Investigación Clínica

ISSN: 0535-5133
riclinicas@gmail.com
Universidad del Zulia
Venezuela

Mariel Murga, Humberto; Centeno Sanchez, Rene; Sánchez Meraz, Wulfrano; González
Amaro, Ana María; Arredondo Hérnandez, Raymundo; Cárdenas, Jairo Mariel; Gutiérrez
Cantu, Francisco Javier
Eficacia antimicrobiana del primer ortodóncico adicionado con nanopartículas de plata.
Estudio transversal in vitro.
Investigación Clínica, vol. 57, núm. 4, diciembre, 2016, pp. 321-329
Universidad del Zulia
Maracaibo, Venezuela

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 Invest Clin 57(4): 321 - 329, 2016

Eficacia antimicrobiana del primer

ortodóncico adicionado con nanopartículas
de plata. Estudio transversal in vitro.
Humberto Mariel Murga, Rene Centeno Sanchez, Wulfrano Sánchez Meraz,
Ana María González Amaro, Raymundo Arredondo Hérnandez, Jairo Mariel Cárdenas y
Francisco Javier Gutiérrez Cantu.

Facultad de Estomatología, Universidad Autónoma de San Luis Potosí. San Luis de Potosí,
México.

Palabras clave: nanopartículas de plata; primer ortodóncico; unidades formadoras de colonias;

desmineralización.

Resumen. Se evaluó la eficacia antimicrobiana de las nanopartículas de plata (NPsAg)

incorporadas al adhesivo (primer) colocado en el esmalte dental adyacente a la aparatología
ortodóncica fija (brackets). Se realizó un estudio experimental in vitro en 40 premolares, los
cuales se dividieron en dos grupos con brackets, uno cementado con primer convencional y
otro adicionado con NPsAg; se colocaron en medios de cultivo, previamente inoculados con
Streptococcus mutans, y se tomaron muestras para hacer cultivos y conteo de unidades for-
madoras de colonias (UFC) al día 1, 15 y 30. Se observó una disminución de la presencia de
Streptococcus mutans en las muestras a los 15 días de colocado el primer con la agregación de
nanopartículas, aunque tal efecto se redujo a los 30 días. Esta reducción del efecto de las na-
nopartículas puede deberse a la inexistencia de limpieza mecánica, lo cual favoreció la agrega-
ción bacteriana sobre el biofilm, afectando su efecto antimicrobiano. Esto sugiere la necesidad
de realizar estudios in vivo que permitan observar el comportamiento de los biomateriales en
el medio bucal. Las NPsAg agregadas al primer resultan una herramienta eficaz para prevenir
la desmineralización del esmalte alrededor de la aparatología ortodóncica fija.

Autor de correspondencia: Francisco Javier Gutiérrez Cantú. Facultad de Estomatología, Universidad Autónoma de San Luis
Potosí. Av. Dr. Manuel Nava #2, Zona Universitaria, C.P. 78290; San Luis Potosí, México. Teléfono: 52 (444) 826 23 57
ext.5122. Fax: 52 (444) 826 23 57. Correo electrónico: pacogtz@uaslp.mx
322 Mariel Murga y col.

Antimicrobial efficacy of orthodontic primer added

with silver nanoparticles. Cross-sectional in vitro
study.
Invest Clin 2016; 57(4): 321 - 329

Key words: silver nanoparticles; orthodontic primer; colony-forming units; demineralization.

Abstract. The antimicrobial efficacy of the silver nanoparticles (NPsAg), incorporated

into the adhesive (primer) placed in the enamel adjacent to fixed orthodontic appliances (brac-
kets), was evaluated. An experimental study was performed on 40 premolars in vitro, which
were divided into two groups with brackets, one cemented with conventional primer and ano-
ther added with NPsAg, placed in culture media previously inoculated with Streptococcus mu-
tans, and sampled for culturing and counting colony forming units (UFC) on days 1, 15 and 30.
A decrease in the presence of Streptococcus mutans in the samples after 15 days with nanopar-
ticle aggregation was observed, and a reduction in the effect of said nanoparticles after 30 days.
This reduction of the nanoparticles effects can be due to the absence of mechanical cleaning,
which favored the bacterial aggregation on the biofilm, affecting its antimicrobial effect. This
suggest the need for realizing studies in “vivo” which will allow the observation of the behavior
of the biometals on the buccal medium. The NPsAg added to the primer are an effective tool to
prevent the demineralization of the enamel around the fixed orthodontic appliances.

Recibido: 01-02-2016 . Aceptado: 30-06-2016

INTRODUCCIÓN del inicio y progresión de la desmineralización;

La desmineralización del esmalte es una
complicación común en el tratamiento ortodón-
cico con aparatología fija que provoca lesiones
cariosas o “manchas blancas”. Prevenir estas es
una de las preocupaciones de los ortodoncistas
debido a que resultan poco saludables y anties-
téticas, así como potencialmente irreversibles.
Las lesiones por desmineralización, causadas
por los ácidos formados por los microrganismos
alrededor de la aparatología ortodóncica fija, se
observan como manchas blancas en el esmalte
(1-3).
La cavidad oral está constituida por gran
número de microorganismos que coexisten en
simbiosis con el huésped. Un grupo de comple-
jos bacterianos son los principales responsables
aunque gran parte de los microorganismos que
ingresan en la cavidad bucal se eliminan, un
pequeño porcentaje puede adherirse y persistir
para organizarse en placas o biopelículas que
desencadenan el inicio de la desmineralización
del esmalte. La adhesión de la aparatología or-
todóntica fija al diente es facilitada mediante el
primer. Estudios previos han reportado que es-
tos primer proveen un sitio de fácil adhesión y
rápido crecimiento de microorganismos, debido
a la rugosidad de su superficie (4, 5). Un método
para prevenir la desmineralización del esmalte
es utilizar primer ortodóncicos resistentes a la
acumulación y colonización bacteriana. Para
este propósito, varios agentes antimicrobianos,
como fluoruro y clorhexidina se han incorpora-
do en productos ortodóncicos; sin embargo, en

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la práctica, se ha comprobado que no son du- desinfección y esterilización. Dichos procesos

raderos y que afectan las propiedades mecáni- se corroboraron inoculando las muestras en agar
cas de adhesión del material (1-5).El desarrollo soya tripticasa (Difco, BD, Franklin Lakes, NJ,
científico que ha alcanzado la nanotecnología Estados Unidos), incubándolospor 24 horas en
ha generado una nueva dimensión en el desa- horno de incubación (Felisa, Zapopan, Jalisco,
rrollo de materiales o técnicas odontológicas. México) a 37°C; se midió el desarrollo micro-
La nanotecnología incluye a la electrónica y el biano en escala de McFarland y en siembras
magnetismo, para la fabricación de estructuras en placas de agar soya tripticasa (Difco, BD,
de carbón, silicio, materiales inorgánicos, me- Franklin Lakes, NJ, Estados Unidos), en los
tales y materiales semiconductores. El término cuales no se observó crecimiento bacteriano.
nanotecnología, se refiere a la fabricación y uti- Durante la segunda fase del estudio, la
lización de materiales, dispositivos y sistemas muestra se dividió en 2 grupos: grupo control
en el rango de dimensión de 0,1-100 nm (1 nm (n= 20) y grupo de tratamiento con NAg (n=
= 10-9 m) que permite fabricar materiales a par- 20). En el grupo control, se procedió a reali-
tir del reordenamiento de átomos y moléculas, zar el protocolo de cementado con aparatología
presentando propiedades diferentes que las nor- ortodóncica fija Flexx MBT (Ah-Kim-Pech,
males. En otros estudios, las nanopartículas de D.F., México) mediante Transbond XT Primer
plata (NPsAg) se han incorporado a diversos (3M® Minnesota Mining and Manufacturing
materiales de adhesión, debido a que presentan Company, Estados Unidos). Para el grupo con
en su química superficial, propiedades que han NAg, se usó también Transbond XT Primer pero
demostrado tener un efecto antibacteriano con- adicionando nanopartículas de plata al material
tra la biopelícula de bacterias inoculadas en la ortodóntico. Para tales efectos se usó una mez-
superficie de las restauraciones (6-9). Para ser cla de NPsAg en polvo elaborada en un cuarto
aceptados clínicamente, los nuevos primers de- oscuro de laboratorio, con una concentración de
ben proveer actividad antimicrobiana superior, 600 ppm, pH 7 y un tamaño aproximadamente
disminuir la colonización bacteriana y mostrar de 50 nm, previamente evaluado por un equipo
propiedades físicas comparables a los primers Malvern Co. MOd. NanoziserTecnica DLS; el
convencionales (10-13). tamaño y la distribución de las NPsAg, la crista-
El propósito de este estudio in vitro fue eva-
linidad y el grado de dispersión dependieron de
luar la eficacia antimicrobiana de las NPsAg in- la cinética de la reacción. Para la síntesis de las
corporadas al primer ortodóncico y compararla NPsAg se utilizó NaBH4 como agente reductor.
con la actividad bacteriana del primer conven- La relación molar Ag+ a reductor fue mayor a
cional. uno. Se adicionaron agentes estabilizantes (ami-
nas primarias con relación molar metal-estabili-
MATERIAL Y MÉTODOS zante) para controlar el tamaño y uniformidad.
Se realizó el protocolo de grabado mediante áci-
La primera fase del estudio comenzó se- do fosfórico al 37 % Scotchbond (3M, Monro-
leccionando y analizando una muestra de 40 via, CA, Estados Unidos), el cual se aplicó por
premolares; los criterios de inclusión fueron 30 segundos, se enjuagó por 30 segundos y se
los siguientes: primeros premolares inferiores procedió a secar con aire a presión. El primer
extraídos de pacientes sanos, sin caries, desmi- fue entonces aplicado en la superficie vestibu-
neralización, restauraciones, fracturas o fluoro- lar grabada del diente, se procedió a colocar
sis, los cuales se sometieron a un protocolo de resina Transbond XT (3M® Minnesota Mining

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and Manufacturing Company, Estados Unidos)
en la base del bracket, colocándolo en el diente
con una presión constante, retirando el exceso
de resina y se fotopolimerizó (Demetron VCL
401, Kerr, Orange, CA, Estados Unidos) por 40
segundos en total (10 segundos por cada cara de
la aparatología fija).
Para la inoculación bacteriana de los premo-
lares se tomaron muestras a 4 pacientes. Los cri-
terios de exclusión fueron los siguientes: caries
activa, bolsas periodontales, hábitos perniciosos
o haber sido tratado con antibióticos en los úl-
timos 3 meses. La toma de muestra se realizó
mediante la colocación de una punta de papel
estéril (Hygenic, Akron, OH, Estados Unidos)
en la cara vestibular del incisivo central inferior;
posteriormente se colocaron en un contenedor
cerrado y fueron transportados inmediatamen-
te al laboratorio para cultivo de S mutans (14).
Las muestras obtenidas se sembraron en agar
mitis-salivarious (Difco, BD, Franklin Lakes,
NJ, Estados Unidos), agar lactobacillus (Difco,
BD, Franklin Lakes, NJ, Estados Unidos) y agar
extracto de levadura sucrosa-bacitracina (Difco,
BD, Franklin Lakes, NJ, Estados Unidos). Para
corroborar la presencia de las bacterias de inte-
rés del estudio, se realizaron pruebas prelimina-
res de morfología macroscópica y microscópi-
ca. Una vez obtenidos los cultivos se realizaron
pruebas de identificación bioquímica API20s-
trep (bioMérieux México, D.F., México). Se
identificó la presencia de S. mutans, S. mitis, S.
salivarious, S. sanguis y Lactobacillus. Se ais-
laron los microorganismos en tubos de ensaye
con 10 ml de Brain-HeartInfusion (BHI) (Lan-
sing, MI, Estados Unidos) y se mantuvieron a
37°C en horno de incubación (Felisa, Zapopan,
Jalisco, México). Se dividieron las muestras
de ambos grupos de manera aleatoria en tubos
de ensaye con 20 ml de BHI que contenían las
muestras bacterianas obtenidas previamente. Se
incubaron a 37°C y se realizaron se realizaron
recambios de BHI cada 48 horas para que las
Mariel Murga y col.
bacterias siguieran en un medio apto con nu-
trientes que las mantuvieran activas el tiempo
de duración del estudio. Las tomas de muestras
microbiológicas de cada uno de los premolares
se llevaron a cabo en dos intervalos de tiempo,
a los 15 y 30 días. Dichas muestras fueron to-
madas con 3 puntas de papel estéril (Hygenic,
Akron, OH, Estados Unidos) a cada diente, con
una duración de toma de muestra de 1 minuto.
Se depositaron en tubos de ensayo con 10 ml de
caldo soya tripticasa, se incubaron por 2 horas
en horno de incubación a 37°C y se hizo dilu-
ción seriada 10-1 a 10-3. Posteriormente, se sem-
braron todas las diluciones en placas agar soya
tripticasa, se etiquetaron y sellaron las muestras
y se incubaron durante 24 horas en horno de
incubación a 37°C. Posteriormente, se conta-
ron las unidades formadoras de colonias (UFC)
usando un lápiz digital contador de colonias
(modelo 1002, Labtron, Tehran, Iran) y se to-
maron en cuenta las muestras que tuvieran entre
25-250 UFC con la finalidad de permitir la ob-
servación de las características morfológicas de
las bacterias, así como el conteo por dispersión
adecuada de las UFC (15). Para el análisis esta-
dístico se utilizó el software MINITAB (Versión
17, State College, PA, Estados Unidos), se ana-
lizó la normalidad de las variables y se realizó
comparaciones entre las muestras con la prue-
ba t de student para determinar la significancia.
Para reducir el sesgo de las medidas se calculó
el coeficiente de confiabilidad (95%) y con una
significancia estadística de p < 0,05.
Se hizo la transformación de los datos del
número de UFC a datos exponenciales para su
análisis estadístico con la siguiente fórmula:
No. de colonias en placa x Factor de dilu-
ción / 0,1 mL = No. de colonias por mililitro
Posteriormente se expresó el número de
UFC en log10 para los tiempos de toma de mues-
tra en los grupos de estudio.
El presente fue un estudio in vitro con ma-
nejo de residuos con desarrollo microbiano,
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cuyo protocolo fue autorizado por el honorable
comité de ética en investigación de la Facultad
de Estomatología de la Universidad Autónoma
de San Luis Potosí asignado con la clave CEI-
FE034-014, se siguieron los lineamientos de
acuerdo a la norma oficial mexicana NOM-087-
ECOL-SSA1-2002 de protección ambiental,
salud ambiental, residuos peligrosos biológico
infecciosos, de clasificación y especificaciones
del manejo.
RESULTADOS
Se identificó la carga bacteriana en los dos
grupos de estudio a los días 1, 15 y 30 para cada
una de las muestras. Se realizó la estadística
descriptiva que incluye la media, error estándar,
desviación estándar, valor mínimo y máximo
para cada variable. En ambos grupos se obtuvo
una toma basal con carga bacteriana en el día
0; en el día 15 se identificaron las diferencias
entre los grupos de control y de tratamiento en-
contrándose una media de 9,6 UFClog10 con
una desviación estándar de 1,4 para el grupo de
tratamiento (adicionado con NPsAg), y de 10,8
UFClog10 con una desviación estándar de 0,8 en
el grupo control, lo que indicó una disminución
significativa de UFC en el grupo de tratamiento
(p= 0,02).Al realizarse el recuento en el día 30,
que han empleado las NPsAg como agente anti-
microbiano. Así Silva Benítez y col. (25) obser-
varon que al colocar adhesivo sobre el esmalte
dental, aumentaba la presencia de S. mutans y
disminuía con la agregación de NPsAg, siendo
ésta una buena opción para prevenir la desmi-
neralización del esmalte alrededor de la apara-
tología ortodóncica (25). En este estudio se ob-
servó una reducción del efecto de las NPsAg en
la toma de muestras en el día 30, lo cual pudo
deberse a la adhesión que se establece entre los
microorganismos y los tejidos del hospedero,
microorganismos que se agregan entre sí para
organizarse en placas o biopelículas que son
comunidades complejas de microorganismos
recubiertas de un polímero extracelular que les
ayuda a retener el alimento y protegerse de los
agentes tóxicos.
Al ser un estudio in vitro, estas capas de bio-
film no pueden ser removidas mecánicamente
por el cepillado dental, por lo que permiten una
continua agregación bacteriana, y junto con su
materia de desecho pueden afectar el efecto an-
timicrobiano de las NPsAg que se encuentran
en la superficie del esmalte adyacente a los
brackets. Aunque los resultados del estudio fue-
ron no significativos a los 30 días, representan
un valioso aporte ya que sugieren que el cepilla-
do juega un papel importante en la prevención

TABLA I
CARGA BACTERIANA EN LOG10 UFC EN LOS GRUPOS EN ESTUDIO EN LOS
DIAS 1,15 Y 30 DESPUES DE APLICADO EL TRATAMIENTO
Día 1 Día 15 Día 30
Control n= 20 NPSAg n= 20 Control n= 20 NPSAg n= 20 Control n= 20 NPSAg n= 20
10,8± 0,8 9,6 ± 1,4* 11,5 ± 1,6 11,6±1,7**
0 0
(9,1-12,1) (6,5-12,2) (8,4-14,6) (7,8-14,4)
Las cifras representan el promedio ± desviación estándar (mínimo-máximo)
* p ˂ 0,02 en comparación con el control
**p = 0,82 en comparación con el control
NPSAg: nanopartículas de plata

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se observó una marcada disminución del efecto
de las NPsAg con una media de 11,6 UFClog10
y desviación estándar de 1,7 para el grupo de
tratamiento (adicionado con NPsAg) y una me-
dia de 11,5 UFClog10 con desviación estándar
de 1,6 para el grupo control, no encontrándose
diferencia significativa entre ambos grupos. Se
determinó la significancia entre los grupos al día
15, no así en la toma basal y al día 30. (Tabla I).
DISCUSIÓN
Actualmente, gran parte de la población re-
curre a tratamientos ortodóncicos con el fin de
conseguir mayor estética dental, para lo cual es
necesario el uso de brackets. Los tratamientos
de ortodoncia con aparatología fija tienen un
gran efecto sobre la desmineralización del es-
malte ya que estos crean, debido a la rugosidad
de su superficie, un ambiente favorable para la
acumulación de microorganismos (10). La des-
mineralización durante el tratamiento es la com-
plicación más frecuente y se hace evidente en el
primer mes de la colocación de la aparatología
de ortodoncia (11).
A pesar de la disponibilidad de diversos
protocolos para el uso de fluoruros en pacientes
con tratamiento de ortodoncia, estos materiales
no han demostrado un efecto inhibitorio en la
desmineralización del esmalte dental (1-5). Son
muchos los estudios en distintos campos de la
medicina que han utilizado NPsAg y reportan su
eficacia antimicrobiana (7-23).
En el 2005, Elechiguerra y col.demostra-
ron el efecto bactericida de las NPsAg (1 y 10
nm) sobre E.coli, P. aeruginosa, V. cholerae y
S. typhus. El efecto bactericida de las NPsAg
ha sido demostrado en diversos microorganis-
mos como P. aeruginosa, S. aureus, E. coli, S.
typhi y V. cholerae observándose una inhibi-
ción en la reproducción bacteriana, penetración
de las NPsAg al núcleo y destrucción de DNA
(14). En el presente estudio se propuso el uso de
Mariel Murga y col.
NPsAg para reducir la carga bacteriana presente
en el esmalte adyacente a la aparatología de or-
todoncia, por ello se sintetizaron y adicionaron
a un medio adhesivo de uso diario para el orto-
doncista, en el cual mediante el cementado nor-
mal de brackets y sin repercusiones en el nivel
de adhesión al esmalte pudiera tener un efecto
positivo en la reducción de las bacterias forma-
doras de manchas blancas como S. mutans, S.
mitis, S. salivarious. S. sanguis y Lactobacillus.
El diseño de este estudio permitió tener un ma-
yor control en el laboratorio para identificar y
aislar las bacterias involucradas en el desarrollo
de manchas blancas en el esmalte dental, y el
aislamiento de cepas de las bacterias estudiadas,
que permitieron imitar en gran medida las con-
diciones existentes en la boca. En el laboratorio
se pudieron manejar los más altos estándares de
asepsia; el estudio fue realizado por un solo ope-
rador entrenado asegurando una toma basal con
cero carga bacteriana, trabajando en un ambien-
te estéril como el que brinda la campana de flujo
laminar, evitando que los resultados del mismo
se debieran a un factor externo. En cuanto a la
selección de los órganos dentarios de interés,
se tuvo cuidado de que cumplieran con los cri-
terios de inclusión, y fueron asignados en los
grupos control y de tratamiento (con NPsAg) de
manera aleatoria para tener la seguridad de que
tuvieran características similares y así evitar que
los resultados fueran alterados por algún factor
externo.
El conteo de UFC en placas de agar es una
técnica validada por Gaitán-Fonseca y col. (24);
es una técnica fidedigna, reproducible, fácil de
realizar y más económica que otras técnicas
usadas; por tales ventajas se eligió esta técnica,
la cual arrojó resultados que entraron en los ran-
gos establecidos 25-250, tal como otros autores
han reportado (24).
Los resultados obtenidos en este estudio en
la toma a los 15 días, tuvieron valor significa-
tivo (p= 0,02) y son corroborados por estudios
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Eficacia antimicrobiana de las nanopartículas de plata
de la desmineralización del esmalte adyacente a
la aparatología fija.
En la literatura no se encontraron estudios
similares que permitan establecer el efecto de
las NPsAg al ser combinadas con el cepillado
dental por periodos mayores de tiempo, y con
la concentración exacta de bacterias en el medio
oral, así como las diversas especies que coexis-
ten en ella, por lo que es necesario que se reali-
cen estudios in vivo que aporten más informa-
ción sobre la eficacia de las NPsAg.
De acuerdo a nuestros resultados, la adición
de NPsAg al primer de ortodoncia es eficaz en
la disminución de carga bacteriana causante de
la desmineralización y formación de manchas
blancas y caries.
La actividad antimicrobiana de las NPsAg
se vió disminuida con respecto al tiempo de la
toma de muestra de los 15 días a los 30 días;
esto puede ser debido a la falta de una acción de
limpieza mecánica como la que confiere el cepi-
llado dental que remueve los restos de desecho
de los microorganismos, pudiendo esto cubrir
las NPsAg en el esmalte adyacente a la apara-
tología de ortodoncia disminuyendo su efecti-
vidad antimicrobiana, se necesitan estudios clí-
nicos in vivo que permitan evaluar el poder de
las N P s A g actuando en un medio bucal vivo
con todos sus componentes. Las NPsAg tienden
a inhibir selectivamente a las bacterias sin cau-
sar toxicidad en células de mamíferos. Algunos
estudios han puesto de manifiesto la correla-
ción positiva entre la concentración de NPsAg
y efectos citotóxicos. Sin embargo, la ausencia
de citotoxicidad contra células humanas se de-
mostró cuando concentraciones de NPsAg de
0,05-0,70% fueron incorporados (26,27). La
toxicidad por la exposición aguda a iones de
plata es relativamente baja; las principales vías
de exposición reportadas comprenden la inhala-
ción, ingestión, tópica dérmica, urológica y he-
matógena. La exposición crónica puede llevar
al depósito de partículas en la piel (argiria), ojos
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(argirosis) y otros órganos (28).
De acuerdo a nuestros resultados, la adición
de NAg al prime rortodóncico es eficaz en la
disminución de carga bacteriana causante de la
desmineralización formando manchas blancas y
caries. En virtud de los resultados de este estu-
dio, se concluye que la adición de NAg al pri-
mer ortodóncico es eficaz en la disminución de
carga bacteriana causante de la desmineraliza-
ción formando manchas blancas y caries.
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