemente grandes para el paso

de iones que cambian el potencial de la membrana y activan de este modo la acción de las

mismas.

Las endolisinas tienen un péptido señal que les permite al exterior de la célula a

través de sistemas generales de secreción. La actividad enzimática de las endolisinas consiste

en la hidrólisis del peptidoglicano que rodea a las bacterias, lo que ocasiona la aparición de

zonas de desestabilización de la envoltura celular que no pueden contener la presión osmótica

interna de la bacteria, que finalmente se lisa.

A partir del enlace químico por el que hidrolizan, las endolisinas se dividen en cinco

tipos: endopeptidasa, N-acetil-ß-D-glucosaminidasa, N-acetilß-D-muramidasa y

transglicosilasa y N-acetilmuramil-L-alanina amidasa. La estructura de las endolisinas varía

entre las codificadas por fagos que infectan bacterias Gram negativas y las codificadas por

fagos que infectan a las bacterias Gram positivas.

Estas últimas generalmente son proteínas globulares con un solo dominio catalítico.

Mientras que las endolisinas codificadas por fagos que infectan bacterias Gram positivas

tienen una estructura modular que posee, al menos, dos dominios funcionales.

La actividad catalítica se sitúa en el extremo amino-terminal, mientras que el otro

extremo carboxi-terminal tiene un dominio de unión a la pared celular que le da especificidad

a la enzima y lo mantiene unido a la pared, evitando que se produzca la lisis en otras

bacterias.

La gran parte de endolisinas tienen un espectro de acción limitado a la especie

infectada por el fago que las sintetiza, a pesar que algunas son específicas de género. Las

endolisinas codificadas por fagos que infectan a bacterias Gram positivas tienen la capacidad
 La Fagoterapia

23

de degradar el peptidoglicano cuando se añaden desde el área exterior de la bacteria (lisis

desde fuera), actuando como agentes antibacterianos.

2.2.3 Productos de fagos

En el campo de la fagoterapia, es necesario conocer la utilización de productos

básicos de fagos, como las endolisinas, también llamadas “enzobioticos”, como actores

potenciales con fines terapéuticos. Las endolisinas son enzimas que el fago produce para lisar

a la bacteria huésped. Por ejemplo, las hollinas rompen la pared celular de la bacteria y

liberan la progenie del fago al medio ambiente al final de su ciclo de vida.

Debido a que las endolisinas atacan y degradan específicamente el peptidoglicano,

hay un gran interés en su uso como agentes antibacterianos. Tienen dos dominios de acción,

el catalítico, que produce la hidrólisis del peptidoglicano, y el de unión al peptidoglicano. Las

endolisinas, generalmente son específicas de un género o familia bacteriana.

Asimismo, gracias a la estructura de la pared celular, las bacterias Gram-positivas son

en gran parte susceptibles a las endolisinas administradas externamente, por otro lado, las

bacterias Gram-negativas, la membrana externa imposibilita el ingreso de la endolisina al

espacio periplasmàtico, las endolisinas tienen diversas características beneficiosas, entre sus

ventajas cabe señalar:

1. Son muy específicas contra género y especie bacteriana, esta especificidad de

los fagos permite una eliminación selectiva de las bacterias patógenas mientras que el resto

del microbiota permanece intacto. En el caso de las endolisinas, no dañan células humanas ni

el microbiota del huésped, ya que la especificidad suele estar restringida al género, es decir,

son activas frente a todas las especies del género bacteriano al cual infecta el fago que la

codifica. Sin embargo, la efectividad suele ser mucho mayor frente a la especie a la que

infecta el fago, y notablemente menor frente al resto de las especies.

2. Pueden ser sinérgicas con los antibióticos.

 La Fagoterapia

24

3. Por medio de ingeniería química es posible modificar las endolisinas para

cambiar el sitio de unión, o el de catálisis o para aumentar su espectro, etc.

4. La capacidad de autorreplicación de los fagos implica un aumento

exponencial en su número tras un proceso de infección, multiplicándose así también su

eficacia.

5. Tanto bacteriófagos como endolisinas son igualmente efectivos frente a

bacterias sensibles y resistentes a los antibióticos. Por ello, constituyen un prometedor sistema

de eliminación de bacterias resistentes a antibióticos que puedan estar presentes en el entorno

alimentario.

6. La actividad antibiofilm de los bacteriófagos y las endolisinas constituye una

ventaja a la hora de erradicar estas complejas estructuras microbianas.

7. El uso de bacteriófagos es seguro, ya que hay estudios realizados en personas

voluntarias que ingirieron fagos, sin que fuesen detectados efectos adversos (Bruttin &

Brüssow, 2005).

8. No alteran las características organolépticas de los alimentos, un requisito

muy importante a la hora de ser utilizados como bioconservantes.

Entre las desventajas cabe señalar:

1. Los bacteriófagos pueden ser portadores o transferir genes de virulencia a las

bacterias a las cuales infectan. Se precisa, por lo tanto, una caracterización completa previa a

su aplicación (secuenciación del genoma completo, identificación de los genes, estudio de la

capacidad de transducción). Además, se desaconseja el uso de fagos atemperados, ya que

pueden integrarse en el cromosoma bacteriano sin llegar a matar a la bacteria huésped.

2. Los bacteriófagos tienen un rango de huésped limitado, lo que implica que,

en ocasiones, sea necesario utilizar mezclas de fagos para poder eliminar el mayor número

posible de cepas distintas de un determinado patógeno.

 La Fagoterapia

25

3. Las bacterias tienen la capacidad de hacerse resistentes a los bacteriófagos de

manera espontánea. Por ello, se requiere siempre el uso de mezclas de fagos de distintas

familias, lo que hace virtualmente imposible que una única bacteria adquiera resistencia a

todos ellos.

4. Las condiciones físico-químicas del alimento o del ambiente en el que se

procesa, pueden inactivar a bacteriófagos y endolisinas, o bien reducir su actividad, siendo

pues necesario determinar las condiciones idóneas para cada aplicación con objeto de

garantizar los mejores resultados (Bigwood et al., 2008).

2.3 Formulación y administración

2.3.1 Formas de administración

En la práctica clínica, pueden ser administrados de tres formas distintas. Sin

embargo, la más utilizada es en forma de cóctel o mezcla fija de fagos, esta tiene

varios beneficios:

1. Permite el tratamiento de múltiples especies bacterianas a la vez.

2. Mayor potencia por la acción de múltiples cepas de fagos que atacan la

misma bacteria.

3. Limitación de la resistencia al forzar a la bacteria objetivo a desarrollar

resistencia a múltiples fagos simultáneamente para sobrevivir.

El inconveniente que tiene este método es que cada fago que conforman el cóctel

requiere una reducción en la dosis individual para poder co-formularse. Además, existe la

posibilidad de que los bacteriófagos interfieran entre sí, por ejemplo, que empiecen a

competir por el mismo receptor de la bacteria y ocasionen resistencia cruzada.

 La Fagoterapia

26

En la actualidad los cócteles de fagos se fabrican mediante la producción actual de

“Buenas Prácticas de Manufactura”, los productos finales se someten a evaluaciones clínicas

de seguridad y eficacia por etapas, otra forma de administración es la utilización de un solo

fago dirigido con precisión a una bacteria específica.

Esta modalidad consta de la preparación magistral del fago según la vía de

administración elegida, tener identificada a la bacteria patógena y contar con bibliotecas

diversas y grandes de fagos purificados.

Esta modalidad no debería usarse empíricamente, por el riesgo de fallo asociado a

insensibilidad bacteriana al fago. Por último, no siempre se cuenta con un fago en el biobanco

dirigido contra una determinada bacteria.

Los cócteles no deberían usarse empíricamente, por el riesgo de fallo asociado a la

insensibilidad bacteriana al fago. Finalmente, no siempre hay un fago dirigido contra una

determinada bacteria en el biobanco. La tercera y última modalidad de administración es la

fabricación de productos con fagos personalizados, aislados para cubrir las necesidades

específicas de cada paciente.

Bajo esta estrategia y contando con los recursos pertinentes, los fagos pueden ser

modificados genéticamente en forma continua para responder, por ejemplo, a la resistencia a

los fagos. La dificultad con esta modalidad sería que el aislamiento del fago y la manufactura

del producto hecho con este tomaría un periodo muy extenso de tiempo, semanas o meses.

2.3.2 Cóctel de fagos

El desarrollo de cócteles de fagos debido a la diversidad masiva de fagos ambientales

es sustancialmente más complicado que diseñar un régimen de combinación de terapia

antibiótica.

Su composición es crítica para el éxito de la terapia con fagos, la personalización de

estos cócteles para cada tipo de infección toma mucho tiempo y pueden llegar ser muy
 La Fagoterapia

27

costosos, sin embargo, un enfoque de “talla única para todos”, puede no proporcionar la

especificidad requerida para que resultados clínicos sean favorables. Otras consideraciones

son los efectos secundarios de los fagos sobre el microbiota del individuo, aunque, han sido

plenamente investigados.

En el diseño de cóctel también es importante tener en cuenta el ciclo de vida del fago.

Los fagos virulentos componen en gran parte el viroma del intestino. Se ha determinado que

algunos fagos lisogénicos son prometedores terapéuticamente, pausando los genes de

virulencia en bacterias patógenas o concediendo genes para el metabolismo de ácidos grasos

de cadena corta, mientras que otros fagos suministran genes de resistencia a los antibióticos y

a la virulencia.

Los genes de resistencia a los antibióticos se han recolectado de una fracción fágica

del ADN en las aguas residuales y se ha encontrado que estos persisten más tiempo en los

fagos que en las bacterias. También están presentes en muestras fecales humanas y en fagos

de muestras con ratones con tratamiento antibiótico, lo que indica un posible papel para los

fagos como reservorio de genes de resistencia a antibióticos. El potencial hipotético de los

fagos lisogénicos para complicar las infecciones existentes a través de la transferencia

horizontal de estos genes en gran medida excluye a estos de la mayoría de los cócteles de

fagos.

Sin embargo, (Schooley et al., 2017) demostraron la posibilidad de diseño de un

cóctel “inteligente”, de 5 fagos que elimino de una herida cutánea, Acinetobacter baumannii

en un modelo de ratón. Este cóctel de fagos inteligente estaba compuesto por 4 fagos que eran

incapaces de lisar al hospedero y 1 fago que solamente inhibe el crecimiento in vitro.

El fago inhibidor del crecimiento causa la pérdida de la cápsula en la bacteria, y la

eliminación de la cápsula ocasiona la disminución de la virulencia de la bacteria; haciéndola

susceptible a la lisis de los 4 fagos adicionales.

 La Fagoterapia

28

Este representa el punto de partida para proponer nuevas opciones de tratamiento para

eliminar infecciones bacterianas que son resistentes a los tratamientos convencionales. Este

tipo de manipulación in situ de bacterias individuales, y potencialmente el microbioma

intestinal humano puede ser muy provechoso, pero aún falta mucho por saber acerca del papel

de los virus lisogénicos en el intestino humano para que su uso sea seguro y eficaz.

2.3.3 Encapsulamiento de fagos

El uso de fagos para la reducción o en el mejor de los casos la eliminación de STEC

(Escherichia coli productor de toxina Shiga) y EHEC (Escherichia coli enterohemorrágica) en

bovinos requiere del desarrollo de visas convenientes de administración de fagos.

Existen diversos trabajos realizados sobre la efectividad del tratamiento con fagos

para combatir el STEC y el EHEC en bovinos y otros rumiantes, entre todos los métodos

utilizados se demostró que el método de suministro más práctico y rápido era el método por

vía oral, sobre todo pensando en una aplicación masiva de este tratamiento donde deben ser

inoculados cientos de animales, y el suministro se puede dar mediante el alimento o el agua

bebida.

A pesar que, existe la posibilidad de que un número suficiente de fagos puede ser

capaz de atravesar el sistema gástrico y llegar al intestino del vacuno por consumo directo en

el agua de bebida (o con la adición de HCO3 - para amortiguar el ácido estomacal), para que

esto suceda las cantidades que deben suministrarse al agua son muy grandes, ya que las dosis

ingeridas deben ser del orden de 1011 -1013 UFP.

Más aún, los ensayos realizados en rumiantes infectados experimentalmente no

reflejan de manera exacta lo que se observa en la realidad, ya que la gran incidencia de EHEC

y STEC que se genera en el intestino del rumiante por infección artificial, implica que la

posibilidad de encuentro del fago con la “bacteria blanco” es razonablemente alta, y con el
 La Fagoterapia

29

primer ciclo de infección la replicación del fago incrementa exponencialmente más esta

probabilidad.

Las EHEC y STEC que se encuentran naturalmente en el intestino de los bovinos

representan una mínima proporción de su flora intestinal, y aunque este número pequeño de

bacterias es apto para producir el contagio a humanos, esta baja proporción de la “bacteria

blanco” va a necesitar de un alto número de fagos para que éstos puedan producir de forma

efectiva la infección y lisis.

Con el propósito de lograr aumentar el número de fagos capaces de llegar al intestino

del bovino se pusieron a prueba diferentes alternativas para proteger al fago del pH altamente

ácido del estómago durante el suministro oral a bovinos.

Para esto se formularon matrices de encapsulamiento para los fagos y se observó la

protección que ofrecía frente a la acidez y a la acción de ciertas enzimas digestivas. Estas

matrices deben procurar ser aptas para el consumo de los bovinos, por lo que se exploraron

sistemas cuyos elementos fueran de origen natural y aceptados para el consumo, como son el

ácido oleico, los polisacáridos como pectinas y alginato y productos derivados de los gránulos

de kefir.

2.3.4 Conservación de fagos

Los bacteriófagos usados para el biocontrol de patógenos se ha desarrollado con

mayor fuerza en occidente en la última década, este notable desarrollo plantea la necesidad de

tener técnicas de conservación que permitan almacenar a largo plazo las formulaciones del

fago.

El desarrollo más evidente de la fagoterapia se ha dado en el área de la industria

alimentaria, por lo cual, significa que las técnicas de conservación que deben ser utilizadas en

este campo deben permitir que estas formulaciones de fagos puedan ser aplicadas en

productos para el consumo.

 La Fagoterapia

30

La liofilización es el método más utilizado para el transporte y conservación de

productos biológicos. Para este proceso se suelen utilizar lioprotectores (Lp) que disminuyen

el daño ocasionado por los procesos de congelación y deshidratación y el posterior

almacenamiento.

En la mayor parte de los casos se utilizan como Lp, sistemas naturales complejos

(sueros, extractos y cultivos de bacterias probióticas), como la leche descremada, que aportan

al mismo tiempo varios elementos, tales como las proteínas y la lactosa, que pueden actuar

como protectores de uno o ambos procesos y son aptos para el consumo.

Este método podría resultar muy apropiado para su posterior administración como

agentes terapéuticos y exactamente es por este motivo que es importante la búsqueda de

formulaciones estables de fago durante la liofilización y el almacenamiento de productos ya

liofilizados.

CAPÍTULO III

3.1 VENTAJAS DE LA TERAPIA DE FAGOS

Las principales ventajas que presenta esta terapia frente a la utilización de los antibióticos se

pueden resumir en elevada seguridad y especificidad. Además, esta terapia puede emplearse en

combinación con los antibióticos para mejorar la eficacia del tratamiento.

3.1.1 Seguridad

La seguridad de los fagos hace referencia a su capacidad de auto amplificación y

autolimitación, dado que el fago al infectar a una bacteria patógena introduce en ella su material

genético dando inicio al ciclo lítico en el cual se formaran y liberaran los nuevos fagos que tendrán la

capacidad de infectar a más bacterias de esta forma logra su propagación, la multiplicación de los

fagos se dará hasta que ya no existan más bacterias huéspedes que infectar lo cual producirá la
 La Fagoterapia

31

eliminación de los fagos. Este crecimiento exponencial y la rápida reproducción permite que la dosis

administrada de bacteriófagos a los pacientes sea menor y en lapsos de tiempo más apartados. Los

fagos por sí mismos presentan una baja toxicidad, ya que están formados principalmente por ácidos

nucleicos y proteínas, sin embargo, para asegurar su baja toxicidad, es decir la eliminación de posibles

sustancias tóxicas, antes de ser utilizados en la terapia se someten a una secuenciación y análisis de

genoma y una purificación mediante cromatografía de intercambio iónico y centrifugación a alta

velocidad.

A pesar de ser en gran medida seguros, debido a que su estructura externa esta compuesta por

una cápside proteica, existe la posibilidad de la translocación de los fagos por medio del epitelio del

intestino, donde serán capaces de circular dentro de la sangre, aumentando la posibilidad de sufrir

casos de anafilaxia. Algunos estudios revelan que los fagos puedes reducir la regulación de la

respuesta del sistema inmune a antígenos de microbios intestinales a través de la inhibición de la

interleucina-2, factor de necrosis tumoral y producción de interferón gamma beneficiando al huésped.

Otros estudios demuestran que el sistema inmune del huésped elimina los fagos después de la

administración en ratones. A pesar de que los pros del uso de fagos son mayores que los contras en

pacientes no inmunocomprometidos, el efecto de los fagos en los pacientes inmunocomprometidos

puede ser totalmente adverso, empeorando su condición. Aún no se ha llegado a un acuerdo acerca de

esta posibilidad ya que otros estudios muestran que es poco probable que la terapia con fagos sea

capaz de provocar este tipo de reacción en pacientes inmunocomprometidos.

También existe la posibilidad de que los cócteles de fagos produzcan un estado de disfunción

en la barrera intestinal, intestino permeable. (Tezt & Tezt, 2016), usaron el modelo de ratón para

demostrar que el consumo vía oral de un cóctel de fagos comercial ruso era capaz de aumentar la

permeabilidad intestinal y elevar los niveles séricos de complejos circulatorios, inmunes e

inflamatorios en la sangre, los cuales pueden desembocar en una serie de condiciones patológicas.

Además, otro estudio desestimó el aumento significativo de los niveles de citoquinas en

respuesta al tratamiento con fagos. La posibilidad de que esta terapia cause perturbaciones en la
 La Fagoterapia

32

función intestinal podría convertirse en un factor que propicia varios trastornos como la enfermedad

de Crohn, diabetes tipo 1 y enfermedad del intestino inflamado. Asimismo, encontraron que la

respuesta inflamatoria al fago dependía del sitio de la infección. Es posible que la respuesta

fisiológica a los fagos se diferencie entre cada individuo y dependa de las cepas de fagos específicas

utilizadas. Para determinar por completo la seguridad de los fagos es necesario realizar ensayos

clínicos en humanos, ya que la información que se tiene de estos hasta ahora proviene de

experimentos hechos en modelos animales.

En contraparte los antibióticos necesitan ser administrados en altas dosis para actuar como un

antimicrobiano afectivo, lo que a largo plazo puede producir daños en distintos tejidos. Los efectos

secundarios de los antibióticos son muy conocidos, estos incluyen la cardiotoxicidad, distintas

complicaciones gastrointestinales y hematológicas, hepatotoxicidad, neurotoxicidad, casos de

anafilaxia y nefrotoxicidad.

3.1.2 Especificidad

Los fagos son muy específicos en su objetivo de bacterias y se pueden adaptar para

apuntar a cepas específicas de bacterias. Esto significa que la terapia con fagos es

particularmente útil en los casos en que las infecciones bacterianas son resistentes a los

antibióticos.

Según (Revista Mexicana de ciencias Farmacéuticas, 2010, pp.16-17) “La

especificidad de los fagos hace referencia a su capacidad para infectar y replicarse en ciertos

tipos de bacterias”

Y para (Domingo Calap & Gonzales, Febrero 3,2022,p.13) clasifican en los siguientes

casos:

1. Cóctel de fagos
 La Fagoterapia

33

Hace referencia a una combinación de diferentes bacteriófagos que se

utilizan en un tratamiento para combatir una infección bacteriana específica.La idea

detrás de los cócteles de fagos es aprovechar las diferentes características y

habilidades de varios bacteriófagos para aumentar la efectividad del tratamiento. Cada

bacteriófago en el cóctel puede tener una especificidad diferente para diferentes cepas

de bacterias o puede atacar a las bacterias en diferentes etapas de su ciclo de vida. Al

combinar varios bacteriófagos, se busca aumentar la probabilidad de éxito al abordar

la diversidad de bacterias presentes en una infección. La selección de los

bacteriófagos para un cóctel se basa en estudios de susceptibilidad bacteriana y en la

capacidad de los bacteriófagos para lisis eficiente de las bacterias objetivo. Los

investigadores también consideran la compatibilidad entre los bacteriófagos

seleccionados para asegurar que no haya interacciones negativas entre ellos.Los

cócteles de fagos han mostrado prometedores resultados en el tratamiento de

infecciones bacterianas, especialmente en casos de bacterias resistentes a los

antibióticos. Al utilizar una combinación de bacteriófagos, se busca aumentar la

probabilidad.

2. Las enzimas líticas derivadas de los bacteriófagos, también conocidas

como enzimas lizantes o enzimas endolisinas: son proteínas producidas por los

bacteriófagos que tienen la capacidad de romper y destruir la pared celular de las

bacterias. Estas enzimas son cruciales para el ciclo de vida de los bacteriófagos, ya

que les permiten liberar las partículas virales al romper la pared celular de la bacteria

infectada. Las enzimas líticas son altamente específicas y están diseñadas para atacar

la estructura de la pared celular bacteriana. Dependiendo del tipo de bacteria objetivo,

 La Fagoterapia

34

las enzimas líticas pueden tener diferentes mecanismos de acción. Por ejemplo,

algunas enzimas líticas actúan como peptidoglicano hidrolasas y rompen los enlaces

del peptidoglicano, que es un componente importante de la pared celular bacteriana.

Esto debilita la pared celular y conduce a la lisis o ruptura de la bacteria.Las enzimas

líticas derivadas de los bacteriófagos han despertado un gran interés en el campo de la

terapia de fagos, ya que se pueden utilizar de forma independiente como agentes

antibacterianos. Estas enzimas pueden ser aplicadas directamente sobre las bacterias

para destruir su pared celular, lo que puede ser especialmente útil en casos de

bacterias resistentes a los antibióticos. Además, las enzimas líticas también se están

investigando para su uso en combinación con los bacteriófagos en los cócteles de

fagos. Estas enzimas pueden ayudar a debilitar la pared celular bacteriana, facilitando

la entrada de los bacteriófagos y aumentando su eficacia en la destrucción de las

bacterias.Es importante destacar que las enzimas líticas derivadas de los bacteriófagos

son altamente específicas para ciertos tipos de bacterias y no afectan a las células

humanas. Esto las hace prometedoras como alternativas a los antibióticos en el

tratamiento de infecciones bacterianas , ya que reduce el riesgo de desarrollo de

resistencia bacteriana.

3. La modificación mediante ingeniería genética de los bacteriófagos se

ha presentado cómo una técnica utilizada para alterar el material genético de los

bacteriófagos con el objetivo de mejorar sus propiedades y adaptarlos para diferentes

aplicaciones en la terapia de fagoLa ingeniería genética de los fagos implica la

manipulación de su genoma mediante la introducción, eliminación o modificación de

genes específicos. Esto se puede lograr utilizando técnicas como la recombinación

 La Fagoterapia

35

homóloga, la edición genética mediante CRISPR-Cas9 u otras herramientas de

ingeniería genética.

Algunos de los objetivos de la modificación genética de los fagos

incluyen:

3.1 Ampliación de la especificidad: Los bacteriófagos tienen una especificidad

natural para ciertos tipos de bacterias. Sin embargo, mediante la ingeniería genética,

es posible modificar los receptores de reconocimiento en la cápside del bacteriófago

para ampliar su rango de hospedadores y permitir que infectn y destruyan diferentes

cepas bacterianas.

3.2 Mejora de la eficiencia de lisis: La lisis bacteriana es el proceso mediante

el cual los bacteriófagos destruyen la bacteria huésped. La ingeniería genética puede

ser utilizada para mejorar la actividad de las enzimas líticas producidas por los

bacteriófagos, aumentando su eficiencia para romper la pared celular bacteriana y

liberar las partículas virales.

3.3 Reducción de la resistencia bacteriana: Los bacteriófagos pueden

evolucionar y adaptarse a las defensas de las bacterias, lo que puede conducir al

desarrollo de resistencia. La ingeniería genética de los fagos puede ayudar a superar la

resistencia bacteriana mediante la modificación de los genes involucrados en la

interacción entre el bacteriófago y la bacteria huésped.

 La Fagoterapia

36

3.1.3 Versatilidad

“Los fagos se pueden utilizar para tratar una amplia gama de infecciones

bacterianas, incluidas aquellas que son difíciles de tratar con los antibióticos

tradicionales” (Serrano Romero, 2020, p.8)

Los fagos son virus que infectan bacterias y tienen una gran versatilidad en su uso.

Explora las enzimas derivadas de fagos y su capacidad para realizar diversas funciones, desde

el reconocimiento y la entrada del fago en la bacteria hasta la liberación de nuevos virus

mediante la lisis bacteriana.

3.1.4 Fácil de administrar

Los fagos se pueden administrar por vía oral, tópica o mediante inyección, lo que

facilita su uso en una variedad de entornos clínicos.

La administración de la terapia de fagos puede variar dependiendo del tipo de

infección y la ubicación específica del problema. Aquí hay algunas formas comunes en las

que se administra la terapia de fagos:

1. Administración tópica: En el caso de infecciones de la piel o heridas,

los fagos pueden aplicarse directamente en el área afectada en forma de cremas, geles

o apósitos impregnados con fagos. Esto permite que los fagos actúen localmente y

combatan las bacterias presentes en la superficie de la piel.

2. Administración oral: Algunas formas de terapia de fagos se pueden

administrar por vía oral, en forma de cápsulas o líquidos. Esto puede ser útil en
 La Fagoterapia

37

infecciones gastrointestinales o infecciones en otras partes del cuerpo que se pueden

tratar de manera efectiva a través del tracto digestivo.

3. Administración intravenosa: En casos más graves o sistémicos, los

fagos se pueden administrar por vía intravenosa, lo que significa que se inyectan

directamente en una vena. Esto permite que los fagos se distribuyan por todo el

cuerpo y lleguen a las áreas afectadas por la infección.

Es importante tener en cuenta que la administración de la terapia de fagos

debe ser realizada por profesionales de la salud capacitados y siguiendo las pautas y

protocolos adecuados. Cada caso puede requerir un enfoque específico y es

importante consultar con un médico especialista en terapia de fagos para determinar la

mejor forma de administración en cada situación.

3.1.5 Económico

La terapia con fagos suele ser menos costosa que los tratamientos tradicionales

con antibióticos, ya que los fagos se pueden producir fácilmente y no requieren

procesos de fabricación complejos. Según un artículo de la BBC News Mundo:

“la terapia de fagos ha mostrado ser una alternativa prometedora y menos

costosa para combatir infecciones bacterianas resistentes a los antibióticos” (Milei,

2023)

En el artículo, se relata el caso de Isabelle Carnell-Holdaway, una paciente que

fue tratada con fagos en el Great Ormond Street Hospital de Londres. Isabelle tenía

una infección por Mycobacterium abscessus, una bacteria resistente a los antibióticos,
 La Fagoterapia

38

y los médicos le dieron menos del 1% de posibilidades de supervivencia. Sin

embargo, la terapia de fagos fue exitosa y Isabelle se recuperó por completo.

La terapia de fagos puede considerarse menos costosa en comparación con

otros tratamientos debido a varios factores:

1. Menor desarrollo de resistencia: A diferencia de los antibióticos, que

pueden perder efectividad debido al desarrollo de resistencia bacteriana, los fagos

tienen la capacidad de evolucionar rápidamente para adaptarse a las bacterias

resistentes. Esto significa que los fagos pueden seguir siendo efectivos incluso cuando

las bacterias desarrollan resistencia a los antibióticos, lo que reduce la necesidad de

desarrollar constantemente nuevos medicamentos.

2. Producción más simple: La producción de fagos puede ser más simple

y menos costosa en comparación con la producción de antibióticos. Los fagos pueden

ser cultivados y multiplicados en bacterias hospedadoras, lo que permite una

producción más escalable y económica.

3. Menor impacto en la microbiota: Los antibióticos pueden tener un

impacto negativo en la microbiota intestinal, lo que puede llevar a problemas de salud

adicionales. Los fagos, al ser específicos para ciertas bacterias, pueden minimizar el

impacto en la microbiota y reducir la necesidad de tratamientos adicionales para

restaurar el equilibrio de la flora intestinal.

Sin embargo, es importante tener en cuenta que la terapia de fagos todavía está

en desarrollo y no está ampliamente disponible en todos los lugares. Además, los

costos pueden variar dependiendo de la ubicación geográfica, la disponibilidad de

 La Fagoterapia

39

fagos específicos y otros factores relacionados con la producción y administración del

tratamientos.

3.2 Desventajas

Una de las dificultades que enfrenta la fagoterapia es la falta de regulaciones en la

mayoría de los países de Occidente, lo que impide la inversión de capital en esta tecnología.

Sin embargo, ya existen varias empresas dedicadas a la bioprospección y producción

de fagos. La compañía Intralityx en Baltimore, MD USA, ha elaborado tres

productos: SalmoFresh, para el control de Salmonella spp., ListShield, que actúa

específicamente contra Listeria monocytogenes y Ecoshield, contra Escherichia coli. Los tres

productos mencionados se encuentran aprobados por la FDA ,para ser utilizados en productos

de consumo humano.

(PubMed Central, 2018, p.101-)

3.2.1 Conocimiento limitado

Aunque la terapia de fagos ha sido objeto de investigación durante

décadas, todavía hay mucho que aprender sobre su eficacia, seguridad y

aplicaciones clínicas. El conocimiento y la comprensión de los fagos y su

interacción con las bacterias son áreas en constante desarrollo.

3.2.2 Dificultad en la producción y almacenamiento

La producción de fagos para su uso terapéutico puede ser un desafío.

Cada tipo de bacteria requiere fagos específicos, lo que implica la necesidad

de mantener una biblioteca de fagos para diferentes cepas bacterianas.

 La Fagoterapia

40

Además, el almacenamiento y la estabilidad de los fagos también pueden ser

un desafío logístico.

3.2.3 Estrecho espectro de actividad

El fago solo puede infectar y destruir un número limitado de cepas

bacterianas específicas. Por ejemplo, un fago puede ser efectivo contra una

única especie de bacteria o solo algunas cepas de esa especie. Esta limitación

puede deberse a las diferencias en los receptores de superficie de las bacterias

que el fago necesita para unirse e infectar.

Por otro lado, cuando el espectro de actividad de un fago es amplio,

significa que puede infectar y eliminar una variedad más amplia de cepas

bacterianas. Algunos fagos tienen la capacidad de infectar múltiples especies

de bacterias o incluso diferentes géneros bacterianos.

La especificidad del espectro de actividad de los fagos es una

consideración importante en la terapia de fagos, ya que determina qué tipos de

infecciones bacterianas pueden ser tratadas con éxito por un fago en particular.

Es importante seleccionar el fago adecuado con un espectro de actividad que

coincida con la bacteria objetivo para lograr resultados óptimos en la terapia

 La Fagoterapia

41

3.2.4 Aparición de resistencia bacteriana

De acuerdo a Cordiés, Machado y Hamilton(1998) “la resistencia bacteriana es el mecanismo

que utiliza la bacteria para reducir la acción de los agentes antimicrobianos”. ( pp.13-27 )

Según otros autores la resistencia bacteriana de acuerdo a su filosofía:

Los fagos ante las infecciones bacterianas, se enfrentan a una serie de mecanismos

antivirales ,que han desarrollado las bacterias mediante su evolución(...),con el fin de

prosperar en la mayoría de los ambientes.Cada uno de los pasos del ciclo de vida de los

bacteriófagos puede ser blanco de un mecanismo anti fágico. (Castaño Osorio, 2019, 36-51)

Al igual que sucede con los antibióticos, las bacterias también han desarrollado

mecanismos de resistencia contra los fagos aunque la tasa de desarrollo hacia estos es menor

y es evitable mediante el uso de varios fagos o con la selección de un fango activo diferente .

Dichas resistencias se producen como resultado de la mutación y de la selección o adquisición

de fagos templados, siendo transmitidas bien verticalmente, de la célula madre a la hija, o

bien, horizontalmente a través de plásmidos. (Castillo Trueba, 2020, p.11)

“Las bacterias son capaces de resistir los ataques de fagos a través de múltiples

mecanismos, entre ellos se encuentran las mutaciones espontáneas, los sistemas de

modificación de restricción e inmunidad adaptativa a través del sistema CRISPR-Cas”. (Ruiz

Román, 2021, p.16)

 La Fagoterapia

42

“Las bacterias presentan varios mecanismos para contrarrestar las infecciones por

fagos, como la alteración o enmascaramiento del receptor de fagos, sistemas de restricción

modificación y sistema CRISPR-Cas”. (López Martín, 2020, p.9)

Los mecanismos para la resistencia bacteriana,de acuerdo a los mismos autores son

los siguientes:

En primer lugar, las mutaciones pueden formarse de manera espontánea o mediante la

transferencia horizontal entre las células de distinta o misma especie. Los genes de resistencia

a antibióticos (ARG) en los cromosomas bacterianos o en los plásmidos pueden movilizarse

por los fagos durante su ciclo de infección, este mecanismo es la transducción y consiste en

transferir el material genético entre organismos. Existen dos tipos de transducción:

• Generalizada: Los fagos transfieren cualquier parte del cromosoma bacteriano.

Durante la lisis inducida por fagos, el cromosoma bacteriano se fragmenta, una pieza se

encapsula y forma una partícula traductora. Estos fagos no contienen los genes, solo la

cápside tiene origen viral. A pesar de ello, la partícula transductora inyectó los genes

bacterianos en la célula receptora y mediante recombinación se puede incorporar en la célula

del huésped. Para ellos los receptores de la célula deben de ser reconocidos por el fago y parte

de la célula debe ser homologada para que se lleve a cabo la recombinación.

• Especializada: Se transfieren únicamente algunas partes. Esta transducción se lleva

a cabo mediante la inserción de los genomas del fago en una región concreta del cromosoma

del huésped. Este proceso de transferencia horizontal, podría ser la responsable de aportar

determinantes de patogenicidad y factores de virulencia, determinando la formación o

aparición de nuevas bacterias patógenas o mucho más resistentes. Para ello habría que elegir

fagos sin capacidad de transmisión genética o modificarlos previamente para eliminar este

proceso natural. La transmisión de ARG por fagos está demostrado en bacterias como son la

Salmonella, Clostridium, Streptococcus, Staphylococcus y Bacillus. En un estudio se mostró

 La Fagoterapia

43

que un producto humano liberado por células faríngeas desencadena la inducción y la

transducción generalizada de fagos endógenos de S.pyrogenes. Esta transducción in vivo de

los genes bacterianos incluyó uno que codifica la bomba de flujo y por lo tanto confería

resistencia a los antibióticos macrólidos. Este hallazgo es importante dado que es un patógeno

humano estricto y los fagos pueden propagar los genes de resistencia. En cuanto a las

mutaciones espontáneas son los principales mecanismos de resistencia a los fagos, además,

impulsan la coevolución fago-bacteriana. Las modificaciones espontáneas confieren

resistencia a los fagos ya que modifican la estructura de los componentes de la superficie

bacteriana, la cual actúa como receptora del fago y determina su especificidad. Aun así, las

bacterias resistentes a los fagos pueden volverse menos virulentas en caso de mutaciones en

factores de virulencia de superficie como en los lipopolisacáridos (LPS) . Los polisacáridos,

son polímeros extracelulares producidos por la bacteria que abundan como receptores

asociados a la pared celular del huésped, estos proporcionan beneficios estructurales y

funcionales a la célula bacteriana. Así pues, tanto los polisacáridos, como las proteínas

integrales, los factores de virulencia, los antígenos y los transportadores de nutrientes son una

de las principales líneas de defensa de las bacterias contra la infección de los fagos. Es decir,

la superficie de la célula bacteriana está repleta de moléculas receptoras para la posible

infección y adsorción de los fagos, ya que estos no son móviles y dependen de interacciones,

de su rango y especialidad con las células del huésped. Entre otros de los sistemas de defensa

bacterianos frente a la infección por fagos, se encuentran las proteínas CRISPR-Cas y los

sistemas de modificación de restricción que protege a las bacterias del ADN invasivo extraño.

Existen también sistemas de infección por aborto para facilitar la destrucción de las células

bacterianas infectadas para así reducir la carga de los fagos dentro de la población.

Estos mecanismos de resistencia suelen ser efectivos, pero no del todo infalibles y

pueden combatirse mediante la dosis infecciosa del fago y las mutaciones en el rango del

hospedador que permiten a los fagos alterar la inmunidad bacteriana una vez sus genomas
 La Fagoterapia

44

están dentro de las células. Con ello se permite a los fagos superar la inmunidad bacteriana

una vez dentro de las células. Los mecanismos que bloquean la adsorción inicial de fagos a la

célula y prohíben la infección se seleccionan durante la evolución de la resistencia bacteriana,

a pesar de los defectos de aptitud que dan lugar a desventajas competitivas bacterianas. Otro

problema en cuanto a combatir a las bacterias resistentes es la formación de biofilms, ya que

su resistencia es extrema frente a los antimicrobianos. Esto es debido a que al estar protegidas

de las defensas del huésped acaban convirtiéndose en enfermedades crónicas. Los fagos son

capaces de penetrar estos biofilms lo que supone una ventaja a la hora de acabar con la

resistencia ocasionado por ellos. Además, se pueden suplementar con antibióticos

convencionales para mayor efectividad. En ausencia de terapia contra las bacterias se puede

llegar a una situación en la que las defensas del hospedador no son capaces de combatirlas y

desencadenar la muerte del paciente. En cambio, la combinación de la propia defensa del

huésped y la terapia con fagos conduce al crecimiento bacteriano negativo y por lo tanto no se

alcanzarían densidades que podrían ser letales. (Ruiz Román, 2021, pp.9-11)

En el caso del sistema CRISPR-Cas, que actualmente es sinónimo de modificación

genética, fue primeramente propuesto como un “sistema adaptativo inmune” por Francisco

Mojica e independientemente por un grupo de la Université Paris-Sud en 2005. CRISPR es un

locus formado por una serie de secuencias cortas repetidas de la bacteria intercaladas por

espaciadores (fragmentos de la secuencia de ADN del fago viral). Cuando una bacteria es

infectada por un fago al que no se había enfrentado anteriormente, se añaden nuevos

espaciadores procedentes de fragmentos del ADN viral al final de uno de los lados del

CRISPR, haciendo de CRISPR como una memoria cronológica de los fagos a los que la

bacteria y sus antecesoras se han enfrentado. En respuesta a la invasión de los fagos, estas

secuencias espaciadoras de CRISPR son transcritas y en colaboración con las proteínas

nucleasas Cas, señalan y destruyen las secuencias del fago que son homólogas a las

secuencias espaciadoras que ya poseen. (López Martín, 2020, pp.9-10)

 La Fagoterapia

45

En el caso de otra autora, se puede producir la alteración o pérdida del receptor

siendo este el mecanismo más común de resistencia contra fagos. La pérdida de un receptor

puede deberse a cambios en las proteínas de membrana lo que produce una alteración en la

composición de la superficie celular. Como consecuencia de esta pérdida o alteración, el fago

no reconocerá al huésped lo que evitará la adsorción y la producción de nuevos fagos.

Además, algunas bacterias son capaces de secretar ciertas moléculas, entre ellas

glicoconjugados, alginatos o sustancias poliméricas extracelulares (EPS) como los

exopolisacáridos que producen el enmascaramiento del receptor evitando así la adsorción del

fago. Este problema se puede solucionar mediante la elección de otro receptor o con la

secreción de enzimas que degraden las sustancias . En segundo lugar, la bacteria también

puede desarrollar sistemas para la eliminación del ADN viral como el sistema de Repeticiones

Palindrómicas Cortas Agrupadas y Regularmente Interespaciales (CRISPR) o el sistema de

exclusión de superinfección (Sie). Este último está formado por proteínas asociadas a la

membrana, las cuales interaccionan con las proteínas implicadas en la introducción del ADN

impidiendo su inyección, de esta manera, disminuye la virulencia y la propagación del virus .

En último lugar, actúa el sistema de infección abortiva (Abi) que tiene como objetivo la

destrucción de la célula infectada para evitar la transmisión al resto de células. Es el

responsable del bloqueo de la replicación, transcripción, traducción, ensamblaje y liberación

de nuevos viriones . De acuerdo con lo explicado con anterioridad, los fagos líticos ejercen

una presión selectiva en las bacterias lo que provoca que el huésped desarrolle mecanismos de

resistencia. (Castillo Trueba, 2020, p.11)

También,existen otros mecanismos de resistencia bacteriana a los

bacteriófagos,como: la resistencia o inhibición de la adsorción, que resulta en una reducción

de la interacción entre el fago y la bacteria, que son descritos como “restricción” donde la

bacteria sobrevive y el fago muere; y las infecciones abortivas (como el sistema REX

descrito en
 La Fagoterapia

46

E. coli), donde tanto el fago como las bacterias mueren. Dentro de los mecanismos de

resistencia a la adsorción se incluye: pérdida de receptores moleculares del fago en el

hospedero, así como la generación de barreras físicas que ocultan la molécula receptora

(ejemplo: cápsula).

Diferentes estrategias usadas por la bacteria para bloquear la absorción del fago:

a) Escape de la infección por fagos en la etapa de adsorción. La adsorción del fago a

la superficie celular bacteriana se produce a través del reconocimiento de un receptor de fago

en

la superficie. Las bacterias pueden hacerse resistentes a los fagos mediante la

modificación de estos receptores de la superficie celular(paso 1); Los fagos pueden adaptarse

a reconocer estos nuevos receptores (paso 2). Las bacterias también pueden producir proteínas

que enmascaran el receptor del fago (paso 3).Staphylococcus aureus produce la proteína A, lo

que reduce la adsorción de fagos (paso 4).

b) La adsorción de fagos también puede ser bloqueado por la producción de

exopolisacáridos (EPS), pero los fagos superan la capa de EPS mediante la producción de una

liasa del polisacárido o una hidrolasa de polisacárido para escindir EPS.

c) Los fagos también han evolucionado para reconocer específicamente polisacáridos

tales como el antígeno O y el antígeno K.

Los mecanismos de restricción incluyen: bloqueo de la captación del genoma del

fago , superinfección inmune, modificaciones de la restricción y CRISPR (clustered

regularly interspaced short palindromic repeat), todoslos cuales funcionan después de la

adsorción del fago,pero antes de terminar la toma por parte del fago del metabolismo de la

célula hospedera; sin embargo, los fagos también tienen mecanismos para evadir estos

sistemas de protección bacteriana.

 La Fagoterapia

47

Como estrategia de control de la resistencia, está la facilidad de alternar fagos

o usar un cóctel de fagos para eludir la aparición de resistencias de la bacteria hospedera

frente a un determinado fago. Esta condición implica disponer de una variedad de fagos

que puedan ser usados para una determinada bacteria. Se trata de una circunstancia

factible de superar, que da cuenta de la gran abundancia de fagos en el medio, aunque

la misma requiere de tiempo y recursos económicos y tecnológicos para la

identificación,aislamiento, selección y caracterización del fago, así mismo para disponer

de este como un producto final para uso terapéutico(Castaño Osorio, 2019, 36-51).

También,existe una defensa por parte de fagos que son los cócteles de fagos capaces de

infectar al mismo huésped por adsorción mediante diferentes receptores debe prevenir o por lo menos

retrasar la aparición de bacterias mutantes resistentes. Esta adición de diferentes fagos específicos

para el mismo tipo de bacteria no solo disminuye la probabilidad de resistencia genética, también

incrementa la posibilidad de que ciertos mutantes tengan defectos en otras aptitudes, ya que se

producen compensaciones a costa del crecimiento bacteriano y la pérdida de genes, como pueden ser

genes de resistencia antibiótica. Esto convierte la resistencia de los fagos clínicamente relevantes en

algo difícil de predecir, ya que las bacterias fago-resistentes que surgen bajo condiciones de

laboratorio puede que nunca aparezcan en condiciones fisiológicas, donde el acúmulo de estos

defectos en genes accesorios puedan causar destrucción inmunológica, resensibilización antibiótica o

error a la hora de prosperar.

La resistencia siempre será un desafío para cualquier agente antibacteriano.Pero, los fagos son

entidades replicativas sujetas a la evolución y están mejor equipados para tratar con esto.Debido a que

millones de años de coevolución han dotado a los fagos con una serie de defensas antibacterianas tales

como, metilación genómica para evitar el reconocimiento por enzimas de restricción (endonucleasas

bacterianas Cas), despolimerización de la cápsula bacteriana para favorecer el acceso a su receptor y

moléculas antitoxina presentes en el código genético para revertir el sistema Abi (abortive-infection)

de las bacterias (López Martín, 2020, pp.9-10).

 La Fagoterapia

48

3.2.5.Falta de datos y ensayos clínicos

Una de las principales desventajas de la fagoterapia es la falta de información sobre

los ensayos clínicos de los fagos, la ausencia de regulación y aprobación por los organismos

oficiales como la Agencia Europea del Medicamento (EMA) o la Administración de

Alimentos y Medicamentos (FDA). (Loc-Carrillo & Abedon, 2011, p.11).

Los ensayos clinicos para la fagoterapia communmente son muy caros y toman

mucho tiempo, pero dado el contexto actual de resistencia bacteriana multirresistentes a los

antibióticos, es urgente que la comunidad científica reúna esfuerzos en la realización de los

ensayos correspondientes.Por ende, se deben implementar regulaciones para evaluar la

efectividad terapéutica de los fagos, las cuales deben ser diferentes a los estándares

establecidos para los antibióticos. (Pimienta Rodrígez, 2013, p.3-6).

En 2009,la FDA aprobó un ensayo clínico en fase I, sobre la evaluación de un cóctel

de fagos que contenía ocho monófagos, entre ellos, contra: S. aureus, P. aeruginosa y E. coli.

Para tratar pacientes con úlceras venosas infestadas en los pies. Los resultados de este ensayo

mostraron que la preparación de fagos fue segura. (Rhoads et al., 2009, pp.237-243).

También en ese mismo año, la compañía británica Biocontrol Limited reportó un ensayo

clínico I/II a doble ciegas controlado para la otitis crónica causada por P. aeruginosa. En contraste con

el tratamiento con antibióticos, que requiere la administración de grandes cantidades en el curso del

tratamiento, la terapia con fagos requirió solamente una dosis simple de 600 000 fagos . Un resultado

positivo fue reportado en el que se mostraron bajas concentraciones de P. aeruginosa en los oídos y

mejoría de las condiciones clínicas. (Wright et al., 2009, pp.349-357).

Hasta el momento, este ha sido el único ensayo de eficacia controlado para la terapia con

fagos. Otros experimentos han sugerido que el tiempo de vida media de los fagos en el torrente
 La Fagoterapia

49

sanguíneo no es suficientemente largo, pero se han encontrado mutantes del fago “lambda” que han

persistido por más tiempo. (Sulakvelidze, 2011,pp.14-18).

Todos estos ensayos, junto con otros estudios no tan bien reportados, indican que la terapia

con fagos es una alternativa prometedora para el tratamiento de infecciones causadas por bacterias

resistentes a los antibióticos. De acuerdo con el Servicio Nacional de Salud de Estados Unidos

(www.clinicaltrials.gov), se están preparando tres nuevos ensayos clínicos con fagos terapéuticos, en

los cuales dos de ellos se encuentran en la fase de reclutamiento de pacientes. En los últimos años, se

ha hecho énfasis en el cuidado que debe prestarse a la utilización de los fagos en otro tipo de

aplicaciones, por ejemplo, como antisépticos en la producción de alimentos; ya que el empleo

desmedido de los fagos puede acelerar la emergencia de cepas bacterianas resistentes a múltiples

fagos y ello afectaría la utilización de esta herramienta en la lucha contra las enfermedades

infecciosas. (Pimienta Rodrígez, 2013, 3-6).

Durante décadas, en países del este de Europa se ha estudiado esta terapia, sin embargo, para

la obtención de sus datos clínicos se han encontrado con diversos impedimentos referentes a los

procedimientos de realización (p. ej.: ensayos no aleatorizados ni controlados con placebo), al idioma

y al contexto político.Actualmente, la FDA sólo ha autorizado el uso de fagos para suplementos

dietéticos, profilaxis ambiental y descontaminación de alimentos. En cuanto al uso en humanos, esta

terapia se encuentra en ensayos clínicos de fase I y fase II para definir su eficacia y seguridad.

(Castillo Trueba, 2020, pp.11-12).

Por lo tanto, es difícil su aprobación , validación y su aplicación clínica a causa de la

ausencia de protocolos validados para la vía de administración, dosis, frecuencia y duración del

tratamiento. (Romero Calle et al., 2019).

 La Fagoterapia

50

3.2.6 Respuesta inmune

El sistema inmunitario desempeña un papel fundamental en los seres vivos

,pero también en la eliminación de fagos, lo que puede perjudicar el éxito de la

terapia igualmente en la erradicación de las colonias bacterianas. (Gordillo

Altamirano & Barr, 2019, p.32)

De igual manera otros autores tiene su punto de vista sobre esta

desventajas,las cuales son:

Los bacteriofagos, como otros virus, pueden ser reconocidos por el

sistema inmune como elementos invasores y ser rápidamente eliminados del

sistema circulatorio por el sistema retículo endotelial o la inmunidad innata

antes de que lleguen a los tejidos infectados, por ende disminuyendo su

eficacia, especialmente en administraciones repetidas y prolongadas .

Estudios en animales han demostrado una reducción significativa de la carga

de fagos sanguíneos tras su administración intravenosa; la fagocitosis

hemática y hepática serían los responsables de esta rápida

disminución.Algunos estudios demostraron que la inducción por parte del

huésped de anticuerpos neutralizantes anti-fagos es uno de los principales

factores responsables de la eficacia limitada de la fagoterapia. El desarrollo

de este tipo de anticuerpos no es un problema significativo en la fase inicial

del tratamiento de las infecciones agudas, ya que la cinética fágica es mucho

más rápida que la producción de estos anticuerpos. Sin embargo su presencia

puede ser un obstáculo si se precisan administraciones posteriores o

tratamientos crónicos. (Reina & Reina, 2018, pp.101-104).

 La Fagoterapia

51

Ante el hecho de que la estructura externa del fago se encuentra

formada por una cápside proteica resulta bastante probable que el sistema

inmune del paciente reaccione ante su presencia en el organismo.Por ende,

previamente a su administración, las preparaciones de fagos deben ser

purificadas para que resulten exentas de cualquier sustancia tóxica o que

pueda generar alergia en el organismo. (Castillo Trueba, 2020, pp.11-12)

También, el factor más estudiado de la respuesta inmune en

mamíferos son los anticuerpos específicos contra fagos, los cuales en su

mayoría reducen la concentración de fagos activos en sangre y suero

originando así un efecto negativo sobre la terapia. Sin embargo, en algunas

situaciones esta formación de anticuerpos no supuso una alteración en la

capacidad antibacteriana del fago ya que diversos estudios comprobaron, tras

una administración oral e intravenosa a roedores, que la aparición de los

anticuerpos neutralizadores se producía fuera del cuadro temporal del

tratamiento efectivo, además de necesitar elevadas dosis por vía oral. Por lo

tanto, la producción de anticuerpos va a depender de la dosis administrada de

fago y del tiempo que el sistema inmune necesita para producir una respuesta.

(Dąbrowska, 2019, pp.2000-2025).

Según Nilson (2014)otros estudios avalan que:

“Depende del tipo de fago ,la dosis suministrada y la vía de administración

debido a que no se evidenciaron los efectos adversos por aplicación tópica pero sí por

vía intravenosa,para activar el sistema inmune”. ( pp.192-198).

Actualmente, se encuentra en investigación la posibilidad de diseñar

fagos menos inmunogénicos gracias a la ingeniería genética. Aunque, no

 La Fagoterapia

52

existen datos suficientes y gran relevancia clínica sobre la inmunogenicidad

de los fagos, por ende se deben seguir estudiando (Romero Calle et al., 2019)

Conclusión

En el transcurso del desarrollo de esta monografía , hemos investigado acerca de los

fundamentos científicos de la terapia de bacteriofagos, desde su historia hasta sus desventajas. Sin

embargo, al ser una terapia en un estado de investigación naciente, nos encontramos con la difícil

tarea de la búsqueda de fuentes e información para nuestra investigación monográfica. Por lo tanto,se

concluye que la terapia de fagos se ha vuelto una prometedora alternativa para las infecciones de

bacterias multidrogo resistentes a los antibióticos.

Se ha demostrado que la fagoterapia es un tratamiento seguro, con una baja incidencia de

efectos adversos en los humanos, esto en cuanto a sus rutas de suministro y funcionamiento de los

fagos. Los fagos tienen la capacidad de replicarse únicamente en el interior de una célula huésped, lo

que hace posible la lisis de las bacterias patógenas. Uno de productos principales de los fagos son las

endolisinas que son indispensables para llevar a cabo la lisis celular, ya que estas son enzimas fagicas

que van a propiciar dicho suceso. Los fagos pueden administrarse de distintas formas, sin embargo, el

método más usado son los cócteles de fagos, por su mayor efectividad y eficacia en la terapia. La

mejor vía de administración de los fagos, es la vía oral por lo que se desarrollaron matrices

especializadas que pudieran soportar el pH ácido del recorrido de los fagos hasta los intestinos. La

liofilización es el mejor método para la conservación de los fagos que se han desarrollado hasta el

momento, sin afectar su composición y funcionamiento.

 La Fagoterapia

53

La terapia de bacteriofagos a pesar de ser una buena alternativa ante las infecciones

bacterianas,como cualquier otra solución también tiene desventajas , las principales son:la aparición

de resistencia bacteriana, debido a su mecanismo de protección de defensa evolucionado gracias a los

antibióticos por ende puede convertirse en un gran problema para esta terapia ;falta de datos y ensayos

clínicos,es un desafío por parte de las autoridades que no dan el permiso necesario para seguir

investigando debido a que en la actualidad se sigue teniendo el miedo de usar virus para un

tratamiento en seres vivos,por último la respuesta inmune,debido a que el sistema inmune reacciona

ante cualquier ente extraño, pero en casos especiales en el caso de la fagoterapia.Por ende se debe

evaluar con más énfasis estos desafíos para poder tener una solución factible y evite futuros

problemas en la terapia de fagos.

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