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Revisar
Revisión de funciones
Paradigmas emergentes deb-arrestar la
señalización independiente de siete
receptores transmembrana
Arun K. Shukla1,2, Kunhong Xiao1y Robert J. Lefkowitz1,2
1Departamento de Medicina, Centro Médico de la Universidad de Duke, Durham 27710, Carolina del Norte, EE. UU.
2Instituto Médico Howard Hughes, Centro Médico de la Universidad de Duke, Durham 27710, Carolina del Norte, EE. UU.
b-Las arrestinas, originalmente descubiertas para desensibilizar
siete receptores transmembrana activados (7TMR; también
conocidos como receptores acoplados a proteína G, GPCR), ahora
son mediadores bien establecidos de la endocitosis del receptor, la
ubiquitilación y la señalización independiente de la proteína G.
Análisis globales recientes deb-interacciones de arrestina yb- Los
eventos de fosforilación dependientes de arrestina han
descubierto varias funciones previamente no previstas deb-
arrestinas en una variedad de eventos de señalización celular.
Estos hallazgos sugieren fuertemente que los roles funcionales de
b-Las arrestinas son mucho más amplias de lo que se entiende
actualmente. Estudios biofísicos destinados a comprender
múltiples conformaciones activas de los 7TMR y elb-Las arrestinas
han comenzado a desentrañar la base mecanicista de las diversas
capacidades funcionales deb-arrestinas en la señalización celular.
La superfamilia de los siete receptores transmembrana (7TMR) Los
7TMR, también conocidos como receptores acoplados a proteína G
(GPCR), son proteínas integrales de membrana que constituyen la
clase más grande de receptores de superficie celular en el genoma
humano con aproximadamente 800 miembros diferentes.[1]. Estos
receptores se unen a una amplia gama de ligandos que incluyen
hormonas, péptidos, neurotransmisores y lípidos.
[2]. Tras su activación, inician una variedad de vías de señalización
intracelular para provocar respuestas celulares apropiadas.
[3]. Dado que la señalización 7TMR regula de manera crucial una
amplia gama de procesos fisiológicos y fisiopatológicos, estos
receptores son uno de los objetivos farmacológicos más
importantes.[4]. Por tanto, los estudios sobre la señalización 7TMR
constituyen una de las áreas más atractivas de la biología moderna
no sólo desde la perspectiva de la investigación básica, sino
también en términos de posibles implicaciones terapéuticas y
oportunidades traslacionales. La activación de la señalización 7TMR
dependiente de la proteína G implica la unión de un agonista que
induce cambios conformacionales en el receptor que a su vez
promueven su interacción con las proteínas G heterotriméricas (G
abj) (Figura 1a). A esto le sigue el intercambio de nucleótidos de
guanina (GTP por PIB) en la Gasubunidad, activación y disociación
de las proteínas G heterotriméricas[5]. Las proteínas G disociadas
posteriormente interactúan y activan una variedad de efectores
posteriores, como enzimas (p. ej., adenilato ciclasa).
Autores correspondientes:Shukla, AK Lefkowitz,
(arun.shukla@receptor-biol.duke.edu);
RJ (lefko001@receptor-biol.duke.edu).
0968-0004/$ – ¡ver portada! 2011 Elsevier Ltd. Todos los derechos reservados. doi:10.1016/j.tibs.2011.06.003
y fosfolipasas) y canales iónicos para generar segundos
mensajeros (por ejemplo, AMPc) e iniciar respuestas de
señalización apropiadas.[6]. Como un receptor activado puede
acoplarse secuencialmente a múltiples proteínas G, las células han
ideado mecanismos de desensibilización para desactivar la
señalización dependiente de la proteína G para evitar los efectos
nocivos de la señalización sostenida.[7].
b-Arrestinas y receptores quinasas acoplados a proteína G (GRK):
un mecanismo de desensibilización universal La desensibilización
7TMR es esencialmente un proceso de dos pasos (Figura 1b). En el
primer paso, los GRK fosforilan los receptores ocupados por
agonistas, principalmente en el extremo carboxilo terminal de los
receptores, pero también en los bucles intracelulares.
[8]. Las GRK son una familia (GRK1-GRK7) de serina/treonina
quinasas[7]. Mientras que la expresión de GRK1 y GRK7 se limita a
la retina, GRK4 también tiene una distribución celular limitada y su
mayor expresión se encuentra en los testículos.[9]. Las otras GRK
se expresan ampliamente y fosforilan 7TMR no rodopsina. GRK2 y
-3 contienen un dominio de homología de pleckstrina y su
orientación a la membrana se ve favorecida principalmente por
interacciones con Gbg; por el contrario, GRK5 y -6 están
constitutivamente localizados en la membrana en virtud de
diversas modificaciones, como la palmitoilación.[10]. Aunque
cuatro GRK (es decir, GRK2, -3, -5 y -6) son los principales
responsables de la fosforilación de la mayoría de los 7TMR, no se
ha establecido firmemente un motivo de secuencia objetivo de
GRK consensuado. Las secuencias primarias de 7TMR están poco
conservadas; por lo tanto, las GRK probablemente reconocen
ciertos determinantes estructurales en los receptores activados.
Los 7TMR activados también son fosforilados por proteínas
quinasas dependientes de segundos mensajeros, como la proteína
quinasa A (PKA) y la proteína quinasa C (PKC), que también
contribuyen a la desensibilización.[11]. Además, algunos estudios
han demostrado que otras quinasas como la caseína quinasa II[12]
y ribosomal S6 quinasa 2[13]puede fosforilar 7TMR específicos; sin
embargo, estos eventos parecen estar restringidos a sistemas
receptores específicos y sus contribuciones a la desensibilización
del receptor aún no se han dilucidado por completo.
El segundo paso de la desensibilización implica el reclutamiento
de proteínas adaptadoras multifuncionales llamadas arrestinas a
los receptores activados y fosforilados. Reclutamiento deb-La
arrestina impide estéricamente un mayor acoplamiento de la
proteína G del receptor, lo que conduce a la desensibilización.[14].
Tendencias en ciencias bioquímicas, septiembre de 2011, vol. 36, núm. 9 457
 Revisar Tendencias en Ciencias BioquímicasSeptiembre de 2011, vol. 36, núm. 9

(a) agonista (b) agonista agonista

PAG
GRK5/6
PAG PAG
!
GRAMO PÁGINAS
PAGPAG
GRAMO!
GRAMO"
GRAMO
"
GRK2/3 "-arrestin
GRAMO#
#
GRAMO

GRAMO!
"
GRAMO GRAMO"

GRAMO!
GRAMO#
GRAMO#

Proteína G
dependiente
señalización

(C) agonista agonista

PAG PAG

Nedd4 PÁGINAS PAGPAG

AP2 c-Src
"-arrestin "-arrestin

mdm2 clatrina ERK act

Receptor PAGPAG

internalización PAG

"-arrestin
dependiente
señalización

tiLicenciatura

Figura 1.Roles multifacéticos deb-arrestinas y receptores quinasas acoplados a proteína G (GRK) en la señalización y regulación de siete receptores transmembrana (7TMR). (a)El paradigma clásico de la
señalización dependiente de la proteína G a través de 7TMR donde la unión de un agonista conduce a cambios conformacionales en el receptor. El receptor activado a su vez se acopla y activa proteínas
G heterotriméricas. Tras la activación, las proteínas G heterotriméricas se disocian y la G activadaay Gbgconducir a la generación de señalización descendente. (b)Fosforilación mediada por GRK yb-
desensibilización mediada por arrestina de 7TMR. Los receptores activados ocupados por agonistas son fosforilados por GRK en serina/treoninas principalmente en el extremo C terminal pero también
en los bucles intracelulares. Los receptores fosforilados reclutan proteínas adaptadoras multifuncionalesb-arrestinas que impiden estéricamente un mayor acoplamiento de la proteína G al receptor y, a
su vez, conducen a la desensibilización del receptor. (C)nuevos roles deb-arrestinas como adaptadores de endocitosis, adaptadores de ubiquitina ligasa E3 y el nuevo paradigma deb-señalización
dependiente de arrestina aguas abajo de 7TMR. Unido al receptorb-Las arrestinas también reclutan varios componentes de la maquinaria de internalización dependiente de clatrina en los receptores
activados y posteriormente promueven la endocitosis del receptor a través de fosas recubiertas de clatrina. Además,b-Las arrestinas también actúan como adaptadores para varias ubiquitina ligasas E3
diferentes para facilitar la ubiquitinación del receptor. Asombrosamente,b-Las arrestinas también son capaces de estructurar varias moléculas de señalización, como c-Src, Akt y ERK, para iniciar la
señalización independiente de la proteína G aguas abajo de los 7TMR activados. Tenga en cuenta que los diferentes socios vinculantes deb-Las arrestinas que se muestran en la figura probablemente no
se unen.b-arrestinas simultáneamente.

Hay cuatro miembros en la familia arrestina, arrestina 1 (también
llamado antígeno S o arrestina visual), arrestina 2 (b-arrestina 1),
arrestina 3 (b-arrestina 2) y arrestina 4 (también llamada arrestina
X o arrestina de cono)[15]. Mientras que la arrestina visual y la
arrestina de conos se localizan en los conos y bastones de la retina
e interactúan exclusivamente con la rodopsina, las dosb- Las
isoformas de arrestina se expresan de forma ubicua. Se han
determinado las estructuras cristalinas de las cuatro arrestinas y
esencialmente consisten en dominios N y C construidos casi en su
totalidad a partir de dominios antiparalelos.bhojas[16-18]. Es
interesante observar que existe una alta homología secuencial y
estructural entre los miembros de la familia de las arrestinas; aún
así, son capaces de capacidades funcionales sorprendentemente
diferenciales. Al igual que los GRK, sólo los dosb-Las isoformas de
arrestina parecen ser suficientes para regular un gran repertorio
de 7TMR, lo que sugiere que estas proteínas reconocen ciertas

458
Revisar
dominios estructurales comunes en los receptores activados por
agonistas.
Durante la última década, varios aspectos funcionales
novedosos de b-Se han descubierto arrestinas en la regulación de
la señalización 7TMR. La capacidad previamente imprevista deb-
Las arrestinas para actuar como transductores de señales y mediar
la señalización 7TMR independiente de la proteína G han llevado a
la noción de agonismo sesgado. Además, los enfoques
proteómicos globales han comenzado a descubrir una gama cada
vez mayor deb- compañeros de interacción de arrestina, así como
nuevas redes de señalización que están potencialmente reguladas
porb-arrestinas de manera dependiente de la fosforilación/
desfosforilación. Las siguientes secciones analizan los
descubrimientos más recientes en estas áreas e intentan
proporcionar información reciente sobre la base biofísica
subyacente de la señalización multifacética a través de 7TMR.
Horizontes en expansión: conexiones novedosas y roles
regulatorios novedosos deb-arrestinas para 7TMR
Tras el descubrimiento del papel deb-arrestinas en la
desensibilización a 7TMR, estudios adicionales encontraron queb-
Las arrestinas también interactúan y sirven como adaptadores
para varios componentes clave de la maquinaria endocítica para
promover la internalización del receptor.Figura 1C)[19]. Estas
proteínas incluyen la cadena pesada de clatrina.[20],b2 adaptina
del complejo de proteínas adaptinas AP2[21], el pequeño factor de
ribosilación de ADP 6 de proteína G (ARF6)[22]y elNORTE-proteína
de fusión sensible a etilmaleimidas[23].b-La internalización de
7TMR mediada por clatrina dependiente de arrestina parece ser un
mecanismo general para la mayoría de los 7TMR; sin embargo, hay
algunos ejemplos en los que, dependiendo del tipo de célula o del
sistema receptor,b-Las arrestinas están involucradas en menor
medida o no participan en absoluto.[24]. Basado en la estabilidad
de la interacción entre el receptor internalizante y elb- arrestinas,
se han delineado dos clases de receptores. Para los receptores de
clase A, como elbreceptor 2-adrenérgico (b2AR), la interacción
entre el receptor yb-las arrestinas son transitorias; por el contrario,
para los receptores de clase B, como el receptor de angiotensina
subtipo 1a (AT1aR), la interacción es significativamente más estable
[25]. Además, la estabilidad del receptor-b-La interacción de
arrestina también determina si los receptores experimentan un
reciclaje rápido (clase A) o un reciclaje lento/clasificación
endosómica (clase B).[26].
Otro conjunto de observaciones relacionadas que han ampliado
el alcance funcional deb-arrestinas es una apreciación de su
capacidad para actuar como adaptadores de ubiquitina ligasa E3 y
mediar la ubiquitilación de 7TMR (Figura 1C)[27]. El primer indicio
de una implicación deb-arrestinas en ubiquitilación se informó en
el contexto del ser humanob2AR: se propuso queb-La arrestina 2
puede actuar como un adaptador para que una ubiquitina ligasa
E3 promuevabubiquitilación 2AR[28]. Trabajos posteriores
encontraron queb-La arrestina 2 de hecho actúa como un
adaptador para la célula precursora neural de ubiquitina ligasa E3
expresada y regulada negativamente en el desarrollo 4 (NEDD4)
para promoverbUbiquitilación y degradación de 2AR[29].
Similarmente,b-la arrestina 1 forma parte de otra ubiquitina ligasa
E3, AIP4, en respuesta a la activación del receptor 4 de quimiocina
(motivo CXC) (CXCR4); sin embargo, esta interacción parece ser
necesaria para eventos de clasificación endosómica tardía y
degradación en lugar de ubiquitilación de CXCR4 per se.
[30]. porque la mayoríab-Aparecen funciones dependientes de arrestina.
Tendencias en Ciencias BioquímicasSeptiembre de 2011, vol. 36, núm. 9
Recuadro 1. Avances más recientes
1.b-Arrestinas como adaptadores de ligasa E3.Una de las últimas incorporaciones a la lista
cada vez mayor de proteínas para las cualesb-Las arrestinas que pueden actuar como
adaptadores son las ubiquitina ligasas E3.b-Los arrestos pueden servir de andamio para
MDM2[28], AIP4[30]y NEDD4[29]no solo en el contexto de 7TMR sino también de otras
proteínas de membrana que no son 7TMR.
2.b-Arrestinas como reguladores de proteínas de membrana distintas de
7TMR. Varias líneas de evidencia sugieren roles cruciales deb-arrestinas en
la regulación de canales iónicos y transportadores, principalmente
mediando en su internalización y ubiquitilación.[33–37]. Esta actividad
amplía significativamente el repertorio de proteínas de membrana que
están influenciadas directa o indirectamente porb-arrestinas.
3.Adaptadores de tráfico de levadura (ART) relacionados con arrestin.Relacionados
evolutivamente con las arrestinas de los mamíferos y que contienen
características estructuralmente conservadas con las arrestinas de los mamíferos,
las ART pueden imitar la función de andamiaje deb-arrestinas para ligasas de
ubiquitina E3 para mantener niveles apropiados de transportadores de
membrana enSaccharomyces cerevisiae[41–43].
4.Nuevas formas de inducir sesgos.Además de los ligandos sesgados, AT1aR
también exhibeb-señalización sesgada por arrestina cuando se aplica
estrés mecánico u osmótico a las células que expresan el receptor. Tales
tensiones no parecen inducir ninguna activación detectable de la proteína
G aguas abajo de AT1aR.[96]. La bacteria que causa la meningitis
cerebroespinal,Neisseria meningitidis,involucra selectivamente unb-vía de
señalización dependiente de arrestina aguas abajo deb2AR para abrir
uniones intercelulares a través de reordenamientos citoesqueléticos que,
en última instancia, permiten la adhesión bacteriana a las células
endoteliales y la posterior colonización.[97].
conservarse en la mayoría de las 7TMR, el papel deb- Las arrestinas
en la ubiquitilación, clasificación endosómica/lisosomal y
degradación de los receptores probablemente también se
conservarán entre los miembros de la superfamilia 7TMR.
Curiosamente, la capacidad deb-Las arrestinas para mediar la
internalización y la ubiquitilación no se limitan a 7TMR (Caja 1).b-
Las arrestinas son cruciales para la internalización o ubiquitilación
(o ambas) del factor de crecimiento transformante tipo III.b (TGF-b)
receptor[31], el receptor del factor de crecimiento similar a la
insulina I (IGF1)[32], canales de calcio dependientes de voltaje
[33,34], canal de potencial receptor transitorio tipo vanilloide
(TRPV4)[35], el intercambiador Na(+)/H(+) 1 (NHE1)[36], el
intercambiador neuronal Na(+)/H(+) NHE5
[37], el receptor de andrógenos[38]y la cadherina endotelial
vascular (VE)[39]. Además, Kurtz, la única detención no visual
expresada enDrosofila,está involucrado de manera crucial en
la ubiquitilación y degradación de Notch mediada por deltex
[40]. Además, las proteínas de tráfico relacionadas con la arrestina de
levadura (ART), que están relacionadas lejanamente con las arrestinas
de los mamíferos, pero que comparten el pliegue de arrestina, están
involucradas en la internalización y ubiquitilación de los
transportadores de la membrana plasmática.[41–43]. Estos hallazgos
no solo resaltan un principio conservado evolutivamente, sino que
también sugieren que algunos de los paradigmas descubiertos
originalmente para los 7TMR, y que se anticipó que serían relevantes
únicamente para los 7TMR, podrían ser aplicables a otras proteínas
integrales de membrana. De hecho, es tentador especular queb-Las
arrestinas podrían ser mediadores globales de la ubiquitilación e
internalización de proteínas de membrana.
Roles deb-arrestina y GRK en la señalización 7TMR:
cambiando el paradigma
Un hallazgo algo sorprendente, pero también uno de los más
interesantes, en el área de 7TMR fue la observación de queb-
Las arrestinas pueden armar la tirosina quinasa c-Src para
459
Revisar
activado por agonistab2AR, que eventualmente conduce a la activación
de la quinasa regulada por señales extracelulares (ERK1/2)[44] (Figura 1
C). Este hallazgo no sólo proporcionó el primer indicio de queb-Las
arrestinas podrían funcionar como moléculas de señalización, pero
posteriormente ha llevado al descubrimiento del nuevo campo de
proteínas G independientes,b-señalización dependiente de arrestina a
través de 7TMR. Desde este primer informe, una gran cantidad de
datos no sólo ha establecidob-arrestinas como transductores de
señales auténticos, pero también sugirió queb-La señalización
dependiente de arrestina es muy diversa.[45]. Por ejemplo,b-Las
arrestinas pueden interactuar con otros miembros de la familia c-Src,
como Hck, Fgr y Yes, y acercarlos al receptor activado.[46]. Además,b-
Las arrestinas son capaces de andamiar a otros actores clave de las vías
de señalización de la proteína quinasa activada por mitógenos (MAPK),
incluidas ERK1/2, p38 y c-Jun N terminal quinasa-3 (JNK3). [44,47,48].
Además,b-Se informa que las arrestinas estructuran AKT, PI3 quinasa y
fosfodiesterasa 4 (PDE4) en el contexto de receptores específicos tanto
in vitroyen vivo[49-56]. La gama de capacidades de señalización deb-
Las arrestinas han sido revisadas en detalle en otros lugares.[57]; Sin
embargo, hay al menos dos conclusiones importantes que se pueden
extraer de la investigación en esta área durante la última década:
primero, queb- Las arrestinas actúan como moléculas de señalización
independientes de la proteína G aguas abajo de los 7TMR y, en
segundo lugar, que las capacidades de señalización deb-Las arrestinas
son mucho más diversas de lo que se concibió originalmente.
Acercándonos: el concepto de agonismo sesgado
El hallazgo de queb-Las arrestinas pueden mediar la señalización
celular independiente de la proteína G aguas abajo de los 7TMR, lo que
posteriormente condujo al descubrimiento de que los dos brazos de
señalización son farmacológicamente separables.[58]. En otras
palabras, es posible identificar o diseñar ligandos que puedan activar
selectivamente proteínas dependientes de proteína G ob-Señalización
dependiente de arrestina. Estos ligandos, que pueden activar
selectivamente uno u otro brazo de señalización, se denominan
"agonistas sesgados" y este fenómeno de activación selectiva se
denomina "agonismo sesgado". Este descubrimiento cambió la noción
ampliamente aceptada del espectro lineal de eficacia de los 7TMR y
descubrió modos de señalización multidimensional de estos
receptores. Por ejemplo, la estimulación del receptor de angiotensina II
tipo 1a (AT1aR) por SII (Sar1, isla4, isla8-angiotensina II), una versión
modificada de la angiotensina II, conduce exclusivamente ab-
señalización dependiente de arrestina sin ninguna activación
detectable de la proteína G, lo que convierte al SII en unb-Ligando con
polarización de arresto para AT1aR. Ligandos sesgados para proteína G
ob-Se han descrito arrestinas para varios receptores diferentes
(revisados en[59]). Curiosamente, para algunos receptores, una de
estas dos vías de señalización puede traducirse en efectos fisiológicos
beneficiosos, mientras que la otra parece mediar en resultados
indeseables. Por lo tanto, dependiendo del sistema receptor, podría ser
posible desarrollar agonistas sesgados para una de estas dos vías y
convertirlos en fármacos novedosos y terapéuticamente más
beneficiosos. Por ejemplo, la vitamina niacina, un agonista de GPR109A
que se utiliza en dosis altas para tratar la dislipidemia, parece ejercer su
efecto reductor de los triglicéridos a través de una vía dependiente de
la proteína G, mientras que su efecto secundario de enrojecimiento
cutáneo depende deb-arresto 1[60]. De hecho, un agonista de GPR109A
que activa selectivamente la señalización de la proteína G
460
Tendencias en Ciencias BioquímicasSeptiembre de 2011, vol. 36, núm. 9
sin comprometerseb-La arrestina 1 ha sido descrita recientemente.
[61]. Dicho ligando podría mantener los efectos beneficiosos
de reducción de lípidos sin provocar la respuesta de
enrojecimiento y, por lo tanto, podría ser superior a la niacina.
Otro ejemplo de donde unb-El ligando sesgado por arrestina
podría ser terapéuticamente preferido para AT1aR. TRV120027,
unb- Agonista de AT1aR sesgado por arrestina, mejora el
rendimiento cardíaco en modelos animales además de reducir
la presión arterial media como los antagonistas imparciales
clásicos.[62]. Estos ejemplos resaltan el potencial de mejora
terapéutica al apuntar a brazos de señalización específicos de
7TMR y representan una traducción atractiva de la
investigación básica de 7TMR.
Para la mayoría de los Gasy Gaqreceptores acoplados, el
dependiente de proteína G y elb-La activación de las quinasas ERK
MAP dependiente de arrestina parece ser en su mayoría
independiente entre sí (es decir, la inhibición de una proteína G no
atenúa significativamenteb-activación de ERK dependiente de
arrestina y viceversa). Sin embargo, un hallazgo interesante, que
aún no se comprende del todo, es que para Gai/GRAMOaoh
receptores acoplados (como el receptor de quimiocina CXCR7 y el
receptor de niacina GPR109A), la proteína G y la b-la señalización
dependiente de arrestina a ERK parece ser interdependiente[60,63]
. Para estos receptores, la inhibición de Gaiusando toxina pertussis
ob-Las arrestinas por un pequeño ARN de interferencia suprimen
significativamente la activación de ERK. Estos hallazgos indican que
al menos para la activación de ERK aguas abajo de Gaireceptores
acoplados, ciertos componentes clave tanto de la proteína G
dependiente como de lab-Se requieren vías de señalización
dependientes de arrestina.
Cabe señalar que se ha demostrado un sesgo de señalización
en varios niveles adicionales, lo que agrega más ramificaciones a la
señalización 7TMR. Por ejemplo, ciertos receptores son capaces de
acoplarse a más de un tipo de proteína G, y recientemente se han
descrito ligandos específicos que promueven el acoplamiento
preferencial a una u otra proteína G. Curiosamente, un informe
reciente mostró que para b2AR, dos estereoisómeros del mismo
ligando fenoterol exhiben sesgo al acoplarse preferentemente a
cualquiera de los dos Gso Gi
[64]. También es posible que ciertos ligandos recluten
preferentemente uno de los dosb-isoformas de arrestina a los
receptores, añadiendo así un nivel adicional de sesgo. Además,
diferentes ligandos pueden activar diferentes conjuntos de GRK, lo
que conduce a resultados de señalización diferenciales, como se
observa para el receptor de quimiocina, CCR7.[63]. En este caso,
CCL19 conduce a la fosforilación del receptor por GRK2/3 y GRK6,
CCL21 promueve sólo la fosforilación mediada por GRK6; Estos dos
ligandos, a su vez, muestran patrones diferenciales de
desensibilización del receptor,b-arresto en el reclutamiento yb-
redistribución de arrestina[63]. También se puede imaginar que
otras vías de señalización, además de la proteína G y b-la
señalización de arrestina, puede agregar aún más niveles de sesgo
potencial. Por ejemplo, la estimulación de AT1aR conduce a la
fosforilación de tirosina y a la activación de JAK2 (Janus quinasa 2),
una proteína citosólica típicamente implicada en la señalización del
receptor de citoquinas. Posteriormente, la activación de JAK2 da
como resultado la activación de su sustrato posterior, los factores
de transcripción, el transductor de señal y el activador de la
transcripción (STAT) 1 y 2.[sesenta y cinco]. Además, no todas las
células expresan todos los efectores (p. ej., proteínas G, GRK, b-
arrestinas, etc.) a niveles similares y dependiendo de la
 Revisar Tendencias en Ciencias BioquímicasSeptiembre de 2011, vol. 36, núm. 9

tipo de célula/tejido y los niveles de efectores, los ligandos también
pueden mostrar sesgo en uno u otro nivel de regulación del
receptor[66].
Globalización: 'ómicas' en marchab-arrestinas
Como la lista de vías de señalización queb-Las arrestinas pueden
regular en respuesta a la activación de 7TMR ha aumentado, al igual
que la aplicación de enfoques globales para obtener una visión más
completa deb-Señalización dependiente de arrestina y eventos
reguladores en las células. En particular, dos enfoques de biología de
sistemas basados en espectrometría de masas (MS) han tenido como
objetivo proporcionar conocimientos novedosos sobreb-señalización
dependiente de arrestina de manera imparcial. Estos enfoques utilizan
esencialmente los avances recientes de la EM para, en primer lugar,
identificar nuevos socios de interacción deb-arrestinas tras la activación
de AT1aR y segundo, para obtener una lista extensa de proteínas aguas
abajo de AT1aR que podrían estar reguladas porb- arrestinas mediante
fosforilación o desfosforilación.
Elb-interactoma de arrestina
Este es un enfoque destinado a obtener una lista completa deb-
arrestin socios vinculantes. Células HEK-293 que sobreexpresan
AT1aR junto con cualquiera deb-La arrestina 1 o 2 se estimularon
con vehículo o angiotensina II seguido de inmunoprecipitación
utilizando la etiqueta FLAG en el extremo C terminal deb-arrestinas
seguidas de la identificación de asociados
proteínas por EM[67]. Se identificaron un total de 337 proteínas no
redundantes comob-proteínas de unión a arrestina: se encontró que
173 interactúan conb-Se descubrió que arrestina 1 y 266 interactúan
conb-arrestina 2. Curiosamente, se encontró un número significativo
de proteínas en complejo conb-arrestinas en condiciones basales. Sin
embargo, tanto el número de proteínas como la cobertura de proteínas
que interactúan cambiaron significativamente tras la estimulación con
angiotensina, lo que es consistente con cambios dependientes de la
activación del receptor en lab-perfil de arresto. Aunque algunas de las
proteínas identificadas podrían representar interacciones indirectas (p.
ej.b-Andamiaje dependiente de arrestina de un complejo de
señalización en el que no todos los componentes se unen
directamente.b-arrestinas), la puntuación de confiabilidad (su
probabilidad de estar en complejo conb-arrestinas) es alto por dos
razones. Primero, varias proteínas que se ha informado que
interactúan conb-Las arrestinas, como la proteína fosfatasa 2A (PP2A),
la clatrina, AP2 y la fosfodiesterasa 4D, específica de AMPc (PDE4D),
estaban presentes en esta lista. En segundo lugar, las pruebas
secundarias de varios "aciertos" mediante transferencia Western
reflejaron esencialmente un patrón consistente con los datos de MS.
Además, desde la publicación de este estudio, se han confirmado de
forma independiente varias interacciones (por ejemplo, Kif 3A y TRPV4).
Los resultados de este estudio destacan al menos dos puntos clave.
Primero,b-Las proteínas que interactúan con la arrestina están
ampliamente distribuidas en los compartimentos subcelulares, con una
mayoría en el citoplasma y el núcleo, pero

(a) (b)

Sala de emergencias y Golgi (2%) 7,4%

Mitocondria (2%) 7,1%M 25,1%
o

Otros is
nocid

1,8% c el Señal
Me (6%) can án
mb 2,7% aco a
Desco

ran l de ea transducción
mpañ ion
a (5% enzima ante es s
Nucléolo ) 5,3% metabó
(5%) lica
Citoplasma Celular
Núcleo (53%) organización Ácido nucleico
(26%) vinculante
15,1%

35,5%

(C) (d)
10,9%
32,2%
o

5,2%
nocid

Desconocido
(19%) Mis
Citoplasma cel
Desco

Ciclo án eas Señal

(35%) celu
10,1% desar lar & transducción
Membrana rollo
(13%)
dor a
porta ó lic
trans ab
Núcleo 6,9%
n

et
ni ar
ció

Ácido nucleico
am
ga ul

(33%)
za

zim
or Cel

vinculante
en
6,3%

8,0% 20,4%
tiLicenciatura

Figura 2.El alcance global de lab-interactoma de arrestina yb-eventos de fosforilación dependientes de arrestina. (a)Subcelular y (b)distribución funcional deb-Proteínas que interactúan con arrestina con
y sin estimulación del receptor de angiotensina subtipo 1a (AT1aR) por angiotensina II.[66]. Tenga en cuenta que la mayoría deb-Los compañeros de interacción de la arrestina se distribuyen en el
citoplasma, pero una fracción significativa son proteínas nucleares, lo que resalta las posibles funciones nucleares deb-arrestinas. La distribución funcional deb-Las proteínas de unión a arrestina
resaltan sus funciones principales en la señalización celular, la organización celular y la unión de ácidos nucleicos. (C)Subcelular y (d)distribución funcional de las proteínas que se fosforilan tras la
activación del AT1aR por unb-ligando sesgado por arrestina, SII (Sar1, isla4, isla8-angiotensina II)[66]. Tenga en cuenta que tanto la distribución celular como funcional de las proteínas que se fosforilan/
desfosforilan tras la estimulación SII en unb-La manera dependiente de arrestina imita el patrón de proteínas identificadas en la pantalla de interactómica.

461
Revisar
también en nucléolo, membrana plasmática, mitocondrias, retículo
endoplasmático (RE) y Golgi (Figura 2a). Segundo,b- Las proteínas
que interactúan con arrestina se clasifican en las categorías
funcionales de transducción de señales, organización celular,
unión de ácidos nucleicos, enzimas metabólicas, chaperonas y
canales iónicos, lo que indica la naturaleza diversa de los procesos
en los queb-Las arrestinas están potencialmente involucradas (
Figura 2b). Estas proteínas incluyen quinasas (p. ej., ERK, AKT),
fosfatasas (p. ej., PP2A, slingshot), proteínas nucleares (p. ej.,
histonas desacetilasas, HDAC), proteínas de membrana distintas de
7TMR (p. ej., TRPV4), proteínas implicadas en la transcripción (p. ej.,
STAT1) y traducción (p. ej. factor de elongación eIF-4B). Esta diversa
gama de proteínas que interactúan resalta las funciones
ampliamente distribuidas deb-arrestinas en la señalización celular.
Incluso en condiciones basales (es decir, no estimuladas),b-Las
arrestinas parecen estar en complejo con varias proteínas
diferentes, lo que sugiere que incluso sin activación del receptor,
pueden armar varias proteínas, lo que podría ser crucial para
secuestrar estas proteínas de sus sitios de acción para ejercer una
regulación negativa de ciertas vías.
Aunque este estudio proporcionó la primera prueba exhaustiva
para identificar nuevasb-arrestando a los compañeros de interacción,
hay varias maneras en que este enfoque podría utilizarse para producir
información aún más interesante y novedosa. En primer lugar, no
todos los 7TMR necesariamente convergen en los mismos resultados
funcionales. Por lo tanto, no sería sorprendente que, tras la activación
por diferentes 7TMR, elb-El interactoma de arrestina muestra perfiles
algo que no se superponen con los obtenidos con el AT1aR. Tal
hallazgo resaltaría el papel deb- Regulación dependiente de arrestina
de las vías de señalización en el contexto de un sistema receptor
específico. También sería interesante explorar cómob-El interactoma de
arrestina cambia en respuesta a un ligando sesgado. Aunque se podría
esperar una superposición significativa entre las proteínas que
interactúan conb-arrestinas en respuesta a un ligando imparcial versus
ligando sesgado, también podría haber conjuntos específicos de
proteínas que interactúan o pierden interacción conb-arrestinas en una
de estas dos condiciones. De hecho, porqueb-Los procesos
dependientes de arrestina parecen tener patrones temporales
distintos, no sería sorprendente si losb-El interactoma de arrestina
cambia en diferentes momentos durante los eventos de señalización.
Por ejemplo, el proceso de desensibilización ocurre a los pocos
segundos de la activación del receptor, perob-La señalización
dependiente de arrestina parece tener un inicio algo más lento. Por lo
tanto, se podría esperar identificar proteínas involucradas en la
desensibilización del receptor y la endocitosis, como la clatrina o AP2 en
puntos temporales tempranos y proteínas de señalización aumentadas
como ERK o Srcat en puntos temporales posteriores. Además, sería
muy interesante, y probablemente fisiológicamente más relevante,
realizar análisis similares utilizando células primarias o incluso tejidos
completos.
Mapas de señalización celular: fosfoproteómica. Casi todas las
vías de señalización en la célula implican la fosforilación y/o
desfosforilación de proteínas clave. [68,69]. Estos eventos son
cruciales para activar e inactivar enzimas clave, incluidas las
quinasas y fosfatasas, promover las interacciones proteína-
proteína, regular a la baja las proteínas de la membrana y
promover la ubiquitilación y degradación de las proteínas.
[68,69]. Por lo tanto, obtener una lista exhaustiva de proteínas
cuyo estado de fosforilación cambia en unb-manera
dependiente de arrestina al activarse
462
Tendencias en Ciencias BioquímicasSeptiembre de 2011, vol. 36, núm. 9
La elaboración de un 7TMR es de suma importancia para obtener
información clave sobreb-Vías de señalización de arrestina. De
hecho, dos enfoques paralelos pero independientes han abordado
muy recientemente esta cuestión.[70,71]. Ambos enfoques utilizan
la tecnología de vanguardia de la fosfoproteómica cuantitativa
para observar cambios en los niveles de fosforilación de manera
imparcial tras la activación de AT1aR. Un estudio utilizó unb-
ligando sesgado por arrestina del AT1aR, a saber, SII, para activar
selectivamenteb-vías de señalización dependientes de arrestina y
utilizó la estrategia de etiquetado de isótopos estables de
aminoácidos en cultivo celular (SILAC) junto con MS para identificar
cambios en la fosforilación[70]. Este estudio identificó 171
proteínas (222 fosfopéptidos diferentes) que mostraron una mayor
fosforilación y 53 proteínas (66 fosfopéptidos diferentes) que
mostraron una disminución de la fosforilación tras la estimulación
SII. Utilizando los datos obtenidos de lab-pantalla de interactómica
arrestina[67], los autores utilizaron múltiples herramientas
bioinformáticas para construir una red de quinasas involucradas
enb-señalización dependiente de arrestina aguas abajo del AT1aR.
Por el contrario, un estudio diferente utilizó tanto el ligando
imparcial angiotensina II como el ligando sesgado SII para obtener
un patrón comparativo de proteína G dependiente yb-señalización
dependiente de arrestina tras la activación de AT1aR[71]. Este
enfoque también utilizó SILAC e identificó un total de 1183 sitios de
fosforilación regulados positivamente en 527 fosfoproteínas; El
36% de estos fosfositos (es decir, 427 fosfositos) se superpusieron
en los fosfoproteomas SII y angiotensina. Curiosamente, se
encontró que un conjunto más pequeño de sitios (un total de 58)
estaban regulados exclusivamente por SII, y no por angiotensina,
lo que indica que un número significativo de proteínas aguas abajo
de AT1aR están exclusivamente fosforiladas en unb-arrestar de
manera independiente sin ninguna participación de la señalización
dependiente de la proteína G.
De estos estudios se pueden extraer varias conclusiones
interesantes. Similar ab-proteínas que interactúan con arrestina, la
distribución funcional y celular de las proteínas fosforiladas o
desfosforiladas en unb-manera dependiente de arrestina son
bastante diversos. Estas proteínas están ampliamente distribuidas
entre la membrana plasmática, el citoplasma y el núcleo (Figura 2
C). Además, el análisis funcional revela que estas proteínas se
dividen en varias categorías diferentes, incluida la transducción de
señales, la organización celular, la unión de ácidos nucleicos y las
enzimas metabólicas.Figura 2d). Curiosamente, se identificó una
gran cantidad de quinasas en estas pantallas, incluidas varias
MAPK, control de división celular 42 (CDC42), quinasa S6 ribosomal,
quinasa activada por AMP (AMPK) y tirosina quinasas no
receptoras. Aunque anteriormente se había informado que
algunas de estas quinasas estaban reguladas porb- arrestinas,
estos estudios identificaron varias proteínas (por ejemplo, AMPK)
cuyasb-La fosforilación dependiente de arrestina se desconocía
previamente. El enriquecimiento de quinasas en el fosfoproteoma
es especialmente notable dado que la mayoría de las quinasas se
activan tras la fosforilación o desfosforilación; por lo tanto, este
hallazgo proporciona pistas importantes sobre las funciones
específicas deb-arrestinas en diversas vías de señalización.
Además, hubo una superposición significativa entre los
fosfoproteomas inducidos por angiotensina y SII; sin embargo,
varias docenas de proteínas fueron fosforiladas sólo en respuesta
a la estimulación SII, lo que sugiere la existencia deb-vías de
señalización de arrestina distintas de
 Revisar Tendencias en Ciencias BioquímicasSeptiembre de 2011, vol. 36, núm. 9

agonista

PAG

PÁGINAS

"-arrestin
MAP4K

MAP4K2/3/4 PAK2 MAP4K5

MAP3K2
MAP3K

RAF1 MAP3K1 MAP3K4 MAP3K12 MAP3K5 MAP3K7 MAP3K11 MAP3K14

MAP3K3
MAP2K

MEK1 MEK5 MEK7 MEK4

MEK3/6
MAPK

ERK1/2 MAPK7 JNK1 JNK2 JNK3 MAPK11 p38

ikk!
RSK1/2/3 ikk"
MSK1
Objetivos

MNK1 MSK1 C-junio ESTADÍSTICA1

¡NF!B

tiLicenciatura

Figura 3.Un ejemplo de unb-Red de señalización de la proteína quinasa activada por mitógenos (MAP) dependiente de arrestina aguas abajo del subtipo 1a del receptor de angiotensina (AT1aR). Las
proteínas resaltadas en rojo interactúan conb-arrestinas, las proteínas delineadas en verde se fosforilan tras la activación de AT1aR por unb-ligando sesgado por arrestina, SII (Sar1, isla4, isla8
-angiotensina II). La proteína resaltada en rojo y delineada en verde estaba presente tanto en elb-interactoma de arrestina y elb-fosfoproteoma de arrestina. Las proteínas delineadas en azul están
presentes en las vías correspondientes de la MAP quinasa, pero no se identifican en la pantalla proteómica. Tenga en cuenta que esta cifra resalta un potencialb- La red de señalización de MAP quinasa
dependiente de arrestina basada en estudios de interactómica y fosfoproteómica y todos los módulos de MAP quinasa descritos aquí no necesariamente han sido documentados para estar regulados
porb-arrestinas. Las flechas punteadas indican las vías que aún no han sido confirmadas por estudios independientes como activadas directamente porb-arrestinas, las flechas continuas indican las vías
que se han estudiado en detalle y que están bien establecidas para ser moduladas porb-arrestinas.

Los dependientes de la proteína G. Las herramientas bioinformáticas,
utilizadas para obtener una visión de todo el sistema, generaron unb-red de
quinasa dependiente de arrestina que resalta las funciones potenciales deb-
arrestina en varias vías previamente no previstas, como las implicadas en el
ciclo celular y la reparación de daños en el ADN.[70]. Estos estudios también
identificaron motivos de consenso dentro de varias quinasas que están
enriquecidas entre las fosfoproteínas y, por lo tanto, proporcionan una
mejor comprensión de las quinasas que podrían estar implicadas de manera
crucial enb-señalización de arrestina. Los grandes conjuntos de datos
generados a partir de estos estudios proteómicos se pueden utilizar para
construirb-redes de señalización dependientes de arrestina que deberían
poder proporcionar pistas sobre nuevas
niveles de nodos reguladores en la señalización 7TMR (figura 3). Es
importante señalar aquí que ambos estudios de fosfoproteómica
se realizaron utilizando células que expresan AT1aR. Como se
conservan varios mecanismos de señalización de 7TMR en
diferentes sistemas receptores, es probable que también exista
una gran cantidad de eventos de fosforilación descritos en estos
estudios para otros receptores. Sin embargo, al mismo tiempo,
estudios similares con otros receptores podrían revelar redes
reguladoras novedosas y no superpuestas que pueden ser
específicas del tipo de receptor.
A pesar de que la función de señalización deb-Las arrestinas
se descubrieron hace sólo unos diez años, ha habido

463
Revisar
Desde entonces ha habido avances notables en este campo. No sólo se
han identificado varias conexiones imprevistas, sino también la
importancia fisiológica deb-La señalización de la arrestina ha
comenzado a descifrarse a partir de estudios realizados en modelos
animales.[72]. Este conjunto de trabajos sugiere queb-Los eventos
reguladores independientes de la detención son muy probablemente
tan diversos e igualmente importantes desde el punto de vista
fisiológico como los mediados por las proteínas G. Los avances
metodológicos en el área de la EM y la biología de sistemas no sólo han
permitido generar visiones globales deb-señalización dependiente de
arrestina, pero también son muy prometedores para descubrir nuevas
redes reguladoras de una manera relativamente rápida. De hecho,
estos análisis globales deb-Los eventos mediados por arrestina sirven
como sólidas herramientas generadoras de hipótesis. Por ejemplo, la
interacción deb-Las arrestinas con el miembro de la familia kinesina 3A
(KIF3A), descubiertas por primera vez mediante el enfoque de la
interactómica, llevaron al descubrimiento de un nuevo mecanismo de
translocación suavizada al cilio primario.[73]. De manera similar, el
análisis de TRPV4, que fue identificado como un compañero de
interacción en elb-interactoma de arrestina, condujo al descubrimiento
de un nuevo mecanismo de regulación negativa de TRPV4 a través deb-
ubiquitilación mediada por arrestina[74]. De manera similar, el análisis
fosfoproteómico identificó la reorganización del citoesqueleto como
una de las vías de señalización enriquecidas aguas abajo de AT1aR;
Varios actores clave en esta vía (por ejemplo, cofilina, tirachinas) sufren
cambios en su estado de fosforilación tras la estimulación del SII. Este
hallazgo motivó un análisis bioquímico posterior que no sólo confirmó
los hallazgos de la fosfoproteómica sino que también reveló que las
funciones deb- Las arrestinas en la regulación de la reorganización
citoesquelética mediada por AT1aR son análogas a las funciones deb-
arrestinas reportadas anteriormente para el receptor 2 activado por
proteasa (PAR2)
[75]. En el caso de AT1aR,b-arrestinas andamio tirachinas 1 para
mediar en la desfosforilación de cofilina; sin embargo, para PAR2,
b-Las arrestinas median la desfosforilación de la cofilina a través
de la cronofina de andamiaje. Lo más probable es que este
enfoque de la biología de sistemas oriente la evolución del campo
y ayude a descubrir una serie de redes reguladoras novedosas
que, de otro modo, tardarían mucho más en dilucidarse mediante
procesos iterativos convencionales.
Diversidad funcional deb-arrestinas y la cuestión de la
especificidad
Como se mencionó anteriormente, hay aproximadamente 800 genes
que codifican 7TMR en el genoma humano. Aunque la arquitectura
básica de siete haces transmembrana está muy conservada, existe
relativamente poca similitud de secuencia entre las secuencias
primarias de los receptores. A pesar de esto, los paradigmas centrales
de la proteína G yb-La señalización independiente de la detención es
válida para la mayoría de los receptores examinados hasta la fecha.
Obviamente, esto plantea la cuestión de cómo se determina y controla
estrictamente la especificidad de la señalización. Las células de
mamífero expresan 16 G.asubunidades, 5Gb
subunidades y 12 Gjsubunidades que pueden producir suficientes
permutaciones combinatorias para dar cuenta de la gran cantidad
de receptores. Por el contrario, sólo hay cuatro subtipos de GRK
que son ubicuos en las células y sólo dos isoformas deb-arrestinas
que son responsables de la desensibilización, internalización y
señalización a través de un gran repertorio de 7TMR. Debido a que
las GRK son quinasas, su actividad depende de la presencia de
serina y treoninas en una
464
Tendencias en Ciencias BioquímicasSeptiembre de 2011, vol. 36, núm. 9
contexto apropiado. Regulación concertada deb-La detención de
eventos independientes, por el contrario, exige varios niveles de
circuitos reguladores.
Una pista sobre la multiplicidad funcional deb-Las arrestinas
provienen de sus patrones de localización intracelular. Mientrasb-
La arrestina 1 se localiza principalmente en el citoplasma, contiene
una señal de localización nuclear y se sabe que se transloca al
núcleo en respuesta a estímulos específicos.
[76]. Es posible que la piscina nuclear deb-La arrestina 1 participa
en una variedad de procesos que son distintos de los regulados
por el conjunto citoplasmático deb-arrestin 1, ampliando así su
cobertura funcional. Por el contrario,b-arrestin 2 alberga una señal
de exportación nuclear[77]lo que facilita su exclusión nuclear,
posiblemente asegurando que las dos isoformas puedan participar
simultáneamente en eventos de señalización que no se
superpongan. Obviamente,b-las arrestinas no pueden unirse a las
337 proteínas presentes en el interactoma al mismo tiempo; en
cambio, lo más probable es que interactúen con distintos
conjuntos de proteínas en diferentes momentos de señalización, lo
que genera diferentes resultados funcionales. Aunque las
interacciones mutuamente excluyentes deb-Las arrestinas con sus
compañeros de unión no se han documentado directamente, hay
informes que sugieren interfaces de unión al menos parcialmente
superpuestas para diferentes proteínas enb-arrestinas. Por
ejemplo, c-Src, Mdm2 y PDE4 parecen compartir una interfaz de
interacción en el dominio N deb-arrestinas, y por lo tanto parecería
probable que su unión ab-las arrestinas serían mutuamente
excluyentes.
Otro nivel de especificidad puede surgir deb-oligomerización de
arrestina[78–81]. Hay varias líneas de evidencia que sugieren queb-
Las arrestinas pueden formar homodímeros y heterodímeros, al
menos cuando se sobreexpresan en las células. Esto se documentó
por primera vez mediante estudios de transferencia de energía por
resonancia de bioluminiscencia (BRET) y co-inmunoprecipitación, y
recientemente la interfaz de homodimerización parab-La arrestina
2 se mapeó mediante análisis de matriz de péptidos puntuales.
Curiosamente, la coexpresión deb-La arrestina 1 y 2 en las células
HEK previene la localización nuclear deb-arrestina 1 que a su vez
podría afectarb-eventos de señalización dependientes de arrestina
1. También se puede imaginar la posibilidad de queb-Los dímeros
de arrestina presentan una interfaz única y diferente para las
interacciones con distintos conjuntos de proteínas que la
presentada porb-monómeros de arrestina. Recientemente se
informó que la interacción de Mdm2 requiereb-oligomerización de
arrestina 2 como perjudicial b-La oligomerización de arrestina 2
mediante la mutación de los sitios de unión de IP6 reduce su
interacción con Mdm2. Sin embargo, las interacciones de este
mutante con oligomerización alterada con otros socios de unión
como clatrina, AP2 y ERK2 no se ven afectadas. Además,
recientemente se demostró que las mutaciones enb-arrestina 2,
que redujo la homodimerización, también inhibióbActivación de
ERK dependiente de 2AR sin afectar la internalización del receptor.
Otra diferencia importante en la especificidad funcional deb-Se
observa arrestinas dependiendo del grado y el sitio de
ubiquitilación. Por ejemplo, sitios de ubiquitilación putativa no
superpuestos enb-La arrestina 2 parece gobernar su interacción
con diferentes receptores y la posterior endocitosis y señalización.
[82]. Por lo tanto, dependiendo del contexto de estimulación (por
ejemplo, receptor, ligando, etc.), podría surgir un patrón
diferencial de ubiquitilación para afinar la respuesta posterior. Es
tentador especular que tipos similares de
 Revisar Tendencias en Ciencias BioquímicasSeptiembre de 2011, vol. 36, núm. 9

La regulación también puede resultar de otras modificaciones
postraduccionales deb-arrestinas (por ejemplo, fosforilación y
sumoilación). Todos estos mecanismos potenciales para gobernar la
especificidad funcional deb-Las arrestinas dependen en última
instancia de la capacidad deb-las arrestinas adoptan múltiples
conformaciones en respuesta a una estimulación específica.
Base mecanicista de la señalización sesgada.
El hecho de que los dependientes de la proteína G yb-El hecho de que
las vías de señalización dependientes de arrestina sean
farmacológicamente separables (es decir, que sea posible diseñar
ligandos que puedan desencadenar selectivamente una u otra vía)
aboga por la existencia de múltiples conformaciones de receptores
activos. En este marco conceptual, se podría imaginar que un ligando
insesgado induce una conformación que es capaz de acoplarse a
ambos brazos de señalización aguas abajo. Sin embargo, se induce una
conformación distinta del receptor cuando está ocupado por un
ligando sesgado (Figura 4a). Obviamente, estas conformaciones de
receptores probablemente se superpongan significativamente dado
que el espacio conformacional del haz 7TMR está restringido. Aún así,
el bolsillo de unión del ligando, al unirse a un ligando sesgado, debe
mostrar un conjunto de interacciones que sean significativamente
diferentes y no superpuestas con las inducidas tras la unión de un
ligando no sesgado. Estas diferencias en el bolsillo de unión al ligando
deben conducir a su vez a
correspondientes reordenamientos estructurales de las hélices
transmembrana, así como de la cara intracelular del receptor. Debido a
que la superficie intracelular del receptor es la interfaz principal para el
acoplamiento receptor-efector, estos distintos cambios estructurales en
la superficie intracelular del receptor deberían determinar si el receptor
se acopla a una proteína G o a una proteína G.b-arrestina y, por lo
tanto, cuál de estos brazos de señalización se activa. Aunque falta
evidencia directa de conformaciones distintas del receptor en
respuesta a ligandos imparciales y sesgados, algunos hallazgos
sugieren que ligandos funcionalmente diferentes pueden inducir
conformaciones de receptores significativamente diferentes.[83,84].
Por ejemplo, la espectroscopia de fluorescencia se ha utilizado para
monitorear cambios conformacionales en purificados y reconstituidos.
b2AR marcado con un fluoróforo ambientalmente sensible,
monobromobimano en Cys271en el tercer bucle intracelular del
receptor. Los experimentos de extinción de la fluorescencia bimana
que utilizan este receptor sugieren que los agonistas totales y parciales
no sólo alteran los interruptores de activación cruciales en elb2AR en
diferentes grados, pero también agonistas parciales con diferentes
eficacias son capaces de afectar estos interruptores en diferentes
grados.[83]. Más recientemente, un método basado en transferencia
de energía por resonancia de fluorescencia intramolecular (FRET) bSe
utilizó el biosensor 2AR para monitorear los cambios conformacionales
del receptor en células vivas. Un análisis sistemático

(a) (b)

R R

!-arr
sesgado
receptor

agonista
agonista !-arr agonista sesgado

R* R* * R* *

PAG

PAG
PAG PAG PAG
PAG
PAG PAG
"
GRAMO
GRAMO!

#
GRAMO "
GRAMO GRAMO!

!-arrestin
GRAMO" GRAMO!

!-arrestin !-arrestin GRAMO#

GRAMO#

!-arr* !-arr* * !-arr* *

tiLicenciatura

Figura 4.Una representación esquemática de un marco conceptual simple para explicar la base mecanicista deb-señalización sesgada por arrestina. (a)La unión de un ligando imparcial al receptor induce
una conformación activa del receptor (R*), mientras que la unión de unb-El ligando sesgado por arrestina promueve una conformación activa diferente del receptor (R**). Las distintas conformaciones
del receptor están acopladas a las correspondientes conformaciones activas deb-arrestar (b-arreglo * yb-arr **) que gobiernan diferentes resultados funcionales. (b)Unión de un agonista imparcial a un
b-El receptor sesgado por arrestina también induce una conformación distinta en el receptor que probablemente sea similar a la inducida por unb-ligando sesgado por arrestina al receptor de tipo
salvaje y una conformación correspondiente enb-arrestar. Los detalles estructurales exactos de estas múltiples conformaciones activas de receptores yb-Las arrestinas aún no se han descifrado
mediante cristalografía y otros métodos biofísicos.

465
Revisar
Los cambios de FRET en respuesta a la estimulación del ligando
revelaron diferencias cualitativas y cinéticas en las conformaciones
inducidas por dos agonistas endógenos del receptor, la epinefrina
y la norepinefrina.[84]. Una evidencia aún más sólida de la
existencia de múltiples conformaciones activas de 7TMR proviene
de la observación de que ciertos receptores mutantes (p. ej.b2AR
TYY[85]y AT1RAAY[86]) no exhiben ninguna activación detectable de
la señalización de la proteína G heterotrimérica clásica incluso tras
la estimulación por sus agonistas imparciales endógenos. Sin
embargo, estos receptores mutantes reclutan con fuerzab-
arrestinas y activarb- Señalización dependiente de arrestina. Estos
hallazgos indican claramente la incapacidad de estos receptores
mutantes para adoptar una conformación que se acople fácilmente
a sus proteínas G afines y argumentan que existe una
conformación específica que se acopla selectivamente ab-
arrestinas (Figura 4b). Los aspectos estructurales de estas
múltiples conformaciones activas de los 7TMR se conocen muy
poco en la actualidad y requerirán una caracterización biofísica y
cristalográfica exhaustiva. Curiosamente, una estructura cristalina
delbMuy recientemente se determinó el 2AR unido a un agonista
completo sintético (es decir, ligando imparcial) en una
conformación activa. Esta estructura muestra un movimiento hacia
afuera significativo de TM5 y TM6 y un movimiento hacia adentro
de TM3 y TM7 hacia el núcleo central del haz de 7TM en
comparación con la estructura cristalina previamente determinada
delb2AR en una conformación inactiva[87]. Será interesante ver
cómo cambian estas características cuando las estructuras
cristalinas del bSe determinan 2AR en conformaciones de
señalización alternativas.
La hipótesis del código de barras
Las diferencias conformacionales a nivel del receptor deben ser
reconocidas por efectores inmediatos posteriores, como los GRK y
b-arrestinas para iniciar conjuntos específicos de respuestas
funcionales. Para varios receptores diferentes, el agotamiento de
GRK2/3 o GRK5/6 ejerce efectos claramente distinguibles sobre la
regulación y señalización del receptor.[88,89]. GRK2/3 parece ser
responsable de la fosforilación masiva del receptor y su
agotamiento afecta negativamente la internalización del receptor y
b-arrestar el reclutamiento pero no b-señalización mediada por
arrestina. Por el contrario, el agotamiento de GRK5/6 parece
reducir significativamenteb-señalización de arrestina a ERK1/2,
pero tiene efectos relativamente menores en la internalización yb-
arresto en el reclutamiento. Estas observaciones proporcionan
evidencia indirecta de la idea de que diferentes conjuntos de GRK
fosforilan distintos sitios no superpuestos en los receptores que a
su vez constituyen un "código de barras" de fosforilación en el
receptor. Por lo tanto, es tentador especular que la conformación
del receptor inducida por un ligando insesgado activará GRK
específicas que diferirán, parcial o completamente, de aquellas
activadas por las conformaciones del receptor inducidas por un
ligando sesgado. Dichos códigos de barras de fosforilación podrían
afectar significativamente de manera específica la topología y
carga de la cara intracelular del receptor, gobernando a su vez la
conformación adoptada por los reclutados.b-arrestinas. Las
distintas conformaciones adoptadas porb-Las arrestinas en
respuesta a códigos de barras de fosforilación diferencial en el
receptor podrían entonces dirigirb- arrestinas para participar en
funciones específicas. Aunque la fosforilación diferencial del
receptor por diferentes GRK al
466
Tendencias en Ciencias BioquímicasSeptiembre de 2011, vol. 36, núm. 9
Aún no se ha demostrado directamente la estimulación por ligandos
imparciales versus ligandos sesgados, los datos emergentes apuntan a
la existencia de fosforilación diferencial del receptor en respuesta a
agonistas completos versus parciales.[66]y cierta preferencia por la
fosforilación de sitios específicos por GRK específicas
[90].
in vitroestudios de la interacción de receptores aislados no
rodopsina conb-Las arrestinas han sido técnicamente muy
desafiantes. Por lo tanto, se ha utilizado un péptido fosforilado
correspondiente al extremo C del receptor de vasopresina
como imitador del receptor-b-interacción arrestina[91,92]. La
unión de estos fosfopéptidos induce un cambio
conformacional enb-arrestinas similares a las inducidas en la
arrestina visual tras la unión de un fosfopéptido de rodopsina
[93]. Los análisis limitados de proteólisis y de EM revelan que el
cambio conformacional inducido por el fosfopéptido conduce a
la liberación del extremo C de las arrestinas, que a su vez
expone su sitio de unión a la clatrina. Tal modelo es compatible
con el mecanismo de activación deb-arrestinas tras el
reclutamiento de 7TMR fosforilados y con la capacidad deb-
arrestinas para promover la internalización del receptor. Mayor
apoyo para un cambio conformacional enb-La arrestina 2 al
unirse al receptor activado se obtiene mediante experimentos
con un biosensor basado en BRET en células vivas.[94,95]. La
idea de un código de barras de fosforilación en el receptor
aborda la cuestión de b-arrestina cambia
conformacionalmente un paso más allá y sugiere que múltiples
conformaciones activas distintas deb- Se inducen arrestinas
correspondientes al patrón de fosforilación del receptor. De
hecho, una fuerte evidencia de tal posibilidad proviene de un
estudio que utilizó un sistema basado en BRET descrito
previamente.b-biosensor de arrestina en células vivas
[95]. Cambios estructurales enb-La arrestina provoca un
reordenamiento de los dos extremos de la molécula, alterando así la
eficiencia de BRET de tal manera que indica cambios conformacionales.
En tres sistemas receptores diferentes, la activación del receptor por un
ligando imparcial aumenta la señal BRET, lo que indicab-reclutamiento
de arrestina al receptor y un cambio conformacional.
Sorprendentemente, cuando el receptor es estimulado por unb-
agonista sesgado por arrestina, hay una disminución en la señal BRET,
lo que sugiere queb-La arrestina adopta una conformación diferente al
reclutarse en el receptor. Es tentador especular que un aumento en la
señal BRET corresponde a una conformación deb-arrestina, que es
capaz tanto de desensibilización como de señalización del receptor,
mientras que una disminución en la señal BRET refleja una
conformación que participa selectivamente en la señalización. De
hecho, el uso deb- Los mutantes del receptor sesgados por arrestina
apoyan firmemente esta hipótesis. Se observa una señal BRET fallecida
cuandob- mutantes sesgados por arrestina delb2AR y AT1aR son
estimulados por ligandos imparciales. Incluso un ligando imparcial sólo
puede colocar al receptor en una conformación que participa
selectivamente enb-señalización de arrestina; por lo tanto, reclutadob-
La arrestina probablemente adoptará una conformación de
señalización que en este caso se refleja en una disminución de la señal
BRET. Estos hallazgos establecen la noción de queb- Las arrestinas no
solo adoptan múltiples conformaciones activas sino que también estas
conformaciones están acopladas a distintos resultados funcionales. Un
objetivo interesante, pero muy desafiante, es mapear los detalles
estructurales de estos distintos cambios conformacionales, ya sea
mediante herramientas biofísicas indirectas o rayos X.
Revisar
Recuadro 2. Áreas que requerirán avances significativos en los próximos
años
1.Caracterización estructural deb-complejos de señalización de arrestina.
Con las estructuras cristalinas de las cuatro isoformas deb-arrestinas
disponibles, el siguiente paso será atrapar los complejos deb-
arrestinas con sus compañeros que interactúan. Estas estructuras
deberían arrojar luz sobre la interfaz de interacción, la plasticidad
funcional y las múltiples conformaciones de estas moléculas
multifuncionales.
2.Caracterización estructural del receptor.b-complejos de señalización de
arrestina.Aunque los fosfopéptidos correspondientes al extremo C de los
receptores se han utilizado como sustitutos para estudiar los receptores-b-
interacciones arrestina, una comprensión completa de estas interacciones
requerirá la cocristalización de los receptores con b-arrestinas. Dichos
experimentos deberían proporcionar información directa sobre la interfaz
de interacción, así como sobre los cambios conformacionales dependientes
de la activación enb-arrestinas que gobiernan la actividad mediada por
receptores.b-Señalización dependiente de arrestina y eventos reguladores
en las células.
cristalografía (Cuadro 2). Además, la determinación estructural
deb-Las arrestinas en complejo con receptores activados,
preferiblemente ocupados por diferentes ligandos, ayudarán a
delinear la interfaz de interacción, así como los determinantes
cruciales responsables de inducir conformaciones
funcionalmente distintas enb-arrestinas.
Comentarios finales y perspectivas futuras
A medida que los enfoques de la biología de sistemas se vuelven más
rutinarios con los avances a nivel tecnológico y bioinformático, el
número de grandes conjuntos de datos que describen visiones globales
de las capacidades funcionales deb-Las arrestinas en el contexto de
receptores específicos o estímulos específicos deben acumularse
rápidamente. Es de esperar que esto dé como resultado la construcción
de redes de señalización en todo el sistema y descubra muchas vías
nuevas para investigaciones futuras. Sin embargo, la demostración
directa y el análisis funcional de estas redes en entornos fisiológicos
seguirán siendo un desafío. Desarrollar una mejor comprensión de las
consecuencias fisiológicas de la proteína G dependiente yb-La
señalización dependiente de arrestina para cualquier receptor
determinado será extremadamente importante (Cuadro 3). Dichos
estudios, que utilizan modelos animales knockout,
Recuadro 3. Áreas de investigación más candentes
1.Implicaciones fisiológicas deb-señalización dependiente de arrestina utilizando
modelos animales.estudios conb-ratones knockout para arrestina han
proporcionado varios conocimientos clave sobre las implicaciones fisiológicas de
b-Señalización dependiente de arrestina. A medida que surgen nuevos
paradigmas de señalización de las pantallas globales,en vivoLos estudios en
modelos animales serán cruciales para lograr una mejor comprensión de las
ramificaciones más finas de estos eventos de señalización para diseñar
herramientas para manipulaciones terapéuticas.
2.Desarrollar ligandos sesgados como terapias novedosas.Los ligandos sesgados
para varios receptores presentan una oportunidad única para explorar las
posibilidades de diseñar una nueva clase de fármacos dirigidos a 7TMR.
TRV120027, el primerob-El agonista sesgado por arrestina dirigido a AT1aR acaba
de entrar en ensayos clínicos de fase II para la insuficiencia cardíaca congestiva.
3.Enfoques de biología de sistemas para descifrarb-Redes de señalización
dependientes de arrestina.Las pantallas globales que utilizan enfoques
basados en la proteómica resaltan claramente el camino a seguir para
descubrirb- Redes de señalización dependientes de arrestina en las células.
Validación sistemática de redes novedosas.en vivo,Sin embargo, seguirá
siendo un desafío.
Tendencias en Ciencias BioquímicasSeptiembre de 2011, vol. 36, núm. 9
Será crucial para el diseño posterior de ligandos sesgados
apropiados como fármacos potenciales. La caracterización
estructural de 7TMR en múltiples conformaciones de señalización y
en complejo con sus efectores como GRK yb-Es necesario realizar
arrestinas para proporcionar detalles moleculares detallados de la
señalización sesgada. Estructuras deb-Las arrestinas en complejo
con sus propios compañeros de interacción serán cruciales para
comprender las amplias capacidades funcionales de estas
moléculas. Estas estructuras no sólo proporcionarán detalles
moleculares de las interacciones que producen resultados
funcionales distintos, sino que también deberían ayudar en el
diseño de mejores herramientas para modular estas complicadas
redes con fines terapéuticos.
Un tema importante que ha surgido en la última década es que
b-Las arrestinas, además de sus funciones clásicas en la
desensibilización de 7TMR, también participan de manera crucial
en la endocitosis, ubiquitilación y eventos de señalización de 7TMR.
Además, ahora está bien establecido queb-La señalización
dependiente de arrestina es extremadamente diversa y regula una
lista cada vez mayor de vías de señalización. Además, los efectos
regulatorios deb-Las arrestinas claramente van más allá del ámbito
de las 7TMR e involucran varias otras clases de proteínas de
membrana, como canales iónicos, transportadores, receptores
tirosina quinasas y receptores de citoquinas. Estos hallazgos
implican que las funciones regulatorias deb-Las arrestinas abarcan
un espectro más amplio de procesos fisiológicos y patológicos de
lo que se aprecia actualmente.
Expresiones de gratitud
Agradecemos a los Dres. Seungkirl Ahn, Jeffrey Kovacs y Tanya Daigle por la
lectura crítica del manuscrito. RJL es investigador del Instituto Médico
Howard Hughes (HHMI). Reconocemos el apoyo financiero de los Institutos
Nacionales de Salud (HL16037 y HL70631). Agradecemos a Donna Addison y
Quivetta Lennon por su excelente asistencia administrativa.
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Vía de la beta-arrestina para atravesar el endotelio de la microvasculatura cerebral.
Celúla143, 1149-1160
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