Cinética Enzimática

Raúl Pérez Gálvez

Departamento de Ingeniería Química

1
1 Clasificación de la cinética enzimática

• Homogénea. Sustrato (S), enzima (E) y producto (P) están en disolución.

• Heterogénea. Cuando :

1. Enzima y productos disueltos pero el sustrato poco soluble (por

ejemplo gases con baja solubilidad en agua, sólidos, etc).
2. Sustrato y producto son solubles pero la enzima está
inmovilizada (no se encuentra disuelta).

Sustrato

Productos

Enzima

2
 2 Método de las velocidades iniciales

[S0] [p]

r0
r0

t t
pendiente
conversió 𝑆0 − 𝑆 𝑝 − 𝑝0 𝑑𝑆 𝑑𝑝
n 𝑥= = 𝑟0 = − =
𝑆0 𝑆0 𝑑𝑡 𝑡=0
𝑑𝑡 t=0
𝑚𝑜𝑙 𝑑𝑒 𝑆 ó 𝑃
𝑟0 ≡
Δ𝑆 Δ𝑝 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 · 𝑡𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜
𝑥 ≤ 0,10 → 𝑟0 ≈ − =
Δ𝑡 Δ𝑡

3
 2 Método de las velocidades iniciales

S01
r01
S02
r02

S03

r03

t S03 S02 S01

A mayor concentración inicial del sustrato mayor velocidad inicial

 2 Método de las velocidades iniciales

Cinética Michaeliana Cinéticas No Michaelianas

Hiperbólica Sigmoidal Parabólica

r0 r0 r0

Punto de inflexión

S0 S0 S0
 3.1 Cinética Michaelis-Menten para reacciones irreversibles S→P

𝐸
𝑆 → 𝑃

𝑘1 𝑘2
𝐸+𝑆 𝐸𝑆 𝐸+𝑃 r0 r0
𝑘−1 𝑜𝑟𝑑𝑒𝑛 0 → 𝑟0 = 𝑟𝑚á𝑥 = 𝑐𝑡𝑒

Etapa rápida de equilibrio Etapa lenta controlante

𝑒𝑇0 = 𝑐𝑡𝑒

𝑜𝑟𝑑𝑒𝑛 1 → 𝑟0 ∝ 𝑆0
direct. prop. S0

r0 r0

𝑆0 = 𝑐𝑡𝑒

𝑒S𝑇00
 3.1 Cinética Michaelis-Menten para reacciones irreversibles S→P

𝐸
𝑆 → 𝑃

𝑘1 𝑘2
𝐸+𝑆 𝐸𝑆 𝐸+𝑃 [ES] 𝐸𝑆 = 𝑐𝑡𝑒
𝑘−1

Etapa rápida de equilibrio Etapa lenta controlante

(a) Hipótesis de estado estacionario para los intermedios

𝑑 𝐸𝑆
= 𝑘1 · 𝑒 · 𝑆 − 𝑘−1 · 𝐸𝑆 − 𝑘2 · 𝐸𝑆 = 0 t
𝑑𝑡
𝑘1 𝑘2
𝑑 𝐸𝑆 E S ES
= 𝑘1 · 𝑒 · 𝑆 − (𝑘−1 +𝑘2 ) 𝐸𝑆 = 0 𝑘−1
𝑑𝑡

𝑘1 · 𝑒 · 𝑆 𝑒 · 𝑆 Constante de Michaelis
𝐸𝑆 = =
𝑘−1 + 𝑘2 𝐾𝑀 σ ← 𝐸𝑆 → 𝑘−1 + 𝑘2
𝐾𝑀 = =
σ → 𝐸𝑆 ← 𝑘1

e = concentración de enzima libre 𝐾𝑀 ↓ ↑ 𝑒𝑠𝑡𝑎𝑏𝑖𝑙𝑖𝑑𝑎𝑑 𝑑𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑙𝑒𝑗𝑜 𝐸𝑆

 3.1 Cinética Michaelis-Menten para reacciones irreversibles S→P

𝐸
𝑆 → 𝑃
𝑘1 𝑘2
𝐸+𝑆 𝐸𝑆 𝐸+𝑃
𝑘−1

𝑘2
(b) Velocidad de reacción ES P
𝑑𝑝
𝑟= = 𝑘2 · [𝐸𝑆]
𝑑𝑡

(c) Balance de materia a la enzima

enzima total = enzima libre + enzima ligada

𝑒·𝑆 𝑆 𝑒𝑇
𝑒𝑇 = 𝑒 + [𝐸𝑆] → 𝑒𝑇 = 𝑒 + =𝑒 1+ → 𝑒=
𝐾𝑀 𝐾𝑀 𝑆 Ecuación de Michaelis-Menten
1+
𝐾𝑀
𝑟𝑚 · 𝑆
𝑟=
𝐾𝑀 + 𝑆
𝑒·𝑆 𝑒𝑇 𝑆 𝑘2 · 𝑒 𝑇 · 𝑆 𝑟𝑚 · 𝑆 r m= r max
𝑟 = 𝑘2 · 𝐸𝑆 = 𝑘2 · = 𝑘2 · · = =
𝐾𝑀 𝑆 𝐾𝑀 𝐾𝑀 + 𝑆 𝐾𝑀 + 𝑆
1+
𝐾𝑀
 3.1 Cinética Michaelis-Menten para reacciones irreversibles S→P

𝐸
𝑆 → 𝑃

𝑘1 𝑘2
𝐸+𝑆 𝐸𝑆 𝐸+𝑃 r0 r0
𝑘−1 𝑜𝑟𝑑𝑒𝑛 0 → 𝑟0 = 𝑟𝑚
SITUACIONES LÍMITE
𝑟𝑚 · 𝑆
𝑎 𝑆 ↓ ⇒ 𝑆 ≪ 𝐾𝑀 ⇒ 𝑟 ≈
𝑘2 · 𝑒 𝑇 · 𝑆 𝑟𝑚 · 𝑆 𝐾𝑀
𝑟= =
𝐾𝑀 + 𝑆 𝐾𝑀 + 𝑆 𝑏 𝑆 ↑ ⇒ 𝐾𝑀 ≪ 𝑆 ⇒ 𝑟 ≈ 𝑟𝑚

𝑒𝑇0 = 𝑐𝑡𝑒
𝑟𝑚
𝑜𝑟𝑑𝑒𝑛 1 → 𝑟0 ≈ ·𝑆
Ejemplo 1 𝐾𝑀
S0
Dado el mecanismo de reacción A+B+C → Productos con formación de
dos complejos intermedios (AB, ABC). Definir y calcular las constantes de 𝑟𝑚1
Michaelis-Menten para cada complejo. ¿Qué complejo presenta mayor r0 r0
estabilidad? [Nota: para KM considerar solo la reacción principal]
𝑘1 𝑘2 𝑟𝑚2
𝐴+𝐵 𝐴𝐵 𝐴+𝑃
𝑘−1 𝑟𝑚3
+
C
𝑘1 = 0.5; 𝑘−1 = 0.2
𝑒𝑇1 > 𝑒𝑇2 > 𝑒𝑇3
𝑘3 𝑘−3 𝑘2 = 0.5;
𝑘3 = 0.15; 𝑘−3 = 0.01 𝑟𝑚 = 𝑘2 · 𝑒𝑇
ABC

S0
3.1 Cinética Michaelis-Menten para reacciones irreversibles S→P

Ejemplo 1 STOPTIME = 40
init (A, B, C) = 0.5 M; init (P, AB, ABC) =0

𝑘1 𝑘2
𝐴+𝐵 𝐴𝐵 𝐴+𝑃
𝑘−1
+
C 𝑘1 = 0.5; 𝑘−1 = 0.2
𝑘3 𝑘−3 𝑘2 = 0.5;
𝑘3 = 0.15; 𝑘−3 = 0.01
ABC
 3.1 Cinética Michaelis-Menten para reacciones irreversibles S→P

𝑘1 𝑘2
𝐸+𝑆 𝐸𝑆 𝐸+𝑃
𝑘−1

𝑘2 · 𝑒 𝑇 · 𝑆 𝑟𝑚 · 𝑆 Determinar los parámetros cinéticos rm, KM, k2 ?

𝑟= =
𝐾𝑀 + 𝑆 𝐾𝑀 + 𝑆

(a) Gráficamente (b) Linealización Lineweaver-Burk

1
r0 r0 r0
𝑟r00 r0
𝑟𝑚

𝐾𝑀
𝑟𝑚 Punto de inflexión 𝑝𝑑𝑡𝑒 =
𝑟𝑚
2
1
𝑜. 𝑜 =
𝑟𝑚
1
𝐾𝑀 S0 S0 𝑆0 S0
S0
𝑟𝑚 𝑟𝑚 · 𝑆
𝑟= = ⇒ 𝐾𝑀 + 𝑆 = 2𝑆 ⇒ 𝑆 = 𝐾𝑀
2 𝐾𝑀 + 𝑆 𝑟𝑚 · 𝑆 1 1 𝐾𝑀 1
𝑟= ⇒ = + ·
𝐾𝑀 + 𝑆 𝑟 𝑟𝑚 𝑟𝑚 𝑆
 3.1 Cinética Michaelis-Menten para reacciones irreversibles S→P

𝑘1 𝑘2
𝐸+𝑆 𝐸𝑆 𝐸+𝑃
𝑘−1

𝑘2 · 𝑒 𝑇 · 𝑆 𝑟𝑚 · 𝑆 Determinar los parámetros cinéticos rm, KM, k2 ?

𝑟= =
𝐾𝑀 + 𝑆 𝐾𝑀 + 𝑆

(b) Linealización Eadie-Hofstee

𝑜. 𝑜 = 𝑟𝑚
r0 r0 r0

𝑟𝑚 · 𝑆
𝑟= ⇒ 𝑟 · 𝐾𝑀 + 𝑟 · 𝑆 = 𝑟𝑚 · 𝑆
𝐾𝑀 + 𝑆
Punto de inflexión 𝑟
𝑝𝑑𝑡𝑒 = −𝐾𝑀 𝑟 · 𝑆 = 𝑟𝑚 · 𝑆 − 𝐾𝑀 · 𝑟 ⇒ 𝑟 = 𝑟𝑚 − 𝐾𝑀 ·
𝑆
o.o pend

𝑟0
S0 𝑆0 S0 S0
 Ejemplo 2

Se quiere estudiar la cinética de una reacción de hidrólisis enzimática irreversible. Ajustar los
datos experimentales a la ecuación de Michaelis-Menten y determinar los parámetros cinéticos.

S0, mM 1.5 2 3 4 8 16
r0, mmol/(L·min) 0.21 0.24 0.28 0.33 0.40 0.45

𝑟𝑚 · 𝑆 1 1 𝐾𝑀 1
𝑟= ⇒ = + ·
𝐾𝑀 + 𝑆 𝑟 𝑟𝑚 𝑟𝑚 𝑆

1 1 1 𝐾𝑀
𝑅𝑒𝑔𝑟𝑒𝑠𝑖ó𝑛 𝑙𝑖𝑛𝑒𝑎𝑙: 𝑌 = 𝐴 + 𝐵 · 𝑋 ⇒ 𝑌 = ; 𝑋 = ⇒ 𝑜. 𝑜. = ; 𝑝𝑑𝑡𝑒 =
𝑟 𝑋 𝑟𝑚 𝑟𝑚
1 1
= 1,9978 + 4,2663 · (𝑟 2 = 0,9928)
𝑟 𝑆
1 1 𝑚𝑀
𝑜. 𝑜. = 1,9978 = ⇒ 𝑟𝑚 = = 0,5005 0,5005 · 𝑆 𝑚𝑚𝑜𝑙
𝑟𝑚 𝑜. 𝑜. 𝑚𝑖𝑛 𝑟=
2,1355 + 𝑆 𝐿 · 𝑚𝑖𝑛
𝐾𝑀 𝑝𝑑𝑡𝑒.
𝑝𝑑𝑡𝑒. = 4,2663 = ⇒ 𝐾𝑀 = = 𝑝𝑑𝑡𝑒 · 𝑟𝑚 = 2,1355 𝑚𝑀
𝑟𝑚 𝑜. 𝑜.

KM → ud. de concentración S, rm → ud. de velocidad r

13
 Ejemplo 3

En una serie de experimentos sobre la hidrólisis enzimática de almidón se obtuvieron las

siguientes velocidades iniciales de reacción. Obtener los parámetros cinéticos asumiendo que se
trata de una reacción irreversible que sigue el mecanismo de Michaelis-Menten

s, g/L 0.30 0.50 0.86 1.29 2.16 4.31 6.47 10.48

r0, mg/(L·min) 0.140 0.180 0.260 0.305 0.345 0.400 0.435 0.445

Salta a la vista que las unidades de concentración de sustrato y velocidad no son consistentes. Optamos por
convertir la concentración S en mg/L.

s, mg/L 300 500 860 1290 2160 4310 6470 10480

r0, mg/(L·min) 0.140 0.180 0.260 0.305 0.345 0.400 0.435 0.445

𝑟𝑚 · 𝑆 1 1 𝐾𝑀 1 1 1
𝑟= ⇒ = + · ⇒ = 2,1271 + 1551,9 · (𝑟 2 = 0,9931)
𝐾𝑀 + 𝑆 𝑟 𝑟𝑚 𝑟𝑚 𝑆 𝑟 𝑆

1 1 𝑚𝑔
𝑜. 𝑜. = 2,1271 = ⇒ 𝑟𝑚 = = 0,4701
𝑟𝑚 𝑜. 𝑜. 𝐿 · 𝑚𝑖𝑛
0,4701 · 𝑆 𝑚𝑔
𝑟=
729,6 + 𝑆 𝐿 · 𝑚𝑖𝑛
𝐾𝑀 𝑝𝑑𝑡𝑒. 𝑚𝑔
𝑝𝑑𝑡𝑒. = 1551,9 = ⇒ 𝐾𝑀 = = 729,6
𝑟𝑚 𝑜. 𝑜. 𝐿
14
 Ejemplo 4
Se ha estudiado la hidrólisis de carbobenzoxiglicil-L-leucina (CGL) por la acción de la enzima
carboxipeptidasa pancreática a 25 ºC y pH=7.5, midiendo las velocidades iniciales de reacción a
diferentes concentraciones de sustrato y enzima. Ajustar los resultados de velocidad inicial a una
ecuación de Michaelis-Menten. Para cada serie calcular los valores de k2 y KM. ¿Corresponden
los datos a la misma enzima? ¿Qué valor medio tiene la constante k2?

𝑟𝑚 · 𝑆 1 1 𝐾𝑀 1
𝑟= ⇒ = + ·
𝐾𝑀 + 𝑆 𝑟 𝑟𝑚 𝑟𝑚 𝑆

1 1 mol
eT = 5E − 7 M ⇒ = 19822,8 + 460,7 · (r 2 = 0,9780) ⇒ rm = 5,04E − 5 ; K M = 0,0220 M
r S L·s

1 1 mol
eT = 1E − 6 M ⇒ = 9424,4 + 253,8 · (r 2 = 0,9962) ⇒ rm = 1,06E − 4 ; K M = 0,0269 M
r S L·s

1 1 mol
eT = 5E − 6 M ⇒ = 1895,5 + 49,8 · (r 2 = 0,9937) ⇒ rm = 5,28E − 4 ; K M = 0,0263 M
r S L·s
15
 Ejemplo 4

0,0220 + 0,0269 + 0,0263

𝐾𝑀 = = 0,0251 𝑀
3

Los tres valores de KM son muy parecidos, sin presentar tendencia. Ello implica que el sustrato presenta una
misma afinidad por la enzima. Las tres series se han realizado con la misma enzima.

𝑟𝑚
𝑟𝑚 = 𝑘2 · 𝑒𝑇 → 𝑘2 =
𝑒𝑇

eT = 5E − 7 M ⇒ 𝑘2 = 100,8 𝑠 −1
104,1 · 𝑒𝑇 · 𝑆 𝑚𝑜𝑙
eT = 1E − 6 M ⇒ 𝑘2 = 106 𝑠 −1 𝑘2 = 104,1 𝑠 −1 𝑟=
0,0251 + 𝑆 𝐿·𝑠
eT = 5E − 6 M ⇒ 𝑘2 = 105,6 𝑠 −1

16
 Ejemplo 4

1. Definir eje X : RENAME TIME = S

2. ECUACIÓN: r=(rm*S)/(KM+S)
3. Parameters > Curvefit
• Dataset : formato txt, csv

17
Ejemplo 4

El programa no lee la primera fila del

fichero .csv (la asume para títulos).

18
 3.2 Cinética Michaelis-Menten para reacciones reversibles S  P

𝐸
𝑆 ֞ 𝑃

𝑘1 𝑘2
𝐸+𝑆 𝐸𝑆 𝐸+𝑃
𝑘−1 𝑘−2

(a) Hipótesis de estado estacionario para los intermedios

𝑑 𝐸𝑆
= 𝑘1 · 𝑒 · 𝑆 + 𝑘−2 · 𝑒 · 𝑝 − 𝑘−1 + 𝑘2 · 𝐸𝑆 = 0
𝑑𝑡
𝑘1 · 𝑒 · 𝑆 + 𝑘−2 · 𝑒 · 𝑝
𝐸𝑆 =
𝑘−1 + 𝑘2
𝐾𝑀𝑑
𝑟𝑚𝑑 · 𝑆 − 𝑟𝑚𝑖 · ·𝑝
𝐾𝑀𝑖
𝑟=
(b) Velocidad de reacción 𝐾𝑀𝑑
𝐾𝑀𝑑 + 𝑆 + ·𝑝
𝐾𝑀𝑖
𝑑𝑝
𝑟= = 𝑘2 𝐸𝑆 − 𝑘−2 · 𝑒 · 𝑝
𝑑𝑡

(c) Balance de materia a la enzima

𝑒𝑇 = 𝑒 + [𝐸𝑆]
 3.2 Cinética Michaelis-Menten para reacciones reversibles S  P

𝐸
𝑆 ֞ 𝑃
𝑘−1 + 𝑘2
𝐾𝑀𝑑 =
𝑘1 𝑘2 𝑘1
Reacción directa S → P 𝐸+𝑆 𝐸𝑆 𝐸+𝑃 𝑟𝑚𝑑 = 𝑘2 · 𝑒 𝑇
𝑘−1
CONSTANTE QUE DA LUGAR AL PRODUCTO DESEADO
𝑘2
𝑘2
𝑘−1 + 𝑘2
Reacción inversa P → S 𝐾𝑀𝑖 =
𝐸+𝑆 𝐸𝑆 𝐸+𝑃 𝑘−2
𝑘−1 𝑘−2
𝑟𝑚𝑖 = 𝑘−1 · 𝑒𝑇

Constante y conversión de equilibrio

𝐾𝑀𝑑
𝑟𝑚𝑑 · 𝑆 − 𝑟𝑚𝑖 · ·𝑝
𝐾𝑀𝑖
r𝑒𝑞 = 0 ⇒ =0
𝐾
𝐾𝑀𝑑 + 𝑆 + 𝑀𝑑 · 𝑝 𝑆 = 𝑆0 · (1 − 𝑥)
𝐾𝑀𝑖 𝑒𝑞

𝐾𝑀𝑑 𝑝 = 𝑝0 + 𝑆0 · 𝑥
𝑟𝑚𝑑 · 𝑆𝑒𝑞 − 𝑟𝑚𝑖 · · 𝑝𝑒𝑞 = 0
𝐾𝑀𝑖
⇒

𝑝𝑒𝑞 𝑆0 · 𝑥𝑒𝑞
𝐾𝑒𝑞 = =
𝑆𝑒𝑞 𝑆0 1 − 𝑥𝑒𝑞
 Ejemplo 5

En el estudio experimental de la cinética de la reacción reversible Fumarato + Agua ↔ L-Malato,

correspondiente al ciclo de Krebs, a 25 ºC y pH=7.4, se midieron las velocidades iniciales de
reacción a concentración de enzima constante (fumarasa). En la primera serie de experimentos,
para estudiar la reacción directa, la concentración inicial de L-malato era nula y se variaba la
concentración inicial de fumarato, mientras que en la segunda para estudiar la reacción inversa la
concentración inicial de fumarato era nula y se variaba la concentración inicial de L-malato. Los
valores relativos de las velocidades de reacción vienen recogidas en las siguientes tablas:

Para estimar los parámetros de una cinética reversible se suelen plantear dos series de experimentos:

1. Concentración de producto = 0, para analizar la reacción directa S → P

2. Concentración de reactivo = 0, para analizar la reacción inversa P → S
 Ejemplo 5

Reacción directa:
LB
𝑟𝑚𝑑 · 𝑆
𝑃 =0 ⇒ 𝑟𝑑 = rmd, kmd
𝐾𝑀𝑑 + 𝑆
𝐾 SSE
𝑟𝑚𝑑 · 𝑆 − 𝑟𝑚𝑖 · 𝐾𝑀𝑑 · 𝑝
𝑀𝑖
𝑟=
𝐾
𝐾𝑀𝑑 + 𝑆 + 𝐾𝑀𝑑 · 𝑝 Reacción inversa:
𝑀𝑖 𝐾𝑀𝑑
𝑟𝑚𝑖 ·
·𝑝 𝑟𝑚𝑖 · 𝑝
𝐾𝑀𝑖
𝑆 =0 ⇒ 𝑟𝑖 = =
𝐾
𝐾𝑀𝑑 + 𝑀𝑑 · 𝑝 𝐾𝑀𝑖 + 𝑝
𝐾𝑀𝑖
dividir entre (kmd/kmi) SSE LB

1 1 𝐾𝑀𝑑 1
= + ·
𝑟𝑑 𝑟𝑚𝑑 𝑟𝑚𝑑 𝑆

1 1
= 0.0100 + 0.0138 · (𝑟 2 = 0.9999)
𝑟𝑑 𝑆

mmol mmol
𝑟𝑚𝑑 = 100 ; K Md = 1.3807
L · min L
 Ejemplo 5

1 1 𝐾𝑀𝑖 1
= + ·
𝑟𝑖 𝑟𝑚𝑖 𝑟𝑚𝑖 𝑝

1 1
= 0.0126 + 0.0587 · (𝑟 2 = 0.9999)
𝑟𝑖 𝑝
mmol mmol
𝑟𝑚𝑖 = 79.3651 ; K Mi = 4.6587
L · min L

1.3807
100 · 𝑆 − 79.3651 · ·𝑝 100 · 𝑆 − 23.5215 · 𝑝 𝑚𝑚𝑜𝑙
4.6587
𝑟= ⇒ 𝑟=
1.3807 1.3807 + 𝑆 + 0.2964 · 𝑝 𝐿 · 𝑚𝑖𝑛
1.3807 + 𝑆 + ·𝑝
4.6587

𝑝𝑒𝑞
𝑟𝑒𝑞 = 0 ⇒ 100 · 𝑆𝑒𝑞 − 23.5215 · 𝑝𝑒𝑞 = 0 ⇒ 𝐾𝑒𝑞 = = 4.2514 (𝑎𝑑. )
𝑆𝑒𝑞

𝑆0 · 𝑥𝑒𝑞
= 4.2514 ⇒ 𝑥𝑒𝑞 = 0.8096
𝑆0 · 1 − 𝑥𝑒𝑞
 Ejemplo 6

La isomerización enzimática de glucosa a fructosa tiene gran interés en la industria de los

alimentos. Los siguientes datos de velocidades iniciales están tomados en ausencia de fructosa
(1ª serie) o en ausencia de glucosa (2ª serie). Proponer un modelo cinético y obtener los valores
de conversión en el equilibrio y constante de equilibrio.

1ª serie 1 1
[Glucosa], mol/L r0 , mol/(L·min) = 1.2038 + 0.5950 · (𝑟 2 = 0.9996)
0.100 0.140
𝑟𝑑 𝑆
0.150 0.194
0.200 0.235 𝑚𝑜𝑙
𝑟𝑚𝑑 = 0.8307
0.250 0.282 𝐿 · 𝑚𝑖𝑛
0.400 0.373
0.500 0.415 𝑚𝑜𝑙
𝐾𝑀𝑑 = 0.4943
0.650 0.476 𝐿
 Ejemplo 6

1 1
= 1.2704 + 2.2421 · (𝑟 2 = 0.9998)
𝑟𝑖 𝑝

𝑚𝑜𝑙
𝑟𝑚𝑖 = 0.7872
𝐿 · 𝑚𝑖𝑛

𝑚𝑜𝑙
𝐾𝑀𝑖 = 1.7649
𝐿

0.8307 · 𝑆 − 0.2205 · 𝑝 𝑚𝑚𝑜𝑙

𝑟=
0.49437 + 𝑆 + 0.2801 · 𝑝 𝐿 · 𝑚𝑖𝑛

𝑝𝑒𝑞
𝑟𝑒𝑞 = 0 ⇒ 0.8307 · 𝑆𝑒𝑞 − 0.2205 · 𝑝𝑒𝑞 = 0 ⇒ 𝐾𝑒𝑞 = = 3.77 (𝑎𝑑. )
𝑆𝑒𝑞
𝑆0 · 𝑥𝑒𝑞
= 3.77 ⇒ 𝑥𝑒𝑞 = 0.79
𝑆0 · 1 − 𝑥𝑒𝑞
 4 Modulación de la acción enzimática. Inhibición

Inhibición: disminución de la actividad enzimática debido a la presencia de otros compuestos

(inhibidores).

Inhibición irreversible. El compuesto inhibidor es una toxina que se une a la enzima,

inactivándola irreversiblemente.

𝑘1 𝑘2
𝐸+𝑆 𝐸𝑆 𝐸+𝑃
𝑘−1
+
𝐼
𝑘3

𝐸𝐼 ∗(𝑖𝑛𝑎𝑐𝑡𝑖𝑣𝑜)

Inhibición reversible. La actividad enzimática se puede restablecer si se retira el inhibidor.

▪ Inhibición competitiva simple.

▪ Inhibición acompetitiva (anticompetitiva)
▪ Inhibicion no competitiva
• Simple
• Mixta
 4.1 Inhibición competitiva simple

Inhibición competitiva simple: el inhibidor es un compuesto de estructura química similar al

sustrato (compite con él). Es capaz de unirse a la enzima, formando un complejo inactivo (i.e.
que no conduce a la formación de producto P).

𝑘1 𝑘2
𝐸+𝑆 𝐸𝑆 𝐸+𝑃
𝑘−1
+
𝐼
𝑘3 𝑘−3

𝐸𝐼 ∗(𝑖𝑛𝑎𝑐𝑡𝑖𝑣𝑜)

+ S
S + P

+
I

I
 4.1 Inhibición competitiva simple

𝑘1 𝑘2
𝐸+𝑆 𝐸𝑆 𝐸+𝑃
𝑘−1
+
𝐼
𝑘3 𝑘−3

𝐸𝐼 ∗(𝑖𝑛𝑎𝑐𝑡𝑖𝑣𝑜)

Si [S] aumenta → se desplaza al inhibidor, recuperándose actividad enzimática.

 4.1 Inhibición competitiva simple

𝑘−1 + 𝑘2
𝐾𝑀 =
𝑘1

𝑟𝑚 = 𝑘2 · 𝑒𝑇

𝑘−3
𝐾𝐼 =
𝑘3

(a) Hipótesis de estado estacionario para los intermedios

𝑑 𝐸𝑆 𝑑[𝐸𝐼]
= 𝑘1 · 𝑒 · 𝑆 − 𝑘−1 · 𝐸𝑆 − 𝑘2 · 𝐸𝑆 = 0 = 𝑘3 · 𝑒 · 𝐼 − 𝑘−3 · 𝐸𝐼 = 0
𝑑𝑡 𝑑𝑡

𝑑 𝐸𝑆 𝑘3 · 𝑒 · 𝐼 𝑒 · 𝐼
= 𝑘1 · 𝑒 · 𝑆 − (𝑘−1 +𝑘2 ) 𝐸𝑆 = 0 𝐸𝐼 = =
𝑑𝑡 𝑘3 𝐾𝐼

𝑘1 · 𝑒 · 𝑆 𝑒 · 𝑆
𝐸𝑆 = =
𝑘−1 + 𝑘2 𝐾𝑀
 4.1 Inhibición competitiva simple

𝑘−1 + 𝑘2
𝐾𝑀 =
𝑘1

𝑟𝑚 = 𝑘2 · 𝑒𝑇

𝑘−3
𝐾𝐼 =
𝑘3

(b) Velocidad de reacción

𝑑𝑝
𝑟= = 𝑘2 · 𝐸𝑆
𝑑𝑡

(c) Balance de materia para la enzima

𝑒·𝑆 𝑒𝑇
𝑟 = 𝑘2 · 𝐸𝑆 = k 2 · = k2 · ·S
𝑒𝑇 = 𝑒 + 𝐸𝑆 + [𝐸𝐼] 𝐾𝑀 𝑆 𝐼
1+ + · 𝐾𝑀
𝐾𝑀 𝐾𝐼
𝑒·𝑆 𝑒·𝐼 𝑆 𝐼
𝑒𝑇 = 𝑒 + + =𝑒 1+ + 𝑘2 𝑒 𝑇 · 𝑆 𝑟𝑚 · 𝑆
𝐾𝑀 𝐾𝐼 𝐾𝑀 𝐾𝐼 𝑟= =
𝐼 𝐼
𝐾𝑀 + 𝑆 + 𝐾𝑀 ·
𝐾𝐼 𝐾𝑀 1 + 𝐾𝐼 + 𝑆
𝑒𝑇
𝑒=
𝑆 𝐼
1+ +
𝐾𝑀 𝐾𝐼
 4.1 Inhibición competitiva simple

𝑟𝑚 · 𝑆 1 1 𝐾𝑀 𝐼 1
𝑟= = + 1+ ·
𝐼 𝑟 𝑟𝑚 𝑟𝑚 𝐾𝐼 𝑆
𝐾𝑀 1+ +𝑆
𝐾𝐼
o.o. pdte.

1 𝐼2 𝑝𝑑𝑡𝑒
𝑟
𝐼1

𝐾𝑀
𝑝𝑑𝑡𝑒′ =
𝐼0 = 0 𝑟𝑚 · 𝐾𝐼

𝐾𝑀
1 𝑜. 𝑜. ′ =
𝑜. 𝑜. = 𝑟𝑚
𝑟𝑚
𝐼
1
𝑆
𝐼2 > 𝐼1 > 𝐼0 = 0
𝐾𝑀 𝐼 𝐾𝑀 𝐾𝑀
𝑝𝑑𝑡𝑒2 > 𝑝𝑑𝑡𝑒1 > 𝑝𝑑𝑡𝑒0 𝑝𝑑𝑡𝑒 = 1+ = + ·𝐼
𝑟𝑚 𝐾𝐼 𝑟𝑚 𝑟𝑚 · 𝐾𝐼
𝑜. 𝑜.2 = 𝑜. 𝑜.1 = 𝑜. 𝑜.0
o.o.’ pdte.’
1
𝑜. 𝑜. =
𝑟𝑚
 Ejemplo 7

En el estudio experimental de la cinética de la hidrólisis de hipurato de metilo catalizada por

quimitripsina a 25 ºC y pH=7.9 e inhibida por indol, se han obtenido los siguientes valores de velocidad
inicial de reacción en función de las concentraciones de sustrato e inhibidor. Determinar el tipo de
inhibición que presenta y proponer una ecuación cinética.

r0, mmol/(L·min)
[S], mM
[I]=0 [I]=0.55 mM [I]=1.10 mM [I]=2.20 mM
8 0.23 0.19 0.17 0.13
10 0.26 0.21 0.19 0.15
15 0.30 0.25 0.23 0.19
20 0.33 0.28 0.26 0.22
25 0.34 0.30 0.28 0.24

1 1 Inh. Competitiva simple

𝐼 =0⇒ = 2.2304 + 16.6291 · (𝑟 2 = 0.9951)
𝑟 𝑆 𝑟𝑚 · 𝑆
𝑟=
𝐼
1 1 𝐾𝑀 · 1 + 𝐾 + 𝑆
𝐼 = 0.55 𝑀 ⇒ = 2.4425 + 22.8402 · (𝑟 2 = 0.9983) 𝐼
𝑟 𝑆 1 1 𝐾𝑀 𝐼 1
= + · 1+ ·
1 1 𝑟 𝑟𝑚 𝑟𝑚 𝐾𝐼 𝑆
𝐼 = 1.10 𝑀 ⇒ = 2.4938 + 27.3580 · (𝑟 2 = 0.9991)
𝑟 𝑆
1 1 𝑜. 𝑜 = 2.4119
2 1 mmol
𝐼 = 2.20 𝑀 ⇒ = 2.4809 + 41.7379 · (𝑟 = 0.999)
𝑟 𝑆 ⇒ rm = = 0.4146
2.4119 L · min
 Ejemplo 7

Las pendientes son función de la concentración de inhibidor:

𝐾𝑀 𝐼 𝐾𝑀 𝐾𝑀
𝑝𝑑𝑡𝑒 = 1+ = + ·𝐼 ⇒ 𝑝𝑑𝑡𝑒 = 16.2376 + 11.3286 · 𝐼 (r 2 = 0.9929)
𝑟𝑚 𝐾𝐼 𝑟𝑚 𝑟𝑚 · 𝐾𝐼

𝐾𝑀
= 16.2376 ⇒ 𝐾𝑀 = 16.2376 · 0.4146 = 6.7323 mM
𝑟𝑚

𝑜. 𝑜. ′
KI = = 1.4333 mM
𝑝𝑑𝑡𝑒.′

0.4146 · 𝑆 mmol
𝑟=
𝐼 L · min
6.7323 · 1 + +𝑆
1.4333
 4.2 Inhibición acompetitiva (anticompetitiva) simple

Inhibición acompetitiva simple: la enzima deforma su estructura cuaternaria para unirse a una
molécula de sustrato (complejo ES). Se habilita un nuevo sitio activo al que se une el inhibidor I.
El complejo ternario EIS es inactivo, no conduce a la formación de producto.

𝑘1 𝑘2 KM
𝐸+𝑆 𝐸𝑆 𝐸+𝑃
𝑘−1
+
𝐼 KM=

𝑘4 𝑘−4

𝐸𝐼𝑆 ∗(𝑖𝑛𝑎𝑐𝑡𝑖𝑣𝑜)

+ S
S + P

I
+
I

I
 4.2 Inhibición acompetitiva simple

Si [S] aumenta → se alcanza un valor de rmáx, pero a un valor menor que sin inhibidor

𝑟
𝑟0 CONCENTACIÓN INHIBIDOR
𝐼2 > 𝐼1 > 𝐼0 = 0
𝑟1
𝑟2 < 𝑟1 < 𝑟0
𝑟2 VELOCIDAD

𝑆
 4.1 Inhibición acompetitiva simple

𝑘−1 + 𝑘2
𝐾𝑀 = Nota: por definición, para la constante
𝑘1 de Michaelis sólo se considera la vía
principal E+S  ES → E+P
𝑟𝑚 = 𝑘2 · 𝑒𝑇

𝑘−4
𝐾𝐼𝑆 =
𝑘4

(a) Hipótesis de estado estacionario para los intermedios

? ¿Qué implica que KM > KIS
o al revés?

𝑑 𝐸𝑆
= 𝑘1 · 𝑒 · 𝑆 + 𝑘−4 · 𝐸𝐼𝑆 − (𝑘−1 +𝑘2 + 𝑘4 · 𝐼) · 𝐸𝑆 = 0
𝑑𝑡
𝑑 𝐸𝐼𝑆
= 𝑘4 · 𝐸𝑆 · 𝐼 − 𝑘−4 · [𝐸𝐼𝑆] = 0
𝑑𝑡
𝑟𝑚 · 𝑆
𝑟=
(b) Velocidad de reacción 𝐼
𝐾𝑀 + 1 + ·𝑆
𝐾𝐼𝑆
𝑑𝑝
𝑟= = 𝑘2 · 𝐸𝑆
𝑑𝑡

(c) Balance de materia a la enzima total

𝑒𝑇 = 𝑒 + 𝐸𝑆 + [𝐸𝐼𝑆]
 4.1 Inhibición acompetitiva simple

𝑟𝑚 · 𝑆 1 1 𝐼 𝐾𝑀 1
𝑟= = · 1+ + ·
𝐼 𝑟 𝑟𝑚 𝐾𝐼𝑆 𝑟𝑚 𝑆
𝐾𝑀 + 1 + ·𝑆
𝐾𝐼𝑆
o.o. pdte.
𝐼2
1 𝑜. 𝑜.
𝑟
𝐼1

1
𝑝𝑑𝑡𝑒′ =
𝐼0 = 0 𝑟𝑚 · 𝐾𝐼𝑆

1
𝐾𝑀 𝑜. 𝑜. ′ =
𝑝𝑑𝑡𝑒 = 𝑟𝑚
𝑟𝑚

1 𝐼
𝑆
𝐼2 > 𝐼1 > 𝐼0 = 0
A mayor concentración de inhibidor mayor o.o
1 𝐼 1 1
𝑜. 𝑜.2 > 𝑜. 𝑜.1 > 𝑜. 𝑜.0 𝑜. 𝑜. = 1+ = + ·𝐼
𝑟𝑚 𝐾𝐼𝑆 𝑟𝑚 𝑟𝑚 · 𝐾𝐼𝑆
𝑝𝑑𝑡𝑒2 = 𝑝𝑑𝑡𝑒1 = 𝑝𝑑𝑡𝑒1
o.o.’ pdte.’
𝐾𝑀
𝑝𝑑𝑡𝑒 =
𝑟𝑚
 Ejemplo 8

Los siguientes datos cinéticos corresponden a una reacción irreversible inhibida por el compuesto I.
Determinar el tipo de inhibición y obtener los parámetros de la ecuación de velocidad.

r0, mmol/(L·min)
[S], mM
[I]=0 [I]=2 mM [I]=4 mM [I]=8 mM
2 0.22 0.18 0.15 0.11
5 0.43 0.29 0.22 0.15
8 0.56 0.35 0.25 0.16
10 0.63 0.37 0.26 0.17
15 0.75 0.41 0.28 0.17
20 0.83 0.43 0.28 0.18
25 0.88 0.45 0.29 0.18

1 1 Inh. Acompetitiva simple

𝐼 =0⇒ = 0.8433 + 7.4104 · (𝑟 2 = 0.9946)
𝑟 𝑆 𝑟𝑚 · 𝑆
𝑟=
𝐼
1 1 𝐾𝑀 + 1 + 𝐾 ·𝑆
𝐼 = 2 𝑀 ⇒ = 1.9641 + 7.2125 · (𝑟 2 = 0.9989) 𝐼𝑆
𝑟 𝑆 1 1 𝐼 𝐾𝑀 1
= · 1+ + ·
1 1 𝑟 𝑟𝑚 𝐾𝐼𝑆 𝑟𝑚 𝑆
𝐼 =4𝑀 ⇒ = 3.1531 + 7.0058 · (𝑟 2 = 0.9996)
𝑟 𝑆
𝐾𝑀
1 1 2 𝑝𝑑𝑡𝑒. = 7.3255 =
𝐼 = 8 𝑀 ⇒ = 5.2262 + 7.6731 · (𝑟 = 1) 𝑟𝑚
𝑟 𝑆
 Ejemplo 8

Las ordenadas en el origen son función de la concentración de inhibidor:

1 𝐼 1 1
𝑜. 𝑜. = 1+ = + ·𝐼 ⇒ 𝑜. 𝑜. = 0.8770 + 0.5485 · 𝐼 (r 2 = 0.9991)
𝑟𝑚 𝐾𝐼𝑆 𝑟𝑚 𝑟𝑚 · 𝐾𝐼𝑆

1 mM
= 0.8770 ⇒ 𝑟𝑚 = 1.1403
𝑟𝑚 min

𝑜. 𝑜. ′
K IS = = 1.5990 mM
𝑝𝑑𝑡𝑒.′
𝐾𝑀
𝑝𝑑𝑡𝑒. = 7.3255 = ⇒ 𝐾𝑀 = 7.3255 · 1.1403 = 8.3533 𝑚𝑀
𝑟𝑚

1.1403 · 𝑆 mmol
𝑟=
𝐼 L · min
8.3533 + 1 + ·𝑆
1.5990
 4.3 Inhibición no competitiva

Inhibición no competitiva : la enzima posee dos centros activos, que permiten alojar tanto al
sustrato como al inhibidor, de modo que se puede formar el complejo EI y el complejo E-I-S
COMPLEJOS

𝑘1 𝑘2
𝐸+𝑆 𝐸𝑆 𝐸+𝑃
𝑘−1
+ +
𝐼 𝐼
𝑘3 𝑘−3 𝑘4 𝑘−4

𝐸𝐼 ∗(𝑖𝑛𝑎𝑐𝑡𝑖𝑣𝑜) 𝐸𝐼𝑆 ∗(𝑖𝑛𝑎𝑐𝑡𝑖𝑣𝑜)

+ S
S + P
I I I
+ +
I I

I I
 4.3 Inhibición no competitiva

𝑘−1 + 𝑘2
𝐾𝑀 = 𝑟𝑚 = 𝑘2 · 𝑒𝑇
𝑘1
𝑘−3 𝑘−4
𝐾𝐼 = 𝐾𝐼𝑆 =
𝑘3 𝑘4

𝐾𝐼 ≪ 𝐾𝐼𝑆 𝐾𝐼𝑆 ≪ 𝐾𝐼
 4.3 Inhibición no competitiva

𝑘−1 + 𝑘2
𝐾𝑀 = 𝑟𝑚 = 𝑘2 · 𝑒𝑇
𝑘1
𝑘−3 𝑘−4
𝐾𝐼 = 𝐾𝐼𝑆 =
𝑘3 𝑘4

(a) Hipótesis de estado estacionario intermedios

𝑑 𝐸𝑆
𝑑𝑡
=0
? Deducir la ecuación cinética para
inhibición no competitiva
𝑑 𝐸𝐼
=0
𝑑𝑡
𝑑 𝐸𝐼𝑆
=0 𝑟𝑚 · 𝑆
𝑑𝑡 𝑟=
𝐼 𝐼
𝐾𝑀 1 + + 1+ ·𝑆
(b) Velocidad de reacción 𝐾𝐼 𝐾𝐼𝑆
𝑑𝑝
𝑟=
𝑑𝑡

(c) Balance de materia a la enzima total

𝑒𝑇 = 𝑒 + 𝐸𝑆 + 𝐸𝐼 + [𝐸𝐼𝑆]
 4.3 Inhibición no competitiva simple

Inhibición no competitiva simple ⇒ K I = K IS = K S

𝑟𝑚 · 𝑆 1 1 𝐼 𝐾𝑀 𝐼 1
𝑟= = · 1+ + · 1+ ·
𝐼 𝐼 𝑟 𝑟𝑚 𝐾𝑆 𝑟𝑚 𝐾𝑆 𝑆
𝐾𝑀 (1 + )+ 1+ ·𝑆
𝐾𝑆 𝐾𝑆
o.o. pdte.

1 𝐼2 A mayor concentración de inhibidor aumenta la o.o y la pendiente

𝑟 𝐼2 > 𝐼1 > 𝐼0 = 0
𝐼1
𝑜. 𝑜.2 > 𝑜. 𝑜.1 > 𝑜. 𝑜.0
𝐼0 = 0
𝑝𝑑𝑡𝑒2 > 𝑝𝑑𝑡𝑒1 > 𝑝𝑑𝑡𝑒0

1
𝑆
−𝑜. 𝑜.
𝑎. 𝑜.2 = 𝑎. 𝑜.1 = 𝑎. 𝑜.0 =
𝑝𝑑𝑡𝑒
abcisa en el origen
 4.3 I. no comp. mixta con predominio de carácter competitivo

Inhibición no competitiva mixta con predominio del carácter competitivo ⇒ K I < K IS

Más fuerte EI

𝑟𝑚 · 𝑆 1 1 𝐼 𝐾𝑀 𝐼 1
𝑟= = · 1+ + · 1+ ·
𝐼 𝐼 𝑟 𝑟𝑚 𝐾𝐼𝑆 𝑟𝑚 𝐾𝐼 𝑆
𝐾𝑀 (1 + )+ 1+ ·𝑆
𝐾𝐼 𝐾𝐼𝑆
o.o. pdte.

1 𝐼2

𝑟
𝐼1 𝐾𝐼 < 𝐾𝐼𝑆 ⇒ 𝑝𝑟𝑒𝑑𝑜𝑚𝑖𝑛𝑖𝑜 𝑐𝑎𝑟á𝑐𝑡𝑒𝑟 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑒𝑡𝑖𝑡𝑖𝑣𝑜
𝐼2 > 𝐼1 > 𝐼0 = 0
𝐼0 = 0
𝑜. 𝑜.2 > 𝑜. 𝑜.1 > 𝑜. 𝑜.0

cortan en el segundo cuadrante 𝑝𝑑𝑡𝑒2 > 𝑝𝑑𝑡𝑒1 > 𝑝𝑑𝑡𝑒0

1
𝑆
la abcisa en el o.o se hace menos negativa

𝑎. 𝑜.2 > 𝑎. 𝑜.1 > 𝑎. 𝑜.0

aumenta la abcisa en el origen al aumentar la concentración de inhibidor

 4.3 I. no comp. mixta con predominio de carácter acompetitivo
MAS FUERTE EIS

Inhibición no competitiva mixta con predominio del carácter acompetitivo ⇒ K IS < K I

𝑟𝑚 · 𝑆 1 1 𝐼 𝐾𝑀 𝐼 1
𝑟= = · 1+ + · 1+ ·
𝐼 𝐼 𝑟 𝑟𝑚 𝐾𝐼𝑆 𝑟𝑚 𝐾𝐼 𝑆
𝐾𝑀 (1 + )+ 1+ ·𝑆
𝐾𝐼 𝐾𝐼𝑆
o.o. pdte.

1 𝐼2

𝑟
𝐼1 𝐾𝐼𝑆 < 𝐾𝐼 ⇒ 𝑝𝑟𝑒𝑑𝑜𝑚𝑖𝑛𝑖𝑜 𝑐𝑎𝑟á𝑐𝑡𝑒𝑟 𝑎𝑐𝑜𝑚𝑝𝑒𝑡𝑖𝑡𝑖𝑣𝑜
𝐼2 > 𝐼1 > 𝐼0 = 0
𝐼0 = 0 𝑜. 𝑜.2 > 𝑜. 𝑜.1 > 𝑜. 𝑜.0

𝑝𝑑𝑡𝑒2 > 𝑝𝑑𝑡𝑒1 > 𝑝𝑑𝑡𝑒0

cortan en el tercer cuadrante

1
𝑆

𝑎. 𝑜.2 < 𝑎. 𝑜.1 < 𝑎. 𝑜.0

disminuye la abcisa al aumentar la concentración del inhibidor
 Ejemplo 9

1 1 Inhibición No Competitiva Simple

𝐼 =0 ⇒ = 1.8895 + 4.3734 · (𝑟 2 = 0.9829)
𝑟 𝑆 𝑟𝑚 · 𝑆
𝑟=
1 1 𝐼 𝐼
𝐼 = 40 𝑚𝑀 ⇒ = 4.8012 + 11.1091 · (𝑟 2 = 0.9920) 𝐾𝑀 · 1 + + 1+ ·𝑆
𝐾𝑆 𝐾𝑆
𝑟 𝑆

1 1 𝐼 𝐾𝑀 𝐼 1
= · 1+ + · 1+ ·
𝑟 𝑟𝑚 𝐾𝑆 𝑟𝑚 𝐾𝑆 𝑆
 Ejemplo 9

1 𝐼 1 1
𝑜. 𝑜. = · 1+ = + · 𝐼 ⇒ 𝑜. 𝑜. = 1.8895 + 0.0728 · 𝐼 (𝑟 2 = 1)
𝑟𝑚 𝐾𝑆 𝑟𝑚 𝑟𝑚 · 𝐾𝑆

1 𝑚𝑀 1.8895
𝑟𝑚 = = 0.5292 ; KS = = 25.9547 mM
1.8895 𝑚𝑖𝑛 0.0728

𝐾𝑀 𝐼 𝐾𝑀 𝐾𝑀
𝑝𝑑𝑡𝑒. = · 1+ = + · 𝐼 ⇒ 𝑝𝑑𝑡𝑒 = 4.3734 + 0.1684 · 𝐼 (𝑟 2 = 1)
𝑟𝑚 𝐾𝑆 𝑟𝑚 𝑟𝑚 · 𝐾𝑆

𝐾𝑀 4.3734
= 4.3734 ⇒ 𝐾𝑀 = 2.3144 𝑚𝑀; 𝑡𝑒𝑛𝑒𝑚𝑜𝑠 2ª 𝑣í𝑎 𝑝𝑎𝑟𝑎 𝑐𝑎𝑙𝑐𝑢𝑙𝑎𝑟 𝐾𝑆 = = 25.9703 𝑚𝑀
𝑟𝑚 0.1684

25.9547 + 25.9703
𝐾𝑆 = = 25.9625 mM
2

0.5292 · 𝑆 mmol
𝑟=
𝐼 𝐼 L · min
2.3144 · 1 + + 1+ ·𝑆
25.9625 25.9625
 Ejemplo 10

Los siguientes datos cinéticos corresponden a una reacción irreversible inhibida por el compuesto I.
Determinar el tipo de inhibición y obtener los parámetros de la ecuación de velocidad.

r0, mmol/(L·min)
[S], mM
[I]=0 [I]=3 mM [I]=6 mM [I]=9 mM
1 0.36 0.30 0.26 0.23
1.5 0.50 0.42 0.36 0.32
2 0.63 0.52 0.44 0.39
5 1.14 0.91 0.76 0.65
7.5 1.39 1.09 0.90 0.76
10 1.56 1.21 0.99 0.83
12.5 1.69 1.30 1.05 0.89
15 1.79 1.36 1.10 0.92

1 1
𝐼 =0 ⇒ = 0.4022 + 2.3801 ·
𝑟 𝑆

1 1
𝐼 = 3 𝑚𝑀 ⇒ = 0.5441 + 2.7763 ·
𝑟 𝑆

1 1
𝐼 = 6 𝑚𝑀 ⇒ = 0.6935 + 3.1461 ·
𝑟 𝑆

1 1 Inhibición No Competitiva Mixta con

𝐼 = 9 𝑚𝑀 ⇒ = 0.8441 + 3.4741 · predominio de carácter acompetitivo
𝑟 𝑆
 Ejemplo 10

𝑟𝑚 · 𝑆 1 1 𝐼 𝐾𝑀 𝐼 1
𝑟= ⇒ = · 1+ + · 1+ ·
𝐼 𝐼 𝑟 𝑟𝑚 𝐾𝐼𝑆 𝑟𝑚 𝐾𝑆 𝑆
𝐾𝑀 · 1 + + 1+ ·𝑆
𝐾𝐼 𝐾𝐼𝑆

1 𝐼 1 1
𝑜. 𝑜. = · 1+ = + · 𝐼 ⇒ 𝑜. 𝑜. = 0.3997 + 0.0492 · 𝐼 (𝑟 2 = 0.9998)
𝑟𝑚 𝐾𝐼𝑆 𝑟𝑚 𝑟𝑚 · 𝐾𝐼𝑆

1 𝑚𝑀 0.3997
𝑟𝑚 = = 2.5019 ; K IS = = 8.1240 mM
3.997 𝑚𝑖𝑛 0.0492

𝐾𝑀 𝐼 𝐾𝑀 𝐾𝑀
𝑝𝑑𝑡𝑒. = · 1+ = + · 𝐼 ⇒ 𝑝𝑑𝑡𝑒 = 2.3964 + 0.1217 · 𝐼 (𝑟 2 = 0.9982)
𝑟𝑚 𝐾𝐼 𝑟𝑚 𝑟𝑚 · 𝐾𝐼

𝐾𝑀 2.3964
= 2.3964 ⇒ 𝐾𝑀 = 5.9956 𝑚𝑀; 𝐾𝐼 = = 19.6910 𝑚𝑀
𝑟𝑚 0.1217

2.5019 · 𝑆 mmol
𝑟=
𝐼 𝐼 L · min
5.9956 · 1 + + 1+ ·𝑆
19.6910 8.1240
4.4 Resumen de las inhibiciones
5 Cinéticas No Michaelianas

Sigmoidal Parabólica

Activación por sustrato Inhibición por sustrato

 SIEMPRE ACOMPETITIVA

5.1 Mecanismo general de activación/inhibición por sustrato

𝑘1 𝑘2
𝐸+𝑆 𝐸𝑆 𝐸+𝑃 + S
S + P

𝑘−1
+ +
𝑆 S

𝑘4 𝑘−4

𝑘5
𝐸𝑆2 𝐸𝑆 + 𝑃
S
S
+ P
S

𝑟0 Activación
por sustrato 𝑘5 ≫ 𝑘2 se forma más por vía secundaria, ES2 más
activo que ES

Inhibición por
sustrato parcial 𝑘5 ≪ 𝑘2 casi todo se forma por
la vía principal, ES más
activo que ES2

Inhibición por ES2 (muerto) incapaz de formar

sustrato total 𝑘5 = 0 producto, [S] pequeñas

𝑆0
 5.1 Ecuación cinética del mecanismo general

𝐸 + 𝑆 ↔ 𝑬𝑺 → 𝐸 + 𝑃
𝑘−1 + 𝑘2
𝐾𝑀1 = 𝑟𝑚1 = 𝑘2 · 𝑒𝑇
𝑘1

𝐸𝑆 + 𝑆 ↔ 𝑬𝑺𝟐 → 𝐸𝑆 + 𝑃
𝑘−4 + 𝑘5
𝐾𝑀2 = 𝑟𝑚2 = 𝑘5 · 𝑒𝑇
𝑘4

(a) Hipótesis de estado estacionario para los intermedios

𝑑 𝐸𝑆 𝑑 𝐸𝑆2
=0 =0
𝑑𝑡 𝑑𝑡

(b) Velocidad de reacción 𝑟𝑚2 2

𝑟𝑚1 · 𝑆 + ·𝑆
𝐾𝑀2
𝑟=
𝑑𝑝 𝑆2
𝑟= = 𝑘2 𝐸𝑆 + 𝑘5 [𝐸𝑆2 ] 𝐾𝑀1 + 𝑆 +
𝑑𝑡 𝐾𝑀2

(c) Balance de materia a la enzima

𝑒𝑇 = 𝑒 + 𝐸𝑆 + [𝐸𝑆2 ]
5.2 Casos particulares: inhibición total por sustrato

𝑘−1 + 𝑘2
𝐾𝑀1 = 𝑟𝑚1 = 𝑘2 · 𝑒𝑇
𝑘1
𝑘−4
𝐾𝑀2 = 𝑟𝑚2 =0
𝑘4

𝑟𝑚2 2
𝑟𝑚1 · 𝑆 + ·𝑆 𝑟𝑚1 · 𝑆
𝐾𝑀2
𝑟= → rm2 = 0 → 𝑟=
𝑆2 𝑆2
𝐾𝑀1 + 𝑆 + 𝐾𝑀1 + 𝑆 +
𝐾𝑀2 𝐾𝑀2

𝑑𝑟
𝑚á𝑥𝑖𝑚𝑜 → = 0 → 𝑆ó𝑝𝑡 = 𝐾𝑀1 · 𝐾𝑀2
𝑑𝑆

𝑺 → ∞, 𝒓 = 𝟎
 Ejemplo 11
8. Una reacción enzimática irreversible se lleva a cabo a 25 ºC y pH=7, con concentración inicial de
enzima constate en igual a 10-4 mol/L, obteniéndose los datos de velocidades iniciales de reacción
mostrados en la tabla. Obtener una ecuación cinética que interprete los datos experimentales.

[S]0, mol/L r0 , mol/(L·min)

0.0490 0.0051
0.0963 0.0081
0.1810 0.0121
0.2660 0.0141 𝑆ó𝑝𝑡 𝑟 máxima
0.3570 0.0135
0.6900 0.0105
0.8460 0.0088 𝑆 → ∞, 𝑟→0

𝑟𝑚1 · 𝑆 𝑑𝑟
𝑟= ⇒ = 0 → 𝑆ó𝑝𝑡 = 𝐾𝑀1 · 𝐾𝑀2
𝑆2 𝑑𝑆
𝐾𝑀1 + 𝑆 +
𝐾𝑀2
𝑆2
𝐾𝑀1 + 𝑆 + 𝑆 𝑆 1 1 𝐾𝑀1
𝐾𝑀2
= ⇒ = · 𝑆2 + ·𝑆+
𝑟𝑚1 𝑟 𝑟 𝑟𝑚1 · 𝐾𝑀2 𝑟𝑚1 𝑟𝑚1

𝒀 = 𝑨𝒙𝟐 + 𝑩𝒙 + 𝑪
 Ejemplo 11

REGRESIÓN CUADRÁTICA
2
𝑆
𝐾𝑀1 + 𝑆 + 𝑆 𝑆 1 1 𝐾𝑀1
𝐾𝑀2
= ⇒ = · 𝑆2 + ·𝑆+
𝑟𝑚1 𝑟 𝑟 𝑟𝑚1 · 𝐾𝑀2 𝑟𝑚1 𝑟𝑚1

𝑌 = 𝐴 · 𝑋2 + 𝐵 · 𝑋 + 𝐶
=ESTIMACION.LINEAL(Y;X:X2)

𝑆
= 115.93 · 𝑆 2 + 2.6254 · 𝑆 + 10.1039
𝑟

1 𝑚𝑜𝑙
2.6524 = ⇒ 𝑟𝑚1 = 0.3770
𝑟𝑚1 𝐿 · 𝑚𝑖𝑛 0.3770 · 𝑆 mol
𝑟=
𝑆2 L · min
𝐾𝑀1 𝑚𝑜𝑙 3.8092 + 𝑆 +
0.0229
10.1039 = ⇒ 𝐾𝑀1 = 3.8092
𝑟𝑚1 𝐿

1 𝑚𝑜𝑙 𝑚𝑜𝑙
115.93 = ⇒ 𝐾𝑀2 = 0.0229 𝑆ó𝑝𝑡 = 3.8092 · 0.0229 = 0.3324
𝑟𝑚1 · 𝐾𝑀2 𝐿 𝐿
 Ejemplo 12
La hidrólisis de hemoglobina con subtilisina se lleva a cabo a 50 ºC y pH=8, con concentración inicial
de enzima constate en igual a 260 μg/mL. Se sospecha inhibición total de la reacción por el propio
sustrato. Obtener una ecuación cinética que interprete los datos experimentales. ¿A qué concentración
de substrato se obtendrá una velocidad de reacción máxima?

[S]0, mmol/L r0 , mmol/(L·min)

2 0.045
5 0.100
7.5 0.134
15 0.201
30 0.254
50 0.263
75 0.248
100 0.227
200 0.161
300 0.123

𝑟𝑚1 · 𝑆 𝑆 1 1 𝐾𝑀1
𝑟= → = · 𝑆2 + ·𝑆+
𝑆2 𝑟 𝑟𝑚1 · 𝐾𝑀2 𝑟𝑚1 𝑟𝑚1
𝐾𝑀1 + 𝑆 + 𝐾
𝑀2
𝑚𝑀
𝑟𝑚1 = 0.4949 0.4949 · 𝑆 mM
𝑚𝑖𝑛 𝑟=
𝑆 𝑆2 min
= 0.0199 · 𝑆 2 + 2.0205 · 𝑆 + 39.61 19.60 + 𝑆 +
𝑟 𝐾𝑀1 = 19.60 𝑚𝑀 101.5

𝐾𝑀2 = 101.5 𝑚𝑀 𝑆ó𝑝𝑡 = 44.6 𝑚𝑀

 5.2 Casos particulares: inhibición parcial por sustrato

𝑘−1 + 𝑘2
𝐾𝑀1 = 𝑟𝑚1 = 𝑘2 · 𝑒𝑇
𝑘1
𝑘−4 + 𝑘5
𝐾𝑀2 = 𝑟𝑚2 = 𝑘5 · 𝑒𝑇
𝑘4

𝑘 2 ≫ 𝑘5
𝑟0
ES2 no es un complejo muerto,
𝑟𝑚á𝑥𝑖𝑚𝑎 pero la velocidad de formación de
P a partir de ES2 es muy baja, es
más efectiva la vía principal k2.

𝑟𝑚2 𝑟𝑚2 2
𝑆 → ∞, 𝑟 = 𝑟𝑚2 𝑟𝑚1 · 𝑆 +
𝐾𝑀2
·𝑆
𝑟=
𝑆2
𝐾𝑀1 + 𝑆 +
𝐾𝑀2

𝑆ó𝑝𝑡 𝑆0
 5.2 Casos particulares: activación por sustrato

𝑘−1 + 𝑘2
𝐾𝑀1 = 𝑟𝑚1 = 𝑘2 · 𝑒𝑇
𝑘1
𝑘−4 + 𝑘5
𝐾𝑀2 = 𝑟𝑚2 = 𝑘5 · 𝑒𝑇
𝑘4

𝑘 5 ≫ 𝑘2
𝑟0
La vía k5, por la que se forma
𝑟𝑚2 producto a partir del complejo ES2 ,
es mucho mayor que velocidad de la
vía k2. El complejo ES2 es mucho
más activo para la formación de
producto.
𝑃𝑢𝑛𝑡𝑜
𝑑𝑒 𝑖𝑛𝑓𝑙𝑒𝑥𝑖ó𝑛 𝑟𝑚2 2
𝑟𝑚1 · 𝑆 + ·𝑆
𝐾𝑀2
𝑟=
𝑆2
𝐾𝑀1 + 𝑆 +
𝐾𝑀2

𝑆0
 6 Inhibición por producto
Hay muchos ejemplos de reacciones enzimáticas donde la reacción se inhibe por
la acumulación de sus propios productos. Por ejemplo: la hidrólisis enzimática
de glucosa en etanol, donde el propio etanol a partir de ciertos niveles inhibe la
reacción.

La inhibición por producto puede ser competitiva, acompetitiva o no

competitiva, en función de que el producto se una la enzima libre, al complejo
E-S o a ambos. Las ecuaciones son similares a las que hemos visto cuando los
inhibidores son externos. Por ejemplo en el caso de la inhibición por producto
competitiva:

E + S  ES ⎯⎯
k2
→ E+P 𝑟𝑚 · 𝑆
𝑟=
+ 𝑝
𝐾𝑀 · 1 + 𝐾 + 𝑆
𝑃
P
k3 k−3
k−3
EP (inactivo) K P=
k3
60
 6 Inhibición por producto
Inhibidor (producto) y sustrato estarán relacionados en función de la
conversión.

𝑆 = 𝑆0 · 1 − 𝑥 en la mayoría de los
S ⎯⎯→ PE 𝑝 = 𝑝0 + S0 · x
casos p0 =0

Inhibición por 𝑟𝑚 · 𝑆 𝑟𝑚 · 𝑆0 (1 − 𝑥) kps tiende a infinito

𝑟= ⟹ 𝑟=
producto 𝑝 𝑆 𝑥
competitiva 𝐾𝑀 · 1 + +𝑆 𝐾𝑀 1 + 0 + 𝑆0 (1 − 𝑥)
𝐾𝑃 𝐾𝑃

Inhibición por 𝑟𝑚 · 𝑆 𝑟𝑚 · 𝑆0 (1 − 𝑥) kp tiende a

producto 𝑟= ⟹ 𝑟= infinito
𝑝 𝑆 𝑥
acompetitiva 𝐾𝑀 + 1 + ·𝑆 𝐾𝑀 + 1 + 0 · 𝑆0 (1 − 𝑥)
𝐾𝑃𝑆 𝐾𝑃𝑆

Inhibición por 𝑟𝑚 · 𝑆 𝑟𝑚 · 𝑆0 (1 − 𝑥)
producto 𝑟= ⟹ 𝑟=
𝑝 𝑝 𝑆 𝑥 𝑆 𝑥
no competitiva 𝐾𝑀 1+ + 1+ ·𝑆 𝐾𝑀 1 + 0 + 1 + 0 · 𝑆0 (1 − 𝑥)
𝐾𝑃 𝐾𝑃𝑆 𝐾𝑃 𝐾𝑃𝑆

61
7 Mecanismo general de reacción de dos sustratos

𝐸
𝐴+𝐵 𝑃+𝑄

Ordenado
1. Formación de complejo ternario EAB
Al azar

Theorell-Chance
2. Formación de complejo binario
Ping-pong
 7.1 Mecanismos con formación de complejo ternario EAB

Mecanismo ordenado
𝑘1
𝐸+𝐴 𝐸𝐴 Dos etapas sucesivas, con
𝑘−1
+ formación reversible del
𝐵 complejo EA, seguido de la
formación del complejo EAB.
𝑘4 𝑘−4 Este último conduce a los
productos P y Q.
𝑘5
𝐸𝐴𝐵 𝐸+𝑃+𝑄
𝑟𝑚 = 𝑘5 · 𝑒𝑇

Mecanismo al azar
𝑘1
𝐸+𝐴 𝐸𝐴 La enzima se une
𝑘−1
+ + indistintamente al sustrato A y B.
𝐵 𝐵 Los dos complejos binarios EA y
EB conducen a la formación de
𝑘3 𝑘−3 𝑘4 𝑘−4 EAB. Este último conduce a los
productos P y Q.
𝑘2 𝑘5
𝐸𝐵 + 𝐴 𝑘−2
𝐸𝐴𝐵 𝐸+𝑃+𝑄
𝑟𝑚 = 𝑘5 · 𝑒𝑇
7.2 Mecanismo con formación de complejo binario

Mecanismo de Theorell-Chance Se puede considerar un caso particular del

mecanismo ordenado, donde la entrada del
sustrato B da lugar de forma instantánea a la
salida de P, sin formación de complejo ternario.

𝑘1 𝑘1
𝐸+𝐴 𝐸𝐴 𝐸+𝐴 𝐸𝐴
𝑘−1
+ 𝑘−1
+
𝐵 𝐵
𝑘4 𝑘4 𝑘−4
𝑟𝑚 = 𝑘4 · 𝑒𝑇

𝐸𝑄 + 𝑃 𝐸𝐴𝐵
𝑘5 𝑘5
𝑟𝑚 = 𝑘5 · 𝑒𝑇

𝐸+𝑄 𝐸+𝑃+𝑄

? Plantea la hipótesis de estado estacionario para el

complejo intermedio EA para ambos mecanismos.
 7.2 Mecanismo con formación de complejo binario

Mecanismo de ping-pong El complejo [Enzima-Sustrato A] se descompone de

forma que el sustrato A, al captar un protón
(generalmente) de la enzima, la deja en forma
radicalaria. Dicho radical es muy activo y captura una
molécula del sustrato B para transformarla en P.

𝑘1
𝐸+𝐴 𝐸𝐴 -H + A
-H

𝑘−1
E EA
𝑘2

* + -H

𝐸∗ +𝑄 Q
+
+ B -H
𝐵
𝑘2

*
𝐸∗𝐵 E*B

𝑘3

-H + P
𝐸+𝑃
7.3 Ecuación cinética para reacciones con dos sustratos

𝑟𝑚 · 𝐴 · 𝐵
𝑟=
𝐾 + 𝐾1 · 𝐴 + 𝐾2 · 𝐵 + 𝐴 · 𝐵

Ordenado/Theorell-Chance: no se forma complejo EB ⇒ 𝐾2 = 0

𝑟𝑚 · 𝐴 · 𝐵
𝑟=
𝐾 + 𝐾1 · 𝐴 + 𝐴 · 𝐵

Azar: se forman EA y EB indistintamente ⇒ 𝐾 = 𝐾1 · 𝐾2

𝑟𝑚 · 𝐴 · 𝐵
𝑟=
𝐾1 · 𝐾2 + 𝐾1 · 𝐴 + 𝐾2 · 𝐵 + 𝐴 · 𝐵

Ping-pong: 𝐾 = 0
𝑟𝑚 · 𝐴 · 𝐵
𝑟=
𝐾1 · 𝐴 + 𝐾2 · 𝐵 + 𝐴 · 𝐵
 7.3 Ecuación cinética para reacciones con dos sustratos

𝑟𝑚 · 𝐴 · 𝐵
𝑟=
𝐾 + 𝐾1 · 𝐴 + 𝐾2 · 𝐵 + 𝐴 · 𝐵

Linealización

Ecuación de la línea (B=cte)

1 𝐾 + 𝐾1 · 𝐴 + 𝐾2 · 𝐵 + 𝐴 · 𝐵 1 K1 K K2 1
= = + + + ·
𝑟 𝑟𝑚 · 𝐴 · 𝐵 rm rm · B rm · B rm A
 7.3 Ecuación cinética para reacciones con dos sustratos

Ecuación de la línea

1 𝐾1 + [𝐵] 𝐾 + 𝐾2 [𝐵] 1 𝐾1 + 𝐵
= + · ⇒ 𝑎. 𝑜. = −
𝑟 𝑟𝑚 · 𝐵 𝑟𝑚 · 𝐵 𝐴 𝐾 + 𝐾2 𝐵

o.o. pdte.
 7.3 Ecuación cinética para reacciones con dos sustratos

1 𝐾1 + [𝐵] 𝐾 + 𝐾2 [𝐵] 1 𝐾1 + 𝐵
= + · ⇒ 𝑎. 𝑜. = −
𝑟 𝑟𝑚 · 𝐵 𝑟𝑚 · 𝐵 𝐴 𝐾 + 𝐾2 𝐵

o.o. pdte.

𝐾1 + 𝐵 𝐾1 + 𝐵 1
Azar: ⇒ 𝐾 = 𝐾1 · 𝐾2 ⇒ 𝑎. 𝑜. = − =− =−
𝐾1 𝐾2 + 𝐾2 𝐵 𝐾2 𝐾1 + 𝐵 𝐾2

1 𝐵1
𝑟 𝐵2
Las rectas comparten
abcisa en el origen
𝐵3

1
[𝐴]
7.3 Ecuación cinética para reacciones con dos sustratos

1 𝐾1 + [𝐵] 𝐾 + 𝐾2 [𝐵] 1 𝐾1 + 𝐵
= + · ⇒ 𝑎. 𝑜. = −
𝑟 𝑟𝑚 · 𝐵 𝑟𝑚 · 𝐵 𝐴 𝐾 + 𝐾2 𝐵

o.o. pdte.

𝐾1 + 𝐵
Ordenado/Theorell-Chance: 𝐾2 = 0 ⇒ 𝑎. 𝑜. = −
𝐾

1 𝐵1
𝑟 𝐵2
Punto de corte en
𝐵3 el II Cuadrante

1
[𝐴]
7.3 Ecuación cinética para reacciones con dos sustratos

1 𝐾1 + [𝐵] 𝐾 + 𝐾2 [𝐵] 1 𝐾1 + 𝐵
= + · ⇒ 𝑎. 𝑜. = −
𝑟 𝑟𝑚 · 𝐵 𝑟𝑚 · 𝐵 𝐴 𝐾 + 𝐾2 𝐵

o.o. pdte.

𝐾2 𝐵 𝐾2
Ping-pong: 𝐾 = 0 ⇒ 𝑝𝑑𝑡𝑒 = = cte
𝑟𝑚 𝐵 𝑟𝑚

1
𝐵1
𝑟
𝐵2
Rectas paralelas
𝐵3

1
[𝐴]