Desafíos en la dosificación

de fármacos:

Las respuestas a los fármacos varían debido

a factores genéticos y adquiridos, lo que
dificulta optimizar las dosis. La mayoría de
los fármacos son efectivos solo en un
porcentaje reducido de pacientes.
La dosis efectiva para un paciente puede Factores que afectan
resultar en falla del tratamiento o efectos
adversos graves en otro paciente. la respuesta a los
fármacos
Variabilidad genética y Mutaciones genéticas,
respuesta a los fármacos: condiciones fisiológicas,
influencias ambientales,
La identificación de diferentes variantes en el patologías y la interacción con
ADN es fundamental para predecir las otros fármacos influyen en la
diferencias individuales y poblacionales en la respuesta a los medicamentos.
respuesta a los medicamentos.
Herramientas como el qPCR han sido útiles
para estudiar las variaciones interindividuales PRÁCTICA 10
metabolizadores
en la respuesta a fármacos, pero muchos
medicamentos muestran efectos variables en
diferentes poblaciones.

Variantes genéticas y
metabolizadores de
fármacos:
práctica
Se identifican distintos
Uso de azul de metileno y la metabolizadores de fármacos
lectura de la absorbancia para según la variación genética, que
comprender la influencia de puede influir en la eficacia y la
diferentes condiciones en la dosificación de los
respuesta a los fármacos. medicamentos.

MODELOS
EXPERIMENTALES IN-VITRO
DE CULTIVO CELULAR
Los modelos de cultivo celular in-vitro se
presentan como una alternativa valiosa,
permitiendo diversas aplicaciones, desde
investigaciones sobre fisiología celular
hasta pruebas de efectos de compuestos
químicos. Estos cultivos celulares se
utilizan en áreas como la
farmacogenética y la toxicología,
ofreciendo ventajas económicas y éticas.
Las líneas celulares, como HepG2, se
destacan por su utilidad en estudios de
metabolismo, toxicidad hepática y
virología debido a su similitud con células
hepáticas humanas normales.
PRÁCTICA 11
ESTUDIOS IN-VITRO
El desarrollo de fármacos sigue una
secuencia donde se prioriza la fase in-vitro
antes de la fase in-vivo para abordar las
preguntas iniciales del estudio. Resultados
negativos en etapas tempranas, tanto in-
vitro como en los primeros estudios
clínicos, pueden eliminar la necesidad de
investigaciones clínicas posteriores. Este
enfoque se basa en métodos validados y la
selección cuidadosa de
sustratos/fármacos, como en la evaluación
del metabolismo mediado por CYP. Se
exploran en fases iniciales las vías
metabólicas del fármaco, tanto in-vitro
como in-vivo, utilizando "sondas químicas"
para comprender interacciones entre
fármacos.
ENSAYO DE
INDUCCIÓN/INHIBICIÓN IN-
VITRO
En ensayos in-vitro de inducción e
inhibición, se usa una sonda química
que brilla al ser procesada por ciertos
citocromos. Esta técnica se basa en
una reacción que genera luz, similar al
mecanismo natural de luminiscencia
de las luciérnagas. El kit P450-Glo de
Promega aprovecha este principio
para evaluar la actividad de los
citocromos. Es una herramienta
altamente sensible y confiable, ideal
para aplicaciones directas en cultivos
celulares, especialmente con la línea
HepG2.

PRÁCTICA
Se investiga la interacción de un fármaco con la actividad del CYP1A2 en la línea celular HepG2 utilizando el kit P450-Glo de Promega. Se emplean
materiales como placas de cultivo, micropipetas, reactivos de cultivo celular, y el kit específico. El procedimiento implica tratar células HepG2 con
el fármaco durante 48 horas, seguido por la adición de una sustancia llamada Luciferin-1A2 diluida en un buffer. Después de un tiempo de
incubación, se evalúa la luminiscencia mediante un reactivo, y se mide con un lector especial. Los valores obtenidos representan las Unidades
Relativas de Luminiscencia (RLU), indicando la posible interacción del fármaco con el CYP1A2 en estas células.