Acordeón Mico Lab

P1. Introducción a la Micología médica

Características generales de los hongos

 Eucariontes, heterótrofos, uni o pluricell

 Nutrición osmotrofia: digestión externa por secreción de enzimas y absorción de
moléculas digeridas.
 Contribuyen a la descomposición de la materia orgánica
Microcultivo
Componentes

 Caja Petri
 Varilla de vidrio
 Portaobjetos
 Cuadro de agar SDA
 Cubreobjetos
 Solución de agua + glicerina al 10% (no tocar porta)
Uso: para ver al MOC el micelio intacto, sin fragmentarse facilitando su idtx.

Tinción de algodón
Uso: identificar y ver hongos filamentosos  conidios e hifas
Componentes y fundamento

 Azul de algodón o azul de anilina: Colorante ácido afín a la quitina de la pared celular
 Glicerol: Humectar. Previene la desecación de la muestra
 Ac. láctico: Conservador de stc. Evita que se deformen durante la tinción
 Fenol: Fijar preparación e inactivar la flora acompañante
CHROMAgar
Fundamento: medio selectivo y de diferenciación para hongos. Los sustratos cromógenos que
se contienen son degradados por enzimas spf. del hongo en cuestión, lo que permite la
diferenciación por la liberación de compuestos de diferente color.

 C. albicans  verde
 C. krusei  rosa
 C. tropicalis  azul verdoso, azul metálico
Agar Dextrosa Sabouraud (SDA)
Uso: Aislamiento e idtx de hongos filamentosos y levaduras
Fundamento: Peptonas y caseína son fuentes de nitrógeno para el desarrollo de hongos.
Dextrosa es la fuente de energía. Se logra selectividad agregando cloranfenicol.
Sembrado:

 H. filamentosos  Puntos aislados

 Levaduras  Dilución americana
KOH 10%
Fundamento: disuelve la queratina de la muestra (piel, cabello, uña) y digiere parcialmente los
componentes protéicos. No actúa sobre los polisacáridos de las paredes celulares de los
hongos.
Cepas usadas: C. albicans y Penicillium
Reporte de hongos: Superficie, textura y color
P2. Muestra clínicas
Llevar mta al laboratorio en las primeras 2 horas de recolectada. Evitar desecación del hongo.
Levadura de cara  Malassezia furfur
Agar usado para el hisopado  SDA + aceite mineral x hongo lipofilico
Muestra escasa cultivo prioritario
Cultivos deben incubarse x 3-4 semanas antes de desecharlos o hacer un dx

P3. Antimicóticos
Micro y macrodiluciones  medio RPMI 1640 + glucosa
Mec. Acción del Fluconazol
Es un triazol. Inhibe de manera selectiva a la enzima 14-a-desmetilasa en la síntesis del
ergosterol. La depleción del ergosterol y la acumulación de compuestos intermedios en la
síntesis del mismo conllevan a una pérdida de la funcionalidad de la membrana.
Medio Muller-Hinton + 1 % glucosa
Uso: Para llevar a cabo pruebas de potencia de los antimicóticos
Cepa empleada: Candida parapsilosis.
Fundamento: usado para evaluar antimicóticos. Es un medio nutritivo y no selectivo (crece la
mayoría de hongos). Por su composición simple las sustancias pueden difundirse en él.
Se suplementa con glucosa para proporcionar un sustrato adecuado a los hongos.
Sembrado: Masivo
Concepto MIC: concentración más baja (en μg/ml) de un antimicótico que inhibe el crecimiento
de una determinada cepa micótica.
Procedimiento
 P4. Histopatología
Histopatología: Estudio de las células y el tejido enfermo bajo un microscopio.
Muestras  Biopsias  extracción de una muestra de tejido con una profundidad de 0.5-1 cm3

Procesamiento de muestras
Fijación Detener la actividad enzimática que degrade
los tejidos, para preservarlos lo más
parecidos al tejido original y que resista los
tratamientos sucesivos.
Inmovilizar moléculas
Confección de tejidos Uso de micrótomo e inclusión de tejidos en
parafina para hacerlos más duros y sean
seccionados mejor

Tinciones
Tinción Fundamento Ventajas y desventajas
H-E Hematoxilina: Catiónico, básico. V: no enmascara el color
Tiñe comp. ácidos de azul o innato de los hongos.
purpura Muestra respuesta del
Eosina: Aniónico, ácido. Tiñe tejido.
comp. básicos de rosa D: Hongos se tiñen
pobremente
Hongo: azul-rosáceo o rosa
 Gomori Metenamina Plata o Ácido peryódico  oxida
Gomori Grocott polisacáridos de pared 
aldehídos reducen la
metenamina color café o
negro x depósitos de plata
reducida
V: detección más fácil de
los hongos
D: color innato del hongo
enmascara los detalles
internos del hongo

Hongo: café a negro en fondo

T. argéntica verde claro
Ácido peryódico de Schiff ácido peryódico  oxida Mismas que GMS
polisacáridos de pared 
aldehídos

Rvo Schiff  se destiñe x

H2SO4  rxn con aldehídos 
compuesto rojo

Hongo: Rojo rosa sobre fondo

de otro color o lila
(hematoxilina)
Musicarmina de Mayer Identificar mucinas (proteínas V: diferenciación de
glicosiladas) pero no su Cryptococcus de otras
naturaleza bqm. levaduras.
D: No específico para
Hongo: Cápsula de Cryptococcus neoformans
Cryptococcus (levadura
capsulada) roja

Tejido observado  Riñón de ratón infectado con C. albicans. Tinciones PAS y H-E