Transferencia de Embriones Bovinos in Vitro

Transferencia de embriones bovinos in vitro
(Revisión de literatura)
Transfer of bovine embryos in vitro
(Review of literatura)
Juan José Sánchez Tirado
Estudiante Seminario de Profundización en Reproducción Bovina
Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Cooperativa de
Colombia, Sede Ibagué
Este obra está bajo una licencia de Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-CompartirIgual 4.0
Internacional.
Juancho.950710@hotmail.com
RESUMEN
El mejoramiento genético en el ganado bovino ha tenido un gran crecimiento debido
a las demandas de producción y nutricionales por parte del ser humano queriendo
día a día tener alimentos de gran calidad. Se han generado diversas metodologías
para aumentar la carga animal entre las cuales una de las más importantes es la
del sexaje de embriones que surge para reproducir una mayor cantidad de animales
de buena genética en un menor tiempo además de disminuir el intervalo entre
generaciones y aumentar el proceso de selección alcanzado un gran número de
progenie de donadoras valiosas que permitirá incrementar la producción animal.
PALABRAS CLAVES: sexaje, embriones, citometria de flujo.
ABSTRACT
The similar genetic improvement in cattle has had DUE Great Growth Demands and
nutritional Production by Human Being wanting Day to Day Having high-quality food.
Have the generated several methodologies to increase Is the load Among the
animals which one of the most important is that of sexing embryos wave paragraph
Play A mayor number of animals of good genetic in less time: In addition to
decreasing the interval between augmenter generations and the selection process
achieved a great number of valuable donor Progenie which will increase animal
production.
Internacional.
KEYWORDS: sexing, embryos, flow citometry
INTRODUCCION
Las tecnologías de reproducción animal han llegado a su mejor momento en
mercados nacionales e internacionales para mejorar las especies para el mercado
y gustos del consumidor. La transferencia de embriones en ganado bovino tiene
como énfasis reproducir una mayor cantidad de animales de buena genética y
fenotipo en un menor tiempo.
Las tecnologías de transferencia de embriones han mejorado las expectativas de
producción de ganado de leche y carne a nivel nacional e internacional con el fin de
mejorar los hatos para conseguir mejores rendimientos y mejor beneficio económico
(1).
El éxito económico de los programas de transferencia de embriones está en la
genética utilizada, manejo de ganado, administración y mercadeo. Seleccionar la
vaca ganadora, el toro apto para el cruce, el manejo de la receptora, programas de
sincronización y súper ovulación, la educación y capacitación técnica del personal
para atender el manejo y la crianza de animales superiores, son los factores que
afectan el resultado, costos y beneficios de los programas de transferencia (1).
En los últimos años los programas de transferencia han crecido demasiado en los
estados unidos, Brasil y Colombia. La aplicación de esta tecnología se realiza en
Internacional.
ganado de leche y carne por la alta demanda de productos lácteos y cárnicos en el
mundo (2).
La inseminación artificial es utilizada para aumentar la descendencia de toro de gran
valor, la transferencia de embriones es empleada para incrementar la producción
de ternero de las mejores vacas. Puede usarse para inducir gestaciones gemelares,
acelerar un programa de selección o para exportar animales a diferentes países y
eliminar el problema de adaptación a diferentes climas a través del mejoramiento
genético (3).
FACTORES INFLUYENTES EN LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES IN
VITRO
Hay diferentes tipos de factores que pueden influir en un programa de transferencia
de embriones como por ejemplo el protocolo a utilizar, las hormonas con las que se
trabaje, la nutrición, la raza, la edad, el clima, el manejo. Todos estos aspectos
pueden afectar o mejorar un programa de transferencia de embriones (1).
Las hormonas tienen que ser aplicadas en las cantidades indicadas, momentos y
forma adecuada. La persona encargada debe estar bien capacitada ya que estas
hormonas se aplican de forma intramuscular (4).
En el aspecto nutricional es una condición corporal óptima para trabajar una vaca y
tener resultados efectivos, en el ganado de carne es de 5 a 6 y en el ganado lechero
Internacional.
es de 2.5 a 3 una vaca muy gorda acumula demasiada grasa subcutánea y
alrededor de los ovarios lo que afecta las drogas utilizadas (5).
El estado nutricional de la vaca donante afecta la tasa de ovulación y fecundación
como la viabilidad de los embriones. El estado nutricional de las vacas receptoras
es menos críticas que las donantes (6).
Las razas cebuinas (bos inducus) necesitan menor cantidad o dosis de drogas como
la FCH que las razas europeas (bos Taurus) (7). Las razas europeas tienen menor
respuesta en la recuperación de embriones después del protocolo de súper
ovulación, en comparación de la raza ovina (8). Hay beneficios en las vacas
lecheras por su docilidad debido a que estas están en mayor contacto con las
personas en cambio las de carne están menos acostumbradas al manejo y no son
tan dóciles siendo sensibles al estrés (8).
La edad, el ambiente son factores que también pueden influir drásticamente en la
cantidad y la calidad del embrión. Una vaca que no se encuentre en una condición
optima gastara mucha más energía en su adaptación que en la producción de
embriones (9).
TRANSFERENCIA IN VITRO
Internacional.
Un desarrollo muy importante en la biotecnología fue la producción in vitro de
embriones bovinos la cual aseguran una alta preñez cuando son transferidos a
hembras receptoras obteniendo nacimientos de crías optimas y saludables (10).
El primer informe del nacimiento de un ternero con la técnica de producción in vivo
fue en 1970 y se llevó a cabo por Sreenan. No se reportó ningún informe de
animales producidos por fecundación in vitro, la técnica en producción in vivo fue
muy utilizada en los años 70 a principio de los 80 se produjo un becerro por
fertilización in vitro. La primera ternera que nació por fertilización in vitro peso 45kg
y no presentó ninguna anomalía desde entonces las tecnologías mejoraron ya que
las fertilizaciones eran viables en condiciones artificiales (11).
Hay dos formas para la recolección de ovocitos, los cuales pueden ser recuperados
de ovarios que provienen de animales de mataderos o de animales vivos a través
de una técnica llamada aspiración folicular. Los ovarios son recolectados de
hembras sacrificadas y luego aspirados para obtención de folículos que deben tener
un diámetro entre 3 y 6 ml (12). Esta técnica es útil para un último aprovechamiento
de hembras sacrificadas por motivos sanitarios, accidentes u otros (13). de cada
vaca se pueden obtener de 15 a 20 óvulos lo que permitirá obtener de 2 a 6 óvulos
para transferir (14).
El uso de la tecnología de aspiración folicular y de aspiración in vitro unos científicos
en 1998 obtuvieron entre 0.6 y 3.5 embriones con un promedio de 1.5 embriones
por semana. Dayan et consiguieron 1.48 preñeces por procedimiento en 937
secciones de aspiración folicular practicada a 321 animales en conclusión una
Internacional.
donadora que es sometida a aspiraciones foliculares semanalmente la velocidad de
multiplicación de su linaje es muy acelerada (15). Las técnicas de aspiración in vitro
son modelos que se pueden utilizar en varios tipos de vacas por ejemplo las novillas,
vacas vacías, vacas de primer tercio y las vacas seniles. Además, estas técnicas se
pueden implementar en vacas con problemas reproductivos (16) (17).
ASPIRACIÓN FOLICULAR
La técnica de fecundación in vitro consiste en cinco fases básicas para para
preparación de los ovocitos y embriones. La primera de ellas es la aspiración de
ovocitos en la cual se recuperan de hembras vivas por una punción transvaginal
guiada por un ecógrafo especial para este tipo de procesos (18). la aspiración se
realiza por medio de un equipo de ultrasonido aloka SDD 500 con un transductor
microconvexo de 5 mHz el cual es adaptado o una guía de bioxida Chuck bolland.
La aspiración de los folículos se realiza con agujas de calibre 18 conectada a un
tubo de estéril de 50ml mediante una conducción de teflón. El equipo de aspiración
se completa con una bomba de vacío accionada por un pedal que aplicara una
aspiración de 50 a 53 mm Hg (20ml/minuto) (19). Luego de la aspiración folicular, el
contenido aspirado es lavado y filtrado por medio de unos filtros especiales para la
recolección, conteo y selección de los ovocitos por medio de microscopios y
micropipetas. Después de ser seleccionados son clasificados de acuerdo a su
morfología, los criterios de clasificación son de acuerdo al número de camadas de
cúmulos y aspecto del citoplasma (20). Los ovocitos se clasifican en cinco
Internacional.
categorías, la primera categoría son ovocitos con más de tres capas de células de
cúmulos compactas y con citoplasma homogéneo uniformemente granulado, la
categoría 2 son ovocitos con menos de tres capas de células del cúmulo y
citoplasma generalmente homogéneo (21). La categoría 3 son ovocitos con una sola
capa de células del cumulus y citoplasma de aspecto irregular con áreas oscuras
(22). Categoría 4 ovocitos desnudos y la categoría 5 son ovocitos con cumulu
expandido (22).
El proceso de aspiración folicular en el ganado bovino vivo debe realizarse con una
tranquilizarían del animal, además de una anestesia vía epidural para minimizar los
esfuerzos y mejorar la manipulación. Se lava la región perineal para la eliminación
de la contaminación luego se introduce el transductor hasta el fondo del saco vaginal
y con la ayuda de la palpación rectal se ubican los ovarios frente al transductor para
tener una buena vista de los folículos y poder comenzar la aspiración, se deben de
aspirar los folículos con un diámetro mayor a 2 ml (19).
SELECCIÓN OVÁRICA
La vaca es un especie mono ovulatoria por lo que la mayor parte de los Ovocitos
obtenidos tras la aspiración están destinados a degenerar. Esto hace necesario
estimar la calidad de los ovocios antes de ser utilizados para la maduración in vitro,
ya que solamente una parte de los mismos tienen la capacidad de ser fecundados
y soportar el desarrollo embrionario (31).
Internacional.
La selección de los Ovocitos se realiza generalmente en base a tres criterios el
diámetro del ovocito, el aspecto de su citoplasma y las características del cumulo
que rodea. El diámetro de los Ovocitos condiciona su capacidad para madurar (18),
de tal forma que los Ovocitos bovinos con un diámetro inferior a 120 um se
encuentran todavía en fase de crecimiento y no han adquirido aun la capacidad para
madurar (27).
Los Ovocitos rodeados por un cumulo compacto formado por varias capas de
células, presentan mayores porcentajes de maduración, fecundación y de desarrollo
hasta blastocistos, que los que carecen de cumulo o los que están rodeados
solamente por la corona radiada (24).
Se ha tratado de establecer una relación entre el aspecto del citoplasma y la
competencia del ovocito para madurar, ser fecundado y soportar el desarrollo
posterior (25). Asi se ha comprobado que los ovocito que presentan un citoplasma
oscuro muestran una acumulación de lípidos y un bue potencial para el desarrollo,
mientras que los que presentan un citoplasma palido tinen una baa densidad de
orgánulos y escaso potencial de desarrollo. Por otra parte, cuando el citoplasma es
negro, los Ovocitos están envejecidos y tienen un potencial para soportar el
desarrollo muy bajo (26).
Luego de la clasificación ovárica estos son lavados en soluciones de TMC 199
suplementado con 10 % de suero fetal bovino. Los ovocitos son introducidos en
criotubos para un baño María que oscila entre los 30 a 34°C para después ser
madurados y fecundados (19).
Internacional.
MADURACIÓN OVOCITOS
La maduración de los ovocitos consiste en pasar del estadio de profase de MI hasta
el de MII. Los ovocitos son transferidos a unas placas de maduración in vitro con
micro gotas de medio TMC 199 suplementado con suero fetal bovino al 10%, 5ug/ml
LH e,0,1 ug/ml de estradiol cubiertas con aceite mineral. Los ovocitos son
encubados por 24 horas en atmosfera controlada con 5% CO2 y 100% de humedad
(23). La teoría de la maduración consiste en que el ovocito complete la meiosis en
respuesta al pico ovulatorio de LH en maduración in vitro. 24 horas es necesario
para que el ovocito complete su maduración nuclear alcanzando el estadio de MII.
También es muy importante que exista una maduración citoplasmática ya que esta
prepara al ovocito para soportar la fertilización y aportar los nutrientes requeridos
para el desarrollo embrionario. (28)
Cuando los Ovocitos son aspirados desde los folículos reanudan espontáneamente
la meiosis y al ser cultivados in vitro continúan con los procesos de maduración. La
composición de los medios de cultivo y el ambiente controlado deben brindar un
ambiente adecuado para que la maduración ocurra en 24 horas de un modo similar
a lo que sucede in vivo durante más de dos ciclos estrales en el bovino. (29)
FECUNDACIÓN
Internacional.
Obtenidos los ovocitos maduros se debe lograr la fecundación de los mismo, se
incuban con los espermatozoides capacitaos en un medio tyroide, suplementado
con fuentes energéticas como piruvato o lactato y albumina sérica (27). En la
especie bovina la capacitación espermática se ve favorecida por incorporación de
heparina al medio (28).
Los espermtazoides que se requieran para fecundar deben estar vivos y móviles
durante un periodo de 6 a 24 horas, luego de un proceso de selección y capacitación
espermática que nos permita a su vez deshacernos de componentes del plasma
seminal, crioprotectores y espermatozoides muertos o con escasa vitalidad. La
capacitación espermática se logra exponiendo los espermatozoides vivos a
concentraciones de heparina y cafeína, entre otras. Estas sustancias logran
estimular el proceso de capacitación del espermatozoide que lo prepara para
interaccionar y fecundar el ovulo (29).
Los espermatozoides deben cruzar por un proceso de maduración el cual incluye la
eliminación de todos los elementos presentes plasma seminal componentes del
diluyente en caso de sémenes congelados descongelados y contaminantes. Este
proceso se realiza mediantes técnicas basadas en la migración de los
espermatozoides swin up, la centrifugación en gradientes de densidad percoll y
filtración por una lana de vidrio. La maduración espermática habitualmente se
establece en el tracto reproductivo, pero se puede realizar por medio de unos
procedimientos los cuales incluyen incorporaciones (30).
Internacional.
Luego de maduración ovocitaria estos son cultivados con espermatozoides en
medios especiales y en un ambiente controlado por estufas de cultivo por un tiempo
comprendido de entre 5 a 24 horas dependiendo del protocolo (31).
CULTIVO IN VITRO
Existen tres categorías para los cultivos utilizados para los embriones. Los
indefinidos, cuando se utiliza suero, cocultivo con células somáticas; semidefinidos
cuando se omite el cocultivo y el suero se remplaza por albumina sérica y definidos,
cuando el suero se remplaza por macromoléculas como el polivinil alcohol o la
polivinil pirrolidona (32).
Los primeros intentos de cultivar embriones bovinos in vitro se toparon con la
dificultad de que los embriones no superaban la etapa 8 a 16 células, situación
denominada BLOQUEO DE DESARROLLO (33), que no implicaba la muerte
inmediata del embrión, pero que era irreversible. Para evitar este bloqueo se utilizó
el cocultivo con células somáticas o los medios condicionados por dichas células
(34). Y se suplementaron con suero (35). Sin embargo, con el tiempo se demostró
que las aplicaciones de estos procedimientos de cultivo generaban diversos
inconvenientes. En primer lugar, esta metodología que utilizaba medios indefinidos,
dificulta notablemente el conocimiento de las necesidades de os embriones durante
sus etapas de desarrollo temprano. Además, estas condiciones suponen un elevado
riesgo de incorporar patógenos durante el cultivo. Por otra parte, diversos estudios
han demostrado que la incorporación de suero al medio de cultivo es uno de los
Internacional.
principales factores responsables de la presentación del síndrome de exceso de
volumen fetal y de a baja resistencia a la crio preservación de los embriones
obtenidos (36).
Diversos autores trataron de determinar los mecanismos a través de los cuales el
cocultivo con células somáticas produce sus efectos beneficiosos y frutos de estos
trabajos se establecieron varias hipótesis: producción de compuestos con actividad
mitogenica para las células embrionarias , producción de sustancias que favorecen
la diferenciación celular, eliminación o degradación de algunas sustancias
embriotoxicas presentes en el medio de cultivo, modificación de algunas
concentraciones de sustratos energéticos. No obstante, durante este mismo periodo
se obtuvieron suficientes evidencias de que necesidad de utilizar un cocultivo con
células somáticas era consecuencia de que las inapropiadas condiciones de cultivo
utilizadas (composición del medio, atmosfera, gaseosa) (38) (39) (40). Así se ha
podido comprobar que cuando las composiciones del medio de cultivo es adecuada
y la tensión de O2 es reducida, es posible lograr elevados porcentajes de
blastocistos en ausencia de células somáticas (41).
Una vez comprobada la posibilidad de eliminar el cocultvo con células somáticas, el
siguiente reto fue el tratar de eliminar otros componentes causantes de la
indefinición del medio, suero o albumina sérica, sustituyéndolos por
macromoléculas sintéticas. Los primeros estudios donde se demostró la posibilidad
de cultivar los zigotos bovinos hasta blastocitos en un medio completamente
definido, obteniendo de un pequeño número de gestaciones (42).
Internacional.
Los medios simples más utilizados para el cultivo de los embriones bovinos son: el
fluido oviductual sintético, cuya composición fue establecida por Tervit 1972 en base
a los componentes encontrados en el fluido oviductual ovino (43). Estos medios
han sido suplementados con numerosos componentes al objeto de satisfacer las
necesidades nutricionales de los embriones. El componente nuevo que más ha
contribuido a incrementar la eficacia de estos medios simples son los aminoácidos
esenciales y no esenciales (44). Sin embargo estos medios aun necesitan ser
mejorados sensiblemente, puesto que el cultivo de los embriones producidos in vitro
en el interior del oviducto incrementa notablemente la calidad de los mismos.
Las células resultantes de la fertilización in vitro son cambiadas del medio de
fecundación a un medio de cultivo embrionario donde los embriones continúan su
división celular a 8, 16 y 32 células hasta llegar a mórulas y blastocitos. Al llegar a
estos estadios, los embriones pueden ser trasferidos a vacas receptoras en fresco
o congelados para su posterior uso. Durante esta etapa destacan la presencia en el
medio de cultivo de diversas fuentes de energía como la glucosa y aminoácidos
esenciales y no esenciales (44).
Luego de la maduración in vitro, aproximadamente el 90% de los Ovocitos
inmaduros puestos a cultivar alcanzan metafase II y expulsan el primer cuerpo polar.
De estos aproximadamente el 80% son fecundados y comienzan a dividir, al menos,
hasta el estadio de 2, 4 células. Sin embargo solo un 25 a 40 % alcanzan el estadio
de blastocito o blastocito expandido. El cultivo embrionario corresponde al paso más
Internacional.
prolongado dentro del proceso, es el periodo que determina la eficiencia global del
sistema asi como la calidad de los embriones obtenidos (25).
Los componentes abióticos evaluados en un medio de cultivo son varios entre los
cuales la osmolarida, esta es la capacidad que tienen los embriones de absorber
agua del medio que se encuentran, para lograr el punto de equilibrio entre las
sustancias disueltas en el medio y las presentes en el embrión. Esto induce en una
estabilización de la presión osmótica (41).
El pH sirve para evaluar el ambiente de los cultivos. La mayoría de los embriones
de mamíferos cultivados in vitro poseen un pH neutro o ligeramente alcalino.
Los porcentajes de CO2 y O2 deben ser similares a los encontraos en el oviducto
de algunas vacas. Los más utilizados son 5% O2, 90% N2 y 5% CO2, para una
excelente maduración y fecundación de los Ovocitos, y también para un buen
desarrollo embrionario (41).
La relación sodio potasio que se debe obtener es de niveles bajos de sodio y altos
de potasio en comparación con los niveles plasmáticos (40).
El agua es el elemento de mayor proporción en un medio de cultivo y su pureza está
altamente relacionada con el desarrollo embrionario. Algunos medios utilizan agua
bidestilada, para reducir las posibilidades de que resulten problemas con metales
pesados encontrados en mayor proporción en el agua utilizados (41).
Existen diferentes compuestos orgánicos que benefician el medio de cultivo de los
embriones promoviendo su vitalidad, hay fuentes de energía como lactato, piruvato
Internacional.
y glucosa, que son moléculas que fortalecen la energía del embrión en su cultivo
además de participar en la síntesis de percusores de ácidos nucleicos y de lípidos
y su disponibilidad será importante durante la eclosión fuera de la zona pelucida
(41).
Con respeto a los lípidos, poco se sabe acerca de la importancia que tendrían en la
producción de energía durante el desarrollo embrionario temprano. Sin embargo en
los últimos años se ha debatido la posibilidad de mejorar la viabilidad de los
embriones crio preservados a través de la adición de ciertos componentes lipídicos
a los medios de cultivo, específicamente ácido lnoleico no como fuente energética,
sino como fluidificador de las membranas plasmáticas (44).
Las fuentes proteicas como los aminoácidos participan en la regulación embrionaria
además de ser fuente de energía, como buffer intracelular y para la síntesis de
proteínas. Se ha demostrado que los aminoácidos no esenciales favorecerían el
desarrollo en estadios tempranos y los esenciales harían lo mismo en embriones de
más de ocho células (43).
Se utiliza suero bovino o albumina seria bovina como fuente de proteínas a los
medios de cultivo embrionario, aunque los resultados obtenidos tanto en producción
como en sobrevida poscriopreservacion tras su inclusión son contradictorios y
motivo de numerosos estudios. La albumina bovina favorece y protege a los
embriones de sustancias toxicas como metales pesados, aporta factores de
crecimiento, reduce la tensión superficial del medio, evitando que los embriones se
adhieran a las placas (42.)
Internacional.
CLASIFICACIÓN EMBRIONARIA
De acuerdo a las normas IETS, el código para clasificar la calidad embrionaria
basada en la integridad morfológica de los embriones es de tipo numérico. Los
códigos de calidad embrionaria varían de 1 a 4. El primero es un embrión excelente
con masa embrionaria esférica y simétrica, con células blastómeros uniformes en
cuanto al tamaño, color y densidad. Las irregularidades deberían ser relativamente
menores, y al menos el 85% del material celular debe ser una masa embrionaria
intacta y viable. La zona pelucida deberá presentar superficies lisas, sin superficies
cóncavas, planas o delgadas que pudieran causar adhesión de los embriones al
material utlizao durante las manipulaciones. La segunda es un embrión con forma
irregular moderada en cuanto al aspecto, forma, tamaño, color y densidad de las
células. Al menos el 50% del material celular deberá encontrarse intacto y
corresponderá con una masa embrionaria viable. El tercer embrión es regular con
irregularidades maores en la forma y tamaño de la masa embrionaria, asi como en
el tamaño, color y densidad de células individuales. Al menos el 25% del material
celular deberá encontrase intacto y corresponderá con una masa embrionaria
viable. El cuarto es un embrión malo con formas degeneradas no viables (44).
TRANSFERENCIA
La transferencia del embrión a la vaca se puede realizar mediante dos procesos.
Uno consiste en una transferencia quirúrgica realizando una laparotomía en la fosa
Internacional.
paralumbar del animal llegando directamente al útero y poder depositarlo
directamente (45).
La otra técnica consiste en una transferencia no quirúrgica donde solo se realiza
una anestesia epidural y local para tener un mejor manejo del animal. Primero se
debe sincronizar el animal en el día 7 del ciclo estral igualmente los embriones
deben encontrasen en el día 7 y estar depositados en un pajilla esterilizada de 0.25
0.5 ml, después se conecta con la pistola para poder realizar su debido deposito via
vaginal hacia el cuerpo del útero (45).
CONCLUSIÓN
 La transferencia de embriones vitro es una técnica de alta valor científico
debido a que impacta directamente en los índices reproductivos y producticos
de cualquier producción mejorando su clasificación genética y obteniendo
mucho más rápido estudios de progenie de sus ejemplares.
 La transferencia de embriones debe realizarse bajo estrictos protocolos de
bioseguridad para los espermatozoides, óvulos y los mismos embriones para
minimizar la mortalidad en estos.
Internacional.
 La transferencia de embriones in vitro es una técnica de alto valor adquisitivo
y además exige mucho conocimiento por parte e las personas que la vallan
a utilizar.
 La calidad de los Ovocitos es un factor esencial que afecta el éxito de los
sistemas de producción de embriones in vitro.
 Es una biotecnología útil para conservar material genético.
Internacional.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1. Orellana. .J.C, Peralta. E.M. (2007). Manual de procedimientos para laboratorio
de transferencia de embriones en bovinos de la empresa Genetic Resouces
international (GRI) and sexing technologies.
2. Tailor, R. Field. T. 2001. Scientific farms animal production: an introduction to
animal science. Seventh Edition. Colorado state university. USA.744p.
3. Phillips, C. 2003. Principios de producción bovina. Zaragosa, España. Ed.
Acribia. S.A. 341p.
4. Becaluba, F. 2007. Factores que afectan la súper ovulación en bovinos.
5. Bielanski. A. Yadav. 1990. A note on fertilization and embryo production in
suprovulated cattle with various levels of subcutaneous fat tissue. Animal Production
51.
6. Palma, G. Bream, G. 1993. Transferencia de embriones y biotecnología de la
reproducción en la especie bovina. Ed. Argentina.
7. Moreno, J. 2004. Transferencia de embriones en bovinos. Texas , EUA.
Internacional.
8. Gordon, I. 2004. Tecnología de la reproducción de animales de granja. Ed. S.A.
España.
9. Putney, D. Drost, M. Tatcher, W. 1988. Embryonic Development in superovulated
dairiy catle exposed to elevated ambient temperatura between days 1 to 7 post
insemination.
10. Fernández. A. Diaz T. Muñoz.G.(2007). Producción in vitro de embriones
bovinos .
11. Giannotti , A. (2011). Breve historia de la técnica de la fecundación in vitro para
uso en la cría de los animales.
12. Herradon. PG. Quintela. L. Becerra. J.J. Fernandez. M. (2011 ).Fecundacion in
vitro: Alternativa para la mejora genética en bovinos.
13. Diez. C. Muñoz. M. Camaño. J.N. Gomez. E. (2010). Biotecnologia reproductiva:
Producción y criopreservacion de embriones in vitro .
14. Inta. (2004). Aplicación de la producción in vítro de embriones en la producción
animal.
15. Ferraz, M.L. Arce. D. Watanave. M.R.(2000) Influencia de frecuencia OPU-FIV,
En bovinos. Arquivo veterinaria.
16. Bracket, B.G. (1983) A review of in vitro fertilization. Theriogenology. Irlanda.
17. Nasser, L. (2003) Uso practico den la fecundación in vitro en condiciones de
campo. Argentina.
Internacional.
18. Sorensen. A. M. (1979). Reproducion animal principios y prácticas.
19. Puerta. L.F.(2006). Aplicación de la biotecnología de la aspiración folicular y
fecundación in vitro como herramienta para un mejor aprovechamiento de la
hembras
20. Lonergan. K.M. (2011). Potential use of ovum pick up for embryo production and
breeding in catle.
21. Fernandez I. (2002). Procedimientos en los programas de transplantes de
embriones en ganado bovino.
22. Filipiak. Y. Larocca. C. (2010). Biotecnologia en reproducción bovina
23. Sato E, Matsuo M, Miyamoto H, 1990. Meiotic maturation of bovine oocytes in
vitro. Improvement of meiotic competence by dibutyryl cyclic adenosine,
monophosphate.
24. Xu K,P,Greve T, Smith Hittel P 1986. Chronological changes of bovine folicular
oocyte maturation in vitro.
25. Younis AL, Brackett B.G, Fayrer R.A 1989. Influence of serum and hormones of
bovine oocyte maturation and fertilization in vitro.
26. Nagano M, Katagirl S, Takahashi Y,. 2006. Relationship between bovine oocyte
morphology and in vitro developmental potential zygote.
27. Watanave . M.R. Franceschini. D. Vila. R.A, etc.(1998). Producucao in vitro de
embrioes por sessao de aspiracao en femeas nelore.
Internacional.
28. Kruip, T.H, Boni, M. Wurth, Y.A. etc. (2000). Potential use of ovum pick of for
embryo prudction.
29. Inta. (2010). Producción invitro y criopreservacion de embriones bovinos.
Argentina
30. Yanagimachi R. 1994. Mammalian fertlization. En the physiology of reproduction.
Ed: knobil E y Neill jD.
31. Lu KH. Seidel G.E jr. 2004 effects of heparin and sperm concentration on
cleavage and blastocyst development rates of bovine oocytes inseminated with flow
cytometrically sorted sperm.
32. Leoni GG, Rosati I, Succu S, (2007) atmosphere during IVF accelerates the
kinetc of formation of in vitro produced ovine blastocysts.
33. Peláez V. A. (2011) producción in vitro de embriones bovinos. Ecuador
34. Mucci, N. (2010). Crio preservación de embriones bovinos, aspectos
criobiológicos y técnicos. Argentina.
35. Herradon, PG, Quintela, LA, Becerra, JJ Ruibai, S y Fernández, M. (2007)
fecundación in vitro alternativa para la mejora genética en bovinos.
36. Eyestone WH, Firs Nl 1989. Co culture of early cattle embryos to the blastocyst
stage with oviductual tissue or in conditioned médium.
Internacional.
37. Fukui Y. Ono H. 1989. Effects of será, hormones, and granulosa cells added to
culture médium for in vitro maturation, fertilization, cleavage and development of
bovine oocytes.
38. Sirard Ma, First NL 1988 in vitro inhibition of oocyte nuclear maturation inthe
bovine.
39. farin PW, Crosier AE, (2001) influence of in vitro systems on embryo survival
and fetal development in cattle.
40. Bavister B.D., Rose T.A 1992. Development of n vitro matured in vitro fertilized
bovine embryos into morula and blastocysts in defined culture media.
41. Kane M.T, Carney E.W. Ellington J.E. 1992. The role of nutrients peptide growth
factors and co culture cells in development of preimplantation embryos in vitro.
42. Moore K., Bondioli K.R. 1993 glycine and alanine supplementation of culture
médium enhances development of in vitro matured and fertilized cattle embryos,
43. keskintepe L. Brackett BG. 1996 in vitro developmental competence of in vitro
matured bovine oocytes fertilized and cultured in completely defined media.
44. Boni R, Tosti E, Roviello S, Dale B,1999 intracellular communication in in vitro
and in vitoproduced bovine embryos.
45. Hincapie, J. (2001) Honduras. Memoria técnica. Preparación de las columnas
de percoll.
Internacional.
Internacional.

Transferencia de Embriones Bovinos in Vitro

Cargado por

Información del documento

Título original

Derechos de autor

Formatos disponibles

Compartir este documento

Compartir o incrustar documentos

Opciones para compartir

¿Le pareció útil este documento?

¿Este contenido es inapropiado?

Copyright:

Formatos disponibles

Transferencia de Embriones Bovinos in Vitro

Cargado por

Copyright:

Formatos disponibles

Transferencia de embriones bovinos in vitro

Transfer of bovine embryos in vitro

Juan José Sánchez Tirado

Estudiante Seminario de Profundización en Reproducción Bovina

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Cooperativa de

Colombia, Sede Ibagué

El mejoramiento genético en el ganado bovino ha tenido un gran crecimiento debido

de buena genética en un menor tiempo además de disminuir el intervalo entre

generaciones y aumentar el proceso de selección alcanzado un gran número de

progenie de donadoras valiosas que permitirá incrementar la producción animal.

PALABRAS CLAVES: sexaje, embriones, citometria de flujo.

Play A mayor number of animals of good genetic in less time: In addition to

Las tecnologías de reproducción animal han llegado a su mejor momento en

mercados nacionales e internacionales para mejorar las especies para el mercado

y gustos del consumidor. La transferencia de embriones en ganado bovino tiene

como énfasis reproducir una mayor cantidad de animales de buena genética y

fenotipo en un menor tiempo.

Las tecnologías de transferencia de embriones han mejorado las expectativas de

producción de ganado de leche y carne a nivel nacional e internacional con el fin de

El éxito económico de los programas de transferencia de embriones está en la

genética utilizada, manejo de ganado, administración y mercadeo. Seleccionar la

vaca ganadora, el toro apto para el cruce, el manejo de la receptora, programas de

sincronización y súper ovulación, la educación y capacitación técnica del personal

afectan el resultado, costos y beneficios de los programas de transferencia (1).

estados unidos, Brasil y Colombia. La aplicación de esta tecnología se realiza en

La inseminación artificial es utilizada para aumentar la descendencia de toro de gran

valor, la transferencia de embriones es empleada para incrementar la producción

acelerar un programa de selección o para exportar animales a diferentes países y

eliminar el problema de adaptación a diferentes climas a través del mejoramiento

FACTORES INFLUYENTES EN LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES IN

Hay diferentes tipos de factores que pueden influir en un programa de transferencia

trabaje, la nutrición, la raza, la edad, el clima, el manejo. Todos estos aspectos

pueden afectar o mejorar un programa de transferencia de embriones (1).

hormonas se aplican de forma intramuscular (4).

tener resultados efectivos, en el ganado de carne es de 5 a 6 y en el ganado lechero

alrededor de los ovarios lo que afecta las drogas utilizadas (5).

El estado nutricional de la vaca donante afecta la tasa de ovulación y fecundación

como la viabilidad de los embriones. El estado nutricional de las vacas receptoras

es menos críticas que las donantes (6).

respuesta en la recuperación de embriones después del protocolo de súper

ovulación, en comparación de la raza ovina (8). Hay beneficios en las vacas

personas en cambio las de carne están menos acostumbradas al manejo y no son

tan dóciles siendo sensibles al estrés (8).

La edad, el ambiente son factores que también pueden influir drásticamente en la

optima gastara mucha más energía en su adaptación que en la producción de

hembras receptoras obteniendo nacimientos de crías optimas y saludables (10).

El primer informe del nacimiento de un ternero con la técnica de producción in vivo

fue en 1970 y se llevó a cabo por Sreenan. No se reportó ningún informe de

animales producidos por fecundación in vitro, la técnica en producción in vivo fue

muy utilizada en los años 70 a principio de los 80 se produjo un becerro por

y no presentó ninguna anomalía desde entonces las tecnologías mejoraron ya que

las fertilizaciones eran viables en condiciones artificiales (11).

de ovarios que provienen de animales de mataderos o de animales vivos a través

de una técnica llamada aspiración folicular. Los ovarios son recolectados de

un diámetro entre 3 y 6 ml (12). Esta técnica es útil para un último aprovechamiento

de hembras sacrificadas por motivos sanitarios, accidentes u otros (13). de cada

vaca se pueden obtener de 15 a 20 óvulos lo que permitirá obtener de 2 a 6 óvulos

para transferir (14).

El uso de la tecnología de aspiración folicular y de aspiración in vitro unos científicos

por semana. Dayan et consiguieron 1.48 preñeces por procedimiento en 937

secciones de aspiración folicular practicada a 321 animales en conclusión una

multiplicación de su linaje es muy acelerada (15). Las técnicas de aspiración in vitro

pueden implementar en vacas con problemas reproductivos (16) (17).