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PRÁCTICA 1. IDENTIFICACIÓN DE LAS CÉLULAS DEL SISTEMA

INMUNE DE DIVERSAS ESPECIES.

Objetivo

El estudiante identificará las células del sistema inmune en un frotis sanguíneo

siguiendo adecuadamente el procedimiento para la extensión y confección de este,
observará e identificará la morfología estructural de la serie leucocitaria y
conocerá su importancia en el diagnóstico de enfermedades en Medicina
Veterinaria.

Fundamento

Las tinciones hematológicas son un conjunto de procesos que conducen a la

coloración de las estructuras que componen las células sanguíneas. Esto tiene por
objeto el aumentar el contraste entre esas estructuras y el medio que las rodea, y
permite por tanto que las células sean visualizadas microscópicamente con mayor
facilidad. Una de las tinciones mayormente utilizadas en el laboratorio es la tinción
de Wright, esta es conocida como policromática debido a que produce varios
colores. Es una solución de alcohol metílico de un colorante ácido (eosina) y otro
básico (azul de metileno). El alcohol sirve como un fijador del frotis sanguíneo al
portaobjetos. El amortiguador, que consiste en una solución tamponada, mantiene
el pH del colorante y favorece la mejor absorción por los diferentes componentes
celulares (Rodak 2004). Las células que podemos visualizar son las siguientes
(Radin 1998; Rebar 2003):

• Eritrocitos. La morfología de los glóbulos rojos es única para cada especie. Los
glóbulos rojos de los perros tienen un diámetro que mide de 6.5 μ a 7.0 μ, poseen
prominentes áreas pálidas en el centro, son uniformemente circulares y presentan
poca variabilidad en tamaño y forma de célula a célula. Los glóbulos rojos normales
de los perros presentan una moderada tendencia a formar pilas o filas (formación
de rouleau). Los glóbulos rojos de los gatos son más pequeños que los de los perros,
tienen un diámetro que mide de 5.0 μ a 6.0 μ y el área pálida en el centro es
mínima.

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• Neutrófilos. En los mamíferos, los neutrófilos son los granulocitos circulantes

predominantes y se distinguen con facilidad en la película sanguínea periférica
debido a las siguientes características morfológicas: circular, de 12.0 μm a 15.0
μm de diámetro, abundante citoplasma granular rosa pálido, núcleos lobulados con
cromatina concentrada y tinción profunda. Dos clases de gránulos, los gránulos
específicos y los lisosomas, completan su citoplasma. En las aves, estás células se
denominan heterófilos, contienen gránulos eosinófilos, ovalados o en forma de
huso que tienden a cubrir la mayor parte del núcleo del heterófilo. El núcleo
contiene cromatina gruesa y suele tener dos o tres lóbulos.

• Eosinófilos. Se lo denomina eosinófilo debido a sus distintivos gránulos

citoplasmáticos color rojo-anaranjado (eosinofílicos), que son circulares y de
variados tamaños en los perros (Figura 3) y tienen forma de barra en los gatos.

• Basófilos. Los basófilos se observan sólo ocasionalmente en la periferia de los

frotis sanguíneos. Son levemente más grandes que los neutrófilos, tienen
citoplasma de color lavanda pálido y núcleos verdaderamente segmentados. Los
basófilos de perros y gatos con frecuencia contienen sólo unos pocos gránulos
citoplasmáticos distintivos de color azul profundo.

• Monocitos: La única célula del sistema monocito/macrófago que normalmente

se observa en la sangre periférica es el monocito. El núcleo tiene un formato
irregular con un patrón de cromatina delicada a finamente granular que sugiere el
predominio de eucromatina activa. El citoplasma es abundante, con frecuencia
vacuolado, y de un color que oscila entre gris y azul, lo que sugiere un alto
contenido de ARN citoplasmático pero poca cantidad de proteína.

• Linfocitos. Los linfocitos circulantes normales poseen las siguientes

características morfológicas: forma circular, con un diámetro que mide de 9.0 μ a
12.0 μ. Núcleos grandes, circulares, excéntricos con patrones de cromatina
condensada y densa intensidad de tinción. Escaso citoplasma de color azul pálido,
usualmente observable sólo de un lado del núcleo. Los linfocitos B pueden
presentarse como células plasmáticas completamente diferenciadas.

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Materiales y reactivos
1. Muestra de sangre venosa en tubo con anticoagulante EDTA
2. Guantes desechables
3. Bata
4. Cubrebocas
5. Charola
6. Papel absorbente
7. Portaobjetos limpios
8. Microscopio óptico
9. Colorante de Wright
10. Solución Buffer pH 6.4
11. Aceite de inmersión

Metodología

1. Tomar una muestra de sangre y depositarla en un tubo con

anticoagulante (EDTA o heparina).
2. Transportar adecuadamente la muestra al laboratorio en un lapso no
mayor de 30 minutos.
3. En el laboratorio, mezclar nuevamente el tubo y tomar 5 µL de sangre y
colocar a ¾ partes del extremo de un portaobjetos.
4. Con otro portaobjeto limpio y seco, deslizar en un ángulo de 45° la gota
de sangre con un movimiento inicialmente hacia atrás, cubriendo la gota
y rápidamente deslizarlo contrariamente a lo largo del portaobjetos
(figura 1).

Figura 1. Extendido de sangre en un portaobjetos.

5. Dejar secar el portaobjetos al aire.

6. Colocar el portaobjetos sobre los soportes en posición horizontal y
adicionar colorante de Wright (previamente filtrado con filtro de
jeringa), lo suficiente para cubrir todo el portaobjetos.
7. Dejar reposar de 1 a 3 minutos.

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8. Sin enjuagar, agregar solución buffer pH 6.4, evitando que se derrame
fuera del portaobjetos (figura 2).

Figura 2. Monta de portaobjetos y adición de colorante y buffer

9. Soplar para mezclar las dos soluciones.

10. Dejar reposar de 7 a 10 minutos.
11. Lavar el frotis con agua corriente para eliminar el exceso de colorante
y amortiguador.
12. Limpiar la laminilla por la parte inferior con papel.
13. Dejar escurrir y secar al aire.
14. Una vez seco, se agrega una gota de aceite de inmersión, se coloca un
cubreobjetos y se visualiza al microscopio con el objetivo 100X.
15. Identifica las células del sistema inmune y repórtalas.

Bibliografía

- Radin J y Wellman M.L. Interpretación de la Citología Canina y Felina. Clinical

Handbook Series. Nestlé Purina Pet Care Company. 1998.
- Rebar,A.H.: Interpreting the Feline Hemogram. Handbook of Feline Medicine.
Pergamon Press, Oxford, U.K., 1993.
- Rodak B. Hematología: fundamentos y aplicaciones clínicas. 2 ed. Rondinone S,
trad. Buenos Aires: Médica Panamericana, 2004.
- UNAM. Diplomado en Hematología Veterinaria. 2017.

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