Propiedades fisicoquímicas del ADN.

Biología Molecular.

Juárez Vega José Luis

Ranura de
menor espaciado

Ranura de
Mayor espaciado
Densidad.
 Densidad.

Ranura de
menor espaciado

Ranura de
Mayor espaciado
Densidad.
 Densidad.

🔸ADN-A
Aparece en condiciones de humedad relativa
escasa y menor temperatura de la normal.

Solo se obtiene en muestras experimentales,

no vivas.

Doble hélice dextrógira (hacia agujas del reloj).

Presenta un mayor diámetro de apertura y

separación entre bases más evidente que la
cadena de ADN típica.
 Densidad.

🔸ADN-B
Modelo predominante de la estructura secundaria del
ADN en las células de los seres vivos.

Doble hélice dextrógira.

Puentes de hidrógeno: contribuyen a la estabilidad

termodinámica de la doble hélice.

Apilamiento de bases nitrogenadas: interacción

entre electrones de las bases contiguas estabiliza toda
la estructura.
 Densidad.

🔸ADN-B
Doble hélice de ADN con enrollamiento hacia la
izquierda, levógira.
 Densidad.

Ranura de menor
espaciado

Ranura de Mayor
espaciado
 Densidad.
Electroforesis.
 Densidad - Electroforésis.
Es una técnica de laboratorio usado para separar
ADN, ARN o moléculas proteicas basadas en su
tamaño y carga eléctrica.

1. El ADN tiene una carga negativa proporcional a

su tamaño.

2. Si el ADN se somete a electroforesis a través de

un gel, las piezas más pequeñas migrarán más
rápido que las piezas más grandes.

a. Las piezas más grandes tienen problemas para

pasar a través de la matriz de gel y, por lo tanto, se
retrasan, mientras que las piezas más pequeñas
migran más fácilmente.
 Densidad - Electroforésis.
Tipo de geles

1. La agarosa se utiliza para separar moléculas de

ADN bastante grandes.

2. La poliacrilamida se utiliza para separar

pequeños fragmentos de ADN.

a. 2 a varios cientos de pares de bases

3. El tamaño del ADN se estima comparando su

migración a través del gel con moléculas de ADN
de tamaño conocido.
Desnaturalización.
 Desnaturalización.

Se trata del rompimiento de sus

puentes de hidrógeno por medio
de la implementación de:
- Calor
- Baja concentración de Sales.
- Presencia de urea, Formamida y
sustancias alcalinas.
- es un proceso reversible
Absorbancia.
 Absorbancia - Espectrofotometría

Basada en que cualquier solución con moléculas suspendidas permite el paso

de un haz de luz en proporción inversa a la cantidad de moléculas que
contiene.

La absorbancia se mide en densidad óptica (OD), y tiene valores específicos

para cada molécula en una determinada longitud de onda.
 Absorbancia - ADN y ARN

Los nucleótidos de ADN y ARN tienen una absorbancia máxima a una

longitud de onda de 260 nm / 2.600 Å (luz UV). Utilizamos la siguiente
fórmula:

Donde:
● Dilución: relación entre ADN y líquido suspensor.
● Constante: valor teórico de OD, 50 para ADN de doble cadena, 40 para
ARN, 33 para oligonucleótidos y 37 para ADN de cadena simple.
● OD: valor de absorbancia obtenido.
 Absorbancia - Efecto hipercrómico

La absorbancia del ADN se incrementa al desnaturalizar la doble

hélice, y su punto máximo ocurre cuando se descompone el ADN en
nucleótidos libres. Por ende, la absorbancia puede utilizarse para
medir el estado físico del ADN. (Efecto hipercrómico del ADN)
Cinética de Renaturalización.
Si el ADN puede desnaturalizarse
entonces podrá lograr una
renaturalización:

El ADN desnaturalizado +
enfriamiento lento (25ºC por
debajo de la temperatura de
fusión)+ sales fisiológicas
apropiadas = renaturalización e
hibridación.

Esto se logra cuando las

Hemielices se “aparean” por
complementariedad de bases.
 Cinética de Renaturalización.

La cinética de la renaturalización se
emplea como medida del “tamaño”
del genoma de los organismos y
especies.

A mayor tamaño, más complejidad y

tiempo para re establecer las
secuencias complementarias.

La velocidad de la reacción se mide

en unidades Cot= concentración del
ADN en moles de nucleótido/litro por
el tiempo (t) que tarda en lograr la
renaturalización.
 Cinética de Renaturalización.

La renaturalización es
un fenómeno de
unión al azar.

ADN renaturalizado
no contiene las
hebras originales
 Cinética de Renaturalización.

Complejidad= La suma del número de

nucleótidos que tiene cada tipo de secuencia sin
tener en cuenta el número de veces que esta
repetida.
EI ADN de los virus y las bacterias= secuencias
únicas.
Los organismos más complejos, como los
eucariontes, presentan distintos tipos de
secuencias en su genoma= secuencias únicas ,
secuencias de bajo número de copias
secuencias repetidas y altamente repetidas.
(SU,1),(SBNC, 2-10 copias),(SR, alrededor
de 11 a 999 copias),(SAR, 1000 a 1000000
copias)
Las curvas de renaturalización o
curvas Cot, de organismos que
carecen de secuencias repetidas
como virus y bacterias, tienen
forma de S, tienen un sólo punto
de inflexión o punto medio de la
reacción.
Todas las secuencias son
únicas y tienen la misma
probabilidad de encontrar a
su complementaria para
formar la doble hélice.
 Las curvas Cot de
organismos
eucariontes con
diferentes tipos de
secuencias, poseen
varios puntos de
inflexión. Cada uno
de ellos
correspondiente a un
tipo de secuencias
(únicas,
moderadamente
repetidas, repetidas y
altamente repetidas).
Esquema de
la
reasociación
del ADN
eucariótico
Hibridación.
 Que es la hibridación?
Es el proceso en el que dos
moléculas complementarias de una
sola hebra de ADN y/o ARN se unen
y forman una molécula de doble
cadena. La unión depende del
apareamiento apropiado de las
bases entre las dos moléculas de
una sola hebra.
 El ADN suele encontrarse en
forma de una molécula de doble
cadena. Sus dos hebras se unen
entre sí de forma complementaria
en un proceso llamado hibridación.
De forma natural, cuando el ADN
se replica, la nueva hebra híbrida
con la hebra que es copiada.
Según la biología molecular

Combina dos cadenas de ácidos

nucleicos en un resultado bicatenario.

esultado una menos absorción de

energía cuando la cadena es doble, en
cambio una cadena sencilla la energía
que se capta es mucho mayor porque
sus bases nitrogenadas, las cuales se
encargan de la absorción, están
expuestas a las fuentes emisoras de
energía.
 Según la química

Cuando un átomo es mezclado con

otros orbitales atómicos los cuales
crean nuevos orbitales híbridos.
Estos orbitales explican de que
forma se disponen los electrones en
cuanto a la formación de los enlaces,
todo esto dentro de la teoría del
enlace de valencia, lo que llega a
justificar la geometría molecular.
Según la ecología

La mezcla entre dos especies o

variedades de organismos diferentes
a través de diversos métodos.
Determina un cruce entre dos
especies distintas que terminan
creando un individuo diferente, con
características de los dos
organismos. Es un fenómeno
extremadamente común utilizado
para perfeccionar ciertas plantas
Según las ciencias sociales.
Esto hace referencia al mestizaje cultural,
es decir, la mezcla de diversas razas
humanas creando individuos con
características de las dos ramas, paterna
y materna.
MÉTODOS DE HIBRIDACIÓN.

1. La hélice de doble cadena (ADN) es separada

mediante un proceso físico (calor) o químico (con
una base fuerte, como la sosa), esto rompe los
enlaces por puente de hidrógeno que mantienen
unidas las dos hebras del ADN.
2. Las dos hebras complementarias se separan, el
ADN se desnaturaliza.
3. Las cadenas simples (o desnaturalizado) se
mezcla con otra muestra de cadenas simples.
4. La muestra combinada se enfría lentamente, las
moléculas sencillas se van emparejando por las
zonas complementarias (más estables
termodinámicamente) y se va formando una nueva
molécula hibridada.
Gracias por su atención.
Biología Molecular: Propiedades fisicoquímicas del ADN.
Referencias Bibliográficas.
• Nussbaum, R., McInnes, R. y Willard, H. (2016). Thompson y Thompson. Genética en medicina. (8° ed.).
Elsevier.

• Desnaturalización y renaturalización de la cadena de ADN. (2016). Recuperado de https://es.slideshare.net/

karengabrielamarcillovalencia/desnaturalizacin-y-renaturalizacin-de-la-cadena-de-adn.

• Cando Manzano, G. A. (2023). Análisis de las secuencias genéticas para la determinación de paternidad
(Bachelor's thesis, Universidad Nocional de Chimborazo).

• Rubia-Fernández, A. (2023). Técnicas y metodología de detección de patógenos en muestras de alimentos.

• Armendáriz, J., Salazar, A. y Sandoval, A. (2013). Biología Molecular. Fundamentos y aplicaciones en las
ciencias de la salud. McGRAW-HILL.