Memorias

1
Memorias

2
 Memorias
Indice
Diferencias fisiológicas y reproductivas entre Bos Taurus y Bos Indicus.
Pietro S. Baruselli, Emiliana de O.S. Batista, Roberta Machado Ferreira, Gabriel Bo ………….. 6

Criterios en la Elección del Programa Reproductivo para Novillas de Carne: Pubertad

vs Madurez Reproductiva, Protocolo J-Synch vs Protocolo Convencional.
Gabriel A. Bó, Javier de la Mata , Andres Vera Cedeño, Alejo Menchaca …………………………… 22

Enfermedades venéreas: Nuevos desarrollos en técnicas de giagnóstico en toros.

A. García Guerra ………………………………………………………………………………………………………………… 42

Efecto de la edad y el estado fisiológico de la donante sobre la calidad de los ovocitos

y la producción de embriones in vitro.
P.S. Baruselli, E.O.S. Batista, L.M. Vieira, R.M. Ferreira, B.G. Guerreiro, B.M. Bayeux, J.N.S. Sales,
A.H. Souza, L.U. Gimenes …………………………………………………………………………………….………..….. 65

Protocolos de IATF que alargan el proestro y su efecto en la preñez.

A. Menchaca, R. Núñez-Olivera, C. García-Pintos, J. de la Mata, E. Huguenine, G. Bó ……….. 85

Programas de IATF de alta fertilidad con semen sexado.

G.A. Bó, E. Huguenine, J.J. de la Mata, R.L.S. de Carneiroy A. Menchaca……………………….…. 106

Perdidas gestacionales en receptoras de embriones In Vitro: Factores de riesgo y

estrategias para diminuirlas.
A. García Guerra, R. V. Sala, L. Carrenho-Sala, J.C.L., Motta, E. Walleser, L. F. Melo, L. Leffers, M.
Fosado, J. F. Moreno, M. C. Wiltbank ………………………………………………………………………………. 122

Programas de IATF e re-IATF en ganado zebuíno.

Baruselli, P.S.; Vieira, L.M. ………………………………………………………………………………………………… 139

Implementación de programas de IATF a gran escala.

Alejo Menchaca ……………………………………………………………………………………………………………….. 157

Estrategias para el uso eficiente de receptoras de embriones In Vitro.

A. García Guerra, R. V. Sala, J.C.L., Motta, E. Walleser, L. F. Melo, L. Leffers, M. Fosado, J. F.
Moreno, M. C. Wiltbank ………………………………………………………………………………………………….. 162

Momento de inseminación y expresión de celos en vacas de leche sincronizadas con

dispositivos con progesterona y estradiol.
Tschopp, J.C. y Bó G.A ……………………………………………………………………………………………………… 176

Animales del futuro, la revolución CRISPR

Alejo Menchaca ……………………………………………………………………………………………………………… 200

3
Memorias

4
Memorias

5
 Memorias
Diferencias fisiológicas y reproductivas entre Bos Taurus y Bos Indicus

Pietro S. Baruselli1, Emiliana de O.S. Batista1, Roberta Machado Ferreira1, Gabriel Bo2
1
Departamento de Reprodução animal, USP, São Paulo, SP, Brasil
2
Instituto de Reproducción Animal Córdoba (IRAC), Córdoba, Argentina.
(e-mail: barusell@usp.br)

Introdução

O uso estratégico da inseminação artificial em tempo fixo (IATF) em fêmeas Bos indicus
e Bos taurus como ferramenta de multiplicação de indivíduos geneticamente superiores
promove melhora na eficiência reprodutiva, antecipando a concepção e aumentando a taxa de
prenhez ao final da estação de monta (Baruselli et al. 2002, Penteado et al. 2005, Bó et al. 2007).
Esses resultados impactam positivamente o retorno econômico das propriedades que produzem
carne e leite (Baruselli 2016).
Existem marcantes diferenças entre os grupos genéticos na resposta aos tratamentos
de sincronização da ovulação (Bo et al., 2003; Baruselli et al., 2007). Em fêmeas taurinas (Bos
taurus), especialmente vacas da raça Holandesa, maiores concentrações de progesterona (P4)
durante a sincronização acarretam maiores taxas de concepção após a IATF (Wiltbank et al.
2011). Entretanto, em fêmeas zebuínas (Bos indicus), a elevada concentração de P4 durante o
protocolo de sincronização promove efeitos negativos na taxa de crescimento folicular,
reduzindo do diâmetro do folículo dominante e, consequentemente, a taxa de ovulação
(Carvalho et al. 2008).
Contudo, os resultados de pesquisas apontam maior concentração sanguínea de P4
durante protocolo de sincronização da ovulação em fêmeas zebuínas comparadas às taurinas
(Batista 2015, Carvalho et al. 2008). Esta maior concentração circulante de P4 pode ser explicada
pela maior capacidade do corpo lúteo (CL) em produzir P4 (Segerson et al. 1984) ou pela menor
metabolização hepática neste grupo genético (Batista et al., 2015). Entretanto, acredita-se que
por possuir menor tamanho de CL, as fêmeas zebuínas não apresentem maior produção de P4
comparada às fêmeas taurinas. Em concordância com esta hipótese, há relatos de maior
capacidade esteroidogênica do CL em fêmeas taurinas comparadas às zebuínas (Segerson et al.,
1984). No entanto, na literatura existem indícios de menor metabolização hepática em fêmeas
zebuínas comparadas com fêmeas taurinas (Bastos et al., 2012; Batista et al., 2015).
Desta forma, este artigo tem o intuito de apresentar informações sobre as diferenças na
fisiologia reprodutiva de fêmeas Bos taurus e Bos indicus relacionadas ao metabolismo de P4

6
 Memorias
durante protocolo de sincronização da ovulação para IATF. Essas informações são importantes
para otimizar o emprego das biotecnologias da reprodução nos sistemas de produção de carne
e leite e assim aumentar produtividade dos rebanhos.

Comportamento estral

O comportamento de estro ocorre quando há queda nas concentrações de P4 e

aumento nas concentrações de estradiol (E2)(Allrich 1994). Este comportamento pode ser
influenciado pela idade (De Silva et al. 1981), raça (Rae et al. 1999) e produção de leite (Lopez
et al. 2004). Ingestão de matéria seca, peso corporal e metabolismo de esteroides também
podem exercer influência sobre o comportamento estral (Sartori et al. 2010).
A maioria das fêmeas zebuínas iniciam a manifestação de cio no período noturno
(Pinheiro et al. 1998, Bertam 2000), sendo que 30 % destes animais iniciam e encerram o estro
durante a noite (Pinheiro et al., 1998). Em condições brasileiras de manejo, foi avaliado o
comportamento reprodutivo de vacas de corte com auxílio de radiotelemetria (Heat-Watch).
Verificou-se que a duração do estro em Bos indicus é menor do que em Bos taurus (12,9 ± 2,9
horas em Nelore vs. 16,3 ± 4,8 horas em Angus; Mizuta 2003). Apesar disso, o intervalo entre o
estro e a ovulação não apresentou diferenças entre estas duas raças (Nelore, 27,1 ± 3,3 h vs.
Angus, 26,1 ± 6,3 h). A curta duração do estro verificada em zebuínos dificulta a eficácia da
detecção de cio (Galina e Orihuela 2007). No entanto, especificamente em vacas leiteiras de alta
produção, a duração do estro pode também estar reduzida (Nebel et al. 1997), devido ao
elevado metabolismo hepático de E2 presente nesta categoria (Lopez et al. 2004). Entretanto,
Bastos (2012) demonstrou que em condições climáticas e nutricionais semelhantes, vacas
zebuínas e taurinas podem manifestar estro com mesma intensidade e duração (Bastos 2012).
Esses dados demonstram que é necessário conhecer as características do estro
comportamental e da ovulação para implementar eficientes programas reprodutivos, levando
em consideração as diferenças entre Bos indicus e Bos taurus.

Crescimento folicular

O desenvolvimento dos folículos nos ovários de bovinos manifesta-se em um padrão de

ondas. Cada onda de crescimento folicular é caracterizada inicialmente pela emergência
folicular (grupo de pequenos folículos de 3 a 4 mm que são recrutados), seguida da fase de
crescimento conjunto dos folículos recrutados por cerca de três dias (Ginther et al. 2003). Deste

7
 Memorias
grupo de folículos, apenas um continua seu desenvolvimento (folículo dominante), enquanto os
outros reduzem seu tamanho (folículos subordinados; Lucy et al. 1992), estabelecendo-se o
fenômeno da divergência folicular (Ginther et al. 1989). Assim, o folículo dominante presente
no momento da regressão luteínica culmina na ovulação (Fortune et al. 2004). Estudos
evidenciaram as características endócrinas da emergência e do desvio folicular em Bos indicus,
que estão apresentadas na Figura 1.

Figura 1 - Concentrações plasmáticas de FSH e de LH normalizadas para o momento do desvio

folicular (0h) em novilhas Nelore (n=12). Pirassununga – SP, 2004. *representa diferença
estatística entre os pontos (P<0,05) para a curva de FSH (adaptado de Gimenes et al., 2008b).

O intervalo entre ovulações é 21 dias, tanto para fêmeas Bos indicus, como para fêmeas
Bos taurus (Bó et al. 2003; Baruselli et al., 2007). No entanto, em vacas Holandesas de alta
produção, devido ao maior tempo entre luteólise e ovulação, esse intervalo pode ser mais longo,
por volta de 23 dias (Sartori et al. 2004). Considerando o número de ondas de crescimento
folicular por ciclo estral, fêmeas Bos taurus apresentam de duas a três ondas (Bastos 2012). Em
fêmeas zebuínas, há relatos de duas a quatro ondas (Figueiredo et al. 1997).
Sabe-se que no início de cada onda de crescimento folicular, tanto vacas (Bastos 2012)
como novilhas Bos indicus apresentam maior número de folículos antrais que vacas e novilhas
Bos taurus (Carvalho et al. 2008, Batista 2015, Gimenes et al. 2009). Essa característica tem
influência direta na eficiência técnica de transferência de embriões e de OPU-FIV, indicando
vantagem para fêmeas zebuínas sobre as taurinas (Baruselli et al., 2016, Bo et al., 2016).
Neste contexto, sabe que o hormônio Anti-Mulleriano (AMH) tem correlação positiva
com a população folicular em fêmeas Bos taurus e Bos indicus. Foi observado maior
concentração de AMH em novilhas zebuínas comparada às taurinas (1,0 vs 0,3 ng/mL, P < 0,05;

8
 Memorias
Batista et al. 2014). Posteriormente, Guerreiro et al., 2014 observaram que tanto em fêmeas
Bos taurus como em Bos indicus há uma correlação positiva entre produção de embriões in vitro
e AMH. Esta informação também se estendeu para produção in vitro de embriões de bezerras
taurinas e zebuínas (Batista et al. 2016).
Acredita-se que maiores concentrações de insulina e IGF-1 são responsáveis pelo maior
número de folículos recrutados em zebuínos, que taurinos (Bó et al. 2003, Sales et al. 2015,
Sartori et al. 2016, Sales 2011). Corroborando com essa hipótese, foi observada maiores
concentrações pré-prandias de insulina na fase estrogênica (fase de recrutamento folicular)
compara à progesterônica em fêmeas Bos indicus comparada às fêmeas Bos taurus (Bastos
2012).
Além da diferença na população folicular entre fêmeas Bos indicus e Bos taurus, há
também diferença no diâmetro médio dos folículos dominante e ovulatório. Os tamanhos
foliculares médios do folículo dominante e subordinado na divergência folicular são maiores em
fêmeas taurinas (Folículo dominante = 8,5 mm e folículo subordinado = 7,2 mm; Ginther et al.
1997) comparadas às zebuínas (Folículo dominante = 5,4 mm a 6,2 mm e folículo subordinado
5,4 a 5,8 mm; Gimenes et al. 2008a).

Figura 2 Diâmetros do folículo dominante (DF) e do maior folículo subordinado (SF) normalizado
para o dia do desvio em 12 novilhas Nelore (↓ desvio observado). As novilhas foram examinadas
por ultrassonografia a cada 12 h da ovulação (Dia 0) até o Dia 5. O desvio ocorreu 2,5± 0,2 dias
(59,1 ± 5,8 h) após a ovulação, e os diâmetros médios para DF e maior SF no desvio foram de
6,2±0,2 e 5,9±0,2 mm, respectivamente (Média ± SEM). A taxa de crescimento do DF diferiu do
SF após o desvio folicular (P <0,0001). (adaptado de Gimenes et al., 2008a).

Ainda, o tamanho que o folículo dominante atinge capacidade ovulatória em diferentes

diâmetros, quando comparado fêmeas Bos taurus com Bos indicus. Vacas Holandesas ovularam

9
 Memorias
folículos maiores ou igual à 10 mm de diâmetro, com a administração de 40 mg de LH (Sartori
et al. 2001). Entretanto, em fêmeas zebuínas a administração do mesmo indutor de ovulação
levou à ovulação de 33,3%, 80%, e 90% dos animais com folículos de 7 a 8,4 mm; 8,5 a 10 mm e
maior que 10 mm de diâmetro, respectivamente (Gimenes et al. 2008). Esses dados
demonstram que a capacidade ovulatória em fêmeas Bos indicus é adquirida com diâmetros
inferiores aos observados em fêmeas Bos taurus. Ainda, sabe-se que em fêmeas Bos taurus o
diâmetro do folículo ovulatório pode variar entre 12,9 a 17,1 mm (Ginther et al. 1989, Bastos
2012, Batista 2015) e em fêmeas Bos indicus de 9,4 a 12,1 mm (Figueiredo et al. 1997, Sartorelli
et al. 2005, Bastos 2012, Batista 2015).
O diâmetro do CL também parece ser menor em Bos indicus que em Bos taurus (Batista
2015, Bastos 2012). Em fêmeas zebuínas o diâmetro do CL varia de 17 a 21 mm (Figueiredo et
al. 1997), já em taurinos são relatados diâmetros entre 20 e 30 mm (Ginther et al. 1989). Da
mesma forma, há relatos de que a concentração de P4 produzida pelo CL também é inferior em
zebuínos em relação aos taurinos (Segerson et al. 1984).
Carvalho et al., 2008 realizou estudo com sincronização de ovulação em novilhas Bos
indicus (Nelore e Gir), Bos taurus (Angus e Holandês) e cruzadas Bos indicus x Bos taurus (Nelore
x Angus e Gir x Holandês) submetidas à mesmo manejo experimental. O protocolo de
sincronização da ovulação consistiu no emprego de dispositivo intravaginal de P4 e benzoato de
estradiol no início do tratamento. Durante a permanência do dispositivo intravaginal, as
concentrações de P4 sérica foram superiores e permaneceram mais elevadas em novilhas Bos
indicus. Os autores discutem que esse achado pode ser decorrente da diferença de metabolismo
entre esses grupos genéticos, atribuindo menor taxa metabólica em zebuínos. Esse resultado
deve ser levado em consideração quando do emprego de tratamentos com P4 em fêmeas Bos
indicus. Elevados concentrações de P4 diminuem a pulsatilidade de LH e podem comprometer
o crescimento folicular e ovulação.

Metabolismo de hormônios esteróides e IATF

Folículos ovulatórios com maior diâmetro têm maior capacidade de produzir E2 (Perry
et al. 2014) e o tamanho deste folículo está positivamente correlacionado com o tamanho do CL
formado, e assim, com sua capacidade em produzir P4 (Peres et al. 2009, Sá Filho et al. 2013).
A concentração de hormônios esteroides circulante é o resultado de sua produção e
metabolismo (Wiltbank et al. 2012), que ocorre principalmente no fígado (Sangsritavong et al.
2002). A principal fonte de P4 na vaca é o CL (Niswender 2002). Especificamente em vacas

10
 Memorias
leiteiras foi demonstrado que um fator determinante na taxa de metabolismo de P4 é o fluxo
sanguíneo hepático (Sangsritavong et al. 2002). Dois vasos sanguíneos, a artéria hepática e a
veia porta, são responsáveis por tal fluxo. A veia porta drena sangue do trato digestivo para o
fígado. Assim, com o aumento da ingestão de matéria seca, há um aumento no fluxo do trato
digestivo e consequentemente no fígado, desta forma aumentando o metabolismo de P4
hepático (Sangsritavong et al. 2002).
Como citado anteriormente, há relatos na literatura de que fêmeas Bos taurus têm
maior capacidade esteroidogênica que fêmeas Bos indicus (Randel 1976, Segerson et al. 1984).
Entretanto, trabalhos recentes têm demonstrado que fêmeas zebuínas apresentam maior
concentração circulante de esteroides, quando comparada às fêmeas taurinas (Carvalho et al.
2008, Bastos 2012, Batista 2015). Contudo, embora fêmeas taurinas apresentem estruturas
ovarianas de maior diâmetro que fêmeas zebuínas, há indícios de que fêmeas Bos indicus
tenham uma menor metabolização de hormônios esteroides comparada às fêmeas Bos taurus
(Carvalho et al. 2008, Bastos 2012, Batista 2015). Em concordância com esta hipótese, foi
observado em fêmeas zebuínas maior concentração circulante de P4, que fêmeas taurinas
quando ambos grupos genéticos foram submetidas à mesma dieta (baixa ou alta ingestão de
matéria seca) e tinham apenas como fonte de P4 um dispositivo intravaginal de P4 (Batista
2015).
Sabe-se que existem duas possíveis vias de metabolização de P4 no fígado, uma via
envolvendo ação de enzimas da família citocromo P450, e outra via envolvendo enzimas 5α e
5β redutases. Há poucos estudos in vivo a respeito da regulação das enzimas hepáticas que
metabolizam P4 em bovinos. No entanto, a maioria dos metabólitos encontrados no sangue
indicam que o principal caminho de metabolismo de P4 envolve as enzimas AKR1C e AKR1D, ou
seja, enzimas envolvendo o caminho das redutases (Stupnicki and Williams 1968,
Schwarzenberger et al. 1997). Neste contexto, Batista et al., 2015 observaram maior abundância
de transcritos para o gene CYP3A4 (gene da família citocromo P450) no fígado de novilhas Bos
indicus (Nelore) comparadas às Bos taurus (Holandesa), independente da dieta fornecida (alta
ou baixa ingestão de matéria seca). No entanto, em novilhas taurinas foi observada maior
abundância de transcritos para os genes envolvendo o caminho das 5α e 5β redutases,
particularmente os genes AKR1D1, AKR1C4 e SRD5A1. Desta forma, embora exista um papel
crítico do elevado fluxo sanguíneo hepático no aumento do metabolismo de esteroides no
fígado (Sangsritavong et al. 2002), os resultados deste estudo foram indicativos de que a
expressão de enzimas hepáticas relacionados ao metabolismo de P4 é, ao menos parcialmente,
regulada pelo grupo genético. Ainda, esses resultados podem justificar as diferenças nas

11
 Memorias
concentrações circulantes de P4 observadas entre fêmeas zebuínas e taurinas (Batista et al.
2015). Desta forma, uma possível hipótese é que o metabolismo mais lento de esteroides em
fêmeas Bos indicus possa ser uma característica inerente a raça e não apenas um efeito exclusivo
da ingestão de matéria seca.
Assim, em novilhas zebuínas, é indicada a utilização de dispositivos intravaginais que
contenham baixa concentração de P4 para evitar comprometimento no crescimento folicular e
resposta ao protocolo de sincronização. Contudo, o fornecimento alimentar adequado durante
a estação reprodutiva pode colaborar na redução das concentrações plasmáticas de P4,
melhorando a resposta folicular ao protocolo de sincronização da ovulação. Além disso, o uso
de PGF2α no início do protocolo de sincronização promove lise do CL e assim pode reduzir os
efeitos negativos da P4 no crescimento folicular (Figura 2).

Figura 2. Modelo hipotético gráfico de fatores envolvidos no metabolismo de progesterona (P4)

em novilhas Bos indicus (Nelore) e Bos taurus (Holandesa) durante protocolo de sincronização
da ovulação com dispositivo intravaginal de P4 (adaptado de Batista, 2015).

12
 Memorias
Em relação às gonadotrofinas, sabe-se que a concentração de P4 tem importante efeito
na magnitude da onda de liberação LH (Giordano et al. 2012). Quanto a magnitude do pico de
LH, há grande variação nos valores descritos na literatura entre raças e períodos do ciclo estral.
Há relatos de menor onda pré-ovulatória de LH em novilhas Bos indicus que em novilhas Bos
taurus ou cruzadas (Randel 1984). Em fêmeas da raça Holandesa, há relatos de valores entre 0,5
a 1,5 ng/mL (Ginther et al. 1999, Ginther et al. 2001). Em fêmeas da raça Nelore, há relatos entre
0,5 a 1,0 ng/mL em animais sincronizados com dispositivo de P4 (Cipriano et al. 2011).
Em recente trabalho do nosso grupo com novilhas Bos indicus e Bos taurus mantidas nas
mesmas condições de manejo (Batista et al., 2017, artigo submetido) foi observado menor pico
de LH após administração de 0,01 mg de GnRH nos animais mantidos sob altas concentrações
de P4, independentemente do grupo genético (Tabela 1). No entanto, a diferença no pico de LH
em novilhas taurinas submetidas à alta e baixa concentrações de P4 foi maior comparada a
diferença no pico de LH em novilhas zebuínas (Figura 3). Ainda, verificou que a onda pré-
ovulatória de LH é maior em Bos taurus que em Bos indicus.

13
 Memorias
Tabela 1. Onda de liberação LH após o tratamento com GnRH em novilhas Bos indicus (Nelore) e Bos taurus (Holandesa) com Baixa ou Alta concentração de
P4 no momento do tratamento. Todos os valores são expressos como média ± EPM.
Bos indicus (Nelore) Bos taurus (Holandesa) P
Baixa P4 Alta P4 Baixa P4 Alta P4 Grupo Genetic Group*
Item (n = 6) (n = 5) (n = 8) (n = 5) Genético [ ] P41 [ ] P4
P4 (ng/mL) 0.2 ± 0.02 4.4 ± 0.2 0.1 ± 0.007 2.9 ± 0.4 0.06 0.0008 0.20
LH (ng/mL) 8.3 ± 0.8cB 3.3 ± 0.3dC 27.0 ± 1.9aA 6.9 ± 0.4bB 0.0001 < .0001 0.01
Momento do pico de LH (min) 125.0 ± 4.9 102.0 ± 3.3 116.3 ± 2.4 96.0 ± 5.0 0.37 0.02 0.54
AUC (área sobre a curva) 1,482.5 ± 145.8 612.6 ± 45.7 3,862.4 ± 175.2 1,188.8 ± 50.5 <.0001 <.0001 0.34
1. a b,c Indica diferença no pico de LH (ng/mL) entre os grupos (Baixa e Alta P4) no mesmo grupo genético.
2. a ≠b P ≤ 0,05
3. c ≠d P = 0.07
4. A,B,C Indica diferenças no pico de LH (ng/mL) entre os grupos genéticos (Bos taurus e Bos indicus) no mesmo ambiente de P4

14
 Memorias
Figura 3.
14 Bos indicus (Nel) - Alta P4
40 Bos taurus (Hol) - Alta P4 Bos indicus (Nel) - Baixa P4
Bos taurus (Hol) - Baixa P4
12
*
30 10 *
* *

bLH (ng/mL)
*
bLH (ng/mL)

* 8
*
20 *
* 6
*
* * 4
10

0 0
-120 -90 -60 -30 0 30 60 90 120 -120 -90 -60 -30 0 30 60 90 120
Tempo (min)
Tempo (min)

Concentração plasmática de LH em novilhas Bos indicus (Nelore) e Bos taurus (Holandesa) sob alta e baixa
concentração de progesterona (P4) normalizada para amplitude máxima de LH. Asterisco (*) indica
diferença na média de concentração plasmática de LH entre os grupos de Alta e Baixa P4. A seta indica o
momento do pico de LH (ng/mL).

Neste contexto, condições anovulatórias frequentemente verificadas em zebuínos parecem estar

associadas ao comprometimento da liberação de LH, responsável pela continuidade do crescimento e
indução da ovulação do folículo dominante. Em um experimento, D'occhio et al. 1990 observaram que,
aos 30 dias pós-parto, vacas Bos taurus (Hereford x Shorthorn) apresentavam maior concentração
plasmática de LH do que vacas Bos indicus (Brahman). Da mesma forma, esses autores verificaram que
entre 50 e 120 dias pós-parto as vacas Bos taurus apresentaram maior secreção pulsátil de LH que vacas
Bos indicus, além de maior taxa de prenhez.

Considerações finais

Os dados acima apresentados demonstram a importância do conhecimento das particularidades da

fisiologia reprodutiva de fêmeas Bos taurus e Bos indicus que têm implicações diretas na eficiência das
biotecnologias da reprodução utilizadas para multiplicação de indivíduos geneticamente superiores. A
adoção dessas tecnologias (inseminação artificial e transferência de embriões) melhora a eficiência
reprodutiva e proporciona maior produtividade e retorno econômico para a pecuária de corte e de leite.

15
 Memorias
Referências

Allrich R., 1994: Endocrine and neural control of estrus in dairy cows. Journal of Dairy Science, 77 2738-
2744.
Baruselli, P.S. Gimenes, L.U.; Sales, J.N.S. Fisiologia reprodutiva de fêmeas taurinas e zebuínas. Rev Bras
Reprod Anim, v.31, n.2, p.205-211, abr./jun. 2007.
Baruselli P.S.; Marques M.; Carvalho N.; Madureira E.; Campos Filho E., 2002: Efeito de diferentes
protocolos de inseminação artificial em tempo fixo na eficiência reprodutiva de vacas de corte
lactantes. Revista Brasileira de Reprodução Animal, 26 218-221.
Baruselli P. S., 2016: Supera dez milhões de procedimentos e amplia o mercado de trabalho Revista CFMV,
XXII 57-60.
Baruselli PS, Sá Filho MF, Martins CM, Nasser LF, Nogueira MFG, Barros CM, Bó GA. Superovulation and
embryo transfer in Bos Indicus cattle. Theriogenology 2006;65:77-88.
Bastos M. R., 2012: Diferenças Fisiológicas e Reprodutivas entre Bos taurus e Bos indicus. Faculdade de
Medicina Veterinária e Zootecnia - Universidade Estadual de São Paulo.
Batista E. O. S., 2015: Resposta ovariana, endócrina e molecular de novilhas taurinas e zbuínas submatidas
a diferentes níveis nutricionais de ingestão de matéria seca Tese Doutorado, USP, São Paulo.
Batista E. O. S.; Guerreiro B. M.; Freitas B. G.; Silva J. C. B.; Vieira L. M.; Ferreira R. M.; Rezende R. G.; Basso
A. C.; Lopes R. N. V. R.; Rennó F. P.; Souza A. H.; Baruselli P. S., 2016: Plasma anti-Müllerian
hormone as a predictive endocrine marker to select Bos taurus (Holstein) and Bos indicus (Nelore)
calves for in vitro embryo production. Domestic Animal Endocrinology, 54 1-9.
Batista E. O. S.; Macabelli C. H.; Chiaratti M. R.; Yasuoka M. M.; Sala R. V.; Ortolan M.; Jesus E. F.; Del Valle
T. A.; Rennó F. P.; Baruselli P. S., 2015: Impact of bovine genetic group (Bos indicus vs Bos taurus)
and level of dry matter intake (high vs. low) on gene expression of liver enzymes related to
progesterone metabolism. Anim Reprod, 12 642.
Batista E. O. S.; Macedo G. G.; Sala R. V.; Ortolan M.; Sá Filho M. F.; Del Valle T. A.; Jesus E. F.; Lopes R.;
Rennó F. P.; Baruselli P. S., 2014: Plasma Antimullerian Hormone as a Predictor of Ovarian Antral
Follicular Population in Bos indicus (Nelore) and Bos taurus (Holstein) Heifers. Reproduction in
Domestic Animals, 49 448-452.
Bertam C., 2000: Estudo da sincronizacão das ondas foliculares e das caracteristicas de estro, por
radiotelemetria, em novilhas cruzadas (Bos taurus indicus x Bos taurus taurus) tratadas com
acetato de melengestrol e prostaglandina F2 associados a hCG, GnRH ou estradiol e progesterona.
Tese de Doutorado, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo,
Brasil 2000.[Links].
Bó G. A.; Baruselli P. S.; Martı ́nez M. F., 2003: Pattern and manipulation of follicular development in Bos
indicus cattle. Animal Reproduction Science, 78 307-326.
Bó G. A.; Cutaia L.; Peres L. C.; Pincinato D.; Maranã D.; Baruselli P. S., 2007: Technologies for fixed-time
artificial insemination and their influence on reproductive performance of Bos indicus cattle Soc
Reprod Fertil Suppl., 64 223-236.
Bó G. A.; de la Mata J. J.; Baruselli P. S.; Menchaca A., 2016: Alternative programs for synchronizing and
resynchronizing ovulation in beef cattle. Theriogenology, 86 388-396.
BÓ, G.A; BARUSELLI, P.S. ; CHESTA, P.M ; MARTINS, C.M. The timing of ovulation and insemination
schedules in superstimulated cattle. Theriogenology, v.65, p.89-101, 2006.

16
 Memorias
Carvalho J. B. P.; Carvalho N. A. T.; Reis E. L.; Nichi M.; Souza A. H.; Baruselli P. S., 2008: Effect of early
luteolysis in progesterone-based timed AI protocols in Bos indicus, Bos indicus×Bos taurus, and
Bos taurus heifers. Theriogenology, 69 167-175.
Cipriano R. S.; Carvalho B. A.; Marangoni N. R.; Nogueira G. P., 2011: LH and FSH concentration and
follicular development in Nellore heifers submitted to fixed-time artificial insemination protocols
with different progesterone concentrations. Animal Reproduction Science, 127 16-22.
Colli M. H. A.; Rezende R. G.; Ellif F. M.; Zanatta G. M.; Mingoti R. D.; Gonçalves Junior W. A.; Ferreira R.
M.; Baruselli P. S., 2017: Factors influencing the pregnancy rate of 14 month old Nelore heifers
submitted to 3 consecutive TAI. Anim Reprod (SBTE), (abstract).
Crepaldi G.; Freitas B.; Sá Filho M.; Guerreiro B., 2014: Reproductive efficiency of Nelore females
submitted to three consecutive FTAI programs with 32 days of interval between inseminations.
Anim Reprod, 11 355.
D'occhio M.; Neish A.; Broadhurst L., 1990: Differences in gonadotrophin secretion post partum between
Zebu and European breed cattle. Animal Reproduction Science, 22 311-317.
De Silva A.; Anderson G.; Gwazdauskas F.; McGilliard M.; Lineweaver J., 1981: Interrelationships with
estrous behavior and conception in dairy cattle. Journal of dairy science, 64 2409-2418.
Figueiredo R.; Barros C.; Pinheiro O.; Soler J., 1997: Ovarian follicular dynamics in Nelore breed (Bos
indicus) cattle. Theriogenology, 47 1489-1505.
Fortune J.; Rivera G.; Yang M., 2004: Follicular development: the role of the follicular microenvironment
in selection of the dominant follicle. Animal Reproduction Science, 82 109-126.
Galina C. S.; Orihuela A., 2007: The detection of estrus in cattle raised under tropical conditions: What we
know and what we need to know. Hormones and Behavior, 52 32-38.
Gimenes L.; Fantinato Neto P.; Arango J.; Ayres H.; Baruselli P., 2009: Follicular dynamics of Bos indicus,
Bos taurus and Bubalus bubalis heifers treated with norgestomet ear implant associated or not to
injectable progesterone. Anim. Reprod, 6 256.
Gimenes L. U.; Sa Filho M. F.; Carvalho N. A. T.; Torres J. R. S.; Souza A. H.; Madureira E. H.; Trinca L. A.;
Sartorelli E. S.; Barros C. M.; Carvalho J. B. P.; Mapletoft R. J.; Baruselli P. S., 2008a: Follicle
deviation and ovulatory capacity in Bos indicus heifers. Theriogenology, 69 852-858.
Gimenes, L.U.; Sá Filho, M.F.; Torres-Júnior, J.R.; Beltran, M.P. Nogueira, G.P.; Baruselli, P.S. Perfil de FSH
e LH na divergência folicular em novilhas Nelore (Bos indicus). Braz. J. vet. Res. anim. Sci., v. 45, n.
1, p. 11-16, 2008b.
Ginther O.; Beg M.; Donadeu F.; Bergfelt D., 2003: Mechanism of follicle deviation in monovular farm
species. Animal reproduction science, 78 239-257.
Ginther O.; Knopf L.; Kastelic J., 1989: Temporal associations among ovarian events in cattle during
oestrous cycles with two and three follicular waves. Journal of Reproduction and Fertility, 87 223-
230.
Ginther O. J.; Bergfelt D. R.; Beg M. A.; Kot K., 2001: Follicle Selection in Cattle: Role of Luteinizing
Hormone. Biology of Reproduction, 64 197-205.
Ginther O. J.; Bergfelt D. R.; Kulick L. J.; Kot K., 1999: Selection of the dominant follicle in cattle:
establishment of follicle deviation in less than 8 hours through depression of fsh concentrations.
Theriogenology, 52 1079-1093.
Ginther O. J.; Kot K.; Kulick L. J.; Wiltbank M. C., 1997: Emergence and deviation of follicles during the
development of follicular waves in cattle. Theriogenology, 48 75-87.
Giordano J.; Fricke P.; Guenther J.; Lopes Jr G.; Herlihy M.; Nascimento A.; Wiltbank M., 2012: Effect of
progesterone on magnitude of the luteinizing hormone surge induced by two different doses of
gonadotropin-releasing hormone in lactating dairy cows. Journal of dairy science, 95 3781-3793.

17
 Memorias
Guerreiro B.; Batista E.; Vieira L.; Sá Filho M.; Rodrigues C.; Netto A. C.; Silveira C.; Bayeux B.; Dias E.;
Monteiro F., 2014: Plasma anti-Mullerian hormone: an endocrine marker for in vitro embryo
production from Bos taurus and Bos indicus donors. Domestic animal endocrinology.
Lopez H.; Satter L. D.; Wiltbank M. C., 2004: Relationship between level of milk production and estrous
behavior of lactating dairy cows. Animal Reproduction Science, 81 209-223.
Lucy M.; Savio J.; Badinga L.; De La Sota R.; Thatcher W., 1992: Factors that affect ovarian follicular
dynamics in cattle. Journal of animal science, 70 3615-3626.
Marques M.; Ribeiro Júnior M.; SILVA R.; Sá Filho M.; Vieira L.; BARUSELLI P., 2012: Ressincronização em
bovinos de corte. Simpósio Internacional de Reprodução Animal Aplicada, 5 82-92.
Marques M. d. O.; Morotti F.; da Silva C. B.; Júnior M. R.; da Silva R. C. P.; Baruselli P. S.; Seneda M. M.,
2015: Influence of category-heifers, primiparous and multiparous lactating cows-in a large-scale
resynchronization fixed-time artificial insemination program. Journal of veterinary science, 16
367-371.
Mizuta K., 2003: Estudo comparativo dos aspectos comportamentais do estro e dos teores plasmáticos de
LH, FSH, , progesterona e estradiol que precedem a ovulação em fêmeas bovinas Nelore (Bos
taurus indicus), Angus (Bos taurus taurs) e Nelore x Angus (Bos taurus indicus x Bos taurus taurus).
Universidade de São Paulo, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia.
Nebel R. L.; Jobst S. M.; Dransfield M. G., 1997: Use of radiofrequency data communication system, Heat
Watch, to describe behavioral estrus in dairy cattle. Journal of Dairy Science, 80 151.
Niswender G. D., 2002: Molecular control of luteal secretion of progesterone. Reproduction, 123 333-339.
Penteado L.; Sá Filho M.; Reis E.; Torres-Júnior J.; Madureira E.; Baruselli P., 2005: Eficiência reprodutiva
em vacas Nelore (Bos indicus) lactantes submetidas a diferentes manejos durante a estação de
monta. Anais XVI Reunião do Colégio Brasileiro de Reprodução Animal.
Peres R.; Júnior I. C.; Sá Filho O.; Nogueira G. d. P.; Vasconcelos J. L. M., 2009: Strategies to improve fertility
in Bos indicus postpubertal heifers and nonlactating cows submitted to fixed-time artificial
insemination. Theriogenology, 72 681-689.
Perry G. A.; Swanson O. L.; Larimore E. L.; Perry B. L.; Djira G. D.; Cushman R. A., 2014: Relationship of
follicle size and concentrations of estradiol among cows exhibiting or not exhibiting estrus during
a fixed-time AI protocol. Domestic Animal Endocrinology, 48 15-20.
Pinheiro O.; Barros C.; Figueiredo R.; Do Valle E.; Encarnação R.; Padovani C., 1998: Estrous behavior and
the estrus-to-ovulation interval in nelore cattle (Bosindicus with natural estrus or estrus induced
with prostaglandin F2α or norgestomet and estradiol valerate. Theriogenology, 49 667-681.
Pugliesi G.; Rezende R. G.; da Silva J. C. B.; Lopes E.; Nishimura T. K.; Baruselli P. S.; Madureira H.; Binelli
M., 2017: Uso da ultrassonografia Doppler em programas de IATF e TETF em bovinos.
Rae D.; Chenoweth P.; Giangreco M.; Dixon P.; Bennett F., 1999: Assessment of estrus detection by visual
observation and electronic detection methods and characterization of factors associated with
estrus and pregnancy in beef heifers. Theriogenology, 51 1121-1132.
Randel R., 1976: LH and ovulation in Brahman, Brahman x Hereford and Hereford heifers. Journal of
Animal Science, Vol. 43. AMER SOC ANIMAL SCIENCE 1111 NORTH DUNLAP AVE, SAVOY, IL 61874,
pp. 300-301.
Randel R., 1984: Seasonal effects on female reproductive functions in the bovine (Indian breeds).
Theriogenology, 21 170-185.
Sá Filho M.; Marques M.; Girotto R.; Santos F.; Sala R.; Barbuio J.; Baruselli P., 2014: Resynchronization
with unknown pregnancy status using progestin-based timed artificial insemination protocol in
beef cattle. Theriogenology, 81 284-290.

18
 Memorias
Sá Filho M. F.; Penteado L.; Reis E. L.; Reis T. A.; Galvão K. N.; Baruselli P. S., 2013: Timed artificial
insemination early in the breeding season improves the reproductive performance of suckled beef
cows. Theriogenology, 79 625-632.
Sales J. N. d. S., 2011: Efeito da dieta com alta energia nos parâmetros metabólicos, endócrinos e
reprodutivos de vacas Bos indicus e Bos taurus. Universidade de São Paulo.
Sales J. N. S.; Iguma L. T.; Batista R. I. T. P.; Quintão C. C. R.; Gama M. A. S.; Freitas C.; Pereira M. M.;
Camargo L. S. A.; Viana J. H. M.; Souza J. C.; Baruselli P. S., 2015: Effects of a high-energy diet on
oocyte quality and in vitro embryo production in Bos indicus and Bos taurus cows. Journal of Dairy
Science, 98 3086-3099.
Sangsritavong S.; Combs D. K.; Sartori R.; Armentano L. E.; Wiltbank M. C., 2002: High Feed Intake
Increases Liver Blood Flow and Metabolism of Progesterone and Estradiol-17β in Dairy Cattle.
Journal of Dairy Science, 85 2831-2842.
Sartorelli E. S.; Carvalho L. M.; Bergfelt D.; Ginther O.; Barros C. M., 2005: Morphological characterization
of follicle deviation in Nelore (Bos indicus) heifers and cows. Theriogenology, 63 2382-2394.
Sartori R.; Bastos M. R.; Baruselli P. S.; Gimenes L. U.; Ereno R. L.; Barros C. M., 2010: Physiological
differences and implications to reproductive management of Bos taurus and Bos indicus cattle in
a tropical environment. Soc Reprod Fertil Suppl., 67 357-375.
Sartori R.; Fricke P. M.; Ferreira J. C. P.; Ginther O. J.; Wiltbank M. C., 2001: Follicular Deviation and
Acquisition of Ovulatory Capacity in Bovine Follicles. Biology of Reproduction, 65 1403-1409.
Sartori R.; Gimenes L. U.; Monteiro P. L. J. J.; Melo L. F.; Baruselli P. S.; Bastos M. R., 2016: Metabolic and
endocrine differences between Bos taurus and Bos indicus females that impact the interaction of
nutrition with reproduction. Theriogenology, 86 32-40.
Sartori R.; Haughian J.; Shaver R.; Rosa G.; Wiltbank M., 2004: Comparison of ovarian function and
circulating steroids in estrous cycles of Holstein heifers and lactating cows. Journal of dairy
science, 87 905-920.
Schwarzenberger F.; Palme R.; Bamberg E.; Möstl E., 1997: A review of faecal progesterone metabolite
analysis for non-invasive monitoring of reproductive function in mammals. Zeitschrift fuer
Saeugetierkunde (Germany).
Segerson E.; Hansen T.; Libby D.; Randel R.; Getz W., 1984: Ovarian and uterine morphology and function
in Angus and Brahman cows. Journal of animal science, 59 1026-1046.
Stupnicki R.; Williams K. I., 1968: Urinary metabolites of 4-14 C-progesterone in the ewe. Steroids, 12 581-
587.
Vieira L.; Sá Filho M.; Pugliesi G.; Guerreiro B.; Cristaldo M.; Batista E.; Freitas B.; Carvalho F.; Guimaraes
L.; Baruselli P., 2014: Resynchronization in dairy cows 13 days after TAI followed by pregnancy
diagnosis based on corpus luteum vascularization by color doppler. Anim Reprod, 11 378.
Wiltbank M.; Souza A.; Giordano J.; Nascimento A.; Vasconcelos J.; Pereira M.; Fricke P.; Surjus R.; Zinsly
F.; Carvalho P., 2012: Positive and negative effects of progesterone during timed AI protocols in
lactating dairy cattle. Anim Reprod, 9 231-241.
Wiltbank M. C.; Carvalho P. D.; Kaskin A.; Hackbart K. S.; Meschiatti M. A.; Bastos M. R.; Guenther J. N.;
Nascimento A. B.; Herlihy M. M.; Amundson M. C., 2011: Effect of Progesterone Concentration
During Follicle Development on Subsequent Ovulation, Fertilization, and Early Embryo
Development in Lactating Dairy Cows. Biol. Reprod, 85 685.

19
Memorias

20
Memorias

21
 Memorias
Criterios en la Elección del Programa Reproductivo para Novillas de Carne: Pubertad vs
Madurez Reproductiva, Protocolo J-Synch vs Protocolo Convencional

Gabriel A. Bó 12, Javier de la Mata 3, Andres Vera Cedeño3 Alejo Menchaca 4

1 Instituto de Reproducción Animal Córdoba (IRAC), Zona Rural, General Paz (5145), Córdoba,
Argentina.
2 Instituto A.P. de Ciencias Básicas y Aplicadas, Medicina Veterinaria, Universidad Nacional de
Villa María, Villa del Rosario, Córdoba, Argentina.
3 Actividad Privada y Maestría en Reproducción Bovina, IRAC-Facultad de Ciencias Agrarias,
Universidad Nacional de Córdoba, Argentina.
4 Fundación IRAUy, Instituto de Reproducción Animal Uruguay, Montevideo, Uruguay.
e-mail: gabrielbo62@gmail.com

Resumen

Durante los últimos años se ha producido un gran avance en el desarrollo de programas de

inseminación artificial a tiempo fijo (IATF), lo cual incrementó notablemente la cantidad de
animales incluidos en estos programas. Datos de análisis de resultados de programas de IATF
indican que es posible obtener porcentajes de preñez promedio del 50% a primo inseminación,
tanto en vacas con cría al pie como en Novillas. Sin embargo, los resultados de preñez obtenidos
en Novillas muchas veces son variables e impredecibles, sobre todo en Novillas con alto
porcentaje de cebú y las que se quieren preñar con 15 meses de edad. Dentro de las posibles
causas de estos variables resultados podemos mencionar la alta tasa de inmadurez en las Novillas
en el momento que se las quiere inseminar y el tratamiento que se utiliza para la IATF. En ese
aspecto, se han reportado cuanto mayor sea el porcentaje de Novillas inmaduras (sin un CL) en
un lote menores serán los resultados a la IATF. Además, se ha reportado recientemente que las
tasas de preñez a la IATF se podrían incrementar si se disminuye el período de crecimiento del
folículo dominante ovulatorio y se prolonga la duración del proestro. Nosotros recientemente
reportamos datos de un tratamiento realizado utilizando un protocolo basado en benzoato de
estradiol (EB) y un dispositivo con progesterona (P4; que son las hormonas más usadas en
Latinoamérica) pero donde la remoción del dispositivo con progesterona fue realizada 6 días
después y se prolongó el proestro administrando GnRH como inductor de la ovulación a las 72 h

22
 Memorias
en lugar de las 48 h. Este protocolo fue denominado J-Synch las tasas de preñez a la IATF fueron
numéricamente mayores a las obtenidas con el protocolo convencional en Novillas Holando
Argentino y significativamente mayores en Novillas de carne y receptoras de embriones. El
objetivo de esta revisión es discutir en profundidad el tema de pubertad y madurez reproductiva
en Novillas y como estos factores afectan la preñez. Además, presentar resultados obtenidos con
el protocolo J-Synch en comparación con los protocolos convencionales de IATF.

Pubertad en el Ganado Bovino

La pubertad es la edad a la cual un animal alcanza la madurez sexual y es precedida por un

periodo de maduración sexual y desarrollo fisiológico. Las gónadas de los animales son
responsables de la producción de gametas viables que, después de la fertilización, resultan en la
generación de descendientes. La función de las gónadas es regulada por factores locales y
endocrinos, donde la pituitaria e hipotálamo tienen roles críticos. Comprender los factores que
regulan la función de la pituitaria y hipotálamo durante el periodo de maduración sexual, y cómo
estos cambios preparan la primera ovulación en hembras, es la clave para entender los
acontecimientos de desarrollo prepuberal.

Existe bastante información sobre el patrón de desarrollo de los folículos antrales ováricos y del
tracto reproductivo en la ternera después del nacimiento y los mecanismos endocrinos que
controlan la maduración sexual también están más claros. Todo este proceso por lo tanto será
revisado en conjunto. Desde un punto de vista práctico, hay probablemente mas interés en el
mecanismo que regula el desarrollo postnatal ovárico en el bovino comparado con otras especies
de campo, debido a la presión para obtener terneros de Novillas a una edad temprana y a la
intensidad de esfuerzos dirigidos hacia la mejora genética. La edad de la primera ovulación en el
ganado es bastante variable (Kinder et al., 1995) y sería útil adelantar el momento de la primera
ovulación para tener varios ciclos antes del primer servicio, ya que la fertilidad aumenta al paso
de los ciclos después de la primera ovulación puberal (Byerley et al., 1987).

Desarrollo del tracto reproductivo

En mamíferos el sexo genotípico de un individuo es el resultado de una cascada de

eventos controlados por factores endocrinos y genéticos. La determinación del sexo es el proceso
que resulta en la formación de los testículos o de los ovarios y pareciera estar principalmente
bajo control genético (en gran parte por genes de los cromosomas sexuales X e Y) (Cotinot et al.,
2002). La diferenciación sexual es el subsiguiente desarrollo de las gónadas y órganos accesorios

23
 Memorias
sexuales y está bajo control endocrino. La naturaleza del control endocrino esta dirigida por
determinación sexual y por lo tanto, el sexo fenotípico de un individuo es determinado por la
expresión correcta de su constitución genética.

Observaciones de Novillas que fueron sacrificadas en intervalos mensuales mostró que

el peso ovárico aumentó hasta los 4 meses de edad, se mantuvo hasta los 8 meses de edad y
luego aumentó más rápido cuando las Novillas comenzaron a ciclar y desarrollar un cuerpo lúteo
(7 a 10 meses de edad). No había ningún folículo antral visible en el nacimiento pero un pequeño
número apareció antes de 1 mes de edad. El número de folículos antrales alcanzó un pico a los 4
meses de edad, disminuyó hacia los 8 meses y luego se estabilizó. El peso de la vagina y cervix
aumentaron gradualmente hasta los 4 meses de edad, y luego más rápidamente hasta la primera
ovulación. El peso del útero aumento desde el nacimiento hasta la primera ovulación.

En un estudio en Novillas de carne (Honaramooz et al., 2004), utilizando ultrasonografía

transrectal entre las semanas 2 y 60 de edad, el diámetro del útero, del cervix y la vagina
aumentaron rápidamente desde la semana 2 a 24 de edad y aumentaran de nuevo después de
la semana 32 de edad. La primera ovulación ocurrió a las 63.7 ± 1.1 semanas de edad. Las
dimensiones del ovario aumentaron rápidamente desde la semana 2 a 14 edad y nuevamente de
la semana 34 a 60. Los folículos antrales aparecieron a las 2 semanas de edad y el número de
folículos ≥ 3 mm de diámetro y el diámetro máximo de los folículos aumentaron en un modo
similar a las dimensiones ováricas, con un aumento marcado del diámetro máximo del folículo
mayor durante los 80 días antes de la primera ovulación. El diámetro del folículo mayor fue
positivamente correlacionado con el diámetro de varios segmentos del tracto reproductivo.

Desarrollo folicular ovárico

La imagen ultrasonográfica transrectal proporciona un medio de monitoreo frecuente, no-

invasivo de los folículos antrales ováricos en un mismo grupo de animales a cualquier edad (Evans
et al., 1994a, 1994b). Utilizando ultrasonografía transrectal, los folículos antrales ováricos
pueden ser visualizados y medidos independientemente de la profundidad en el ovario. Cuando
esas observaciones fueron hechas diariamente, durante un período de tiempo extenso,
mostraron que las Novillas de carne prepuberes tienen ondas de desarrollo de folículos antrales
(Adams et al., 1994) en forma similar al ganado adulto. Las ondas foliculares en Novillas
prepuberes, como en vacas adultas, fueron precedidas por un pico de concentración sérica de
FSH (Figura 1) (Evans et al., 1994). En un estudio extenso, se realizaron examinaciones
transrectales diarias por periodos de al menos 17 días, en intervalos de 6 a 12 semanas, desde
las 2 semanas de edad hasta la primera ovulación (Evans et al., 1994 a, c). Las Novillas de carne a

24
 Memorias
las 2 semanas de edad mostraron ondas foliculares ováricas regulares (Figura 1; Evans et al.,
1994c). El número de folículos pequeños (3-5 mm de diámetro), medios (6-8 mm de diámetros)
y grandes (≥9 mm de diámetro) aumentó desde la semana 2 a 14 de edad, así como también el
diámetro máximo del folículo mayor de cada onda (Figura 1) El diámetro del folículo mayor
aumentó más rápidamente desde la semana 24 a 44 de edad. La primera ovulación fue vista en
promedio a las 56.0 ± 1.2 semanas de edad. Las concentraciones sérica máximas de estradiol
fueron mayores desde la ultima onda no ovulatoria y la primera ovulatoria en el periodo
peripuberal comparada con las ondas no ovulatorias de las semanas 9 a 12 antes de la primera
ovulación. Bergfeld et al. (1994) encontró que el máximo diámetro folicular del folículo mayor
de cada onda aumento en los últimos 30 días antes de la primera ovulación.

En resumen, observaciones previas posmortem y estudios ultrasonograficos en terneras

mostraron un claro aumento postnatal del número de folículos antrales. Los estudios
ultrasonográficos mostraron después del aumento post-natal de folículos en crecimiento, una
meseta seguida de otro aumento a las 30 semanas, y especialmente en las últimas 11 semanas,
previas a la primera ovulación. Parecería que aumentos en la producción de estrógenos desde
los folículos ováricos manejan el modo bifásico del crecimiento de la genitalia tubular, ya que el
crecimiento del ovario y de los folículos ováricos mostraron un patrón similar que la genitalia
tubular. Las concentraciones circulantes de estradiol son bajas al principio pero aumentan con la
edad mientras las Novillas prepuberes maduran, en particular durante las 12 semanas antes de
la primera ovulación. Sin embargo, el mayor aumento ocurre pocos días antes de la primera
ovulación. La primera ovulación en Novillas frecuentemente no está asociada con estro, y el
subsecuente cuerpo lúteo es más pequeño que uno de un ciclo normal y puede ser de vida más
corta. Este ciclo corto es seguido por estro y una fase luteal de duración normal.

25
 Memorias
Follicle diameter mm)
Follicle diameter (mm)

9
8
7
6
5
4
15 17 19 21 23 25 27 29 31
FSH (ng/ml)

1.4
FSH (ng/ml)

1.2

1.0
MeanMean

0.8

0.6
15 17 19 21 23 25 27 29 31
Age (days)

Figura 1. Representación esquemática de los perfiles de crecimiento del folículo dominante y del
folículo mayor subordinado, asociado con las concentraciones de FSH en Novillas entre 15 y 30
días de edad.

Secreción hormonal durante el periodo prepuber

Existe un aumento marcado pero pasajero en la secreción de LH y FSH en las terneras de 6 a 24

semanas de edad (Evans et al., 1992). La secreción de LH es claramente pulsátil y este aumento
temprano en la secreción parece ser debido principalmente a un aumento en la amplitud del pulso
de LH (Evans et al., 1992, 1994c). Posteriormente, la concentración sérica de LH y FSH permanece

26
 Memorias
baja; la frecuencia de los pulsos de LH aumenta durante los últimos 40 a 80 días previos a la
primera ovulación. La concentración sérica de FSH permanece relativamente estable en el periodo
previo a ovulación (Evans et al., 1994c). Por lo tanto, el aumento postnatal temprano en la
secreción de gonadotrofinas parecería conducir el aumento paralelo del número y tamaño de los
folículos ováricos antrales. En el periodo peripuberal, aumenta la frecuencia del pulso de LH que
causa el crecimiento de los folículos antrales más grande aumentando la producción de estradiol,
durante un período de 30 a 80 días previos a la primera ovulación.

Maduración Sexual

El aumento temprano en la secreción de gonadotrofinas puede reflejar una maduración postnatal

temprana del eje hipotalámico hipofisiario, seguido por el establecimiento de influencias
inhibitorias, que sostienen la secreción de gonadotrofinas inhibida hasta que se adquiere un
adecuado estado de crecimiento somático o de desarrollo. Ciertamente, altos niveles de nutrición
permiten un inicio más rápido de la maduración sexual, con un aumento prepuberal más temprano
de la frecuencia de pulsos de LH, el tamaño máximo del folículo más grande de la onda y de la
secreción de estrógeno. En terneras, el aumento temprano de la secreción de LH parece involucrar
un aumento en la amplitud del pulso de LH (Evans et al., 1992, 1994c). La regulación del feedback
negativo de la secreción de LH es establecido temprano en terneras y parecería no ser un factor
principal en la regulación en el aumento postnatal temprano en la secreción de LH. Una
disminución de la inhibición opioide de secreción de LH puede ser un factor causante del aumento
postnatal temprano en la secreción de LH (Evans et al., 1992). Una inhibición poderosa opioide
de la secreción de LH es restablecida después del aumento postnatal temprano en la secreción de
LH, y parece disminuir antes de la primera ovulación. La importancia funcional del aumento
temprano pasajero postnatal de la secreción de gonadotrofinas es confuso, aunque esto
seguramente estimula el desarrollo del pool de folículos antrales ováricos.

Durante mucho tiempo se sostuvo que una reducción en la supresión de la secreción de LH por el
estradiol sobre los últimos 40 a 50 días antes de la primera ovulación, permite un aumento de la
frecuencia de los pulsos de LH mediado por GnRH (Day et al., 1986, 1987). Esto por último
estimula el crecimiento de los folículos antrales ováricos y la producción de estradiol, hasta que
un folículo produzca suficiente estradiol para causar un pico preovulatorio de LH. La disminución
del feedback negativo del estradiol puede ser mediado por una disminución del número de
receptores de estradiol en el hipotálamo. Cuando la primera ovulación fue inducida por tratamiento
con progestágeno en Novillas, el número de receptores de estradiol en el hipotálamo disminuyó.
Los receptores de estradiol no están presentes en neuronas de GnRH. Por lo tanto, los efectos del
estradiol tienen que ser indirectos. Los opioides endógenos podrían mediar los efectos del estradiol
sobre la secreción de LH como un poderoso inhibidor de la secreción de LH en terneras antes de
la madurez, efecto que parece desaparecer antes de la primera ovulación. Además, la inhibición
prepuberal de la secreción de LH por opioides endógenos en terneras, parece involucrar una
supresión del sistema neuronal dopaminérgico estimulatorio (Honaramooz et al., 2000). Se
desarrolla también un sistema neuronal  adrenérgico de tipo estimulatorio 20 semanas antes de
la primera ovulación. Esto puede tener un papel en la estimulación de la secreción de LH antes de
la primera ovulación, a medida que disminuyen los efectos del feedback negativo del estradiol y
de los opioides endógenos.

27
 Memorias
En resumen, los cambios en la regulación de la secreción de LH por el feedback negativo del
estradiol parecen ser críticos para el aumento de la secreción de LH que conducen al crecimiento
de los folículos antrales ováricos y la producción de estrógenos antes de la primera ovulación en
Novillas. Sin embargo se están encontrando otros reguladores en Novillas y en otras especies, que
pueden estar involucrados en este proceso, probablemente mediando o influenciado los cambios
en el feedback negativo del estradiol sobre la secreción de LH

Efecto de la Nutrición

La nutrición de la ternera en el periodo prepuber va a influenciar el comienzo de la pubertad. El

objetivo de este trabajo fue comparar el inicio de la pubertad de terneras destetadas
precozmente con Rúter® (ACA; Asociación de Cooperativas Argentinas, San Nicolás, Argentina)
vs un grupo control destetadas tradicionalmente. Además, se evaluó el efecto del tipo de destete
sobre la tasa de preñez. Se utilizaron para este estudio 37 hembras puras de pedigree de la raza
Bonsmara que tenían en su ascendencia el mismo padre (Mandela, S.I. 2165). Se efectuaron 8
réplicas de trabajo, las cuales fueron bloqueados por edad de nacimiento. Se utilizó uno de dos
métodos de destete. Destete Rúter® (DR), en el cual las hembras fueron separadas de las madres
en el día 45 de vida para ser trasladados a un corral donde recibieron alimentación con Rúter® y
rollo de alfa ad libitum y de ahí en adelante alimentación con Balanceado Iniciador (ACA) con 18%
de proteína bruta. Luego a los 6 meses de edad pasaron a recibir un concentrado proteico
denominado Terminador (ACA) con 45% de proteína bruta y mezcla con maíz (80% maíz y 20%
concentrado, aproximadamente 3 kg/día divido en dos comidas diarias. En el grupo Destete
Tradicional (DT), las hembras permanecieron con las madres hasta los 6 meses de edad y en ese
momento fueron destetadas y pasaron a recibir alimentación similar a la del grupo DR. A los 45
días de vida y a partir de ese momento en adelante, todas las hembras fueron pesadas
rutinariamente una vez por mes hasta los 18 meses de edad. En ambos grupos a partir de los 10
meses de edad se empezaron a revisar por ultrasonografía (Mindray® DP30 Vet, Shenzhen, China)
y con una frecuencia de cada 15 días, luego una vez por semana desde los 13 meses de edad en
adelante hasta la ovulación que fue corroborada con la presencia de un CL 7 días después (Moran
et al., 1989). En ese momento todas las vaquillonas con un CL fueron sincronizadas para recibir
un primer servicio por inseminación artificial a tiempo fijo (IATF). Se efectuó un protocolo J-Synch
(de la Mata y Bó, 2012) en el cual recibieron en el Día 0 un dispositivo intravaginal de
progesterona (DIB 0,5 g, Zoetis) y 2 mg de benzoato de estradiol (Gonadiol, Zoetis). En el Día 6 se
retiraron los dispositivos y se aplicó 500 µg de prostaglandina (PGF2α, Rio de Janeiro). Luego, 72
h más tarde todas las vaquillonas fueron IATF y recibieron 100 µg de acetato de gonadorelina
(GnRH, Gonasyn gdr, Zoetis). Se realizó el diagnostico de preñez a los 25 Días de gestación y en
ese momento las vaquillonas vacías fueron resincronizadas con el mismo protocolo para recibir
el segundo servicio. Los datos fueron analizados mediante el procedimiento MLGM (InfoStat,
UNC). No se encontraron diferencias entre el diámetro del folículo a la pubertad, semanas a la
pubertad, ganancia diaria de peso, peso final y la tasa de preñez después de dos servicios (P≥0,18;
Tabla 1). Además, no se encontraron interacciones entre las variables estudiadas. Se concluyó

28
 Memorias
que el uso del DR no afecta la llegada a la pubertad, ni la tasa de preñez de vaquillonas
comparadas con un grupo DT.

Tabla 1. Efecto del tipo de destete sobre la ganancia de peso diaria.

Grupo Peso Peso Ganancia Semanas a Diámetro FD a Tasa de

inicial final diaria la la pubertad Preñez
pubertad (mm)

DR 62,6 453 0,88 69,0 12,0 46,2%

±4,7 ±10,4
±0,4 ±0,1 ±0,4 (6/13)

DT 69,3 461 0,91 65,3 13,5 50,0%

±4,1 ±11,2
±0,4 ±0,2 ±0,4 (12/24)

Los resultados no difieren significativamente, (P≥ 0,18).

Protocolos de IATF en Novillas

La inseminación artificial a tiempo fijo (IATF) tuvo grandes avances en los últimos 20 años. La
compresión de la fisiología ovárica en vacas y Novillas (Bó et al., 2016) ha permitido la aplicación
con éxito en forma masiva de la técnica en numerosos rodeos en todo el mundo. Existen varias
ventajas en la implementación de la IATF y dentro de las más destacadas en Novillas se podrían
mencionar la inducción a la ciclicidad en animales prepúberes (estimulación hormonal), la mejora
genética de la progenie y, de capital importancia, la facilidad de partos evitando las distocias. En
general, los porcentajes de preñez alcanzados con la IATF se aproximan al 50 % en rodeos para
carne (Bó et al., 2013), siendo muchas veces variables estos resultados en la categoría vaquillona
debido a factores como: manejo, recría, nutrición y hormonas utilizadas en los distintos
tratamientos. A la hora de seleccionar los programas para sincronizar Novillas se pueden utilizar
prostaglandinas (PGF), progesterona y estradiol o análogos de la hormona liberadora de
gonadrotrofinas (GnRH) combinadas con PGF. Durante la última década se desarrollaron nuevas
generaciones de protocolos denominados “tratamientos cortos”, que han demostrado mejorar las
tasas de preñez. Estos se fundamentan en disminuir el período de inserción de dispositivos con
progesterona, reduciendo el período de dominancia del folículo y prolongado el proestro previo a
la ovulación (CO-Synch 5 d + CIDR; Bridges et al., 2008). Recientemente hemos desarrollado un
nuevo tratamiento corto que utiliza estradiol y progesterona para sincronizar la emergencia de onda
folicular y GnRH como inductor de ovulación, promoviendo un proestro prolongado (denominado
J-Synch; de la Mata y Bó, 2012).

Efecto de la prolongación del proestro sobre la fertilidad

29
 Memorias
El protocolo más utilizado para vacas y Novillas en EEUU utiliza GnRH y un dispositivo con
progesterona por 7 días, con una tasa de preñez cercana al 50%. Bridges et al. (2008) compararon
un protocolo Co-Synch de 7 días con un dispositivo de progesterona con IATF a las 60 h y un
protocolo Co-Synch de 5 días con IATF a las 72 h en vacas de razas para carne. En este estudio,
las tasas de preñez fueron 10,5 puntos porcentuales superiores en las tratadas con Co-Synch de
5 días. En Novillas de razas de carne de 15 meses también demostró ser exitoso el tratamiento
Co-Synch 5 d con IATF a las 72 h cuando se comparó con otros dos protocolos (Perry et al., 2012)
alcanzando tasas de preñez por encima de 60%.En estudios recientes (Whitter et al., 2013) se
reportó que las vacas cruza Angus sincronizadas con el Co-Synch 5d + CIDR, tuvieron mayor
porcentaje de preñez que aquellas que recibieron un protocolo Co-Synch 7d + CIDR (58,1 % vs
55,1 %; P < 0,05).

En todos estos trabajos se justificó la mayor tasa de preñez en el hecho que estos protocolos se
caracterizan por un menor periodo de inserción del dispositivo y un proestro de mayor duración
(Bridges et al., 2008). En este caso se denominó proestro al período comprendido desde la
remoción del dispositivo y aplicación de la primera dosis de PGF hasta la inducción de la ovulación
con GnRH 72 h más tarde. En trabajos posteriores (Bridges et al., 2010) se observó que animales
tratados e inseminados con tratamientos de proestros prolongados tuvieron tasas de preñez
mayores que los animales tratados con tratamientos de proestros cortos. Además los niveles de
estradiol preovulatorios fueron mayores en proestros largos que en proestros cortos, aunque los
diámetros de los folículos preovulatorios no difirieron entre tratamientos (Bridges et al., 2010).
Las concentraciones plasmáticas de estradiol durante el proestro afectaron directamente sobre
el medio ambiente uterino y su habilidad para mantener la preñez y el desarrollo del concepto
los primeros días de gestación. Así se demostró que la mayor duración del proestro y la mayor
concentración plasmática de estradiol pre-ovulatorio generaron mayor expresión de genes que
codifican para receptores de estradiol y una mayor concentración de receptores de progesterona
a nivel uterino durante los primeros 15,5 días de desarrollo embrionario (Bridges et al., 2012).
Además, que las alteraciones de estas concentraciones de estradiol podrían afectar las funciones
uterinas durante los estadios de gestación tardía o en momentos iniciales de la gestación
(implantación y placentación) pudiendo perder la habilidad para mantener la preñez (Bridges et
al., 2013).

Tratamiento J-Synch

A partir de 2011, realizamos una serie de experimentos con el objetivo de desarrollar un nuevo
tratamiento usando EB y P4 para sincronizar el inicio de una nueva onda folicular con un período
reducido de inserción de dispositivo con progesterona de 6 días (en lugar de 7 u 8 días), y
administrando GnRH como inductor de ovulación a las 72 h (Día 9) desde la remoción del
dispositivo junto con la IATF, promoviendo un proestro prolongando. Este tratamiento fue
denominado J-Synch (de la Mata y Bó, 2012). Se comparó la eficiencia en la sincronización de la
ovulación con el tratamiento convencional y las Novillas pertenecientes al grupo J-Synch tuvieron

30
 Memorias
un horario medio de ovulación de 93,7 ± 12,94 h que fue mayor (P<0,0001) al del grupo
Convencional, con una media de 65,0±13,67 h (de la Mata et al., 2015b). Esta diferencia fue de
28,7 h entre tratamientos pero no se vio reflejada en el diámetro del folículo ovulatorio que no
varió entre grupos (J-Synch: 13.0±1,0 mm vs Convencional: 12,8±0,95 mm). Sin embargo la tasa
de crecimiento folicular fue superior en las Novillas del grupo J-Synch (1,3±0,4 mm/día, P=0,05)
que en las grupo Convencional (1,0±0,4 mm/día). Al analizar el desarrollo luteal la media de
volumen luteal calculada durante los Días 4 a 12 fue mayor (P=0,04) en el grupo J-Synch
(398,7±10,0 mm3) en comparación al grupo Convencional (357,3±10,0 mm3) y los niveles de P4
en sangre también fueron mayores (P=0,03) en el grupo J-Synch que en el Convencional.

Tasas de preñez con los tratamientos J-Synch vs los Convencionales

Como se mencionó anteriormente, los tratamientos con estradiol y dispositivos con

progesterona por 7 días (Convencionales) son los más utilizados en la actualidad en Sudamérica
con los que se alcanzan tasas de preñez aceptables (Bó et al., 2013). En experimentos de dinámica
mostrados anteriormente observamos que el proestro inducido en Novillas tratadas con el
protocolo J-Synch tuvo una duración promedio entre 95 y 97 h. Entonces, se formuló una
hipótesis, que la prolongación del proestro aumenta las tasas de preñez con respecto a
tratamientos convencionales que generan un proestro de menor duración. Para esto se hicieron
varios experimentos con el objetivo de comparar las tasas de preñez logradas entre Novillas
tratadas con un protocolo J-Synch en comparación protocolos convencionales (de la Mata et al.,
2015b). En el primer Experimento se utilizaron Novillas cíclicas Angus y Angus x Hereford de 18
a 24 meses de edad, con una condición corporal de 4 a 6 (escala 1 al 9), y los animales fueron
divididos en dos grupos para recibir uno de dos tratamientos de IATF. El grupo J-Synch, recibió
en el Día 0, 2 mg de EB por vía IM), junto con un DIB 0,5 g (Zoetis). En el Día 6 se retiraron los
DIB de todas las Novillas y se administró PGF por vía im. El Día 9 (72 h pos remoción del DIB) las
Novillas fueron IATF junto con la administración de GnRH. A los animales del grupo Convencional,
en el Día 0, se les aplicó 2 mg de EB junto con un DIB 0,5 g. El Día 7 se removieron los DIB y se
administró PGF por vía IM y 0,5 mg de ECP. El Día 9, entre 52 a 54 h pos remoción del DIB, los
animales fueron IATF. El diagnóstico de gestación se realizó entre los 61 y 90 días desde la IATF,
mediante ultrasonografía (Chison 600 Vet, lineal – 5MHz) y palpación rectal. Todos los datos
fueron analizados con regresión logística mediante el software Infostat. Durante los meses
invernales en los que se llevaron a cabo estas réplicas, tanto en el año 2011 como en 2013 se
registraron bajas precipitaciones, lo cual afectó fuertemente la calidad forrajera y por ende un
estrés nutricional general de las Novillas. Al considerar los resultados por tratamiento de ambas
réplicas, la tasa de preñez total fue mayor para las Novillas del grupo Convencional (49,3%;
138/280) que las del grupo J-Synch (37,8%; 104/275; P<0,01). Creemos que el protocolo
implementado para inducir un proestro prolongado (J-Synch) afectó en forma negativa la tasa de
preñez en condiciones de invierno y esto puede atribuirse a un menor tiempo de inserción del
dispositivo con progesterona en las Novillas que recibieron J-Synch, que luego de la IATF tuvieron
baja CC, generando folículos de pequeño tamaño. Esto puede haber comprometido la fertilidad

31
 Memorias
y/o la ovulación subsiguiente. En Novillas, la probabilidades de obtener una exitosa tasa de
preñez a la IATF se logra con un rango de diámetro ovulatorio entre 10,8 y 15,6 mm (Perry et al.,
2007), por lo que estas Novillas probablemente no hayan alcanzado un diámetro folicular
adecuado. Por otro lado, las Novillas del grupo Convencional alcanzaron tasas de preñez
estándares, lo que nos hace pensar que la administración exógena de CPE puede haber
compensado la falta de estradiol endógeno producido por los folículos preovualtorios. Jinks et
al., (2012), reportó que la suplementación con CPE durante el periodo preovulatorio incrementó
los porcentajes de preñez en vacas inducidas a ovular folículos pequeños. Esto podría explicar en
parte el efecto negativo de un proestro prolongado en Novillas con balance energético negativo
y disminución de peso corporal.

En el segundo Experimento se utilizaron Novillas cíclicas Angus y Hereford de 15, 18 y 24 meses

de edad, con una condición corporal de 6 a 8 (escala 1 a 9), y los animales fueron divididos para
recibir los mismos tratamientos que en el Experimento 1 (de la Mata et al., 2015b). En este caso
las Novillas fueron sincronizadas en la Primavera con buena disponibilidad de pasto y en un plano
de aumento de peso. En este caso la preñez general fue numéricamente mayor en el grupo J-
Synch (59,7%; 175/293) que en el convencional (53,1%; 154/290; P=0,12). Sin embargo en el
Experimento 3, realizado en Anguil La Pampa (de la Mata et al., 2015a), la tasa de preñez fue
mayor (P<0,01) en las Novillas tratadas con el protocolo J-Synch (67,9%; 70/103) que las del grupo
Convencional (46,6%; 49/105). En este caso se pintó la base de la cola con pintura (Paintstick, LA-
CO industries, INC, EEUU) como método de detección visual de celo (línea de aproximadamente
25 cm). En el grupo Convencional, las Novillas fueron observadas para determinar manifestación
de celo a las 36 h de removidos los DIB, para ser inseminadas 12 h más tarde (48 h), mientras que
las que manifestaron celo después de las 36 h y/o no manifestaron celo, fueron IATF el Día 9 (54
h post retiro de dispositivo). Las Novillas del grupo J-Synch fueron observadas para determinar
manifestación de celo a las 48 h de removidos los DIB, para ser inseminados 12 h más tarde (60
h) junto con la aplicación de GnRH, mientras que las que manifestaron celo luego de las 60 h y/o
no lo hicieron fueron IATF entre 72 y 74 h post retiro de dispositivo (Día 9) junto con la
administración GnRH. La tasa de detección de celos fue del 30% y no difirió entre los grupos. Sin
embargo, la tasa de preñez de las Novillas inseminadas a celo detectado fue mayor en las Novillas
del grupo J-Synch (80%, 32/40) que en las del Convencional (50%, 15/30; P<0,1) que repercutio
en la tasa de preñez acumulada como se indicó anteriormente. Considerando estos dos
experimentos realizados en primavera, podemos observar que las tasas de preñez logradas
fueron 60,6 % (157/259) para el tratamiento J-Synch y 47,9% para el tratamiento Convencional,
existiendo una diferencia significativa a favor del primer tratamiento (P<0,01). Estos datos
demuestran que en condiciones favorables de CC, nutrición y plano de aumento de peso, como
las que se presentaron en la primavera el protocolo J-Synch resulta en mayores tasas de preñez
que el convencional. A fin de confirmar estos resultados se realizó un ensayo de campo, con la
participación de dos experimentos en Uruguay con 4.947 Novillas Angus x Hereford mestizas (Bó
et al., 2016). Un objetivo secundario fue determinar los efectos del momento de la IATF y la

32
 Memorias
adición de eCG al momento de retirar el dispositivo con progesterona sobre las tasas de preñez.
En el Experimento 1, todas las Novillas recibieron un dispositivo con progesterona de 0,5 g más
2 mg de EB en el Día 0. Las Novillas en el grupo de tratamiento convencional recibieron PGF y CPE
y se retiraron los dispositivos en el Día 7 PM. Las Novillas se subdividieron para ser IATF en el día
9 AM o PM (es decir, 48 o 56 h después de retirado el DIB). Las Novillas en el grupo de tratamiento
J-Synch recibieron PGF y el DIB fue retirado el Día 6 PM y recibieron GnRH y fueron IATF en el Día
9 AM o PM (es decir, 60 o 72 horas después de retirado el DIB). Todas las Novillas en este
experimento también fueron tratadas con 300 UI de eCG (Novormón 5000, Syntex S.A.) al retiro
del DIB. En el Experimento 2, todas las Novillas fueron tratadas con el protocolo J-Synch como se
describe en el Experimento 1, pero a la remoción del dispositivo (Día 6 PM), las Novillas fueron
divididos para recibir 300 UI de eCG o ningún tratamiento eCG en ese momento, y fueron
subdivididas además, para recibir GnRH e IATF en el Día 9 AM o PM (es decir, 60 o 72 horas
después de retirado el DIB). La tasa de preñez fue mayor (P<0,05) en Novillas tratadas con el
protocolo J-Synch (56,1%ñ 613-1125 vs 50,7%; 620/1224; P<0,01). Sin embargo, la eliminación
de eCG del protocolo J-Synch en el Experimento 2 resultó en una reducción de la tasa de (eCG:
57,1%; 739/1295 vs No eCG: 53,1%; 692/1303; P<0,05). En resumen, la adición de eCG mejora
las tasas de preñez a la IATF y se confirmó una mayor tasa de preñez en las Novillas tratadas con
el protocolo J-Synch que en el Convencional.

Se realizó luego otro trabajo con el objetivo de evaluar las tasas de preñez en vacas y Novillas
cruza cebú sincronizadas con el protocolo J-Synch y evaluar además el efecto de la presentación
de celos al momento de la IATF sobre las tasas de preñez (Vera Cedeño, 2016 sin publicar). Este
trabajo se realizó en la Estancia El Mangrullo, localizada en Lavalle, Provincia de Santiago del
Estero. Se utilizaron 253 animales cruza cebú por Bonsmara y Bonsmara puras, que fueron
bloqueadas por categoría (vacas secas cruza Bonsmara, vacas secas Bonsmara puras y Novillas
cruza Bonsmara). Los animales fueron examinados en el Día 0 por ultrasonografía (Mindray DP30
Vet, 7.5 MHz, China) y recibieron la aplicación de dispositivos intravaginales con progesterona
(P4, Synkro xy 0,5 g, Proagro S.A., Argentina) y 2 ml de estradiol benzoato (EB; Benzoato de
Estradiol, 2 mg, Synkro xy, Proagro S.A.). Luego de 6 días se procedió a retirar los dispositivos
con P4 y se realizó la aplicación de 2 ml de PGF (D+Cloprostenol 75.0 µg/ml, Synkro xy, Proagro
S.A.). En ese momento todos los animales fueron pintados (10 a 15 cm de largo por 5 cm de
ancho) sobre la zona sacro coxígea (CeloTest, Biotay S.A., Argentina). Los animales despintados
diagnosticado mediante la observación de la pérdida de la pintura (pp) correspondiente ≥ 30%
(en celo) recibieron 2.5 ml de GnRH (Acetato de Buserelina, 4 µg/ml, Synkro xy, Proagro S.A) y
fueron IATF entre las 62 y 67 h (primera IATF) y los animales que no mostraron celo recibieron la
misma dosis de GnRH y la IATF entre las 69 y 72 h (segunda IATF).
Las Novillas fueron además subdivididas de forma aleatoria, donde la mitad de ellas recibieron
1,5 ml de Gonadotrofina Coriónica Equina (eCG; 200 UI/ml, Novormon 5000, Syntex S.A.,
Argentina).

33
 Memorias
La tasa de preñez alcanzada en este experimento fue del 62.4% Los resultados analizados
demuestran que se encontraron diferencias significativas entre los animales que estaban
despintados (en celo) a las 60 h en comparación con los que no mostraron celo en ese momento
(P<0.04; Tabla 2). También se encontró diferencias significativas cuando se analizó la utilización
de la eCG en la categoría Novillas (P<0,05, Tabla 3). Cuando se comparó la tasa de preñez entre
los animales que estaban pintados a las 60 h y que se despintaron antes de la segunda IATF
realizada entre las 68 y 72h, las diferencias fueron solo numéricas (no significativas) en
comparación con las vacas que nunca se despintaron (sin celo) durante todo el experimento
(Tabla 4). Por último no hubo un efecto significativo de estructura ovárica en el Día 0, condición
corporal, inseminador y toro sobre las tasas de preñez (P>0,07). No se encontraron interacciones
entre las variables estudiadas. A continuación se muestran las tablas de los resultados.

Tabla 2. Efecto de presentación del celo AM diagnosticada por la pérdida de pintura sobre la taza
de preñez.
ab
Categoría N Preñadas Porcentaje

Despintadas 169 113 67 %a

Pintadas 84 45 53 %b

Porcentajes con superíndice distintos difieren significativamente (P<0,04).

Tabla 3. Efecto de la adición de adición de la eCG en Novillas sobre la tasa de preñez.

Tratamiento n Preñadas Porcentaje

Con eCG 39 26 66%a

34
 Memorias
ab
b
Sin eCG 45 21 46%

Porcentajes con superíndice distintos difieren significativamente (P<0,05).

Tabla 4. Efecto de la presentación del celo a la segunda IATF realizada entre las 68 y 72 h sobre
la tasa de preñez

ab
Categoría N Preñadas Porcentaje

Pintadas y con celo 39 24 62%

PM

Pintadas y sin celo 45 21 47%

PM

Porcentajes con superíndice distintos difieren significativamente (P>0,05).

Con respecto a la presentación de celos, las vacas que mostraron celo a la primera IATF
comparándolas con las que no mostraron celo en ese momento las diferencias fueron
estadísticamente significativas, lo que indica que el horario de la inseminación está íntimamente
correlacionado con el celo de los animales, pero cuando se tuvo en cuenta a los animales que no
mostraron celo a la primera IATF y que si mostraron celo a la segunda IATF las diferencias con las
que no mostraron celo durante todo el tratamiento fueron solo numéricas en este trabajo. Por
último, los resultados también confirman lo reportado anteriormente que la adición de eCG
aumenta las tasas de preñez en Novillas cruza que son IATF.

35
 Memorias
Consideraciones finales

En terneras hay una estimulación posnatal inicial del crecimiento de folículos antrales ováricos
debido a un aumento de gonadotrofinas. La regulación y razón de esto es confusa y puede
simplemente reflejar una maduración inicial del eje hipotálamo-gonadal-pituitario ya que
después de este momento ha sido demostrado que todas las facetas del eje son capaces de
funcionar. Esta actividad endocrina inicial parece ser posteriormente sostenida por una supresión
por feedback negativo hasta que las Novillas tengan un tamaño corporal suficiente o tengan una
madurez metabólica para reproducirse con éxito. Aunque las hormonas de la nutrición y
metabólicas como la hormona de crecimiento marcadamente afectan la tasa de la maduración
sexual en las Novillas, los mecanismos de unión entre nutrición, crecimiento y desarrollo son
confusos. La primera ovulación es precedida, probablemente durante un período de 40 a 80 días,
por sensibilidad disminuida de la secreción de LH a la supresión por feedback negativo,
permitiendo un aumento de la secreción de LH (aumento de la frecuencia pulsátil de LH) y un
aumento de los folículos antrales y de la secreción de estrógeno. Un aumento de la secreción de
estrógeno eventualmente causa un pico preovulatorio LH y la primera ovulación. El estrógeno
parece ser el principal agente del feedback negativo sobre la secreción de LH, indirectamente por
otros sistemas neuronales. Sin embargo, la supresión inicial del aumento postnatal temprano de
la secreción de LH puede no implicar al estradiol, pero sí un mecanismo opioide dependiente del
estrógeno.

Con respecto a los protocolos de IATF, el tratamiento J-Synch demostró ser eficiente para la
sincronización y ovulación en Novillas para carne. Este protocolo también fue utilizado con éxito
en Novillas de raza lechera con datos similares a los que se describieron en esta presentación
(Ré et al. 2014) y recientemente se reportó su utilización en vacas receptoras de embriones
reportándose resultados de preñez de más de 60 % (de la Mata et al. 2013) y mayores tasas de
preñez con embriones producidos in vitro que con el tratamiento Convencional (Menchaca et al.,
2016).

Referencias

Adams GP, Evans ACO, Rawlings NC. Follicular waves and circulating gonadotrophins in 8-month-
old prepubertal heifers. Journal of Reproduction and Fertility 1994;100: 27-33.

Bergfeld EGM, Kojima FN, Cupp AS, Wehrman ME, Peters KE, Garcia-Winder M, Kinder JE. Ovarian
follicular development in prepubertal heifers is influenced by level of dietary energy intake.
Biology of Reproduction 1994;51: 1051-1057.

36
 Memorias
Bó GA, Baruselli PS, Mapletoft RJ. 2013. Synchronization techniques to increase the utilization of
artificial insemination in beef and dairy cattle. Anim. Reprod. 10, 137-42.

Bó GA, Baruselli PS, Moreno D, Cutaia L, Caccia M, Tríbulo R, Tríbulo H, Mapletoft RJ. 2002a. The
control of follicular wave development for self-appointed embryo transfer programs in cattle.
Theriogenology 57, 53-72.

Bó GA, Cutaia L, Tribulo R. 2002b. Tratamientos hormonales para inseminación artificial a

tiempo fijo en bovinos para carne: algunas experiencias realizadas en Argentina. Primera
Parte. Taurus 14, 10-21.

Bó GA, Cutaia L, Tribulo R. 2002c. Tratamientos hormonales para inseminación artificial a tiempo
fijo en bovinos para carne: algunas experiencias realizadas en Argentina. Segunda Parte.
Taurus 15, 17-32.

Bó GA, De la Mata JJ, Baruselli PS, Menchaca A. 2016. Alternative programs for synchronizing and
re-synchronizing ovulation in beef cattle. Theriogenology 86, 388-396.

Bridges GA, Ahola JK, Brauner C, Cruppe LH, Currin JC, Day ML, Gunn PJ, Jaeger JR, Lake SL, Lamb
GC, Marquezini GHL, Peel RK, Radunz AE, Stevenson JS, Whittier WD. 2012. Determination
of the appropriate delivery of prostaglandin F2α in the five-day CO-Synch + controlled
intravaginal drug release protocol in suckled beef cows. J. Anim. Sci. 90, 4814-4822.

Bridges GA, Day ML, Geary TW, Cruppe LH. 2013. Deficiencies in the uterine environment and
failure to support embryonic development. J. Amin. Sci. 91, 3002-3013

Bridges GA, Helser LA, Grum DE, Mussard ML, Gasser CL, Day ML. 2008. Decreasing the interval
between GnRH and PGF2α from 7 to 5 days and lengthening proestrus increases timed-AI
pregnancy rates in beef cows. Theriogenology 69, 843-851.

Bridges GA, Mussard ML, Burke CR, Day ML. 2010. Influence of the length of proestrus on fertility
and endocrine function in female cattle. Anim. Reprod. Sci. 117, 208-215.

Bridges GA, Mussard ML, Hesler LA, Day ML. 2014. Comparison of follicular dynamics and
hormone concentrations between the 7-day and 5-day CO-Synch + CIDR program in
primiparous beef cows. Theriogenology 81, 632-638.

Bridges GA, Mussard ML, Pate JL, Ott TL, Hansen TR, Day ML. 2012. Impact of preovulatory
estradiol concentrations on conceptus development and uterine gene expression. Anim.
Reprod. Sci. 133, 16-26

Byerley DJ, Staigmiller RB, Berardinelli JG, Short RE. Pregnancy rates of beef heifers bred either
on puberal or third estrus. Journal of Animal Science 1987;65: 645-650.

37
 Memorias
Cotinot C, Pailhoux E, Jaubert F, Fellous M. Molecular genetics of sex determination. Seminars in
Reproductive Medicine 2002;20: 157-168.

Day ML, Imakawa K, Wolfe PL, Kittok RJ, Kinder JE. Endocrine mechanisms of puberty in heifers.
Role of hypothalamo-pituitary estradiol receptors in the negative feedback of estradiol on
luteinizing hormone secretion. Biol Reprod 1987;37: 1054-1065.

Day ML, Imakawa K, Zalesky DD, Kittok RJ, Kinder JE. Effects of restriction of dietary energy intake
during the prepubertal period on secretion of luteinizing hormone and responsiveness of the
pituitary to luteinizing hormone-releasing hormone in heifers. J Anim Sci 1986;62: 1641-1648.

de la Mata JJ, Bó GA. 2012. Sincronización de celos y ovulación utilizando protocolos con
benzoato de estradiol y GnRH en períodos reducidos de inserción de un dispositivo con
progesterona en Novillas para carne. Taurus 55, 17-23.

de la Mata JJ, Menchaca A, Bó GA. 2015. Tratamientos que prolongan el proestro usando estradiol
y progesterona en Novillas para carne. Resúmenes del XI Simposio Internacional de
Reproducción Animal, IRAC, Córdoba, Argentina, pp. 143-157.

de la Mata JJ, Re M, Bó GA. 2015a. Combination of oestrus detection and fixed-time artificial
insemination in beef heifers following a shortened oestradiol-based protocol that provides
for a lengthened proestrus. Reprod. Fert. Dev. 27, 96 (abstract).

Evans ACO, Adams GP, Rawlings NC. Endocrine and ovarian follicular changes leading up to first
ovulation in prepubertal heifers. Journal of Reproduction and Fertility 1994;100: 187-194.

Evans ACO, Adams GP, Rawlings NC. Endocrine and ovarian follicular changes leading up to the
first ovulation in prepubertal heifers. Journal of Reproduction and Fertility 1994;100: 187-
194.

Evans ACO, Adams GP, Rawlings NC. Follicular and hormonal development in prepubertal heifers
from 2 to 36 weeks of age. Journal of Reproduction and Fertility 1994;102: 463-470.

Evans ACO, Currie WD, Rawlings NC. Effects of naloxone on circulating gonadotrophin
concentrations in prepubertal heifers. Journal of Reproduction and Fertility 1992;96: 847-
855.

Honaramooz A, Aravindakshan J, Chandolia RK, Beard AP, Bartlewski PM, Pierson RA, Rawlings
NC. Ultrasonographic evaluation of the pre-pubertal development of the reproductive tract
in beef heifers. Animal Reproduction Science 2004;80: 15-29.

38
 Memorias
Honaramooz A, Chandolia RK, Beard AP, Rawlings NC. Opioidergic, dopaminergic and adrenergic
regulation of LH secretion in prepubertal heifers. Journal of Reproduction and Fertility
2000;119: 207-215.

Jinks EM, Smith MF, Atkins JA, Pohler KG, Perry GA, MacNeil MD, Roberts AJ, Waterman RC,
Alexander LJ, Geary TW. 2012. Preovulatory estradiol and the establishment and maintenance
of pregnancy in suckled beef cows. J. Anim. Sci. 91, 1176-1185.

Kinder JE, Bergfeld EG, Wehrman ME, Peters KE, Kojima FN. Endocrine basis for puberty in heifers
and ewes. Journal of Reproduction and Fertility 1995;Supplement 49: 393-407.

Menchaca A, Dutra S, Carrau JM, Sapriza F, Bo GA. 2016. Improvements of the new J-Synch
protocol used for fixed time embryo transfer (FTET) in beef cattle recipients transferred with
in vitro produced embryos. Proceedings 18 th International Congress on Animal Reproduction
(ICAR), Tours, France. (abstract).

Menchaca A, Núñez R, Wijma R, García Pintos C, Fabini F, de Castro T 2013. How fertility can
be improved in fixed-time AI programs in beef cattle. Resúmenes X Simposio Internacional
de Reproducción Animal, IRAC, Córdoba, pp. 103-134.

Perry GA, Grant JK, Walker JA, Bridges GA, Kruse SG, Bird S, Heaton K, Arias R, Lake SL. 2012.
Comparison of three CIDR based fixed-time AI protocols for beef heifers. J. Anim. Sci. 90
(Suppl. 3), 237 (abstract)

Perry GA, Smith MF, Roberts AJ, MacNeil MD, Geary TW. 2007. Relationship between size of the
ovulatory follicle and pregnancy success in beef heifers. J. Anim. Sci. 85, 684-519.

Ré M, de la Mata JJ, Bó GA 2014. Synchronization of ovulation in dairy heifers using a shortened

estradiol-based protocol that provides for a lengthened proestrus. Reprod. Fertil. Dev. 26,
118.

Whittier WD, Currin JF, Schramm H, Holland S, Kasimanickam RK. 2013. Fertility in Angus cross
beef cows following 5-day CO-Synch + CIDR or 7-day CO-Synch + CIDR estrus synchronization
and timed artificial insemination. Theriogenology 80, 963-969.

39
Memorias

40
Memorias

41
 Memorias
ENFERMEDADES VENÉREAS: NUEVOS DESARROLLOS EN TÉCNICAS DE
DIAGNÓSTICO EN TOROS.

A. García Guerra1
1 Department of Animal Sciences, The Ohio State University, 2027 Coffey Rd,
Columbus, OH, 43210, USA.
garciaguerra.1@osu.edu

INTRODUCCIÓN
Uno de los factores más importantes que impacta en la producción ganadera y lechera
es la reproducción (Wiltbank et al. 1961; Stevenson 2005). Específicamente, fallas en la
concepción y las pérdidas embrionarias tempranas han sido identificadas como la causa
primaria de reducción en los porcentajes de terneros destetados y la mayor causa de
pérdidas reproductivas en ganado lechero (Wiltbank et al. 1961; Santos et al. 2004). Las
causas infecciosas de infertilidad, muerte embrionaria y fetal son un motivo significativo
de disminución en la performance reproductiva en el ganado. (BonDurant 2005).
La lista de causas infecciosas que producen mortalidad embrionaria y fetal en el ganado
vacuno es extensa e incluye bacterias, hongos, virus y protozoarios (Givens and Marley
2008). En el ganado bovino han sido descriptos numerosos agentes infecciosos de
transmisión venérea (BonDurant 2005; Givens and Marley 2008). Sin embargo, solo en
dos de las enfermedades reproductivas la transmisión venérea es casi exclusivamente
el único medio de transmisión y los agentes causantes son parásitos obligados del tracto
reproductivo. Estas enfermedades se denominan Tricomoniasis Bovina (TB) y
Campilobacteriosis Genital Bovina (CGB).
La Tricomoniasis bovina es causada por Tritrichomonas foetus mientras que la
Campilobacteriosis es causada por Campylobacter fetus subsp. venerealis (Cfv). Ambas
enfermedades se caracterizan por causar infertilidad en la hembra (Bartlett 1947;
Plastridge et al. 1964), perdidas embrionarias y fetales tempranas (Parsonson et al.
1976), bajas tasas de preñez (Stewart et al. 1998; Waldner et al. 2013) y abortos (Clark
et al. 1986). En contraste, los toros no muestran signos clínicos y son considerados
portadores asintomáticos (Samuelson and Winter 1966; Dennett et al. 1974). Las
enfermedades de transmisión venérea son transmitidas durante el servicio y por ello han
generado gran preocupación en sistemas de producción extensiva que utilizan servicio
natural (Dennett et al. 1974). La menor incidencia en ganado manejado en forma
intensiva ha sido atribuida al uso de inseminación artificial (IA) (Yang et al. 2012), bajo
estrictos controles en la extracción y congelado de semen por centros acreditados (CSS
2011).
Importantes pérdidas económicas han sido atribuidas a Tricomoniasis en ganado de
carne (Speer and White 1991) y lechero (Goodger and Skirrow 1986). Un modelo de
simulación desarrollado por Rae y colaboradores (Rae 1989), demostró que
dependiendo de la prevalencia en los toros y con una reducción en la producción de

42
 Memorias
terneros del 14 al 50%, retorno económico por vaca servida se reducía del 4 al 10%,
respectivamente. Sin embargo, las pérdidas económicas pueden ser mayores cuando se
incluyen el costo que conlleva el descarte de vacas y toros y los costos de testeos y
vacunación. De forma similar fue estimado que el 4% de las vacas en los Estados Unidos
no se preñaron a causa de CGB y las pérdidas económicas asociadas fueron de $167
millones (Skirrow 1994). Datos recientes de un brote de CGB en un rodeo de
Saskatchewan, Canadá, indicaron que los porcentajes de preñez pueden verse
reducidos entre un 16 a un 62% cuando toros infectados con Cfv son usados (Waldner
et al. 2013).
La presente revisión no pretende abarcar todos los aspectos de las dos principales
enfermedades venéreas en bovinos. Existen muchas publicaciones que abarcan los
aspectos más importantes de la enfermedad y su diagnóstico tanto en machos como en
hembras (BonDurant 1997; BonDurant 2005; Mshelia et al. 2007). El objetivo principal es
resumir la epidemiologia de las enfermedades venéreas, y más importante, destacar y
analizar los diferentes métodos diagnósticos disponibles para la detección de TB y CGB
en el toro.
EPIDEMIOLOGÍA DE LAS ENFERMEDADES VENÉREAS EN EL BOVINO
Prevalencia
La Tricomoniasis Bovina y la Campilobacteriosis Genital Bovina están mundialmente
distribuidas. A pesar de que el uso de IA ha disminuido la incidencia de estas dos
enfermedades, específicamente en el ganado lechero, continúan siendo un problema
importante a nivel mundial en rodeos de carne manejados en sistemas extensivos. La
prevalencia individual de TB en toros en distintos países está representada en la Tabla
1. La prevalencia individual es usualmente menor al 5% exceptuando unos pocos
estudios. La prevalencia de rodeos se estima entre el 0,76 y el 44,1% (Dennett et al.
1974; Griffiths et al. 1984; Bondurant et al. 1990; Yao et al. 2011; Mendoza-Ibarra et al.
2012) y la prevalencia dentro de un rodeo varía entre el 4 y el 83% (Dennett et al. 1974;
Bondurant et al. 1990; Perez et al. 1992). La prevalencia dentro de un rodeo se ha usado
como una medida de la propagación de la enfermedad entre toros en rodeos infectados.
Sin embargo, una de las mayores limitaciones en esta estimación es la falta de
consideración al tamaño del rodeo, el número y cantidad de animales en servicio, y la
proporción de toros por vaca utilizada. Por otra parte, la prevalencia no excede
usualmente el 50%, probablemente debido a la alta proporción de toros jóvenes en la
población de toros en los rodeos (Rae et al. 1999).

43
 Memorias
Tabla 1. Prevalencia individual de Tricomoniasis bovina en toros de diferentes áreas geográficas.

País N Test Prevalencia Fuente† Publicación

Argentina 5313 cultivo 1,3% Monitoreo (Fort et al. 2004)
Canadá 735 cultivo <0,001% Monitoreo (Waldner et al. 2017)
Colombia 146 cultivo 13,7% Monitoreo (Griffiths et al. 1984)
Costa Rica 378 cultivo 5,3% Monitoreo (Perez et al. 1992)
Namibia 1201 PCR 3,7% Laboratorios (Madoroba et al. 2011)
S. África 1999 PCR 4,5% Laboratorios (Madoroba et al. 2011)
España 103 cultivo/PCR 32% Monitoreo (Mendoza-Ibarra et al. 2012)
USA 2909 cultivo 0,17% Matadero (Grotelueschen et al. 1994)
USA 1975 cultivo 6,0% Encuesta Rae et al., 2004 (Rae et al. 2004)
Programa de
USA 31202 qPCR 3,7% control (Szonyi et al. 2012)
USA 347 cultivo/PCR 0,27% Laboratorios (Rodning et al. 2008)
Programa de
USA 8222 cultivo/PCR 0,21% control (Yao et al. 2011)

†Programa de control (se refiere a estimaciones obtenidas de controles forzados por el gobierno de toros
reproductores); Matadero (se refiere a muestras recolectadas de toros enviados a faena); Laboratorios (se
refiere a estimados obtenidos de laboratorios diagnósticos de muestras recibidas en un periodo definido
de tiempo); Monitoreo (basado en muestreos aleatorios o convenientes de una población de toros de
diferentes rodeos); Encuesta (basado en un muestreo aleatorio estratificado de rodeos en un área
geográfica definida).

La estimación reportada de prevalencia individual de CGB en toros, medida en diferentes

áreas geográficas está representada en la Tabla 2. La prevalencia de rodeos ha sido
reportada oscila entre el 9% y el 89% (Griffiths et al. 1984; McCool et al. 1988; Bawa et
al. 1991; Pellegrin et al. 2002). A pesar de que la prevalencia de rodeos reportada ha
sido relativamente alta, se debe considerar que los valores estimados reportados están
basados en rodeos con antecedentes de bajo rendimiento reproductivo. En Australia, la
prevalencia dentro del rodeo fue estimada en 15%, con una variación entre el 3,7% y el
48% (McCool et al. 1988).

44
 Memorias
Tabla 2. Prevalencia individual de Campilobacteriosis Genital Bovina en toros de distintas
áreas geográficas.
Country N Test Subespecie Prevalencia Fuente† Publicación
Argentina 6763 IF No 0,9% Monitoreo (Fort et al. 2004)
Australia 504 cultivo Cfv 4% Matadero (Turnbull 1977)
Brasil 327 IF No 52,3% Monitoreo (Pellegrin et al. 2002)
Canadá 735 qPCR parA Cfv 1,1% Monitoreo (Waldner et al. 2017)
Centro de
Canadá 529 Elisa/cultivo Cff 3,4% IA (Devenish 2005)
Colombia 146 cultivo Cfv 15% Monitoreo (Griffiths et al. 1984)
PCR (Madoroba et al.
Namibia 1201 16SrRNA No 2,08% Laboratorios 2011)
PCR (Madoroba et al.
S. África 1912 16SrRNA No 1,78% Laboratorios 2011)
† Matadero (se refiere a muestras recolectadas de toros enviados a faena); Laboratorios (se refiere a
estimados obtenidos de laboratorios diagnósticos de muestras recibidas en un periodo definido de tiempo);
Monitoreo (basado en muestreos aleatorios o convenientes de una población de toros de diferentes
rodeos).

Factores de riesgo

El aumento de la prevalencia de T. foetus en toros adultos ha sido reportada en

numerosas publicaciones (Skirrow et al. 1985; Bondurant et al. 1990; Rae et al. 1999;
Rae et al. 2004). Toros mayores de 3 años tienen 3.5 a 17 veces más probabilidades de
ser portadores de T. foetus que toros menores de 3 años (Perez et al. 1992; Mendoza-
Ibarra et al. 2012). Sin embargo, es importante remarcar que toros jóvenes de 1 a 2 años
pueden convertirse en portadores y esto debe ser considerado cuando se implementan
programas de control (Clark et al. 1974; Kimsey et al. 1980). Por otro lado, la relación
entre edad y riesgo de infección con CGB es menos clara. La compra de nuevos toros
fue asociada con una disminución del riesgo de infección con CGB del 35%. No está
claro si esta asociación se debe a la introducción de toros jóvenes vírgenes o es un reflejo
de mejores prácticas de manejo en esos rodeos (Jimenez et al. 2011). Toros de tan solo
20 meses de edad han sido infectados exitosamente con Cfv (Dufty et al. 1975). En toros
jóvenes expuestos a Cfv a los 20, 34, 47 o más de 66 meses, se logró establecer el
estado de portador en un 60%, 83%, 83% y 100% de los mismos, respectivamente (Dufty
et al. 1975; Bier et al. 1977).
El uso de pasturas comunitarias se ha asociado con un aumento en el riesgo de
enfermedad y si no se toman medidas preventivas puede significar una disminución en
las tasas de preñez (Waldner and Garcia Guerra 2013). El uso de pasturas comunitarias
se ha asociado a infección con T. foetus (OR=2.3 a 5.4) (Gay et al. 1996; Mardones et
al. 2008). De forma similar, un estudio realizado en Argentina observo que el movimiento
de toros entre rodeos vecinos duplica la posibilidad de detectar Cfv (Jimenez et al. 2011).

COLECCIÓN Y TRANSPORTE DE MUESTRAS

45
 Memorias
Recolección de muestras

Los métodos de recolección de muestras en toros tienen como objetivo obtener material
prepucial o esmegma. Los tres métodos principales que se han utilizado para colectar
muestras son: el método de aspiración, el lavaje prepucial y el raspador metálico o
plástico. Una de las mayores desventajas del método de lavaje prepucial es que es más
laborioso, y aunque modificaciones posteriores apuntaban a simplificar el procedimiento
de recolección todavía requieren el uso de centrifugación luego de colectada la muestra.
El uso tanto del método de aspiración como el de lavaje prepucial no presentan
diferencias en cuanto a la sensibilidad cuando se utilizó el cultivo o la detección por PCR
para T. foetus (Schonmann et al. 1994; Irons et al. 2002; Mukhufhi et al. 2003). De forma
similar, en otro estudio el uso del raspador metálico y el método de aspiración resultaron
en una sensibilidad después del cultivo del 91.6% y 93.3% respectivamente (Parker et
al. 1999). Asimismo, el uso del raspador plástico y el método de aspiración resultaron en
una alta concordancia cuando el cultivo o PCR fueron usados como método de detección
(k≥0.88) (Mendoza-Ibarra et al. 2012).

Por otro lado, el método de aspiración ha resultado en una mejor recuperación de Cfv y
en menor contaminación del medio de cultivo que el método de lavaje prepucial (Tedesco
et al. 1977). Contrariamente, el uso del raspador plástico resulto mejor que el método de
aspiración para el diagnóstico de Cfv por PCR en tiempo real (McMillen et al. 2006) o
cultivo (Tedesco et al. 1977). Dado que tanto el uso del raspador de metal como el
método de lavaje son muy laboriosos, el método de aspiración con pipeta parece ser un
método más simple y rápido (Clark et al. 1971; Irons et al. 2002). Aunque la técnica del
raspador de metal pareciera presentar algunos beneficios para la recuperación de Cfv,
el hecho de necesitar esterilizarlo después de cada uso ha generado poca popularidad.
Sin embargo, más recientemente una versión plástica y desechable de este dispositivo
ha salido al mercado transformándolo en una excelente alternativa al método de
aspiración.

Transporte de las muestras

Usualmente las muestras prepuciales son obtenidas a campo y el transporte al

laboratorio puede demorarse en condiciones desfavorables. Ambos, Cfv y T. foetus son
sensibles a los cambios de temperatura y las condiciones en América del Norte varían
desde altas temperaturas en el verano a temperaturas extremadamente bajas en el
invierno (Bryan et al. 1999; Davidson et al. 2011). En consecuencia, el transporte en
condiciones inapropiadas puede resultar en una proporción importante de falsos
negativos (Riley et al. 1995; Monke et al. 2002). Además, las muestras prepuciales son
inherentemente complejas debido a la microflora normal, sumado esto a la posible
contaminación por heces o por otras fuentes. Es por ello por lo que el control de
contaminación de las muestras es un paso esencial en el diagnóstico de las
enfermedades venéreas, especialmente cuando se requiere la presencia de organismos
viables como en el diagnostico por cultivo e identificación.

Tritrichomonas foetus

46
 Memorias
Un gran número de medios de transporte han sido descriptos y la eficacia para mantener
organismos viables varía entre 24 y 96 horas. El transporte a altas temperaturas (22-
37°C) requiere la presencia en el medio de productos de origen animal (leche o suero) y
antibióticos (Reece et al. 1983). Por otro lado, el congelamiento de las muestras debe
ser evitado durante el transporte porque la viabilidad disminuye drásticamente y no es
posible detectar organismos después de las 3 horas (Bryan et al. 1999). A pesar de la
cantidad de medios de transporte disponibles, es importante tener en cuenta que el
transporte de las muestras en medios no nutritivos disminuye la sensibilidad en un 14%
(Skirrow et al. 1985). Desde la aparición del InPouch™ FT® kit para cultivo, este se ha
convertido en el método de elección para el transporte de muestras porque también sirve
como medio de cultivo. Se ha comprobado que temperaturas superiores a los 42°C por
menos de 24 horas producen un efecto perjudicial para la supervivencia de T. foetus. Sin
embargo, el uso de PCR en tiempo real permite la detección de animales portadores
(Clavijo et al. 2011; Davidson et al. 2011). El rango óptimo para mantener la viabilidad
de T. foetus parece comprender temperaturas entre los 20 y los 37°C y si bien la
refrigeración a 4°C puede ser practicada debería mantenerse a un mínimo (Bryan et al.
1999; Clavijo et al. 2011).

Campylobacter fetus subsp. venerealis

El uso de medios de transporte para recuperar Cfv es esencial cuando el tiempo de

traslado excede las 6 a 8 horas y cuando el cultivo será usado como el método de
diagnóstico (Clark et al. 1972). La baja supervivencia del organismo ha sido identificada
como uno de los mayores problemas para el diagnóstico de CGB (Monke et al. 2002).
De los numerosos medios de transporte enriquecidos que se han desarrollado, solo dos
mostraron un desempeño superior y han sido ampliamente aceptados (Monke et al.
2002).

El medio de transporte enriquecido y modificado Weybridge (mWTEM) (Lander 1990) es

inoculado con la muestra e incubado a 37°C por 3 días antes de cultivarlo en el medio
de cultivo. Sin embargo el tiempo transcurrido entre la inoculación y la incubación debe
ser reducido para evitar perdida de viabilidad de los organismos (Lander 1990). Otro tipo
de medio de transporte que es conocido como el TEM australiano, fue desarrollado por
Clark y colaboradores. (Clark and Dufty 1978). La mayor desventaja de este medio es
que el aire en el tubo debe ser remplazado para conseguir un ambiente microaerófilo. El
TEM australiano debe ser transportado a una temperatura de entre 18 y 37°C por no más
de 2 días y posteriormente incubado a 37°C por 4 días. Un estudio comparando el TEM
Australiano y el mWTEM demostró que este último era significativamente más eficiente,
con proporciones de aislación de organismos del 25% y 75% respectivamente y un mejor
control en la contaminación (Hum et al. 1994). El uso de medios de transporte es
engorroso y aumenta los costos del diagnóstico. Sin embargo, un estudio reciente
demostró que el cultivo directo es significativamente más sensible que el cultivo luego de
la incubación en mWTEM por 24 horas, siempre y cuando el intervalo entre la colección
de la muestra y su cultivo fuera de menos de 6 h (Chaban et al. 2013).

47
 Memorias
DIAGNOSTICO

Tricomoniasis

La identificación de T. foetus se hace basada en la morfología característica y el

movimiento observado al microscopio (Kimsey et al. 1980). Se ha reportado que la
sensibilidad de la observación directa de secreciones prepuciales es del 68 al 90%
(Bartlett et al. 1947; Hammond et al. 1950). Sin embargo, la observación directa es
efectiva y practica cuando son pocos los toros por examinar y el laboratorio se encuentra
a poca distancia (Kimsey et al. 1980). Por ello los métodos diagnósticos basados en
cultivo de las muestras son más efectivos que la examinación directa de las muestras
prepuciales (Tedesco et al. 1979). Independientemente del medio de cultivo usado, T.
foetus se incuba a 37°C hasta 10 días realizando observaciones periódicas al
microscopio (Clark et al. 1971; Campero et al. 2003; Parker et al. 2003). La sensibilidad
del cultivo y posterior observación en muestras provenientes de toros, se ha estimado
entre 73 y el 97% (Clark et al. 1971; Schonmann et al. 1994; BonDurant 1997; Parker et
al. 2003).
En 1990 se introdujo el sistema InPouch™TF® (Thomas et al. 1990), y en la actualidad
es uno de los sistemas más utilizados en Norteamérica. Está compuesto por una bolsa
de plástico flexible subdividida en 2 compartimentos o cámaras, que contiene 4 ml de un
medio patentado. La muestra es inoculada en la cámara superior, el líquido es forzado
hacia la cámara inferior e incubado en posición vertical para lograr la concentración de
los organismos en el fondo. Por medio de un visor plástico reutilizable se realiza la
observación microscópica directamente en la bolsa. Esta metodología posee numerosas
ventajas: pequeñas cantidades de inoculo son necesarias para obtener resultados
positivos, relativamente rápida, detección temprana, se usa tanto como medio de cultivo
como de transporte, menos susceptible a roturas o derrames, puede almacenarse a
temperatura ambiente por un año, y evita la contaminación al no haber necesidad de
abrir las bolsas para la observación (Thomas et al. 1990; Parker et al. 2003).
Junto con el InPouch™TF®, el medio de Diamond’s son los medios más utilizados.
Aunque algunos estudios no mostraron diferencia en la sensibilidad comparando ambos
medios (Thomas et al. 1990; Appell et al. 1993; Schonmann et al. 1994) otros han
probado una mayor sensibilidad con el uso del InPouch™TF® (Parker et al. 2003). Por
otra parte, muestras inoculadas en el InPouch™TF® son detectadas más rápido (36 a
72 horas) y el control de contaminación es más eficiente (Thomas et al. 1990; Perez et
al. 1992; Mendoza-Ibarra et al. 2012). Uno de las mayores desventajas del método de
cultivo y visualización directa es la potencial presencia de tricomonas móviles no
patogénicas similares a T. foetus (Campero et al. 2003). Por esta razón la especificidad
del método de cultivo se ha estimado entre un 91 y 98% cuando diferentes medios de
cultivo son utilizados (Campero et al. 2003; Perez et al. 2006; Cobo et al. 2007).
La presencia de tricomonas no patogénicas y la necesidad de realizar observaciones
rutinarias por aproximadamente 7 días ha incentivado el desarrollo de métodos
diagnósticos mejorados. Basado en las diferencias entre las especies de Tritrichomonas

48
 Memorias
y otras tricomonas en las secuencias en el gen 5.8s rARN y las regiones que lo flanquean
(ITS), se diseñó un método de PCR convencional que permite la detección especifica de
T. foetus (Felleisen 1997). Si bien los reportes iniciales encontraron que el uso del cultivo
previo a la prueba de PCR mejoraba la sensibilidad, estudios recientes indicaron que
muestras directas (sin previo cultivo) pueden ser usadas exitosamente (Chen and Li
2001; Mendoza-Ibarra et al. 2012). El desarrollo de esta prueba de PCR fue ampliamente
aceptado y mostro tener una sensibilidad similar o incluso superior al cultivo, con valores
entre 66 y 98% (Mukhufhi et al. 2003; Cobo et al. 2007; Yao et al. 2011) y valores de
especificidad entre 98 y 100% (Parker et al. 2001; Cobo et al. 2007). La necesidad de
procesar los productos de amplificación de las muestras para poder visualizarlos en geles
de agarosa transformaba la examinación de grandes números de muestras en una tarea
sumamente laboriosa. La necesidad de métodos diagnósticos más sensibles sumado a
los grandes avances en el estudio de los métodos de PCR condujeron al desarrollo de
métodos para la detección de T. foetus por PCR en tiempo real, como la prueba de
nucleasa Taq (McMillen and Lew 2006). El uso de esta prueba ha sido ampliamente
aceptado y muestra una concordancia del 96-97% con el cultivo en InPouch™TF®
(Cooper et al. 2008; Effinger and Weikel 2008). Estudios recientes provenientes de
nuestro laboratorio indicaron que la sensibilidad y especificidad de la PCR en tiempo
real de muestras enriquecidas mediante cultivo fue del 95.5% y 100%, respectivamente
(García Guerra et al. 2013; Garcia Guerra et al. 2014). Estos no fueron diferentes a la
sensibilidad (95%) y la especificidad (98.8%) obtenida cuando se cultivaron y evaluaron
por observación directa en el InPouch™TF® kit (P>0.10).
Un aspecto interesante de los métodos basados en PCR es la alta sensibilidad
que proveen. Por lo cual, se ha investigado la posibilidad de examinar pooles de
muestras. Un estudio realizado por Kennedy y colaboradores (Kennedy et al. 2008),
experimento con grupos de 5 muestras individuales usando PCR convencional. Los
resultados de este ensayo fueron alentadores al mostrar que la especificidad y
sensibilidad comparada con la PCR individual, eran del 100%. En este aspecto,
recientemente hemos conducido un estudio para determinar la sensibilidad de una
prueba de PCR en tiempo real (Taq nuclease) para la detección de T. foetus, en pooles
de muestras prepuciales enriquecidas por cultivo en grupos de hasta 25 toros. Se
recolectaron muestras prepuciales de 150 novillos y 187 toros vírgenes por el método de
aspiración. Las muestras fueron inoculadas en el InPouch™TF® kit, incubadas a 37°C
por 7 días. Simultáneamente, muestras de un toro naturalmente infectado con T. foetus
fueron recolectadas semanalmente. Los cultivos fueron observados microscópicamente
en días alternos y todas las muestras fueron analizadas individualmente con la prueba
de PCR en tiempo real. Los grupos de muestras prepuciales fueron hechos incluyendo
cantidades fijadas de muestras positivas y negativas en proporciones de 1/2, 1/3, 1/5,
1/10, 1/15, 1/20 y 1/25. La sensibilidad de los pooles de muestras de distintos tamaños
se determinó mediante el cálculo de la proporción de pooles que resultaron positivos.
La sensibilidad de la PCR en tiempo real para los diferentes pooles, creados usando
muestras de un toro positivo, no fue significativamente diferente (Figura 1), con una
sensibilidad total del 94%. La prueba de PCR en tiempo real para la detección de
Tricomoniasis en grupos de hasta 25 muestras, es altamente específica y tiene una
buena sensibilidad (Garcia Guerra et al. 2014).

49
 Memorias
Figura 1. Sensibilidad estimada e intervalo des de confianza de 95% para pooles de
muestras prepuciales de diferente tamaño enriquecidas mediante cultivo y evaluadas
mediante PCR en tiempo real (Garcia Guerra et al. 2014).

El agrupado (pooling) de muestras prepuciales para la detección de T. foetus usando

PCR en tiempo real proporciona una nueva y efectiva estrategia para el monitoreo de
toros. Sin embargo, la necesidad de recolectar las muestras en medio de cultivo y por lo
tanto de incubarlas por un número días previo al testeo, planteó un desafío en áreas
remotas y significo un considerable aumento de los costos. Por esa razón, decidimos
diseñar un experimento para evaluar la sensibilidad de una prueba de PCR en tiempo
real disponible comercialmente para la detección de T. foetus tanto en muestras
prepuciales directas individuales y en pooles, sin la necesidad de cultivo. Muestras de 9
toros infectados con T. foetus (n=121) fueron recolectadas e inoculadas en
InPouch™TF® o en 2 ml de una solución de fosfato salino bufereada (PBS). Muestras
prepuciales de 1016 toros, fueron también recolectadas en ambos InPouch™TF® y PBS.
Todas las bolsas de InPouch™TF® fueron inoculadas y evaluadas de acuerdo con las
indicaciones del fabricante. Las muestras prepuciales inoculadas directamente en PBS
fueron individualmente evaluadas usando una prueba de PCR en tiempo real realizada
por un laboratorio diagnóstico comercial. Las muestras prepuciales directas fueron luego
aleatoriamente divididas para agruparlas en pooles de 5 y 10 muestras asegurándose
que cada grupo contenía una muestra de un toro infectado, previo a la evaluación por
PCR en tiempo real. La sensibilidad fue estimada para el cultivo y la PCR en tiempo real
para las 121 muestras directas y las enriquecidas en cultivo, provenientes de los 9 toros
infectados. No se encontraron diferencias (P=0,12) entre las estimaciones de
sensibilidad para el cultivo, 95% (95% CI: 89,6% -97,7%); PCR en tiempo real de
muestras enriquecidas en cultivo, 95% (95% CI: 90,7 – 98,2%); y muestras prepuciales
directas, 90,1% (95% CI: 83,5% - 94,2%). Tampoco hubo diferencia (P=0,08) entre la
sensibilidad de la PCR en tiempo real de muestras prepuciales directas en 110 grupos
de 5 muestras (83,6%, 95% CI: 75,6% - 89,4%) o 10 muestras (77,3%, 95% CI: 68,6% –
84,1%). El uso del muestreo repetido a intervalos semanales y evaluadas mediante PCR
en tiempo real, aumento la sensibilidad al 100% (sensibilidad acumulada) en los grupos
de 5 y al 96% en los grupos de 10. El uso de muestras prepuciales directas agrupadas

50
 Memorias
parece ser relativamente sensible. Sin embargo, esta estrategia requiere muestreos
repetidos para optimizar la sensibilidad (García Guerra et al. 2013).
Figura 2. Sensibilidad acumulada e intervalos de confianza al 95% en pooles de 5 0 10
muestras directas y evaluadas mediante PCR en tiempo real colectadas a intervalos de
1 semana.

A,B Diferentes superíndices indican diferencias significativas (P<0.05).

Campilobacteriosis genital bovina

La aislación por medio del cultivo es la técnica más comúnmente usada para el
diagnóstico de CGB. Como Cfv es microaerófilo requiere una atmosfera compuesta de
85% de nitrógeno, 10% dióxido de carbono y 5% de oxígeno (Plastridge et al. 1957). Dos
métodos selectivos diferentes han sido utilizados para permitir el crecimiento de Cfv y al
mismo tiempo que prevenir el crecimiento de bacterias saprofitas y otros contaminantes.
Estos son: el uso de filtrado de las muestras o el uso de medios de cultivo selectivos con
antibióticos.
Los dos medios selectivos más comunes son el agar selectivo para
Campylobacter (CSA) y el agar de Skirrow (Hum et al. 1994). La sensibilidad del CSA
varía entre 64 y el 94% cuando las muestras son incubadas a las pocas horas de
recolectadas (Dufty 1967; Dufty and McEntee 1969; Clark et al. 1972; Hum et al. 1994).
Por otro lado, la sensibilidad del agar Skirrow varia entra el 32 y el 68% (Hum et al. 1994;
Monke et al. 2002; Chaban et al. 2013). Otro método posible es el filtrado de las muestras
antes del cultivo en agar sangre con un filtro con tamaño de poro de 0.65µm para la
aislación de Cfv (Wagenaar and Van Bergen 2010). Un método perfeccionado para su
uso en muestras fecales es la filtración pasiva, permitiendo que los organismos móviles
de Cfv puedan migrar a través del filtro hacia la superficie de la placa de cultivo. Ese
método ha sido extensamente usado para la aislación de campilobacterias en otros tipos
de muestras (le Roux and Lastovica 1997; Jokinen et al. 2012). Esta metodología fue
empleada recientemente en muestras prepuciales y resulto en una sensibilidad del 87%

51
 Memorias
y mostro un desempeño significativamente mejor al del agar de Skirrow (32%) cuando
se practicó cultivo directo (Chaban et al. 2013). Este método proporciona una simple y
económica técnica para la aislación de Cfv. Una de las mayores desventajas de los
métodos de cultivo es el sobre crecimiento de contaminantes como Pseudomonas
aeruginosas, Proteus spp y hongos (Monke et al. 2002; Chaban et al. 2013). A pesar de
que los medios selectivos detallados previamente contienen antibióticos para controlar
el crecimiento de esos organismos, la contaminación continúa siendo un problema. El
uso de filtración pasiva parecería ser la medida más efectiva para controlarlo (Chaban et
al. 2013).
El uso de métodos de cultivo requiere la habilidad de distinguir, una vez aislado, entre
Cfv y Cff (Campylobacter fetus subsp. fetus). Luego de aislar las colonias con morfología
consistente con Cfv, se determinan las características fenotípicas (catalasa, crecimiento
a 42°C o en la presencia de 3.5% NaCl, etc.) junto a la tolerancia a 1% de glicina para
permitir la distinción entre Cfv y Cff (Wagenaar and Van Bergen 2010). La caracterización
fenotípica de Cfv está influenciada por el tamaño del inoculo y el medio basal usado, lo
cual ha derivado en una pobre reproducibilidad (On and Holmes 1991). Estos
inconvenientes sumados al descubrimiento de cepas de Cfv tolerantes a 1% de glicina
(Schmidt et al. 2010) hace el uso del cultivo sumado a la identificación fenotípica, un
método engorroso y lento.
Los desafíos que presentan los medios de cultivo, particularmente los
relacionados a transportes prolongados, promovieron el desarrollo de técnicas
diagnósticas basadas en la identificación de antígenos de Cfv, removiendo así la
necesidad de mantener la viabilidad de los organismos en la muestra. La técnica de
inmunofluorescencia (IF) directa (DFAT siglas en inglés) detecta la presencia de Cfv por
medio de anticuerpos policlonales conjugados con FITC (Mellick et al. 1965). Una de las
ventajas de esta técnica es que la muestra es recolectada en una solución de formalina
tamponada y puede ser mantenida refrigerada durante varios días (Jimenez et al. 2011).
El uso de DFAT ha demostrado tener una sensibilidad comparable o mejor que los
métodos de cultivo (Mellick et al. 1965). La sensibilidad de DFAT varía entre 80 y 94%
(Dufty 1967; Clark et al. 1972; Figueiredo et al. 2002). Por otro lado, la especificidad ha
sido estimada en 89% y uno de las mayores preocupaciones con este test, es la reacción
cruzada con ciertos tipos de Cff (Figueiredo et al. 2002). Aunque la diferenciación entre
subespecies no es posible, las ventajas en las condiciones de transporte,
almacenamiento y el tiempo de obtención de resultados han hecho muy popular esta
técnica en Sudamérica y Australia.
La necesidad de métodos más rápidos y precisos para la detección de Cfv, han
llevado al desarrollo de técnicas moleculares. La necesidad de mantener los organismos
viables y la dificultad de diferenciar subespecies puede potencialmente verse
solucionado con el desarrollo de estas técnicas moleculares como así también la
posibilidad de reducir la cantidad de pasos diagnósticos. Hum y colaboradores (Hum et
al. 1997), desarrollaron un test de PCR convencional múltiple para la detección y
subespeciación de C. fetus que se utiliza mundialmente. Este test utiliza dos pares de
primers: MG3F/MG4R que tienen como objetivo el gen de inanición de carbono presente
en ambos Cff and Cfv, y VenSF/VenSR que tienen como objetivo el gen parA presente

52
 Memorias
solo en Cfv (Hum et al. 1997). ). La concordancia con el test de tolerancia a la glicina, en
más de 600 aislaciones, ha variado entre un 70 y un 100% (Hum et al. 1997; Willoughby
et al. 2005; Abril et al. 2007). Sin embargo, su uso usualmente se ha limitado a la
identificación de organismos aislados mediante cultivo (Chaban et al. 2013). Un estudio
reporto el uso de esta prueba en muestras prepuciales recolectadas en mWTEM,
mostrando una sensibilidad del 85.7% y una especificidad del 99% comparado con el
cultivo. El almacenamiento prolongado en mWTEM por más de 24 horas perjudico la
detección de Cfv, siendo atribuido a la contaminación con Pseudomonas que producen
enzimas ADN asas (Schmidt et al. 2010).
La necesidad de manipular las muestras luego de realizar PCR convencional, condujo al
desarrollo de pruebas de PCR en tiempo real basados en la detección de los genes de
Cfv previamente descriptos. Dos pruebas de PCR en tiempo real para la detección del
gen parA han sido reportadas (McMillen et al. 2006; Chaban et al. 2012). Ambos utilizan
un método de extracción de ADN por lisis térmica directamente de muestras prepuciales
y un límite de detección significativamente mejor que el de la PCR múltiple convencional
desarrollada por Hum y/o el cultivo (McMillen et al. 2006). Dada la necesidad de producir
datos precisos para evaluar el rendimiento de esta nueva prueba, nuestro equipo diseño
un estudio para determinar la sensibilidad y especificidad clínica en muestras prepuciales
de toros. Muestras de 300 toros vírgenes y 13 toros infectados con Cfv fueron colectadas
en PBS. La especificidad de la PCR en tiempo real fue calculada a parir de las muestras
de los toros vírgenes, comparando con los resultados de cultivos bacteriológicos
realizados en medio de transporte enriquecido. La sensibilidad fue calculada a partir de
muestras de toros infectados, recolectadas semanalmente, y comparadas con los
resultados de DFAT y del cultivo bacteriológico. La especificidad del 85% para la prueba
de PCR en tiempo real y del 100% para el cultivo bacteriológico fue significativamente
diferente (P<0,05). La sensibilidad promedio fue del 85.4% para la PCR en tiempo real,
82,3% para el cultivo directo con filtro en agar sangre, 72,1% para DFAT y 32,7% para
el cultivo directo en agar Skirrow. Las diferencias en la sensibilidad según el método
usado variaron con la temperatura ambiente exterior como muestra la Tabla 3. El
muestreo repetido aumento significativamente la sensibilidad de la PCR en tiempo real.
El uso de este método como prueba de monitoreo a partir de muestras prepuciales
directas tuvo una sensibilidad comparable a la del cultivo bacteriológico (García Guerra
et al. 2014).
Para la implementación de la PCR en tiempo real como método diagnóstico para la
detección de Cfv, fue necesario analizar las condiciones del transporte de las muestras
desde el campo al laboratorio. Se diseñó un estudio para determinar el efecto del tiempo
y la temperatura durante el transporte en la sensibilidad clínica de la PCR en tiempo real
para Cfv a parir de muestras prepuciales de toros colectadas en PBS. La sensibilidad en
muestras transportadas por periodos cortos (2 a 48 horas) fue mayor cuando estas eran
almacenadas a 4°C y 30°C, mientras que la sensibilidad en muestras con periodo de
transporte prolongado (96 horas) fue mayor cuando eran almacenadas a -20°C (Tabla
4). Idealmente las muestras prepuciales deberían ser almacenadas a 4°C e ingresar al
laboratorio dentro de las 48 horas de recolectadas, de no ser posible deberían congelarse
a -20°C para minimizar la perdida de sensibilidad de la prueba (Garcia-Guerra et al.
2016).

53
 Memorias
Tabla 3. Valores ajustados de sensibilidad (Intervalo de confianza del 95%) para el
diagnóstico mediante cultivo bacteriológico, DFAT y PCR en tiempo real para la
detección de Cfv en muestras prepuciales colectadas en diferentes temperaturas
ambiente.

Temperatura ambiente (°C)

Método N -5 0 5 10 15
a a a b
87,0 87,0 87,0 87,0 86,9 b
Cultivo + filtro 260
(77,5-92,9) (78,1-92,6) (78,3-92,5) (77,9-92,6) (77,0-92,9)
Cultivo + 39,6 c 30,5 d 22,8 d 16,6 e 11,8 d
251
Skirrow (26,1-54,8) (19,6-44,3) (13,9-35,0) (9,4-27,4) (6,1-21,4)
71,3 b 73,8 b 76,1 b 78,3 c 80,3 b
DFAT 244
(57,1-82,3) (60,8-83,6) (63,7-85,2) (65,9-87,1) (67,5-88,9)
a
PCR en tiempo 85,5 89,2 a 92,0 a 94,2 a 95,8 a
260
real (75,5-91,8) (81,3-94,0) (85,4-95,8) (88,4-97,2) (90,7-98,1)
a,b Valores con superíndices diferentes indican diferencias significativas (P<0,05). Filtro =

filtro de 0,65-µm de membrana de éster de celulosa colocada sobre una placa de agar
sangre. Skirrow = placas de agar Skirrow.
El uso de la evaluación de grupos de muestras por PCR en tiempo real ha probado ser
una estrategia valiosa para otras enfermedades venéreas de los bovinos como se
mencionó previamente. Por ello, realizamos un experimento para evaluar el
desempeño de la prueba de PCR en tiempo real para Cfv en pooles de muestras
prepuciales. Fueron muestreados 8 toros infectados y 176 toros de un año, vírgenes.
La sensibilidad de la PCR en tiempo real fue comparable para muestras individuales y
grupos de 5 muestras, mostrando una disminución (P<0.05) en grupos de 10 muestras
(Figura 3). La sensibilidad de los pooles de diferentes tamaños aumento con los
muestreos repetidos, particularmente en las muestras individuales y los grupos de 5
muestras (sensibilidad del 99.9%). Pooles de 5 muestras es una opción viable para
disminuir los costos cuando se realizan evaluaciones de un gran número de toros para
la detección de CGB a partir de muestras prepuciales directas usando el método de
PCR en tiempo real (Garcia-Guerra et al. 2016).
Tabla 4. Comparación del efecto del tiempo y temperatura del transporte en la
sensibilidad de la PCR en tiempo real para el diagnóstico de CGB (n=348 alícuotas de
58 muestras provenientes de 8 toros infectados).
Temperatura de transporte (oC)
Tiempo de transporte
-20 4 30
(horas)
2 0,82b 0,93 0,99a
48 0,95 0,95 0,99a
96 0,95 0,86b 0,84b
a,b
Indica diferencias significativas (P<0,05)

Una falla importante de esta nueva técnica es el porcentaje relativamente alto de falsos
positivos (15%) en toros vírgenes presuntamente libres de Cfv. Respecto a ello, se cree

54
 Memorias
que el gen parA está incluido en una isla genómica (Gorkiewicz et al. 2010; Ali et al.
2012) que contiene factores de virulencia específicos de Cfv pero también se han
identificado genes de movilidad dentro de esta región (Gorkiewicz et al. 2010). La
presencia de estos últimos genes indicaría la posibilidad de transferencia horizontal de
genes. Si este fenómeno es responsable por la identificación errónea reportada, es un
misterio y requiere mayor investigación en el futuro. Se han utilizado, con algún grado de
éxito, otros genes para identificar Cfv por técnicas de PCR (como el ISCfe 1) (Abril et al.
2007), sin embargo ninguno ha sido apropiadamente investigado para determinar la
sensibilidad y especificidad clínica en muestras de campo.
Figura 3. Sensibilidad de la PCR en tiempo real en pooles de muestras prepuciales de
distinto tamaño (n=35 / tamaño de pool). Las barras representan el intervalo de confianza
del 95%.

CONCLUSIONES: ESTRATEGIAS DE CONTROL

Existen numerosas estrategias para el control de enfermedades venéreas, incluyendo la

identificación y remoción de animales infectados, tratamientos y vacunación preventiva
o terapéutica. Las estrategias de vacunación y tratamiento no serán discutidas aquí,
prefiriendo enfocar la discusión en estrategias basadas en la identificación de los toros
portadores. La identificación y remoción de animales portadores ha sido la práctica por
excelencia (Clark et al. 1983). Sin embargo, numerosos factores pueden afectar la
precisión para detectarlos como ser: adecuada recolección y manejo de las muestras,
tiempo y condiciones de transporte, técnicas usadas y su sensibilidad y especificidad,
así como variaciones en el nivel de infección. Se han descripto periodos de entre 4 y 8
meses en los cuales la infección por T. foetus puede no ser detectada (Bartlett et al.
1947). A pesar que esos son considerados toros atípicos, otros estudios han mostrado
que solo entre el 50 y 68% de los toros son consistentemente positivos en todas las
muestras recolectadas (Hammond et al. 1950). Esto también ha sido descripto en toros
infectados con Cfv aunque no se han reportado estimaciones precisas (Plastridge et al.
1957).

55
 Memorias
El muestreo repetido se ha vuelto necesario para eludir este problema. Las
recomendaciones en la cantidad de examinaciones necesarias para certificar que un toro
está libre de infección oscilan desde 2 hasta 6 (Dufty and McEntee 1969; Perez et al.
2006; CSS 2011; Jimenez et al. 2011). El uso de hasta 4 muestreos consecutivos
examinados por cultivo para detectar T. foetus aumenta la sensibilidad de 73 a 99% (Rae
et al. 1999). El muestreo repetido y la examinación usando la prueba de PCR también
han resultado en una mayor sensibilidad (Cobo et al. 2007; Yao et al. 2011). La cantidad
de información acerca del muestreo repetido para la detección de Cfv es escasa en la
literatura, sin embargo un estudio indicó que la sensibilidad del cultivo de muestras de
semen aumentaba desde el 39 al 95% cuando se usaron 3 muestras consecutivas
(Plastridge et al. 1957).

A pesar de las recomendaciones generales encontradas en la literatura, la estrategia a

elegir debe ser cuidadosamente evaluada en base a cada situación. La sensibilidad y
especificidad del método diagnostico a usar y la probabilidad de infección a priori
deberían indicar si se debe realizar uno o múltiples evaluaciones (Parker et al. 1999).
Estos factores determinan el valor predictivo de un método; por ello la probabilidad a
priori o la prevalencia indicaran la estrategia a seguir. La nueva prueba de PCR en tiempo
real para ambos, T. foetus y Cfv, presenta ventajas significativas como: la posibilidad de
recolectar las muestras en tubos con PBS prescindiendo así de la necesidad de usar
medios de transporte, alta sensibilidad y especificidad especialmente en el caso de T.
foetus, la habilidad de procesar un gran número de muestras en poco tiempo, y la
posibilidad de agrupar muestras como una estrategia para disminuir los costos de
examinación.

BIBLIOGRAFIA

Abril, C., E. M. Vilei, I. Brodard, A. Burnens, J. Frey and R. Miserez (2007). "Discovery of
insertion element iscfe1: A new tool for campylobacter fetus subspecies differentiation."
Clinical Microbiology and Infection 13(10): 993-1000.
Ali, A., S. C. Soares, A. R. Santos, L. C. Guimaraes, E. Barbosa, S. S. Almeida, V. A. C. Abreu,
A. R. Carneiro, R. T. J. Ramos, S. M. Bakhtiar, S. S. Hassan, D. W. Ussery, S. On, A.
Silva, M. P. Schneider, A. P. Lage, A. Miyoshi and V. Azevedo (2012). "Campylobacter
fetus subspecies: Comparative genomics and prediction of potential virulence targets."
Gene 508(2): 145-156.
Appell, L. H., W. D. Mickelsen, M. W. Thomas and W. M. Harmon (1993). "A comparison of
techniques used for the diagnosis of tritrichomonas foetus infections in beef bulls." Agri-
Practice 14(2): 30-34.
Bartlett, D. E. (1947). "Trichomonas foetus infection and bovine reproduction." American Journal
of Veterinary Research 8(29): 343-352.
Bartlett, D. E., E. V. Hasson and K. G. Teeter (1947). "Occurrence of trichomonas foetus in
preputial samples from infected bulls." Journal of the American Veterinary Medical
Association 110: 114-120.
Bawa, E., J. Adekeye, E. Oyedipe and J. Umoh (1991). "Prevalence of bovine
campylobacteriosis in indigenous cattle of three states in nigeria." Tropical Animal Health
and Production 23(3): 157-160.
Bier, P. J., C. E. Hall, J. R. Duncan and A. J. Winter (1977). "Experimental infection with
campylobacter fetus in bulls of different ages." Veterinary Microbiology 2: 13-27.

56
 Memorias
BonDurant, R. H. (1997). "Pathogenesis, diagnosis, and management of trichomoniasis in
cattle." Veterinary Clinics of North America. Food Animal Practice 13(2): 345-360.
BonDurant, R. H. (2005). "Venereal diseases of cattle: Natural history, diagnosis, and the role of
vaccines in their control." Veterinary Clinics of North America. Food Animal Practice
21(2): 383-408.
Bondurant, R. H., M. L. Anderson, P. Blanchard, D. Hird, C. Danayeelmi, C. Palmer, W. M.
Sischo, D. Suther, W. Utterback and B. J. Weigler (1990). "Prevalence of trichomoniasis
among california beef herds." Journal of the American Veterinary Medical Association
196(10): 1590-1593.
Bryan, L. A., J. R. Campbell and A. A. Gajadhar (1999). "Effects of temperature on the survival
of tritrichomonas foetus in transport, diamond's and inpouch tf media." The Veterinary
Record 144: 227-232.
Campero, C. M., C. Rodriguez Dubra, A. Bolondi, C. Cacciato, E. R. Cobo, S. Perez, A. Odeon,
A. Cipolla and R. H. BonDurant (2003). "Two-step (culture and pcr) diagnostic approach
for differentiation of non-t. Foetus trichomonads from genitalia of virgin beef bulls in
argentina." Veterinary Parasitology 112(3): 167-175.
Chaban, B., S. Chu, S. Hendrick, C. Waldner and J. E. Hill (2012). "Evaluation of a
campylobacter fetus subspecies venerealis real-time quantitative polymerase chain
reaction for direct analysis of bovine preputial samples." Canadian Journal of Veterinary
Research 76(3): 166-173.
Chaban, B., A. Garcia Guerra, S. Hendrick, C. Waldner and J. E. Hill (2013). "Isolation rates of
campylobacter fetus subsp venerealis from bovine preputial samples via passive
filtration on nonselective medium versus selective medium, with and without transport
medium." American Journal of Veterinary Research 74(8): 1066-1069.
Chen, X. G. and J. Li (2001). "Increasing the sensitivity of pcr detection in bovine preputial
smegma spiked with tritrichomonas foetus by the addition of agar and resin."
Parasitology Research 87: 556-558.
Clark, B. L. and J. H. Dufty (1978). "Isolation of campylobacter fetus from bulls." Australian
Veterinary Journal 54(5): 262-263.
Clark, B. L., J. H. Dufty and M. J. Monsbourgh (1972). "A method for maintaining the viability of
vibrio fetus var. Venerealis in samples of preputial secretions collected from carrier
bulls." Australian Veterinary Journal 48: 462-464.
Clark, B. L., J. H. Dufty and I. M. Parsonson (1983). "The effect of tritrichomonas foetus
infection on calving rates in beef cattle." Australian Veterinary Journal 60(3): 71-74.
Clark, B. L., J. H. Dufty and I. M. Parsonson (1986). "The frequency of infertility and abortion in
cows infected with tritrichomonas foetus var. Brisbane." Australian Veterinary Journal
63(1): 31-32.
Clark, B. L., I. M. Parsonson and J. H. Dufty (1974). "Experimental infection of bulls with
tritrichomonas foetus." Australian Veterinary Journal 50: 189-191.
Clark, B. L., M. B. White and J. C. Banfield (1971). "Diagnosis of tritrichomonas foetus infection
in bulls." Australian Veterinary Journal 47: 181-183.
Clavijo, A., E. Erol, L. Sneed, F. Sun and A. Swinford (2011). "The influence of temperature and
simulated transport conditions of diagnostic samples on real-time polymerase chain
reaction for the detection of tritrichomonas foetus DNA." Journal of Veterinary Diagnostic
Investigation 23(5): 982-985.
Cobo, E. R., P. H. Favetto, V. M. Lane, A. Friend, K. VanHooser, J. Mitchell and R. H.
BonDurant (2007). "Sensitivity and specificity of culture and pcr of smegma samples of
bulls experimentally infected with tritrichomonas foetus." Theriogenology 68(6): 853-860.
Cooper, E., B. C. Love, B. Olson, L. Dye, R. Madinger, A. Stroud, T. Blakley, J. Psiala and B. J.
Johnson (2008). Comparison of direct microscopic examination of in-pouchtm bags and

57
 Memorias
real time pcr for detection of tritrichomonas foetus. Proceedings AAVLD, Greensboro,
NC.
CSS (2011). Minimum requirements for disease control of semen produced for ai. Columbia,
MO, Certified Semen Services (CSS). National Association Animal Breeders (NAAB): 1-
15.
Davidson, J. M., J. D. Ondrak, A. A. Anderson, A. K. Swinford and E. Erol (2011). "Evaluation of
effects of high incubation temperatures on results of protozoal culture and real-time pcr
testing for tritrichomonas foetus inoculated in a commercially available self-contained
culture media system." Journal of the American Veterinary Medical Association 239(12):
1589-1593.
Dennett, D. P., R. L. Reece, J. O. Barasa and R. H. Johnson (1974). "Observations on
incidence and distribution of serotypes of tritrichomonas foetus in beef cattle in north-
eastern australia." Australian Veterinary Journal 50(10): 427-431.
Devenish, J. B., B.; Perry, K.; Milnes, D.; Burke, T.; McCabe, D.; Duff, S.; Lutze-Wallace, C. L.
(2005). "Validation of a monoclonal antibody-based capture enzyme-linked
immunosorbent assay for detection of campylobacter fetus." Clinical and Vaccine
Immunology 12(11): 1261-1268.
Dufty, J. H. (1967). "Diagnosis of vibriosis in the bull." Australian Veterinary Journal 43: 433-
437.
Dufty, J. H., B. L. Clark and M. J. Monsbourgh (1975). "The influence of age on the
suceptibilityof bulls to campylobacter fetus subsp venerealis." Australian Veterinary
Journal 51: 294-297.
Dufty, J. H. and K. McEntee (1969). "Evaluation of some culture media and sampling techniques
for diagnosis of vibriosis in bull." Australian Veterinary Journal 45(4): 140-144.
Effinger, L. and J. Weikel (2008). Evaluation of a real-time pcr test for t. Foetus on 1300+
samples utilizing a crude DNA extract of preputial smegma and trichomonas culture
media. Proceedings AAVLD, Greensboro, NC.
Felleisen, R. S. J. (1997). "Comparative sequence analysis of 5.8s rrna genes and internal
transcribed spacer (its) regions of trichomonadid protozoa." Parasitology 115: 111-119.
Figueiredo, J. F., A. O. Pellegrin, C. B. Foscolo, R. P. Machado, K. L. Miranda and A. Pereira
Lage (2002). "Evaluation of direct fluorescent antibody test for the diagnosis of bovine
genital campylobacteriosis." Revista Latinoamericana de Microbiologia 44(3-4): 118-123.
Fort, M. C., M. C. Rojas, F. H. Esain and L. R. Perez (2004). "Control of genital campylobacter
in cattle in five departments of the province of la pampa during the period 2000-2003."
Publicacion Tecnica - INTA(58): 5-8.
Garcia-Guerra, A., C. L. Waldner, A. Pellegrino, N. Macdonald, B. Chaban, J. E. Hill and S. H.
Hendrick (2016). "Effect of sample pooling and transport conditions on the clinical
sensitivity of a real-time polymerase chain reaction assay for campylobacter fetus subsp
venerealis in preputial samples from bulls." Canadian Journal of Veterinary Research-
Revue Canadienne De Recherche Veterinaire 80(1): 32-39.
García Guerra, A., B. Chaban, J. E. Hill, C. L. Waldner and S. H. Hendrick (2014). "Clinical
sensitivity and specificity of a real-time pcr assay for campylobacter fetus subsp
venerealis in preputial samples from bulls." American Journal of Veterinary Research
75(9): 851-860.
Garcia Guerra, A., J. E. Hill, J. Campbell, C. L. Waldner and S. H. Hendrick (2014). "Use of
pooled protozoal cultures of preputial scraping samples obtained from bulls for the
detection of tritrichomonas foetus by means of a real-time polymerase chain reaction
assay." Journal of the American Veterinary Medical Association 244(3): 352-356.

58
 Memorias
García Guerra, A., J. E. Hill, C. L. Waldner, J. Campbell and S. Hendrick (2013). "Sensitivity of a
real-time polymerase chain reaction for tritrichomonas fetus in direct individual and
pooled preputial samples." Theriogenology 80(9): 1097-1103.
Gay, J. M., E. D. Ebel and W. P. Kearley (1996). "Commingled grazing as a risk factor for
trichomonosis in beef herds." Journal of the American Veterinary Medical Association
209(3): 643-646.
Givens, M. D. and M. S. D. Marley (2008). "Infectious causes of embryonic and fetal mortality."
Theriogenology 70(3): 270-285.
Goodger, W. J. and S. Z. Skirrow (1986). "Epidemiologic and economic analyses of an
unusually long epizootic of trichomoniasis in a large california dairy herd." Journal of the
American Veterinary Medical Association 189(7): 772-776.
Gorkiewicz, G., S. Kienesberger, C. Schober, S. R. Scheicher, C. Guelly, R. Zechner and E. L.
Zechner (2010). "A genomic island defines subspecies-specific virulence features of the
host-adapted pathogen campylobacter fetus subsp venerealis." Journal of Bacteriology
192(2): 502-517.
Griffiths, I. B., M. I. Gallego and L. S. Deleon (1984). "Levels of some reproductive diseases in
the dairy cattle of colombia." Tropical Animal Health and Production 16(4): 219-223.
Grotelueschen, D. M., J. Cheney, D. B. Hudson, D. J. Schweitzer, C. V. Kimberling, G. F.
Tatonallen, K. A. Nielsen and D. J. Marsh (1994). "Bovine trichomoniasis: Results of a
slaughter survey in colorado and nebraska." Theriogenology 42(1): 165-171.
Hammond, D. M., V. R. Bishop, G. Jeffs and W. Binns (1950). "A quantitative study of
trichomonas foetus in preputial samples from infected bulls." American Journal of
Veterinary Research 11: 308-314.
Hum, S., J. Brunner, A. McInnes, G. Mendoza and J. Stephens (1994). "Evaluation of cultural
methods and selective media for the isolation of campylobacter fetus subsp venerealis
from cattle." Australian Veterinary Journal 71(6): 184-186.
Hum, S., K. Quinn, J. Brunner and S. L. W. On (1997). "Evaluation of a pcr assay for
identification and differentiation of campylobacter fetus subspecies." Australian
Veterinary Journal 75(11): 827-831.
Irons, P. C., M. M. Henton and H. J. Bertschinger (2002). "Collection of prepurial material by
scraping and aspiration for the diagnosis of tritrichomonas foetus in bulls." Journal of the
South African Veterinary Association 73(2): 66-69.
Jimenez, D. F., A. M. Perez, T. E. Carpenter and A. Martinez (2011). "Factors associated with
infection by campylobacter fetus in beef herds in the province of buenos aires,
argentina." Preventive Veterinary Medicine 101(3-4): 157-162.
Jokinen, C. C., J. M. Koot, C. D. Carrillo, V. P. J. Gannon, C. M. Jardine, S. K. Mutschall, E.
Topp and E. N. Taboada (2012). "An enhanced technique combining pre-enrichment
and passive filtration increases the isolation efficiency of campylobacter jejuni and
campylobacter coli from water and animal fecal samples." Journal of Microbiological
Methods 91(3): 506-513.
Kennedy, J. A., D. Pearl, L. Tomky and J. Carman (2008). "Pooled polymerase chain reaction to
detect tritrichomonas fetus in beef bulls." Journal of Veterinary Diagnostic Investigation
20: 97-99.
Kimsey, P. B., B. J. Darien, J. W. Kendrick and C. E. Franti (1980). "Bovine trichomoniasis:
Diagnosis and treatment." Journal of the American Veterinary Medical Association
177(7): 616-619.
Lander, K. P. (1990). "The development of a transport and enrichment medium for
campylobacter fetus." British Veterinary Journal 146(4): 327-333.
le Roux, E. and A. J. Lastovica (1997). The cape town protocol: How to isolate the most
campylobacters for your dollar, pound franc, yen , etc. Proceedings of the 9th

59
 Memorias
International Workshop on Campylobacter, Helicobacter, and related organisms, Cape
Town, South Africa.
Madoroba, E., A. Gelaw, T. Hlokwe and M. Mnisi (2011). "Prevalence of campylobacter fetus
and trichomonas foetus among cattle from southern africa." African Journal of
Biotechnology 10(50): 10311-10314.
Mardones, F. O., A. M. Perez, A. Martinez and T. E. Carpenter (2008). "Risk factors associated
with tritrichomonas foetus infection in beef herds in the province of buenos aires,
argentina." Veterinary Parasitology 153(3-4): 231-237.
McCool, C. J., M. P. Townsend, S. G. Wolfe, M. A. Simpson, T. C. Olm, G. A. Jayawardhana
and J. V. Carney (1988). "Prevalence of bovine venereal disease in the victoria river
district of the northern territory likely economic effects and practicable control measures."
Australian Veterinary Journal 65(5): 153-156.
McMillen, L., G. Fordyce, V. J. Doogan and A. E. Lew (2006). "Comparison of culture and a
novel 5' taq nuclease assay for direct detection of campylobacter fetus subsp.
Venerealis in clinical specimens from cattle." Journal of Clinical Microbiology 44(3): 938-
945.
McMillen, L. and A. Lew (2006). "Improved detection of tritrichomonas foetus in bovine
diagnostic specimens using a novel probe-based real time pcr assay." Veterinary
Parasitology 141(3-4): 204-215.
Mellick, P. W., A. J. Winter and K. McEntee (1965). "Diagnosis of vibriosis in the bull by use of
the fluorescent antibody technique." Cornell Veterinarian 55(2): 280-294.
Mendoza-Ibarra, J. A., S. Pedraza-Diaz, F. J. Garcia-Pena, S. Rojo-Montejo, J. A. Ruiz-Santa-
Quiteria, E. San Miguel-Ibanez, V. Navarro-Lozano, L. M. Ortega-Mora, K. Osoro and E.
Collantes-Fernandez (2012). "High prevalence of tritrichomonas foetus infection in
asturiana de la montana beef cattle kept in extensive conditions in northern spain."
Veterinary Journal 193(1): 146-151.
Monke, H. J., B. C. Love, T. E. Wittum, D. R. Monke and B. A. Byrum (2002). "Effect of transport
enrichment medium, transport time, and growth medium on the detection of
campylobacter fetus subsp. Venerealis." Journal of Veterinary Diagnostic Investigation
14: 35-39.
Mshelia, G. D., J. Singh, J. D. Amin, Z. Woldehiwet, G. O. Egwu and R. D. Murray (2007).
"Bovine venereal campylobacteriosis: An overview." CAB Reviews: Perspectives in
Agriculture, Veterinary Science, Nutrition and Natural Resources 2(080): 14.
Mukhufhi, N., P. C. Irons, A. Michel and F. Peta (2003). "Evaluation of a pcr test for the
diagnosis of tritrichomonas foetus infection in bulls: Effects of sample collection method,
storage and transport medium on the test." Theriogenology 60(7): 1269-1278.
On, S. L. W. and B. Holmes (1991). "Reproducibility of tolerance tests that are useful in the
identification of campylobacteria." Journal of Clinical Microbiology 29(9): 1785-1788.
Parker, S., J. Campbell and A. Gajadhar (2003). "Comparison of the diagnostic sensitivity of
commercially available culture kit and a daignostic culture test using diamond's media for
diagnosing tritrichomonas foetus in bulls." Journal of Veterinary Diagnostic Investigation
15: 460-465.
Parker, S., J. Campbell, C. Ribble and A. Gajadhar (1999). "Comparison of two sampling tools
for diagnosis of tritrichomonas foetus in bulls and clinical interpretation of culture
results." Journal of the American Veterinary Medical Association 215(2): 231-235.
Parker, S., Z. R. Lun and A. Gajadhar (2001). "Application of a pcr assay to enhance the
detection and identification of tritrichomonas foetus in cultured preputial samples."
Journal of Veterinary Diagnostic Investigation 13: 508-513.

60
 Memorias
Parsonson, I. M., B. L. Clark and J. H. Dufty (1976). "Early pathogenesis and pathology of
tritrichomonas foetus infection in virgin heifers." Journal of Comparative Pathology 86(1):
59-66.
Pellegrin, A. O., A. P. Lage, J. R. B. Sereno, E. Ravaglia, M. S. Costa and R. C. Leite (2002).
"Bovine genital campylobacteriosis in pantanal, state of mato grosso do sul, brazil."
Revue d'Elevage et de Medecine Veterinaire des Pays Tropicaux 55(3): 169-176.
Perez, A., E. Cobo, A. Martinez, C. Campero and E. Spath (2006). "Bayesian estimation of
tritrichomonas foetus diagnostic test sensitivity and specificity in range beef bulls."
Veterinary Parasitology 142(1-2): 159-162.
Perez, E., P. A. Conrad, D. Hird, A. Ortuno, J. Chacon, R. BonDurant and J. Noordhuizen
(1992). "Prevalence and risk factors for trichomonas foetus infection in cattle in
northeastern costa rica." Preventive Veterinary Medicine 14(3-4): 155-165.
Plastridge, W. N., E. C. Walker, L. F. Williams, E. F. Stula and E. M. Kiggins (1957). "Isolation of
vibrio fetus from bulls." American Journal of Veterinary Research 18(68): 575-578.
Plastridge, W. N., L. F. Williams and E. F. Stula (1964). "Vibrio fetus infection and reinfection in
heifers, as determined by cultural tests using blood agar plus antibiotics." American
Journal of Veterinary Research 25(106): 710-713.
Rae, D. O. (1989). "Impact of trichomoniasis on the cow-calf producer's profitability." Journal of
the American Veterinary Medical Association 194(6): 771-775.
Rae, D. O., P. J. Chenoweth, P. C. Genho, A. D. McIntosh, C. E. Crosby and S. A. Moore
(1999). "Prevalence of tritrichomonas foetus in a bull population and effect on production
in a large cow-calf enterprise." Journal of the American Veterinary Medical Association
214(7): 1051-1055.
Rae, D. O., J. E. Crews, E. C. Greiner and G. A. Donovan (2004). "Epidemiology of
tritrichomonas foetus in beef bull populations in florida." Theriogenology 61(4): 605-618.
Reece, R. L., D. P. Dennett and R. H. Johnson (1983). "Some observations on cultural and
transport conditions for tritrichomonas foetus var. Brisbane." Australian Veterinary
Journal 60: 62-63.
Riley, D. E., B. Wagner, L. Polley and J. N. Krieger (1995). "Pcr-based study of conserved and
variable DNA sequences of tritrichomonas foetus isolates from saskatchewan, canada."
Journal of Clinical Microbiology 33(5): 1308-1313.
Rodning, S. P., D. F. Wolfe, R. L. Carson, J. C. Wright, H. D. Stockdale, M. E. Pacoli, H. C.
Busby and S. E. Rowe (2008). "Prevalence of tritrichomonas foetus in several
subpopulations of alabama beef bulls." Theriogenology 69(2): 212-217.
Samuelson, J. and A. J. Winter (1966). "Bovine vibriosis: The nature of the carrier state in the
bull." Journal of Infectious Diseases 116(5): 581-592.
Santos, J. E. P., W. W. Thatcher, R. C. Chebel, R. L. A. Cerri and K. N. Galvão (2004). "The
effect of embryonic death rates in cattle on the efficacy of estrus synchronization
programs." Animal Reproduction Science 82–83(0): 513-535.
Schmidt, T., E. H. Venter and J. A. Picard (2010). "Evaluation of pcr assays tor the detection of
campylobacter fetus in bovine preputial scrapings and the identification of subspecies in
south african field isolates." Journal of the South African Veterinary Association 81(2):
87-92.
Schonmann, M., R. BonDurant, I. Gardner, K. Van Hoosear, W. Baltzer and C. Kachulis (1994).
"Comparison of sampling and culture methods for the diagnosis of tritrichomonas foetus
infection in bulls." The Veterinary Record 134: 620-622.
Skirrow, M. B. (1994). "Diseases due to campylobacter, helicobacter and related bacteria."
Journal of Comparative Pathology 111(2): 113-149.

61
 Memorias
Skirrow, S., R. H. Bondurant, J. Farley and J. Correa (1985). "Efficacy of ipronidazole against
trichomoniasis in beef cattle." Journal of the American Veterinary Medical Association
187: 405-407.
Speer, C. A. and M. W. White (1991). "Bovine trichomoniasis." Large Animal Veterinarian 46:
18-20.
Stevenson, J. S. (2005). "Breeding strategies to optimize reproductive efficiency in dairy herds."
Veterinary Clinics of North America. Food Animal Practice 21(2): 349-365.
Stewart, R. J. E., J. R. Campbell, E. D. Janzen and J. McKinnon (1998). "The effects of
tritrichomonas foetus and nutritional status on the fertility of cows on a community
pasture in saskatchewan." Canadian Veterinary Journal 39: 638-641.
Szonyi, B., I. Srinath, A. Schwartz, A. Clavijo and R. Ivanek (2012). "Spatio-temporal
epidemiology of tritrichomonas foetus infection in texas bulls based on state-wide
diagnostic laboratory data." Veterinary Parasitology 186(3-4): 450-455.
Tedesco, L. F., F. Errico and L. P. Del Baglivi (1977). "Comparison of three sampling methods
for the diagnosis of genital vibriosis in the bull." Australian Veterinary Journal 53: 470-
472.
Tedesco, L. F., F. Errico and D. B. L. P. (1979). "Diagnosis of tritrichomonas foetus infection in
bulls using two sampling methods and a transport medium." Australian Veterinary
Journal 55: 322-324.
Thomas, M. W., W. M. Harmon and C. White (1990). "An improved method for the detection of
tritrichomonas foetus infection by culture in bulls." Agri-Practice 11(1): 13-17.
Turnbull, P. A. (1977). "Abattoir survey of bull genitalia." Australian Veterinary Journal 53(6):
274-279.
Wagenaar, J. A. and M. A. P. Van Bergen (2010). Manual of diagnostic tests and vaccines for
terrestrial animals 2010. W. O. f. A. H. (OIE). 2: 661-670.
Waldner, C., S. Hendrick, B. Chaban, A. Garcia Guerra, G. Griffin, J. Campbell and J. E. Hill
(2013). "Application of a new diagnostic approach to a bovine genital campylobacteriosis
outbreak in a saskatchewan beef herd." Canadian Veterinary Journal 54: 373-376.
Waldner, C. L. and A. Garcia Guerra (2013). "Cow attributes, herd management, and
reproductive history events associated with the risk of nonpregnancy in cow-calf herds in
western canada." Theriogenology 79(7): 1083-1094.
Waldner, C. L., S. Parker, K. M. Gesy, T. Waugh, E. Lanigan and J. R. Campbell (2017).
"Application of direct polymerase chain reaction assays for campylobacter fetus subsp
venerealis and tritrichomonas foetus to screen preputial samples from breeding bulls in
cow-calf herds in western canada." Canadian Journal of Veterinary Research-Revue
Canadienne De Recherche Veterinaire 81(2): 91-99.
Willoughby, K., P. F. Nettleton, M. Quirie, M. A. Maley, G. Foster, M. Toszeghy and D. G.
Newell (2005). "A multiplex polymerase chain reaction to detect and differentiate
campylobacter fetus subspecies fetus and campylobacter fetus sub-species venerealis:
Use on uk isolates of c. Fetus and other campylobacter spp." Journal of Applied
Microbiology 99(4): 758-766.
Wiltbank, J. N., E. J. Warwick, E. H. Vernon and B. M. Priode (1961). "Factors affecting net calf
crop in beef cattle." J Anim Sci 20(3): 409-415.
Yang, N., X. Cui, W. Qian, S. Yu and Q. Liu (2012). "Survey of nine abortifacient infectious
agents in aborted bovine fetuses from dairy farms in beijing, china, by pcr." Acta
Veterinaria Hungarica 60(1): 83-92.
Yao, C., K. D. Bardsley, E. A. Litzman, M. L. Hall and M. R. Davidson (2011). "Tritrichomonas
foetus infection in beef bull populations in wyoming." Journal of Bacteriology &
Parasitology 2(5): 2-6.

62
Memorias

63
Memorias

64
 Memorias
Efecto de la edad y el estado fisiológico de la donante sobre la calidad de los ovocitos y la
producción de embriones in vitro
P.S. Baruselli1, E.O.S. Batista1, L.M. Vieira1, R.M. Ferreira1, B.G. Guerreiro1, B.M. Bayeux1,
J.N.S. Sales2, A.H. Souza3, L.U. Gimenes4
1
Departamento de Reprodução Animal, USP, São Paulo, SP, Brasil; 2Departamento de Medicina
Veterinária, Universidade Federal de Lavras, Lavras, MG, Brasil; 3Ceva Saúde Animal, Paulínia,
SP, Brazil; 4Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Reprodução Animal, FCAV-
UNESP, Jaboticabal, Brazil.

Resumo
O sucesso da produção in vitro de embriões (PIV) depende da quantidade e qualidade dos
complexos cumulus oócitos (CCOs) aspirados durante a ovum pick up (OPU). Diversos fatores
aparentam ser críticos para a qualidade oocitária, incluindo tamanho do folículo, fatores ambientais
como estresse calórico, genética, idade e estágio de lactação dos animais doadores, sendo que
todos estes fatores tem uma grande influência no resultado da PIV. O objetivo desta revisão é
ressaltar algumas áreas críticas que podem auxiliar veterinários a aumentar a eficiência da OPU e
implementar a PIV com sucesso em sua rotina. O trabalho terá foco em achados recentes da
literatura e aspectos fisiológicos que podem interferir na qualidade dos oócitos encaminhados para
PIV de fêmeas jovem (bezerras e novilhas pré-púberes), vacas gestantes e não gestantes e possíveis
interações com a lactação e dias pós-parto durante a OPU.
Palavras-chave: bovino, FIV, oócito, gestação.

Introdução
A aspiração folicular guiada por ultrassonografia (ovum pick up - OPU) associada com
produção in vitro de embriões (PIV) são tecnologias importantes que podem melhorar a eficiência
reprodutiva e produtiva tanto do gado de leite quanto de corte (Merton et al., 2003; Pontes et al.,
2010). A indústria de PIV evoluiu rapidamente na última década e algumas tecnologias paralelas
como genômica e a descoberta de marcadores de produção de embriões (por exemplo, ensaio de
AMH) estão induzindo um progresso genético mais direcionado e eficiente. Por exemplo, o uso
de tecnologia genômica permite a identificação de animais de genética superior em idades muito
mais jovens. Como resultado, produtores estão impulsionando tanto a indústria quanto a
comunidade científica a desenvolverem técnicas que sejam mais adequadas para animais mais
jovens utilizados em rotinas de OPU-PIV, acelerando o ganho genético ao diminuir o intervalo
entre gerações.

65
 Memorias
Apesar da idade do animal em que a OPU é feita, o sucesso da PIV depende da quantidade
e da qualidade dos complexos cumulus oócitos (CCO) aspirados durante a OPU. Evidentemente,
diversos fatores aparentam ser críticos para a qualidade oocitária, incluindo tamanho do folículo
(Lonergan et al., 1994; Seneda et al., 2001), fatores ambientais como estresse calórico (Torres-
Júnior et al., 2008; Ferreira et al., 2011; Ferreira et al., 2016), genética (Gimenes et al., 2015; Sales
et al., 2015), idade (Batista et al., 2016a) e estágio de lactação dos animais doadores (Baruselli et
al., 2016), sendo que todos estes fatores tem uma grande influência no resultado da PIV. Além
disso, o papel direto do ambiente hormonal durante o desenvolvimento folicular e qualidade
oocitária tem sido demonstrado na literatura científica. Assim, foco tem sido dado aos possíveis
efeitos positivos dos níveis circulantes de progesterona (P4) na determinação da qualidade
oocitária na PIV (Lonergan, 2011). No entanto, um estudo recente do nosso grupo de pesquisa
demonstrou que nem a exposição à níveis baixos de LH, nem os ciclos de P4 são limitantes para a
viabilidade oocitária e o desenvolvimento para o estágio de blastocisto (Batista et al., 2016b).
Pesquisas adicionais são necessárias para elucidar algumas destas complexas interações entre
hormônios reprodutivos e qualidade oocitária.
A raça do gado também constitui um dos fatores que influenciam na eficiência da OPU-
PIV. Doadoras Bos indicus (raças zebuínas) e Bos taurus (raças taurinas) aparentam ter diferenças
significativas quanto ao resultado da PIV (Pontes et al., 2010; Guerreiro et al., 2014a; Gimenes et
al., 2015). Na maior parte da literatura publicada é aparentemente notável que fêmeas Bos indicus
possuem uma recuperação muito maior de oócitos durante a OPU; presumidamente por conta da
maior população folicular ovariana e a maior concentração plasmática de hormônio anti-
Mulleriano (Batista et al., 2014). Além disso, em doadoras zebuínas têm-se observado maior
quantidade de oócitos viáveis em comparação com doadoras taurinas (Guerreiro et al., 2014a;
Gimenes et al., 2015).
Alguns problemas de manejo, como o tipo de dieta, o nível de consumo da ração e o estresse
calórico possuem conhecidamente um alto impacto na qualidade oocitária e na PIV. No entanto, a
interferência destes fatores pode diferir em gado Bos indicus e Bos taurus. O nível de consumo de
energia, por exemplo, pode afetar os níveis circulantes de insulina e IGF-1 (revisão de Sartori et
al., 2016). O aumento excessivo na concentração de insulina sanguínea, principalmente em vacas
leiteiras em fase final de lactação, está negativamente associado com a qualidade oocitária
(revisado por Baruselli et al., 2016). A exposição ao estresse calórico é um efeito conhecidamente
deletério à competência oocitária em gado Bos taurus (Ferreira et al., 2011; Ferreira et al., 2016).
Surpreendentemente, doadoras Bos indicus, apesar de mais resistentes às condições de estresse
calórico ambiental, também são afetadas por ele e podem necessitar aproximadamente quatro
meses para recuperar a qualidade oocitária para os níveis pré-estresse calórico, mesmo após um
curto período de exposição ao calor (Torres-Júnior et al., 2008).
De modo geral, diversos fatores podem ser prejudiciais para qualidade oocitária e devem
ser levados em consideração durante a PIV. Portanto, o objetivo desta revisão é realçar algumas

66
 Memorias
áreas críticas que podem auxiliar veterinários a aumentar a eficiência da OPU e implementar a PIV
com sucesso em sua rotina. A revisão terá foco em achados recentes da literatura e aspectos
fisiológicos que podem interferir na qualidade dos oócitos encaminhados para PIV de gado jovem
(bezerras e novilhas pré-púberes), vacas gestantes e não gestantes e possíveis interações com a
lactação e dias pós-parto durante a OPU.

Efeitos dos diferentes estágios reprodutivos e de desenvolvimento e na qualidade oocitária e

produção in vitro de embriões

Qualidade oocitária e PIV em bezerras doadoras

A população de folículos ovarianos no nascimento em bovinos é estimada em 235.000
(Ericksson, 1966; Betteridge et al., 1989). No entanto, como em todos os mamíferos, essa
população rapidamente diminui com o envelhecimento (Ericksson, 1966). Portanto, novilhas
jovens possuem um maior número de folículos antrais em seus ovários do que vacas (Desjardins
and Hafs, 1969), o que pode estar associado com uma PIV mais eficiente. Estudos prévios
mostraram que bezerras necessitam de estimulação gonadotrófica antes da OPU- PIV para que se
alcance resultados aceitáveis (Presicce et al., 1997; Maclellan et al., 1998; Taneja et al., 2000).
Dentre os protocolos hormonais instituídos para bezerras selecionadas para coleta de oócitos, a
maioria utiliza tratamento com hormônio folículo-estimulante (FSH) antes da OPU por
laparoscopia (LOPU) e tecnologias de PIV (Armstrong et al., 1992; Fry et al., 1998).
Recentemente nosso grupo de pesquisa conduziu uma série de estudos para avaliar os
diferentes protocolos hormonais para coleta de oócitos seguida de PIV em bezerras Bos indicus
(Nelore) e Bos taurus (Holandesas; Batista et al., 2016a). Um experimento foi conduzido em uma
fazenda comercial de gado de corte próxima à cidade de Paulínia (São Paulo, Brasil). Foram
utilizadas 45 doadoras Nelore: 30 bezerras (3 a 4 meses) e 15 novilhas cíclicas (18 a 24 meses).
Em um segundo experimento conduzido no Campus da Universidade de São Paulo (USP, Campus
de Pirassununga, SP, Brasil), foram utilizadas 34 doadoras Holandesas, sendo 24 bezerras (3 a 4
meses) e 10 novilhas cíclicas (14 a 16 meses). Todas as bezerras foram aleatoriamente designadas
a receber tratamento superestimulatório com FSHp (bezerras com FSHp, n = 15) ou sem (bezerras
sem FSH, n = 15). As novilhas cíclicas foram submetidas à OPU-PIV em estágios aleatórios do
ciclo estral.
Todas as bezerras passaram por LOPU. Bezerras sem FSH também foram submetidas à
LOPU, em estágios aleatórios do ciclo estral. Bezerras superestimuladas foram tratadas antes da
LOPU com dispositivo intravaginal de P4 (dia 0, Eazi-Breed CIDR, 0.33 g; Zoetis, São Paulo, SP,
Brasil). Após 5 dias, as bezerras receberam 4 tratamentos de FSHp (140 mg; Folltropin, Agener,
SP, Brasil) administrados duas vezes ao dia em doses decrescentes (40 mg [dia 5, AM], 40 mg [dia

67
 Memorias
5, PM], 30 mg [dia 6, AM]) durante um período de dois dias. A LOPU foi realizada 12 horas após
o último tratamento com FSHp (dia 7).
Em doadoras Bos indicus, o número de CCOs recuperados foi maior em bezerras com FSH
e em novilhas cíclicas, quando comparado com bezerras sem FSH (P = 0,04). Além disso, o cultivo
de CCOs foi maior em bezerras tratadas com FSH e em novilhas cíclicas, quando comparado com
bezerras sem FSH (P = 0,01). No entanto, a taxa de clivagem foi semelhante nos 3 grupos (bezerras
sem FSH, bezerras com FSH, e novilhas cíclicas; P = 0,41; Tabela 1). Apesar dos efeitos positivos
do tratamento com FSH, o número de blastocistos produzidos foi semelhantes em bezerras com e
sem FSH, e este número foi menor do que nas novilhas cíclicas (P = 0,0001; Tabela 1).
Em doadoras Bos taurus, o número de folículos visualizados (P = 0,01) e oócitos
recuperados (P = 0,0001) foi maior em bezerras com FSH do que em bezerras sem FSH e em
novilhas cíclicas. O número de CCOs cultivados foi semelhante entre bezerras sem FSH e novilhas
cíclicas, e ambos os grupos tiveram menos CCOs cultivados do que as bezerras com FSH (P =
0,0001). Apesar destes efeitos positivos do tratamento com FSH, o número de blastocistos
produzidos foi semelhante entre bezerras com e sem FSH, e este valor foi mais baixo do que nas
novilhas cíclicas (Tabela 2).
Os resultados ora apresentados demonstram que é possível produzir embriões de bezerras
utilizando LOPU/PIV. O tratamento com FSH pode ser utilizado como um tratamento
superestimulatório para melhorar a eficiência da LOPU/PIV em bezerras jovens. No entanto, mais
estudos são necessários para melhorar a produção de embriões de bezerras em comparação com
animais adultos.

Tabela 1. Número de folículos visíveis, CCOs e blastocistos (média ± EPM) depois da LOPU-
PIVI em bezerras doadoras Bos indicus (Nelore) e depois da OPU-PIV em novilhas cíclicas Bos
indicus (Nelore).
Bos indicus
Bezerras sem Bezerras Novilhas Valor de
Item FSH com FSH cíclicas P
z y x
Total de folículos visualizados 19,7 ± 4 32,3 ± 5,9 47,1 ± 6,3 0,003
b ab a
Total de CCOs recuperados 13,5 ± 3,6 20,9 ± 5,1 29,9 ± 5,3 0,04
e a b b
Taxa de recuperação (%) 68,5 64,7 63,6 0,02
c b a
Número de CCOs cultivados 4,7 ± 1,4 11,3 ± 4,0 18,1 ± 4,0 <0,0001
f b a a
Taxa de CCOs cultivados (%) 35,1 54,3 60,6 0,01
g
Taxa de clivagem (%) 47 52,2 50,3 0,41
b b a
Blastocistos produzidos 1,7 ± 0,7 2,3 ± 0,8 9,3 ± 2,0 <0,0001
h b b a
Taxa de blastocistos (%) 12,9 11,3 30,9 <0,0001
Dados seguidos por diferentes letras sobrescritas na mesma linha diferem com P ≤ 0,05 (a ≠ b ≠ c) ou P < 0,06 (x ≠ y
≠ z). eNúmero total de CCOs/número de folículos aspirados. fNúmero de CCOs cultivados/número de folículos
aspirados. gNúmero de zigotos clivados/número de CCOs. hNúmero de blastocistos/número de CCOs.

68
 Memorias
Tabela 2. Número de folículos visíveis, CCOs e blastocistos (média ± EPM) depois da LOPU-
PIVI em bezerras doadoras Bos taurus (Holandesa) e depois da OPU-PIVI em novilhas cíclicas
Bos taurus (Holandesa).
Bos taurus
Bezerras sem Bezerras com Novilhas Valor de
FSH FSH cíclicas P
b
22.7 ± 4.2 b
54.3 ± 9.5 a 24.9 ± 3.6 0.01
Total de folículos visualizados
Total de CCOs recuperados 11.7 ± 2.4bx 22.4 ± 5.4a 9.2 ± 1.7cy <0,0001
Taxa de recuperação (%)e 51.3a 41.3a 36.9b 0,01
b a b
CCOs cultivados 3.6 ± 1.0 12.3 ± 3.5 4.7 ± 1.3 <0,0001
Taxa de CCOs cultivados (%)f 30.7b 37.7a 51.1a 0,02
Taxa de clivagem (%)g 17.8 30.5 26.1 0,47
Blastocistos produzidos 0.4 ± 0.2 0.7 ± 0.4 0.5 ± 0.3 0.78
Taxa de blastocistos (%)h 2.9 2.0 4.3 0.60
Dados seguidos por diferentes letras sobrescritas na mesma linha diferem com P ≤ 0,05 (a ≠ b ≠ c) ou P < 0,06 (x ≠ y
≠ z). eNúmero total de CCOs/número de folículos aspirados. fNúmero de CCOs cultivados/número de folículos
aspirados. gNúmero de zigotos clivados/número de CCOs. hNúmero de blastocistos/número de CCOs.

Qualidade oocitária e PIV em novilhas púberes e pré-púberes

Diversos laboratórios de pesquisa têm tido sucesso na produção de embriões viáveis de
novilhas pré-púberes (Armstrong et al., 1992; Fry et al., 1998; Taneja et al., 2000). No entanto,
existe a preocupação de que oócitos de fêmeas mais jovens tenham capacidade de desenvolvimento
menor do que os de doadoras adultas (Khatir et al., 1996; Presicce et al., 1997; Majerus et al.,
1999).
Recentemente nosso grupo de pesquisa realizou um estudo na fazenda Santa Rita,
localizada próxima à cidade Descalvado, no estado de São Paulo (Guerreiro et al., 2014b), no qual
um total de 120 doadoras de quatro categorias distintas foram utilizadas, sendo estas: novilhas pré-
púberes (n = 30), novilhas púberes (n = 30), vacas em lactação (n = 30) e vacas não lactantes (n =
30). As doadoras passaram pela OPU sem sincronização prévia da onda folicular. Seis sessões de
OPU foram realizadas com cinco animais de cada categoria, ou seja, 20 doadoras por sessão.
Imediatamente antes da OPU, todos os folículos foram quantificados e todos os folículos
visíveis (≥ 2 mm) foram puncionados e, então, o total de estruturas recuperadas, a quantidade e
qualidade dos oócitos viáveis foram registrados. Todos os oócitos viáveis foram submetidos à PIV
e o seu desenvolvimento (taxa de clivagem e de blastocisto) foi avaliado. A mesma partida de
sêmen sexado do mesmo touro foi utilizada para a fertilização in vitro (FIV) dos oócitos de todas

69
 Memorias
as categorias de doadoras em todas as sessões de OPU. Os embriões produzidos (n = 206) foram
transferidos para receptoras Bos taurus x Bos indicus.
Não foi observada diferença entre os grupos experimentais quanto ao número total de
folículos aspirados (P = 0,08). Apesar do número semelhante de total de oócitos recuperados (P =
0,12), as novilhas pré-púberes tiveram uma quantidade intermediária de oócitos viáveis, e as vacas
não lactantes produziram mais oócitos viáveis (P = 0,03), quando comparadas com vacas lactantes.
Entretanto, doadoras pré-púberes tiveram uma taxa de clivagem mais baixa (P< 0.0001) e taxa de
blastocisto mais baixa (P< 0.0001) quando comparadas com outras categorias (Tabela 3).

Tabela 3. Número de folículos aspirados, oócitos e embriões produzidos após a OPU-PIVI em

novilhas pré púbere e púbere, e vacas em lactação e secas da raça Holandesa. Dados apresentados
como média ± erro padrão da média.

Novilhas Vacas Valor de

Pré-púberes Púberes Lactantes Não Lactantes P
N 30 30 30 30
Total de folículos aspirados 18,3 ± 2,1 17,3 ± 1,2 14,0± 1,0 17,7 ± 1,7 0,08
1
Total de CCO recuperados 14,2 ± 2,2 13,1 ± 1,1 9,8 ± 1,1 14,6 ± 1,7 0,12
ab ab b a
CCOs cultivados 10,5 ± 1,8 8,3 ± 0,8 6,5 ± 0,9 11,5± 1,4 0,03
2 b a a a
Taxa de clivagem (%) 68,6 98,8 87,6 90,1 < 0,0001
b b b a
Blastocistos prodzidos 0,5 ± 0,2 1,1 ± 0,2 1,2 ± 0,4 4,2 ± 0,6 < 0,0001
3 c b b a
Taxa de blastocistos (%) 4,8 12,7 18,0 36,5 < 0,0001
1
CCO – complexos cumulus oócitos. Número de embriões clivados/CCOs viáveis. Número de
2 3

blastocistos/CCOs viáveis. a,b,cLetras diferentes na mesma linha indicam diferença estatística (P <
0,05).

Portanto, conclui-se que doadoras Holandesas pré-púberes tem baixa competência para
produção in vitro de embriões, sendo a categoria de vacas não lactantes a mais eficiente na PIV.
Embriões produzidos de animais pré-púberes resultaram em taxa de concepção inferior em
comparação com embriões produzidos de vacas em lactação e não lactantes [pré-púberes: 0,0%
(0/15)b; púberes: 9,7% (3/28)b; vacas em lactação: 28,6% (10/25)a; vacas não lactantes: 32,7%
(36/74)a; P < 0,05; Figura 1]. No entanto, foi observada taxa de concepção semelhante para
embriões produzidos de doadoras púberes e pré-púberes.

70
 Memorias

Figura 1. Taxa de concepção após a transferência de embrião. As doadoras eram novilhas pré-
púberes, púberes, vacas em lactação e não lactantes da raça Holandesa.

Um estudo subsequente foi realizado por nosso grupo com novilhas Nelore pré-púberes
(Bos indicus) do Instituto de Zootecnia em Sertãozinho, no estado de São Paulo (Batista et al.,
2016; FMVZ/USP, São Paulo, Brasil; dados não publicados). Neste experimento foi avaliada a
OPU-PIV em diferentes idades e estágios do ciclo estral. O delineamento experimental incluiu:
novilhas pré-púberes de 8 a 12 meses de idade (n = 24), novilhas pré-púberes de 18 a 22 meses de
idade (n = 20) e novilhas cíclicas de 22 a 26 meses (n = 25). Os dados estão resumidos na Tabela
4.

Tabela 4. Número de folículos visíveis, CCOs e blastocistos (média ± EPM) depois da OPU –
PIVI em novilhas pré púberes e púberes de Bos indicus (Nelore).

Novilhas Novilhas
Novilhas púberes Valor de Pa
pré-púberes pré-púberes
(8-12 meses) (18-22 meses) (22-26 meses)
Idadeb Ciclicidadec
(n = 24) (n = 20) (n = 25)
Total de folículos visualizados 19,7 ± 2,1 41,3 ± 5,28 34,0 ± 3,3 < 0,0001 0,0002
Total de CCOs recuperados 13,4 ± 1,7 30,8 ± 5,8 22,6 ± 3,2 < 0,0001 < 0,0001
Total de CCOs clivados 5,6 ± 0,8 14,8 ± 2,5 13,3 ± 1,9 < 0,0001 < 0,0001
CCOs cultivados 7,6 ± 1,0 16,8 ± 2,7 15,1 ± 2,2 < 0,0001 < 0,0001
d
Taxa de CCOs cultivados (%) 57 54 60 0,13 0,5
Taxa de clivagem (%)e 73 88 84 < 0,0001 0,25
Blastocistos produzidos 1,5 ± 0,3 4,7 ± 0,9 7,2 ± 1,2 < 0,0001 < 0,0001

71
 Memorias
Taxa de blastocistos (%)f 20,2 28,1 47 0,05 < 0,0001
a
Efeito do grupo avaliado. b Efeito da idade no grupo pré púbere (8-12 meses vs 18-24 meses). c Efeito da ciclicidade
(cíclica vs não cíclica). d Número de oócitos viáveis/ número total de oócitos. e Número de oócitos clivados/ número
de oócitos cultivados. f Número de blastocistos/ número de oócitos cultivados.

Novilhas pré-púberes de idade entre 8 e 12 meses tiveram menor número de folículos

visualizados e de oócitos recuperados do que novilhas mais velhas, apesar do status de ciclicidade.
Não houve diferença entre os grupos experimentais sobre a taxa de CCOs cultivados ou sobre a
sua taxa de clivagem. No entanto, o número de blastocistos produzidos, bem como a taxa de
blastocisto, aumentou tanto com o avanço de idade dos animais como após os animais tornarem-
se cíclicos (Tabela 4).
O resultado da OPU/PIV em novilhas pré-púberes demonstrou uma eficiência reduzida
quando comparada com novilhas cíclicas e animais adultos. Outros estudos devem ser realizados
para tentar melhorar a eficiência da produção de animais nesta categoria.

Qualidade oocitária e PIV em doadoras gestantes

Recentemente, nosso grupo de pesquisa estudou o efeito da gestação sobre a qualidade
oocitária e PIV em novilhas Holandesas (Bayeux et al., 2016). Para tal, 179 doadoras Holandesas
(Bos taurus) de 3 categorias foram avaliadas: novilhas pré-púberes (8 a 10 meses; n = 60); novilhas
púberes (10 a 12 meses; n = 60) e novilhas prenhes (14 a 18 meses; n = 59). Todos os animais
foram submetidos à OPU em estágios aleatórios do ciclo estral. A mesma partida de sêmen do
mesmo touro foi utilizada para fertilizar os oócitos das doadoras de todas as categorias e de todas
as sessões de OPU. As novilhas púberes apresentaram maior número de oócitos recuperados assim
como CCOs cultivados em comparação com as outras categorias. No entanto, a taxa de clivagem
foi semelhante entre novilhas púberes e novilhas prenhes. Interessantemente, novilhas prenhes
apresentaram maior número de embriões produzidos por OPU e também maior taxa de blastocisto
quando comparadas com as outras categorias de novilhas (Tabela 5). Estes resultados indicam que
as novilhas prenhes apresentam maior eficiência em termos de PIV quando comparadas com
novilhas púberes e pré-púberes da raça Holandesa (Bos taurus).

Tabela 5. Número de oócitos recuperados, CCOs cultivados, blastocistos, taxa de clivagem e de

blastocisto após OPU–PIV em doadoras taurinas de diferentes categorias.
Novilhas
Item Pré-púberes Púberes Prenhes Valor de
(n = 60) (n=60) (n=59) P
Número de CCOs recuperados 9,8 ± 1,3b 15,6 ± 1,4a 9,8 ± 1,6b 0,001
b a b
CCOs cultivados 4,6 ± 0,6 9,1 ± 0,9 5,6 ± 1,1 0,001
d b a a
Taxa de clivagem (%) 31 56 78 0,001
c b a
Bastocistos produzidos 0,31 ± 0,1 0,9 ± 0,2 1,8 ± 0,3 < 0,001

72
 Memorias
Taxa de blastocisto (%)e 2c 4b 37a < 0,001
d e
Número de oócitos clivados/número de oócitos cultivados. Número de blastocistos/Número de oócitos cultivados.
Abreviações: CCOs, complexo cumulus oócitos; PIVI, produção in vitro de embriões; OPU, ovum pick-up. Dados
com diferentes letras sobrescritas na mesma linha diferem em P < 0,001.

Qualidade oocitária e PIV de doadoras em pós-parto recente

Para avaliar o impacto do período pós-parto recente na PIV de bovinos de leite e de corte,
realizamos um estudo utilizando vacas Bos indicus (Nelore; Pierucci et al., 2015) e Bos taurus
(Holandesas; Sala, 2013). Aspirações foliculares guiadas por ultrassonografia foram realizadas a
cada 14 dias, num período de 30 a 86 dias pós-parto. As vacas foram separadas em blocos, de
acordo com a raça, quando 50% dos animais estavam ciclando, o que ocorreu no período de 30
dias pós-parto para vacas Bos taurus e 44 dias pós-parto para vacas Bos indicus. Portanto, o estudo
foi dividido em dois experimentos: experimento 1, vacas Bos taurus com CL (n = 14) e sem CL
(n = 11) no período de 30 dias pós-parto; e experimento 2, vacas Bos indicus com CL (n = 7) e
sem CL (n = 8) no período de 44 dias pós-parto.
Somente para vacas Nelore houve efeito significativo do período pós-parto no número de
folículos aspirados, oócitos recuperados e número de oócitos viáveis. Entretanto, tanto o número
de blastocistos (Figura 2) quanto a taxa de blastocistos não diferiu com o aumento de dias de pós-
parto e ciclicidade, tanto para vacas Bos indicus como para vacas Bos taurus (Figura 3).

73
 Memorias

Figura 2. Número de blastocistos de acordo com os dias pós parto em vacas Holandesas – Bos
taurus (A) e Nelore – Bos indicus (B).

74
 Memorias

Figura 3. Taxa de blastocistos de acordo com os dias pós parto em vacas Holandesas – Bos taurus
(A) e Nelore – Bos indicus (B).

Assim como observado em um estudo prévio, (Matoba et al., 2012), estes resultados não
geram evidência de um efeito de estresse metabólico induzido pela lactação sobre a competência
de desenvolvimento oocitário em vacas de leite e de corte no pós-parto recente, em termos de
habilidade morfológica de desenvolvimento após a FIV. Estudos prévios mostram um entrave na
fertilização durante o pós-parto recente devido à problemas metabólicos, relacionados
principalmente ao balanço energético negativo (Leroy et al., 2012). Nestes estudos, a fertilidade
foi avaliada após a inseminação artificial, com alterações endócrinas e metabólicas significativas
nos microambientes do folículo dominante. Em estudos com OPU-PIV, os folículos são aspirados
com aproximadamente 2 a 3 mm, antes da fase de crescimento do folículo dominante. Este fato
pode, em parte, explicar os diferentes resultados entre os experimentos.

75
 Memorias
Qualidade oocitária e PIV durante início ou final da lactação

Uma avaliação clara dos efeitos da lactação sobre a qualidade oocitária pode ser um tanto
quanto complexo. Por exemplo, testar os efeitos isolados do estágio de lactação somente sobre a
qualidade oocitária pode ser confundido com interações de estresse calórico, já que vacas em
lactação são, em geral, mais susceptíveis à esse tipo de estresse. Além disso, vacas em lactação
podem sofrer de diferentes problemas metabólicos durante a progressão da lactação até o período
seco. Adicionalmente, o tipo de dieta e o nível de matéria seca consumida por vacas em lactação
e vacas não lactantes pode influenciar no resultado da OPU-PIV. Apesar disso, os efeitos negativos
do excesso de consumo de energia parecem comprometer a competência de desenvolvimento in
vitro de oócitos, especialmente em vacas de alto escore corporal (Adamiak, 2005). Os mecanismos
que mediam os efeitos negativos sobre a competência oocitária podem estar relacionados à
alterações endócrinas, como hiperinsulinemia, resistência periférica à insulina e aumento da
concentração sanguínea de glicose, ácidos graxos não esterificados (AGNEs) e IGF-I, que podem
interferir com o transporte de glicose nas células embrionárias e também aumentar as taxas de
apoptose.

Vacas lactantes foram selecionadas para produção de leite, levando as vacas leiteiras
modernas a serem mais propensas à desenvolverem resistência periférica à insulina para manter a
produção de leite. Diversos fatores estão envolvidos na indução de resistência insulínica em vacas
leiteiras, inclusive o balanço energético negativo excessivo no pós-parto recente. Intrigantemente,
vacas leiteiras lactantes são mais propensas à resistência insulínica e esta, aparentemente, ocorre
de forma mais evidente em animais com maior escore de condição corporal e que têm maior
consumo de dietas com alto teor de energia. Este é um problema um tanto quanto comum,
particularmente em fazendas leiteiras comerciais que utilizam uma única dieta durante toda a
lactação. Para testar se o estágio da lactação e possíveis interações com a resistência insulínica
podem influenciar a qualidade oocitária, nosso grupo de pesquisa utilizou vacas Holandesas que
estavam em início ou final da lactação no momento da OPU/PIV (Baruselli et al. 2016). Os
resultados deste estudo claramente mostram que a resistência insulínica associada com o final da
lactação (vacas em final de lactação tiveram maiores níveis de insulina circulante) pode diminuir
a qualidade oocitária e a eficiência da PIV. Por exemplo, nós observamos que vacas em estágio
final de lactação tiveram maior número de oócitos recuperador por sessão de OPU. Em contraste,

76
 Memorias
o número de blastocistos bem como a taxa de blastocistos foram drasticamente menores em vacas
em estágio final de lactação (Tabela 6). Além disso, um genes pró-apoptóticos estavam mais
expressos em vacas com mais dias em lactação. Estes achados corroboram com estudos prévios,
mostrando que vacas em estágio tardio de lactação estão propensas à desenvolverem resistência
insulínica, o que claramente reduz a viabilidade oocitária durante a PIV.

Tabela 6. Resultados de ovum pick-up e produção in vitro de embriões de vacas Holandesas de alta
produção durante estágio inicial ou final de lactação.

Estágio de Lactação
Valor de P
Inicial Final
Nº de animais 70 67
DIM, dias 110,5 ± 20,8 425,6 ± 21,0 N/D
Produção de leite, kg/dia 34,3 ± 1,2 23,4 ± 1,2 <0,0001
Nº de inseminações 0,7 ± 0,2 7,0 ± 0,2 <0,0001
Nº de lactações 2,4 ± 0,1 1,9 ± 0,2 0,05
ECC (escala de 1-5) 2,79 ± 0,06 3,15 ± 0,07 <0,0001
Nº de folículos 14,8 ± 2,4 22,7 ± 2,4 0,0016
Taxa de recuperação, % 46,4 ± 4,4 53,8 ± 4,5 0,1
Nº de oócitos 7,3 ± 2,0 14,3 ± 2,0 0,0004
Nº de oócitos viáveis 4,6 ± 1,6 9,7 ± 1,6 0,001
Nº de oócitos clivados (dia 3) 4,7 ± 0,6 3,9 ± 0,6 0,1
Taxa de clivagem, % 48,0 ± 0,1 41,4 ± 0,1 0,08
Nº de blastocistos (dia 7) 2,2 ± 0,4 1,4 ± 0,3 0,06
Taxa de blastocisto, % 23,0 ± 0,1 13,3 ± 0,1 0,0005
Adaptado de Baruselli et al., 2016.

Qualidade oocitária e PIV em doadoras não-lactantes

A qualidade oocitária tem sido considerada um fator importante que contribui na baixa
fertilidade relatada para vacas leiteiras de alta produção (Walsh et al., 2011). Portanto, levantamos
a hipótese de que procedimentos de OPU-PIV podem resultar em um número maior de blastocistos
por sessão de OPU em doadoras não-lactantes, em comparação com doadoras lactantes. Nossos
dados mostraram um número maior de blastocistos por sessão de OPU em vacas não-lactantes do
que em vacas lactantes (Vieira et al., 2014). Vacas não-lactantes produziram alta taxa de
blastocistos (41,9 vs. 13,4%; P = 0,001) e maior número de embriões viáveis para transferência
por OPU (3,5 ± 0.5 vs. 1,3 ± 0,3; P = 0,003) do que vacas Holandesas em lactação. Resultados

77
 Memorias
semelhantes foram observados em um estudo previamente mencionado, realizado pelo nosso
grupo (Tabela 3).
Vacas de leite têm um metabolismo peculiar, que está diretamente relacionado com a
nutrição e com distúrbios do perfil endócrino. O perfil metabólico de vacas leiteiras é comumente
caracterizado por baixas concentrações de P4 e estradiol (Wiltbank et al., 2006) e altas
concentrações de AGNEs e b-hidroxibutirato (BHB; Leroy et al., 2005). Este metabolismo peculiar
têm sido associado com um microambiente folicular com qualidade abaixo da ideal, o que leva ao
comprometimento da qualidade oocitária, resultando em falhas na concepção (Sartori et al., 2002,
2004; Wiltbank et al., 2006; Leroy et al., 2008a, b; Walsh et al., 2011). Portanto, o fato de que
vacas em lactação têm maior dificuldade em manter boa eficiência reprodutiva pode ajudar a
explicar os baixos resultados observados nos programas de OPU-PIV. Deste modo, em programas
de OPU-PIV, o uso de doadoras não-lactantes deve ter preferência devido à maior produção de
embriões por sessão de OPU.
Em outro experimento (Sales et al., 2015), estudamos os efeitos de dietas com diferentes
teores de energia [100 e 170% para mantença (M) e alto teor energético (1,7M), respectivamente]
sobre os parâmetros reprodutivos, endócrinos e metabólicos em vacas não lactantes Bos indicus
(Gir; n = 14) e Bos taurus (Holandesa; n = 14) submetidas à OPU-PIV a cada 14 dias. Medimos
as concentrações plasmáticas de glicose e insulina e realizamos teste de tolerância à glicose e a
quantificação relativa dos transcritos PRDX1, HSP70.1, GLUT1, GLUT5, IGF1R, e IGF2R dos
oócitos recuperados no final do período experimental. Não foram observadas interações de raça e
do teor de energia sobre as variáveis qualitativas (oócitos viáveis, grau de qualidade e índice de
qualidade oocitária) e quantitativas (oócitos recuperados). Também não foi observado nenhum
efeito do teor de energia da dieta sobre as variáveis quantitativas e qualitativas. A produção in vitro
de embriões (taxa de clivagem e de blastocistos e o número de embriões produzidos) foi
semelhante entre as dietas, mas a dieta 1,7M reduziu a PIV de embriões em vacas Bos indicus após
60 dias de tratamento. Além disso, vacas Bos indicus recebendo a dieta 1,7M apresentaram menor
abundância dos genes HSP70.1, GLUT1, IGF1R, e IGF2R. Todas as vacas recebendo a dieta 1,7M
tiveram maiores concentrações de glicose e insulina e também apresentaram maior resistência
periférica à insulina, de acordo com o teste de tolerância a glicose. Estes resultados sugerem que
o consumo de uma dieta de alto teor energético por um longo período reduz a produção in vitro de
embriões em vacas Bos indicus não lactantes por levá-las a um estado hiperinsulinêmico e por
promover a desregulação de genes envolvidos no metabolismo celular.

Conclusões e indicações para o futuro

Concluindo, a PIV de embriões de bovinos de leite ou de corte jovens aparenta ser possível,
no entanto, muitas melhorias são necessárias para aprimorar esta técnica que vêm como um
complemento para testes de genômica. É importante ressaltar que veterinários trabalhando com
OPU-PIV precisam levar em consideração diversos aspectos fisiológicos específicos de cada raça

78
 Memorias
(Bos indicus vs. Bos taurus). Além disso, é altamente recomendado que se evite trabalhar com
doadoras de oócitos submetidas à dietas de alto teor energético por um longo período e/ou sob
estresse calórico, fatores estes que podem influenciar negativamente na qualidade oocitária,
reduzindo os resultados da PIV.

Referências
Adamiak SJ. 2005. Impact of nutrition on oocyte quality: cumulative effects of body composition
and diet leading to hyperinsulinemia in cattle. Biol Reprod, 73:918-926.
Armstrong DT, Holm P, Irvine B, Petersen BA, Stubbings RB, McLean D, Stevens G,
Seamark RF. 1992. Pregnancies and live birth from in vitro fertilization of calf oocytes collected
by laparoscopic follicular aspiration Theriogenology, 38:667-678.
Baruselli PS, Vieira LM, Sá Filho MF, Mingoti RD, Ferreira RM, Chiaratti MR, Oliveira
LH, Sales JN, Sartori R. 2016. Associations of insulin resistance later in lactation on fertility of
dairy cows. Theriogenology, 86:263-269.
Batista EOS, Macedo GG, Sala RV, Ortolan M, Sá Filho MF, Del Valle TA, Jesus EF, Lopes
R, Rennó FP, Baruselli PS. 2014. Plasma Antimullerian Hormone as a Predictor of Ovarian
Antral Follicular Population in Bos indicus (Nelore) and Bos taurus (Holstein) Heifers.
Reproduction in Domestic Animals, 49(3):448-452.
Batista EO, Guerreiro BM, Freitas BG, Silva JC, Vieira LM, Ferreira RM, Rezende RG,
Basso AC, Lopes RN, Rennó FP, Souza AH, Baruselli PS. 2016a. Plasma anti-Müllerian
hormone as a predictive endocrine marker to select Bos taurus (Holstein) and Bos indicus (Nelore)
calves for in vitro embryo production. Domest Anim Endocrinol, 54:1-9.
Batista EO, Vieira LM, Sá Filho MF, Dias EA, Bayeux BM, Accorsi MF, Monteiro FM,
Souza AH, Baruselli PS, D'Occhio MJ. 2016b. Ovarian follicular growth suppression by long-
term treatment with a GnRH agonist and impact on small follicle number, oocyte yield, and in
vitro embryo production in Zebu beef cows. Theriogenology, 85:1680-1687.
Bayeux BM, Carvalho LM, Mingoti RD, Watanabe YF, Oliveira AS, Chiba MO, Azrak AJ,
Castro PMN, Souza AH, PS Baruselli. 2016. Effect of animal category (prepubertal, pubertal
and pregnant) on in vitro embryo production in Holstein heifers. Anim Reprod, 13: (abstract).
Betteridge KJ, Smith C, Stubbings RB, Xu KP, King WA. 1989. Potential genetic improvement
of cattle by fertilization of fetal oocytes in vitro. J Reprod Fertil Suppl, 38:87-98.
Desjardins C, Hafs HD. 1969. Maturation of bovine female genitalia from birth through puberty.
J Anim Sci, 25:502-507.
Ericksson BH. 1966. Developmental and senescence of the postnatal bovine ovary. J Anim Sci,
25:800-805.

79
 Memorias
Ferreira RM, Ayres H, Chiaratti MR, Ferraz ML, Araújo AB, Rodrigues CA, Watanabe
YF, Vireque AA, Joaquim DC, Smith LC, Meirelles FV, Baruselli PS. 2011. The low fertility
of repeat-breeder cows during summer heat stress is related to a low oocyte competence to develop
into blastocysts. J Dairy Sci, 94:2383-2392.
Ferreira RM, Chiaratti MR, Macabelli CH, Rodrigues CA, Ferraz ML, Watanabe YF, Smith
LC, Meirelles FV, Baruselli PS. 2016. The Infertility of Repeat-Breeder Cows During Summer
Is Associated with Decreased Mitochondrial DNA and Increased Expression of Mitochondrial and
Apoptotic Genes in Oocytes. Biol Reprod, 94(3):66, 1-10.
Fry RC, Simpson TL,Squires TJ. 1998. Ultrasonically guided transvaginal oocyte recovery from
calves treated with or without GnRH. Theriogenology, 49:1077-1082.
Gimenes LU, Ferraz ML, Fantinato-Neto P, Chiaratti MR, Mesquita LG, Sá Filho MF,
Meirelles FV, Trinca LA, Rennó FP, Watanabe YF, Baruselli PS. 2015. The interval between
the emergence of pharmacologically synchronized ovarian follicular waves and ovum pickup does
not significantly affect in vitro embryo production in Bos indicus, Bos taurus, and Bubalus bubalis.
Theriogenology 83:385-393.
Guerreiro BM, Batista EO, Vieira LM, Sá Filho MF, Rodrigues CA, Castro Netto A, Silveira
CR, Bayeux BM, Dias EA, Monteiro FM, Accorsi M,Lopes RN, Baruselli PS. 2014a. Plasma
anti-mullerian hormone: an endocrine marker for in vitro embryo production from Bos taurus and
Bos indicus donors. Domest Anim Endocrinol, 49:96-104.
Guerreiro BM, Rodrigues CA, Castro Neto A, Silveira CRA, Vieira LM, Oliveira RC, Freitas
BG, Baruselli PS. 2014b. Prepubertal Holstein heifers have low efficiency when submitted to
ovum pick-up and in vitro embryo production. Anim Reprod, 11:405. Abstract.
Khatir H, Lonergan P, Carolan C, Mermillod P. 1996. Prepubertal bovine oocyte: a negative
model for studying oocyte developmental competence. Mol Reprod Dev, 45:231-239.
Leroy JL, Vanholder T, Mateusen B, Christophe A, Opsomer G, de Kruif A, Genicot G, Van
Soom A. 2005. Non-esterified fatty acids in follicular fluid of dairy cows and their effect on
developmental capacity of bovine oocytes in vitro. Reproduction, 130:485-495.
Leroy JL, Van Soom A, Opsomer G, Goovaerts IG, Bols PE. 2008a. Reduced fertility in high‐
yielding dairy cows: are the oocyte and embryo in danger? Part II. Mechanisms linking nutrition
and reduced oocyte and embryo quality in high‐yielding dairy cows. Reprod Domest Anim,
43:623-632.
Leroy JL, Vanholder T, Van Knegsel AT, GarciaIspierto I, Bols PE. 2008b. Nutrient
prioritization in dairy cows early postpartum: mismatch between Baruselli et al. In vitro production
of bovine embryos. metabolism and fertility? Reprod Domest Anim, 43(suppl. 2):96-103.
Leroy JL, Rizos D, Sturmey R, Bossaert P, Gutierrez-Adan A, Van Hoeck V, Valckx S, Bols
PE. 2012. Intrafollicular conditions as a major link between maternal metabolism and oocyte
quality: a focus on dairy cow fertility. Reprod Fertil Dev, 24:1-12.

80
 Memorias
Lonergan P, Monaghan P, Rizos D, Boland MP, Gordon I. 1994. Effect of follicle size on
oocyte quality and developmental competence following maturation, fertilization, and culture in
vitro. Mol Reprod Dev, 37:48-53.
Lonergan P. 2011. Influence of progesterone on oocyte quality and embryo development in cows.
Theriogenology, 76:1594-1601.
Maclellan LJ, Whyte TR, Murray A, Fitzpatrick LA, Earl CR, Aspden WJ, Kinder JE,
Grotjan HE, Walsh J, Trigg TE, D'Occhio MJ. 1998. Superstimulation of ovarian follicular
growth with FSH oocyte recovery, and embryo production from Zebu (Bos indicus) calves: effects
of treatment with a GnRH agonist or antagonist. Theriogenology, 49:1317-1329.
Majerus V, De Roover R, Etienne D, Kaidi S, Massip A, Dessy F, Donnay I. 1999. Embryo
production by ovum pick up in unstimulated calves before and after puberty. Theriogenology,
52:1169-1179.
Matoba S, O'Hara L, Carter F, Kelly AK, Fair T, Rizos D, Lonergan P. 2012. The association
between metabolic parameters and oocyte quality early and late postpartum in Holstein dairy cows.
J Dairy Sci, 95:1257-1266.
Merton JS, de Roos AP, Mullaart E, de Ruigh L, Kaal L, Vos PL, Dieleman SJ. 2003. Factors
affecting oocyte quality and quantity in commercial application of embryo technologies in the
cattle breeding industry. Theriogenology, 59:651-674.
Pierucci JC, Silveira CRA, Santos GL, Yamazaki W, Yamazaki LTS, Dias EAR, Paz CC, F.
Monteiro M, Baruselli PS, Gimenes LU. 2015. Evaluation of in vitro embryo production
according to the cyclicity of Nellore (Bos indicus) cows submitted to opu in different postpartum
moments. Anim Reprod, 12:676. Abstract.
Pontes JH, Silva KC, Basso AC, Rigo AG, Ferreira CR, Santos GM, Sanches BV, Porcionato
JP, Vieira PH, Faifer FS, Sterza FA, Schenk JL, Seneda MM. 2010. Large-scale in vitro
embryo production and pregnancy rates from Bos taurus, Bos indicus, and indicus-taurus dairy
cows using sexed sperm. Theriogenology, 74:1349-1355.
Presicce GA, Jiang S, Simkin M, Zhang L, Looney CR, Godke RA, Yang X. 1997. Age and
hormonal dependence of acquisition of oocyte competence for embryogenesis in prepubertal
calves. Biol Reprod, 56:386-392.
Sala RV. 2013. Influência das concentrações de AGNE na qualidade oócitaria e produção in vitro
de embriões de vacas Holandesas no início da lactação. São Paulo, SP: Universidade de São Paulo,
Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia. Dissertação.
Sales JN, Iguma LT, Batista RI, Quintão CC, Gama MA, Freitas C, Pereira MM, Camargo
LS, Viana JH, Souza JC, Baruselli PS. 2015. Effects of a highenergy diet on oocyte quality and
in vitro embryo production in Bos indicus and Bos taurus cows. J Dairy Sci, 98:3086-3099.
Sartori R, Rosa GJ, Wiltbank MC. 2002. Ovarian structures and circulating steroids in heifers
and lactating cows in summer and lactating and dry cows in winter. J Dairy Sci, 85:2813-2822.

81
 Memorias
Sartori R, Haughian JM, Shaver RD, Rosa GJ, Wiltbank MC. 2004. Comparison of ovarian
function and circulating steroids in estrous cycles of Holstein heifers and lactating cows. J Dairy
Sci, 87:905-920.
Sartori R, Gimenes LU, Monteiro PL Jr, Melo LF, Baruselli PS, Bastos MR. 2016. Metabolic
and endocrine differences between Bos taurus and Bos indicus females that impact the interaction
of nutrition with reproduction. Theriogenology, 86:32-40.
Seneda MM, Esper CR, Garcia JM, Oliveira JA, Vantini R. 2001. Relationship between
follicle size and ultrasoound-guided transvaginal oocyte recovery. Anim Reprod Sci, 67:37-43.
Taneja M, Bols PE, Van de Velde A, Ju JC, Schreiber D, Tripp MW, Levine H, Echelard Y,
Riesen J, Yang X. 2000. Developmental competence of juvenile calf oocytes in vitro and in vivo:
influence of donor animal variation and repeated gonadotropin stimulation. Biol Reprod, 62:206-
213.
Torres-Júnior JR, Pires MFA, de Sá WF, Ferreira AM, Viana JH, Camargo LS, Ramos AA,
Folhadella IM, Polisseni J, C Freitas,Clemente CA, de Sá Filho MF, Paula-Lopes FF,
Baruselli PS. 2008. Effect of maternal heat-stress on follicular growth and oocyte competence in
Bos indicus cattle. Theriogenology, 69:155-166.
Vieira LM, Rodrigues CA, Castro Netto A, Guerreiro BM, Silveira CR, Moreira RJ, Sá Filho
MF, Bó GA, Mapletoft RJ, Baruselli PS. 2014. Superstimulation prior to the ovum pick-up to
improve in vitro embryo production in lactating and nonlactating Holstein cows. Theriogenology,
82:318-324.
Walsh SW, Williams EJ, Evans AC. 2011. A review of the causes of poor fertility in high milk
producing dairy cows. Anim Reprod Sci, 123:127-138.
Wiltbank M, Lopez H, Sartori R, Sangsritavong S, Gümen A. 2006. Changes in reproductive
physiology of lactating dairy cows due to elevated steroid metabolism. Theriogenology, 65:17-29.

82
Memorias

83
Memorias

84
 Memorias
Protocolos de IATF que alargan el proestro y su efecto en la preñez

A. Menchaca1, R. Núñez-Olivera1, C. García-Pintos1, J. de la Mata2,3, E. Huguenine2, G. Bó4,5

1
Instituto de Reproducción Animal Uruguay, Fundación IRAUy, Montevideo, Uruguay.
2
Actividad Privada. 3Facultad de Agronomía, Universidad Nacional de La Pampa, Santa Rosa, Argentina.
4
Instituto A.P. de Ciencias Básicas y Aplicadas, Medicina Veterinaria, Universidad Nacional de Villa
María, Villa del Rosario, Córdoba, Argentina.
5
Instituto de Reproducción Animal Córdoba, Córdoba, Argentina.

Introducción

El uso de la inseminación artificial a tiempo fijo (IATF) en bovinos no ha parado de crecer en los
países de la región durante los últimos 20 años, demostrando que es una tecnología que ha venido para
quedarse. Su curva de adopción se encuentra en una fase de madurez, habiendo sido primero adoptada por
los más innovadores y hoy ya es utilizada por productores más pragmáticos o conservadores. Este
crecimiento responde a varios factores, y uno de ellos es la eficacia de la tecnología. Los tratamientos para
IATF logran con éxito inducir y sincronizar la ovulación, tanto en vaquillonas como en vacas en anestro y
con cría al pie, es una tecnología de fácil aplicación en el campo, y -si bien requiere un conocimiento
profundo del profesional veterinario que la aplica- no implica un manejo complejo del rodeo, no es
necesario detectar celo, y no requiere equipamiento de alto costo para el Médico Veterinario. Considerando
el beneficio que genera, tampoco implica un gran costo para el productor. Permite una tasa de preñez
aceptable y un impacto en la curva de parición del rodeo de cría como ninguna otra tecnología, además del
impacto en el progreso genético al permitir el uso de toros de elite en la totalidad del rodeo. Podemos
resumirlo en que la IATF es una tecnología de bajo costo y alto impacto.

Los aspectos técnicos de la IATF han sido mejorados en estos años, principalmente mediante el
refinamiento de los protocolos hormonales utilizados. Hace algunos años, desde el ámbito científico se puso
especial énfasis en controlar la dinámica folicular y el momento de la ovulación, con tal éxito que hoy es
difícil mejorar aún más este aspecto. Sin embargo, evidentemente hay otros puntos a mejorar ya que aún
hay un porcentaje considerable de vacas que no se preñan en la inseminación. Con el objetivo de superar el
clásico 50% de preñez que normalmente se obtiene en una IATF en rodeos de cría, recientemente hemos
cambiado el foco para abordar otros nuevos aspectos. Hoy se plantea profundizar en el estudio de estrategias
preovulatorias para mejorar las condiciones postovulatorias. Estas estrategias procuran mejorar la función
del folículo ovulatorio estimulando su crecimiento y actividad en el período comprendido desde el retiro
del dispositivo con progesterona hasta la ovulación, principalmente mediante la inducción de un proestro
más largo. Se pretende así mejorar la actividad del cuerpo lúteo y el medio ambiente uterino luego de la
ovulación, y favorecer así el desarrollo embrionario y el reconocimiento materno de la gestación. Con esto
en mente, recientemente se han desarrollado nuevos protocolos o se han mejorado los ya existentes. Los
resultados muestran mejoras interesantes que vale la pena considerar.

85
 Memorias
En esta revisión, se aborda esta idea desde sus bases fisiológicas, se resumen los principales
resultados obtenidos en el laboratorio y en el campo, y se proponen posibles mejoras para el futuro.

Por qué prolongar el proestro

Normalmente en una fase folicular espontánea al final del ciclo estral en la vaca, el intervalo entre la
luteólisis y la ovulación es de unos cuatro días aproximadamente. Sin embargo, en los protocolos
convencionales de IATF este período –comprendido desde el retiro del dispositivo con progesterona hasta
la ovulación- es bastante menor, aproximadamente de unos tres días (65-72 horas aproximadamente, Bó et
al., 2007). Esta menor duración de la fase folicular en los protocolos de IATF ocurre porque el folículo
preovulatorio ya ha alcanzado un buen desarrollo al retirar el dispositivo con progesterona al día 7 u 8, y
principalmente porque la administración de cipionato de estradiol (CPE) al retiro del dispositivo (o
benzoato de estradiol BE a las 24 h, o GnRH a las 48 más tarde), induce el pico de LH y la ovulación en un
intervalo más corto de lo que ocurriría de manera espontánea en un ciclo fisiológico. Si bien la fase folicular
comprende al proestro y al estro, para simplificar la terminología nos referiremos al proestro.

La importancia de prolongar el proestro –o de evitar acortarlo- surge de una serie de estudios en

bovinos donde se evaluó la influencia de la madurez folicular sobre la fertilidad (Bridges et al., 2008; Day,
et al., 2015). Aunque primero se había planteado la hipótesis de que en protocolos que utilizaban GnRH
como inductor de la ovulación el diámetro folicular era un fuerte indicador de fertilidad, el análisis
acumulado de varios estudios ha demostrado que –a un mismo diámetro del folículo ovulatorio- el predictor
más consistente de preñez en vacas Bos taurus es la duración del proestro (Day, 2015). Para confirmar esta
idea, en un experimento en el que las vacas fueron inducidas a ovular un folículo con un diámetro similar
entre ellas, la tasa de preñez fue mayor en las que recibieron GnRH 2,25 días después de la administración
de PGF2alfa (71%) comparado con las que recibieron GnRH 1,25 días después de la PGF2alfa (10%, P<
0,01; Bridges et al., 2010). De manera similar, Binelli y colaboradores han trabajado en un modelo
experimental en el que indujeron un proestro largo vs. un proestro corto, colocando un dispositivo con
progesterona por 7,5 u 8 días, y administrando GnRH a las 48 o 36 horas luego del retiro, respectivamente
(proestro largo vs corto). Con este modelo, han demostrado que las vacas con proestro largo tienen un
folículo más grande que induce un cuerpo lúteo de mayor tamaño, con mayor producción de progesterona
y mayor tasa de preñez (Binelli et al., 2017).

Esta fase preovulatoria puede afectar la funcionalidad uterina y el desarrollo embrionario. En bovinos
de carne y leche está demostrado que existe una alta incidencia de muerte embrionaria durante las primeras
tres semanas luego de la fertilización. Si bien en este período el embrión es responsable de su propia
sobrevivencia ya que debe inducir el reconocimiento materno de la gestación mediante una adecuada
señalización, el pasaje de los primeros estadios embrionarios hasta la etapa de conceptus depende
exclusivamente de las secreciones oviductales y uterinas (Binelli et al., 2017). Este proceso de secreción
secuencial a lo largo de los primeros días luego de la fertilización es programado por la exposición a los
estrógenos durante la fase folicular (proestro/estro), y a la acción de la progesterona durante la fase luteal
temprana. Tanto la producción de estrógenos como la de progesterona es determinada por el desarrollo
folicular preovulatorio, justamente durante la fase folicular (Binelli et al., 2017). En este período, varios
trabajos muestran que un desarrollo adecuado del folículo preovulatorio determina una mayor producción
de estrógenos, y también un mayor tamaño y actividad del cuerpo lúteo subsiguiente. A su vez, la
producción de estrógenos en este período preovulatorio programa la presencia de receptores de
progesterona a nivel endometrial, necesarios para que dicha hormona ejerza su acción sobre las secreciones

86
 Memorias
(histotrofo) y el ambiente uterino y permitir así el desarrollo del embrión. Por todo esto, las condiciones
preovulatorias afectarán la actividad luteal, el ambiente uterino y el desarrollo embrionario temprano, y de
esta manera puedan determinar el éxito o el fracaso en el establecimiento de la gestación.

La administración de estradiol exógeno (CPE o BE vs. control) al momento de retirar un dispositivo

intravaginal con progesterona, induce concentraciones más altas de estradiol en sangre durante el período
preovulatorio, que también se relacionaron con menores pérdidas embrionarias en el período entre el
reconocimiento materno de la gestación y la implantación (Madsen et al., 2015). Resultados similares
hemos obtenido con la administración de CPE al retirar el dispositivo (vs. un grupo sin estradiol) con
resultados favorables en la funcionalidad uterina que indican que el estradiol no solo mejora la tasa de
ovulación o mejora la sincronía de la misma, sino que también prepara al endometrio para un mejor
desempeño (Bosolasco et al., en redacción). El problema con el uso de estradiol exógeno al retiro del
dispositivo (o BE 24 h más tarde, o GnRH 48 más tarde), es que -si bien se favorecen estos mecanismos-
también se induce la ovulación de manera prematura, acortando así el proestro y el desarrollo folicular
terminal.

Estos conceptos son relativamente nuevos y por lo tanto no habían sido considerados en el diseño de
los protocolos previos para IATF. Teniendo esto en cuenta, es que se ha propuesto prolongar el proestro en
los protocolos para IATF.

Protocolos con proestro prolongado

El protocolo convencional para IATF en rodeos de cría más utilizado en los países de Sudamérica
consiste en la administración de BE por vía im junto con la administración de progesterona mediante un
dispositivo intravaginal durante 7 u 8 días. Al retirar el dispositivo se administra una dosis de PGF2alfa,
eCG y CPE como inductor de la ovulación, y la IATF se realiza desde las 46 a 56 h luego de retirar el
dispositivo (Figura 1; Menchaca et al., 2013).

Los protocolos con progesterona y estradiol como el indicado anteriormente son los más eficaces
para sincronizar la emergencia de una onda folicular, debido a la supresión combinada de la progesterona
sobre la pulsatilidad de LH y del estradiol sobre la liberación de FSH. Así, con bajos niveles de
gonadotrofinas, los folículos antrales dependientes de las gonadotrofinas dejan de crecer y entran en atresia.
El BE inyectado por vía im será hidrolizado a 17-beta estradiol para metabolizarse algunas horas más tarde,
permitiendo un nuevo aumento en los niveles de FSH para reclutar un nuevo pool de folículos pequeños.
Así se sincroniza la emergencia de una nueva onda folicular que emerge aproximadamente a los 3-4 días
luego de administrar el BE junto con la progesterona. Este recambio folicular asegura que no se generarán
folículos persistentes o con dominancia prolongada, los que han sido asociados a baja competencia del
ovocito y baja fertilidad.

El uso de estradiol al final del protocolo tiene la función de inducir la ovulación. Con este protocolo,
la ovulación ocurre aproximadamente a las 65-72 horas luego del retiro del dispositivo. Cuando al protocolo
con progesterona y eCG aplicado en vacas en anestro se agregó una dosis de CPE, el porcentaje de vacas
que ovularon pasó de 73% (11/15) al 93% (28/30) (Bosolasco et al., en redacción). Si bien estos protocolos
con CPE al retiro del dispositivo (o con BE 24 horas más tarde, o GnRH 48 horas más tarde) son muy

87
 Memorias
eficaces para inducir la ovulación, su uso podría acortar el proestro con las consecuencias negativas
descritas anteriormente.

Considerando las fortalezas y debilidades del protocolo convencional, deberíamos mantener el inicio
del tratamiento con BE y progesterona sin modificarlo (para asegurar el recambio folicular), y mejorar el
final del protocolo durante el desarrollo del folículo ovulatorio (para asegurar la ovulación manteniendo un
proestro adecuado).

El primer protocolo de IATF con proestro prolongado fue propuesto en la Universidad del Estado de
Ohio por el equipo conducido por el Dr. Michael Day (Bridges et al., 2008). Este protocolo conocido como
Co-Synch de 5 días, es un tratamiento basado en GnRH –en lugar de estradiol- al colocar el dispositivo con
progesterona. En los últimos años ha ganado espacio entre los profesionales y productores de Norteamérica,
al haberse demostrado que permite tasas de preñez más alta que las obtenidas con el protocolo convencional
Co-Synch de 7 días que se utilizaba anteriormente (Day, 2015). La base fisiológica de este tratamiento fue
reducir el tiempo de inserción del dispositivo de progesterona (de 7 a 5 días) para evitar el efecto adverso
de la ovulación de un folículo persistente sobre la fertilidad de las vacas que no ovulaban a la primera
GnRH, y a la vez prolongar el período del proestro permitiendo altos niveles endógenos de estrógenos. En
el protocolo convencional utilizado en EEUU no se utiliza estradiol ni al colocar ni luego de retirar el
dispositivo, utilizando GnRH en ambos momentos. El uso de GnRH como inductor de la ovulación se
administra a las 60 horas luego del retiro del dispositivo (al momento de realizar la IATF). En el nuevo Co-
Synch de 5 días, además de retirar dos días antes el dispositivo, también se atrasa la IATF y la GnRH a las
72 horas, alargando así el proestro. Utilizando este protocolo, el efecto favorable del proestro prolongado
estuvo asociado a mayores concentraciones de estradiol circulante antes de la ovulación y mayores
concentraciones de progesterona en la fase luteal subsiguiente (Bridges et al., 2014). En un trabajo previo
(Bridges et al., 2008) estos investigadores compararon un protocolo Co-Synch de 7 días con IATF a las 60
horas (protocolo convencional en USA) y un protocolo Co-Synch de 5 con IATF a las 72 horas (protocolo
con proestro prolongado) en vacas de carne con cría. En ese estudio, la tasa de preñez fue 10,5 puntos más
alta con el protocolo Co-Synch de 5 días (70,4%) que con el Co-Synch de 7 días (59,9%, n= 616 Angus;
P< 0,01). Resultados similares fueron reportados por otros autores, con una tasa de preñez
significativamente más alta en vacas tratadas con Co-Synch de 5 días que con Co-Synch de 7 días (Whittier
et al., 2013).

Este protocolo, si bien mejora la tasa de preñez comparado con el protocolo convencional utilizado
en EEUU, al requerir el uso de GnRH al colocar el dispositivo genera una serie de dificultades al momento
de aplicarlo (Bó et al., 2016). Se han evaluado diversas modificaciones para superar algunas de estas
limitantes en el protocolo Co-Synch de 5 días, las que han sido revisadas en profundidad en trabajos previos
(Bó et al., 2016; Menchaca et al., 2017). La mejor estrategia para resolverlo es sustituir el uso de GnRH
por BE al colocar el dispositivo. En los países en que el BE está disponible siempre es preferible evitar el
uso de GnRH. Por este motivo, desde hace algunos años estamos trabajado en un nuevo protocolo con
proestro prolongado, pero iniciando el tratamiento con BE en lugar de GnRH. Este protocolo es denominado
J-Synch, y difiere en varios aspectos con el Co-Synch de 5 días.

88
 Memorias

Figura 1. Representación esquemática del protocolo convencional y del protocolo J-Synch con proestro
prolongado para IATF en vacas y vaquillonas. Ambos protocolos inician el tratamiento con benzoato de
estradiol por vía im y progesterona (P4) por vía intravaginal, y se administra gonadotrofina coriónica
equina (eCG) y prostaglandina (PG) F2alfa al retirar el dispositivo con progesterona. En el protocolo
convencional el dispositivo se retira a los 7-8 días y en el protocolo J-Synch a los 6 días. En el protocolo
convencional se utiliza cipionato de estradiol (CPE) como inductor de la ovulación (al retirar el
dispositivo) y en el protocolo J-Synch se utiliza GnRH (al momento de la IATF).

Protocolo J-Synch

El protocolo J-Synch consiste en la administración de una dosis de 2 mg de BE im aplicada al colocar

un dispositivo con progesterona durante 6 días (en lugar de 8 en el protocolo convencional), administrando
como inductor de la ovulación GnRH a las 72 h más tarde (en lugar de CPE al retirar el dispositivo). La
IATF se realiza a las 72 horas (en lugar de a las 48 horas como en el protocolo convencional) junto con la
administración de GnRH. Este protocolo se muestra en la Figura 1. Desde el 2013 se han realizado diversos
experimentos de laboratorio y de campo para desarrollar y validar este tratamiento. Parte de esta
información ha sido publicada en diferentes congresos y revistas internacionales (de la Mata y Bó, 2012;
de la Mata et al., 2015, 2018; Bó et al., 2016, 2018; Menchaca et al., 2017). Se resumen aquí estos estudios
y se presentan varios avances más recientes.

Considerando que el protocolo convencional más probado, validado y utilizado por los veterinarios
en Sudamérica es el tratamiento de 7 u 8 días con progesterona y estradiol, cualquier nueva propuesta que

89
 Memorias
surja debe compararse con este protocolo. Por este motivo, en una serie de experimentos se comparó la tasa
de preñez en vaquillonas que recibieron el protocolo J-Synch vs. el protocolo convencional.

Los primeros resultados se pueden resumir en dos experimentos realizados en las estaciones de
invierno y primavera en La Pampa, Argentina (de la Mata et al., 2015). Las vaquillonas en el grupo J-Synch
recibieron IATF junto con la administración de GnRH (72 horas después del retiro del dispositivo de
progesterona), mientras que las del grupo convencional recibieron IATF a las 54 horas después del retiro
del dispositivo. El protocolo convencional es el que se describe en la Figura 1 y en este caso no se administró
eCG en ninguno de los dos grupos experimentales. El primer experimento se realizó durante el invierno
con vaquillonas con una condición corporal moderada (4 a 6 en la escala 1 a 9) al inicio del tratamiento,
que perdieron un punto en promedio durante los 30 días luego de la IATF debido a las condiciones de
sequía que se dieron en ese invierno. Los resultados fueron opuestos a los esperados, las vaquillonas con J-
Synch se preñaron menos que con el protocolo convencional (37,8%, 104/275 vs. 49,3%, 138/280,
respectivamente; P< 0,05). Considerando que estos resultados habían sido obtenidos en condiciones críticas
de alimentación -que no son las recomendables para aplicar esta tecnología- y además sin el uso de eCG,
durante la primavera siguiente se realizaron algunos trabajos adicionales en vaquillonas con mejor
condición corporal (6 a 7 puntos) y ganando peso después del inicio del tratamiento. Este experimento se
realizó en cuatro localidades que incluían 583 vaquillonas cruza Angus y Hereford. En tres de ellos se
comparó la tasa de preñez entre ambos protocolos con IATF, y en uno de ellos se asoció la IATF a la
detección de celo utilizando pintura en la base de la cola al retirar el dispositivo. La tasa de preñez sumando
todas las réplicas favorecieron al protocolo J-Synch comparado al protocolo convencional, que fue 60,6%
(157/259) y 47,9% (12/263) respectivamente (P< 0,05). Cuando se analizaron por separado las tres réplicas
sin detección de celo y por otra parte la réplica con detección de celo, la diferencia no alcanzó a ser
estadísticamente significativa en las tres replicas con IATF (55,7%, 87/156 para J-Synch vs. 49,3%, 78/158
para convencional respectivamente; P= 0,3), y sí lo fue en la réplica con IATF asociado al uso de pintura
(68,0%, 70 /103 vs. 46,6%, 49/105 respectivamente; P<0.05). Los resultados están descritos en profundidad
en el Simposio de IRAC de 2015 (de la Mata et al., 2015). Estos resultados alentaron la ejecución de nuevos
experimentos que realizamos en Uruguay en un mayor número de animales, en condiciones ambientales
normales para la época de servicio, y siempre con el uso de eCG administrada al momento de retirar el
dispositivo. Desde 2014 se han utilizado más de 25 mil vaquillonas y vacas sometidas a diseños
experimentales sólidos para alcanzar conclusiones robustas que nos permitan hacer recomendaciones
claras.

En un estudio comparamos la tasa de preñez obtenida con ambos protocolos (convencional y J-

Synch) en un total de 2.349 vaquillonas ubicadas en 5 establecimientos del norte de Uruguay. Todas las
vaquillonas fueron clasificadas por condición corporal y por actividad ovárica mediante ecografía al iniciar
el tratamiento. Los tratamientos fueron aplicados como se indica en la Figura 1, en ambos protocolos
administrando 300 UI de eCG al retirar el dispositivo. Las vaquillonas del grupo J-Synch (n= 1.125) fueron
inseminadas a las 60 horas o a las 72 horas luego de retirar el dispositivo, mientras que las del grupo
convencional (n= 1.224) se inseminaron a las 48 horas o a las 56 horas del retiro del dispositivo. Los
resultados de este experimento se muestran en la Tabla 1. El protocolo J-Synch permitió aumentar
significativamente (P< 0,01) la tasa de preñez, que fue en promedio 5,4 puntos porcentuales más alta que
con el protocolo convencional (56,1%, 631/1.125 vs. 50,7%, 620/1.224, respectivamente; P< 0,05). La
primera conclusión es que al prolongar el proestro se logra una mayor tasa de preñez que con el protocolo
convencional.

90
 Memorias
Tabla 1. Tasa de preñez obtenida con el protocolo J-Synch vs. el protocolo convencional para IATF en
vaquillonas taurinas.

Protocolo Protocolo convencional P

J-Synch

Efecto principal del protocolo 56,1% (631/1.125) 50,7% (620/1.224) <0,01

Total, n=2.349

Resultados por cada réplica

Réplica I (n=150) IATF AM 53,8% (21/39) 54,1% (20/37) NS

87% con CL IATF PM 52,9% (18/34) 47,5% (19/40) NS

Réplica II (n=420) IATF AM 71,8% (79/110) 66,0% (68/103) NS

54% con CL IATF PM 59,6% (59/99) 54,6% (59/108) NS

Réplica III (n=396) IATF AM 55,4% (56/101) 52,5% (51/97) NS

86% con CL IATF PM 54,1% (53/98) 45,0% (45/100) NS

Réplica IV(n=540) IATF AM 55,6% (80/144) 48,5% (65/134) NS

59% con CL IATF PM 53,3% (65/122) 41,4% (58/140) 0,06

Réplica V (n=843) IATF AM 51,3% (99/193) 50,8% (120/236) NS

39% con CL IATF PM 54,6% (101/185) 50,2% (115/229) NS

Total =2.349 IATF AM 57,1% (335/587) 53,4% (324/607) NS

IATF PM 55,0% (296/538) 48,0% (296/617) 0,05

P NS 0,06

Además de la mayor tasa de preñez promedio obtenida con el protocolo J-Synch, en cada una de las
réplicas que se muestran en la Tabla 1 la diferencia estuvo a favor de este tratamiento (entre 2,4 y 9,1 puntos
porcentuales más alta que el protocolo convencional). Es interesante que en ninguna de las réplicas el
protocolo J-Synch se comportó peor que el tratamiento convencional. Es bueno considerar que para alcanzar
diferencias significativas fue necesario comparar un gran número de animales, dado que cuando se analiza
cada réplica por separado la diferencia no alcanza valor significativo. Por este motivo no deberíamos sacar
conclusiones de trabajos con pocos animales, o con bajo poder estadístico.

Desde el punto de vista de la aplicación en el campo, para el protocolo J-Synch no hubo diferencias
entre la IATF a las 60 horas vs. 72 horas, lo que permitiría mantener una amplia ventana de inseminación
durante todo el Día 9, e inseminar 400 a 500 vacas por día al igual que con el protocolo convencional.

91
 Memorias
¿Por qué J-Synch mejora la tasa de preñez?

El resultado obtenido a favor del protocolo J-Synch en las vaquillonas, llevó a plantear nuevos
experimentos tanto para comprender mejor la causa de esta mejora, así como para proponer nuevas ideas
con el objetivo de mejorar dicho tratamiento. En el siguiente estudio se comparó la dinámica folicular, la
actividad luteal y la funcionalidad uterina en vaquillonas de carne tratadas con el protocolo J-Synch vs. el
protocolo convencional de 7 días con estradiol (de la Mata et al., 2018). Las vaquillonas del grupo J-Synch
ovularon 93,7 ± 12,9 horas después del retiro del dispositivo intravaginal, mientras que las del grupo
convencional ovularon 65,0 ± 13,7 horas después del retiro del dispositivo (P< 0,05). Con este resultado
se demostró que la duración del proestro efectivamente es más prolongado con el protocolo J-Synch (28,7
horas de diferencia). Podemos pensar que el folículo ovulatorio al crecer en ausencia de progesterona por
más tiempo produzca más estradiol que en el protocolo convencional. Esta idea además es sustentada por
el hecho de que la tasa de crecimiento de este folículo desde el retiro del dispositivo hasta la ovulación fue
mayor en el protocolo J-Synch que en el protocolo convencional (1,3 ± 0,4 vs. 1,0 ± 0,4 mm/día,
respectivamente; P< 0,06). Cuando se determinaron las concentraciones de estradiol circulante no
encontramos diferencias entre ambos protocolos, lo que podría interpretarse como que el folículo ovulatorio
con el protocolo J-Synch fue capaz de producir estradiol suficiente para alcanzar niveles circulantes
similares a los inducidos por la administración exógena de CPE en el protocolo convencional. Todo esto
(mayor tasa de crecimiento asociado a niveles de estradiol en sangre similares) nos lleva a sugerir que el
folículo ovulatorio en el protocolo con proestro prolongado produciría más estrógeno y por más tiempo que
en el protocolo convencional.

Además de esto, este efecto sobre el folículo ovulatorio quizás también podría tener cierto beneficio
sobre la actividad luteal y la programación uterina luego de la ovulación como ha sido propuesto
previamente (Binelli et al., 2017). Para evaluarlo, en este experimento también se determinó la actividad
luteal y el ambiente uterino luego de la ovulación (de la Mata et al., 2018). Las concentraciones séricas de
progesterona fueron más altas (4,7 ± 0,2 vs. 3,9 ± 0,1 ng/ml; P< 0,05) y el cuerpo lúteo fue más grande
(398,7 ± 10,0 vs. 357,3 ± 10 mm3; P< 0,05) en los días 7 a 12 después de la ovulación en las vaquillonas
del grupo J-Synch comparadas con en el grupo convencional, respectivamente (Figura 2). En este mismo
estudio, realizamos biopsias endometriales a los 6 días luego de la ovulación y evaluamos la presencia y la
expresión génica de receptores de progesterona, de estradiol e IGF1. Los resultados mostraron una menor
expresión de transcriptos de receptores de progesterona (P< 0,05), lo que asociado a una mayor
concentración sérica de esta hormona estaría indicando una downregulation más avanzada que en el
protocolo convencional. Estos estudios fueron realizados mediante real time PCR e inmunohistoquímica y
reflejan un adelanto en la programación endometrial, lo que en general pueden asociarse a una mejor
funcionalidad uterina.

Estos resultados en su conjunto explicarían, al menos en parte, la mejor tasa de preñez obtenida en
los experimentos previos con el protocolo J-Synch (de la Mata et al., 2018). En suma, la información
muestra que este protocolo: a) aumenta el intervalo entre el retiro del dispositivo y la ovulación, b) permite
una mayor tasa de crecimiento del folículo ovulatorio, c) genera un cuerpo lúteo de mayor tamaño, d) induce
mayores concentraciones de progesterona en sangre, y e) favorece la programación del ambiente uterino
para recibir al embrión.

92
 Memorias

Figura 2. Desarrollo folicular, tamaño del cuerpo lúteo y concentraciones séricas de progesterona en
vaquillonas que recibieron el protocolo J-Synch con proestro prolongado o el protocolo convencional (de
la Mata et al., 2018).

Mejoras al Protocolo J-Synch

Luego de estos resultados que muestran la mejor tasa de preñez obtenida con el protocolo J-Synch
(en vaquillonas y con eCG), se han realizado varios experimentos para refinar su diseño y mejorarlo. Estas
mejoras estuvieron focalizadas en aumentar la tasa de preñez, hacer más fácil la aplicación del protocolo
en el campo, disminuir el costo del tratamiento y hacerlo más versátil para aplicarlo en diferentes
condiciones.

Uso de eCG

Uno de los aspectos evaluados en este protocolo fue la necesidad o no de asociar el uso de eCG al
retirar el dispositivo (Menchaca et al., 2017). Trabajos previos con el protocolo convencional habían
mostrado el beneficio de utilizar la eCG, tanto en vacas como en vaquillonas (Menchaca et al., 2013; Núñez-
Olivera et al., 2014, 2018). Con el protocolo convencional, considerando estos resultados sería un error no
aplicarla y en nuestra práctica utilizamos la eCG de rutina como parte del protocolo (300 UI en vaquillonas
y 400 UI en vacas). Para evaluar su uso en el protocolo J-Synch, realizamos dos experimentos, uno de
campo para conocer la tasa de preñez y otro más intenso para evaluar la dinámica folicular y los perfiles
hormonales. En el trabajo de campo se utilizaron 2.598 vaquillonas Bos taurus en 6 réplicas, todas
recibieron el protocolo J-Synch y la mitad recibió o no recibió 300 UI de eCG al retirar el dispositivo. La
IATF se realizó a las 60 o 72 horas luego de retirar el dispositivo. La tasa de preñez fue mayor cuando se
administró eCG (P< 0,05), y no hubo interacción entre el tratamiento con eCG y la presencia de cuerpo
lúteo en las vaquillonas, es decir que el beneficio de la eCG ocurre tanto en vaquillonas cíclicas como en
anestro (con presencia o ausencia de cuerpo lúteo al iniciar el tratamiento). Los resultados fueron discutidos

93
 Memorias
en trabajos previos en este mismo Simposio (Menchaca et al., 2017). En otro experimento, para comprender
por qué con eCG se incrementa la fertilidad, realizamos ecografías diarias para evaluar la dinámica
folicular, se tomaron muestras de sangre para evaluar las concentraciones de estradiol y progesterona, y se
realizaron biopsias de útero para estudiar el ambiente uterino. Este experimento se realizó en vaquillonas
en anestro y los resultados muestran que la eCG permitió un mayor porcentaje de vaquillonas que ovulan
luego del tratamiento, mayores concentraciones de estradiol preovulatorio, y a una menor incidencia de
cuerpos lúteos de regresión temprana luego de la ovulación (Núñez-Olivera et al., en redacción).
Considerando estos resultados en conjunto, al igual que con el protocolo convencional, el uso de eCG es
recomendable también en el protocolo J-Synch.

Momento de IATF

Otra mejora que se ha logrado con el protocolo J-Synch fue el ajuste del momento de IATF. En un
estudio se comparó la tasa de preñez obtenida con la IATF (+ GnRH) a las 48, 60 o 72 horas luego de retirar
el dispositivo con progesterona. De esta manera, a la vez se estaba comparando un proestro corto (IATF +
GnRH a las 48 h) vs. un proestro largo (IATF + GnRH a las 72 h). Los resultados fueron publicados con
mayor detalle en el International Congress on Animal Reproduction en Tours (Núñez-Olivera et al., 2016).
Para resumirlo, se utilizaron 911 vaquillonas taurinas, todas tratadas con el protocolo J-Synch con eCG al
retirar el dispositivo. Se realizaron tres réplicas para evaluar la tasa de preñez y en dos de ellas se determinó
además el diámetro del folículo ovulatorio al retirar el dispositivo y al inseminar. Los resultados se muestran
en la Figura 3.

Figura 3. Resultados al inseminar vaquillonas con diferente duración del proestro inducido con la IATF +
GnRH a las 48, 60 y 72 horas luego de retirar un dispositivo con progesterona (DIB) colocado por 6 días
(protocolo J-Synch).

94
 Memorias
Estos resultados muestran la conveniencia del proestro largo de 72 horas y no adelantar la IATF a
las 48 horas. En caso de inseminar todo un rodeo sin el uso de pintura para detectar el celo, se recomienda
realizar la IATF a las 72 horas luego de retirar el dispositivo.

Uso de pintura al retirar el dispositivo

Los resultados del experimento anterior indican que habría que realizar la IATF no antes de las 72
horas. Sin embargo, también muestran que a las 48 horas ya hay un alto porcentaje de vaquillonas en celo
y que a las 72 horas algunas de ellas ya han ovulado. Por este motivo, formulamos la hipótesis que sólo en
estas vaquillonas quizás convendría adelantar la IATF a las 60 horas. Para esto deberíamos dividir la
inseminación aplicándola antes solo en aquellas vaquillonas que entran en celo más temprano. Para evaluar
esto se realizó el siguiente experimento en 1.283 vaquillonas de razas taurinas. Luego de aplicar el protocolo
J-Synch en todo el rodeo, se utilizó pintura en la base de la cola al momento de retirar el dispositivo (junto
con la PGF2alfa y la eCG). La mitad de las vaquillonas recibieron la IATF + GnRH a las 60 horas y la otra
mitad a las 72 horas luego del retiro del dispositivo. En el momento de la IATF se registró mediante la
lectura de la pintura si cada vaquillona estaba o no en celo. El resultado en la tasa de preñez fue muy claro.
En las vaquillonas que estaban en celo a las 60 horas, la tasa de preñez fue similar cuando la IATF se realizó
a las 60 o a las 72 horas. Sin embargo, aquellas vaquillonas que no estaban en celo a las 60 horas, la tasa
de preñez fue más alta cuando se inseminaron a las 72 horas que cuando se inseminaron a las 60 horas de
retirado el dispositivo. Estos resultados muestran que adelantar la IATF en las vaquillonas en celo no tiene
ventajas en términos de tasa de preñez, pero nos permite aplicar esta estrategia en programas a gran escala
en rodeos grandes donde se puede comenzar a inseminar a las 60 horas aquellas hembras en celo, y dejar
para las 72 horas a las que no han entrado en celo. En las vaquillonas que no están en celo es conveniente
no adelantar la IATF manteniéndola en las 72 horas.

¿Es necesario utilizar GnRH?

En todos estos trabajos de campo hemos visto que la mayoría de las vaquillonas están en celo al
momento de la IATF (momento en que se administra GnRH). Considerando que en este protocolo no se
administra estradiol exógeno, podemos pensar que en este celo espontáneo las concentraciones de estradiol
endógeno deberían ser suficientes para inducir el pico preovulatorio de LH. Si esto ocurre, quizás no sería
necesario agregar un inductor de la ovulación de manera exógena como la inyección de GnRH que se
administra junto con la IATF. Para evaluarlo, en el siguiente experimento se utilizaron 1.879 vaquillonas
taurinas, aquellas que estaban en celo a las 60 horas recibieron la IATF en ese momento, y en la mitad se
administró una dosis de GnRH y en la otra mitad no se administró GnRH. El porcentaje de vaquillonas que
estaba en celo en este momento (60 horas) fue el 85% del rodeo (1.594/1879). Las vaquillonas que no
estaban en celo a las 60 horas (15% del rodeo) recibieron la IATF a las 72 horas, y en este caso todas
recibieron GnRH ya que la ausencia de estro indica la necesidad de administrar un inductor de la ovulación.
La tasa de preñez fue similar entre las vaquillonas en celo que recibieron o no la inyección de GnRH (56,4%,
452/802 vs. 58,6%, 464/792, respectivamente; P= NS). Se demuestra así que en aquellas hembras en celo,
no es necesario el uso de GnRH y podemos así disminuir el costo del protocolo. Teniendo en cuenta que en
este trabajo el 85% de las vaquillonas estaba en celo, el impacto en el menor costo del tratamiento es

95
 Memorias
considerable. Esta mejora la hemos incorporado en la aplicación de este protocolo en programas
comerciales.

¿Atrasamos la IATF en vaquillonas?

Considerando el resultado anterior que muestra que en aquellas vaquillonas que entran en celo
temprano se obtiene un tasa de preñez similar con la IATF a las 60 o 72 horas, y que aquellas que no están
en celo a las 60 horas no deben inseminarse antes de las 72 horas, en un siguiente experimento se evaluó
atrasar más la inseminación en estas vaquillonas que no entran en celo. Evaluamos entonces inseminar a
las 72 horas todas las vaquillonas en celo, y a las que no están en celo inseminarlas a las 72 o a las 80 horas.
Para esto se utilizaron 1.289 vaquillonas Angus de 14 meses en cuatro réplicas de las cuales el 47,4%
(611/1.289) estaba ciclando (presencia de cuerpo lúteo por ecografía al iniciar el protocolo). Todas
recibieron el mismo protocolo J-Synch que en los experimentos anteriores (Figura 1), utilizando
dispositivos intravaginales con 0,5 g de progesterona que se retiraron en la mañana del día 6 del tratamiento
junto con la administración de 300 UI de eCG y PGF2alfa. Todas las vaquillonas se pintaron en la grupa al
retirar el dispositivo y se leyó la pintura a las 72 horas del retiro. Las vaquillonas que estaban en celo se
inseminaron a las 72 horas (sin GnRH). Las vaquillonas que no estaban en celo fueron divididas en dos
grupos experimentales para recibir la IATF (con GnRH) a las 72 horas o a las 80 horas del retiro del
dispositivo (Día 9 del protocolo, en la mañana o en la tarde respectivamente). Los resultados se muestran
en la Figura 4.

96
 Memorias
Figura 4. Tasa de preñez en vaquillonas que recibieron el protocolo J-Synch con IATF a las

72 horas (vaquillonas en celo) o a las 72 u 80 horas (vaquillonas sin celo) del retiro del dispositivo

con progesterona. Para a vs. b, P< 0,05.

El 84% (1.082/1.289) de las vaquillonas estaba en celo a las 72 h, y la tasa de preñez de estos
animales con la IATF a las 72 horas fue 56,7% (614/1.082). En aquellas que no estaban en celo y se
inseminaron a las 72 u 80 horas, la tasa de preñez fue menor (P< 0,05), siendo 41,7% (43/103) y 31,7
(33/104) para cada grupo, respectivamente. Los resultados muestran que la tasa de preñez en aquellas
vaquillonas que no están en celo a las 72 horas, no se mejora atrasando la IATF a las 80 horas.

¿Adelantamos la GnRH?

En el siguiente experimento se profundizó en aquellas hembras que no entran en celo, y se evaluó

separar la GnRH de la IATF, adelantando la GnRH a las 64 horas y manteniendo la IATF a las 72 horas de
retirar el dispositivo. Se utilizaron 1.825 vaquillonas Angus en seis réplicas de las cuales el 47,8%
(873/1.825) estaba ciclando (presencia de cuerpo lúteo por ecografía al colocar el dispositivo). Todos los
animales recibieron el mismo protocolo que en el experimento anterior (J-Synch) retirando el dispositivo
en la tarde de día 6 junto con la administración de eCG y PGF2alfa. Se colocó pintura en la base de la cola
y se leyó la pintura a las 64 horas más tarde, habiendo 83% en celo (1.518/1.825). Todas estas vaquillonas
en celo recibieron la IATF en ese momento (sin GnRH). Aquellas que no estaban en celo a las 64 horas se
asignaron a dos grupos experimentales para recibir GnRH a las 64 horas (n= 150) o a las 72 horas (n= 157),
y todas se inseminaron a las 72 horas. En estas vaquillonas se volvió a leer la pintura a las 72 horas en el
momento de la IATF. La tasa de preñez en las vaquillonas en celo fue 61,3% (931/1.518), mientras que en
las que no entraron en celo y recibieron GnRH a las 64 horas o 72 horas fue 57,3% (86/150) y 52,9%
(83/157). Los resultados se muestran en la Figura 5.

97
 Memorias

Figura 5. Tasa de preñez en vaquillonas con J-Synch que no entraron en celo a las 64 horas y recibieron
GnRH a las 64 o a las 72 horas (con la IATF a las 72 horas). La gráfica de la izquierda muestra la tasa de
preñez mostrando estos tres grupos, y en la gráfica de la derecha se muestran las vaquillonas que entraron
en celo a las 72 horas. Para diferentes letras (a vs. b), P<0,05.

Considerando estos resultados en conjunto, el momento óptimo para la IATF en las vaquillonas en
celo puede ser a las 60-64 horas o a las 72 horas (sin GnRH). Para las vaquillonas que no entran en celo
con este protocolo, la IATF se debe realizar a las 72 horas (ni antes ni después) siempre con una dosis de
GnRH la que se puede administrar al momento de la IATF o adelantarla a las 60-64 horas.

J-Synch en vaquillonas cebú

Todos los resultados presentados previamente fueron generados en vaquillonas Bos taurus en
Uruguay y Argentina. En vaquillonas Bos indicus han sido reportados tres trabajos comparando la tasa de
preñez del protocolo J-Synch vs. el protocolo convencional, dos en Brasil y uno en Paraguay. Ambos
protocolos fueron aplicados como se describen en la Figura 1, siempre como eCG al retirar el dispositivo.
En uno de ellos no hubo diferencias significativas, y en los otros dos los resultados fueron superiores para
el protocolo J-Synch. Los resultados se muestran en la Tabla 2.

Tabla 2. Tasa de preñez obtenida con el protocolo J-Synch y el protocolo convencional en vaquillonas Bos
indicus.

J-Synch Convencional Valor P Referencia

Brasil (Nelore) 53% (207/391) 54% (211/394) NS Motta et al., SBTE 2016
Brasil (Nelore) 63% (68/108) 48% (64/133) P<0.01 Pincinato et al., SBTE 2018
Paraguay (Brangus) 63% (51/81) 51% (40/79) P<0.05 Frutos et al., 2018

98
 Memorias
J-Synch en vacas

La mayor parte de los experimentos con el protocolo J-Synch fueron realizados en vaquillonas y
existe poca información de su uso en vacas en anestro posparto. Para trabajar en estas condiciones, primero
realizamos una serie de estudios con IATF asociada al destete precoz utilizando el protocolo J-Synch. Las
preguntas a responder fueron: ¿a qué hora es conveniente realizar la IATF? ¿es necesario utilizar pintura?
y en caso de utilizar pintura ¿podría omitirse la administración de GnRH? Se realizó un experimento en 10
réplicas sobre un total de 1.900 vacas con 60 a 90 días posparto, donde todas las vacas fueron separadas
definitivamente de sus terneros entre uno a cinco días antes de iniciar el tratamiento para IATF. El protocolo
fue el mismo que el descrito para vaquillonas (Figura 1), utilizando un dispositivo de 0,5 g de progesterona
junto con una dosis de 2 mg de BE al Día 0 en la tarde, una dosis de PGF y eCG (400 UI en vacas) al Día
6 en la tarde al retirar el dispositivo, y la IATF al Día 9 durante todo el día (entre las 60 y 72 horas del retiro
del dispositivo). En este experimento como en los anteriores, todos los productos fueron elaborados por
Syntex, Argentina. Todas las vacas fueron pintadas en la base de la cola al retirar el dispositivo, y la pintura
fue chequeada 60 horas más tarde. La mitad de las vacas que manifestaron estro recibieron una IATF a las
60 h y la otra mitad a las 72 h, y a su vez la mitad de los animales en cada hora de IATF recibió GnRH y la
otra mitad no recibió ningún inductor de la ovulación. Las vacas que no manifestaron estro a las 60 horas,
también se dividieron en dos grupos para recibir la IATF a las 60 o a las 72 horas, pero en este caso siempre
con una dosis de GnRH junto con la inseminación. En este estudio, a las 60 horas luego de retirar el
dispositivo el 80% (1.515/1.900) de las vacas tenían la pintura borrada indicando que ya habían manifestado
estro; en estas vacas no hubo diferencia entre las que recibieron IATF a las 60 o las 72 horas (66,0%,
529/802 vs. 63,0%, 450/714, respectivamente). En estas vacas en celo tampoco hubo diferencias
significativas entre las que recibieron o no recibieron GnRH (66,0%, 499/756 vs. 63,0%, 479/760,
respectivamente). Por otra parte, en las que no presentaban celo a las 60 horas tampoco hubo diferencia en
la tasa de preñez cuando recibieron la IATF/GnRH a las 60 o a las 72 h (53,9%, 112/208 vs. 55,1%, 97/176,
respectivamente). La única diferencia encontrada en la tasa de preñez en este experimento, independiente
de la hora de IATF y de la administración o no de GnRH, fue entre las que habían manifestado estro (64,6%,
979/1.516) y las que no habían manifestado estro a las 60 horas (54,4%, 209/384). Estos resultados indican
que en vacas con destete precoz es posible aplicar el protocolo J-Synch y obtener resultados aceptables
(62,5% en este caso) y realizar la IATF entre las 60 y 72 horas con resultados similares entre ambos
momentos de inseminación. Asimismo, si se utiliza pintura al retirar el dispositivo es posible evitar el uso
de GnRH al momento de la IATF en aquellas vacas que manifestaron estro.

Si bien estos resultados fueron aceptables y durante varios años hemos utilizado este protocolo J-
Synch en vacas con destete precoz, no existían estudios que comparen ambos protocolos en vacas en anestro
con cría al pie. Para evaluar esto se hicieron dos experimentos en vacas en anestro y con cría al pie,
comparando el protocolo J-Synch y el protocolo convencional. El Experimento 1 se realizó en San Luis
(Argentina) con 973 vacas (72% en anestro) y el Experimento 2 se realizó en Rocha (Uruguay) con 1.183
vacas (87% en anestro). Las condiciones de manejo y alimentación en San Luis no son las más favorables
debido a factores ambientales y oferta forrajera, y en Uruguay si bien la oferta forrajera en general es mejor,
el porcentaje de anestro también era alto. De esta manera se pretendía comparar ambos tratamientos en
condiciones no tan favorables, tal como ocurre en muchos casos donde se aplican los programas de IATF.

99
 Memorias
En el Experimento 1 en Argentina (Huguenine et al., no publicado) las vacas con el protocolo
convencional recibieron la IATF a las 48 o 56 horas de retirar el dispositivo, y con el protocolo J-Synch a
las 64 o 72 horas de retirar el dispositivo. En el protocolo convencional todas las vacas en celo a las 48
horas (detectado por el uso de pintura) recibieron la IATF en ese momento, y las que no estaban en celo
recibieron GnRH en la mañana y fueron inseminadas en la tarde a las 56 horas. En el protocolo J-Synch las
vacas despintadas (en celo) a las 64 horas recibieron la IATF en ese momento, y las que no estaban en celo
recibieron GnRH a las 64 horas y la IATF en la tarde a las 72 horas. El resultado en la tasa de preñez fue
más bajo con el protocolo J-Synch (49,1%, 244/497) que con el protocolo convencional (59,9%, 287/479,
P< 0,05). El porcentaje de vacas en celo en el protocolo J-Synch fue 50,5% (251/497) a las 64 horas y en
el protocolo convencional fue 55,1% (264/479) a las 48 horas (P= 0,15). Tanto para el protocolo J-Synch
como para el convencional, las vacas que presentaron celo se preñaron más (57,8%, 145/251 y 67,8%,
179/264, respectivamente; P< 0,05) que las que no estaban en celo (40,3%, 99/246 y 50,2%, 108/215,
respectivamente; P< 0,05).

Considerando este resultado, es probable que en vacas con cría que reciben el protocolo J-Synch (con
GnRH a las 64 horas) sea necesario prolongar aún más el proestro y atrasar la inseminación. Sobre todo
considerando que la mitad del rodeo no estaba en celo cuando se realizó la IATF a las 64 horas (50% en
celo). Por este motivo, en el Experimento 2 atrasamos la IATF en el protocolo J-Synch y la mitad de las
vacas fueron inseminadas a las 72 horas y la otra mitad a las 84 horas luego de retirar el dispositivo. En este
experimento, para ambos momentos de IATF se inseminaron vacas en celo y vacas sin celo (mediante el
chequeo de la pintura al momento de inseminar). Por su parte, el protocolo convencional recibió la IATF a
las 48 o a las 56 horas, también con vacas pintadas o despintadas en ambos momentos de IATF. Es decir
que la pintura fue registrada solo para saber cuales vacas estaban en celo en cada momento de IATF. Los
resultados se muestran en la Figura 6.

Figura 6. Tasa de preñez en vacas con cría al pie comparando el protocolo J-Synch con el protocolo
convencional para IATF. Para identificar a las vacas en celo se utilizó pintura en la base de la cola que fue
chequeada al momento de la IATF.

100
 Memorias
Considerando estos resultados, el protocolo J-Synch permitió una tasa de preñez similar al protocolo
convencional solo cuando se aplicó un esquema de IATF a las 72 horas a las vacas en celo (64% de preñez)
seguido de IATF a las 80 horas a las vacas que no estaban en celo (36% de preñez). Si comparamos la tasa
de preñez obtenida con este protocolo (en promedio 57,3%, 169/295) con la tasa de preñez en el protocolo
convencional (en celo: IATF 48 h; no celo: IATF 56 h; en promedio 59,9% de preñez, 148/247), los
resultados fueron similares (P= NS). En conclusión, el esquema con J-Synch donde las vacas en celo
reciben IATF a las 72 h y las sin celo reciben la IATF a las 80 h (con GnRH), sería el más recomendable.
Sin embargo, este nuevo protocolo aún no ha superado el resultado del protocolo convencional en vacas
con cría (como sí se logró en vaquillonas).

En otro nuevo experimento realizado más recientemente, se comparó la dinámica folicular y el

momento de la ovulación con ambos protocolos aplicados en vacas con cría al pie y en anestro (Huguenine
et al., resultados preliminares). Ambos protocolos se aplicaron de la misma manera que en el experimento
anterior. Las vacas que recibieron el protocolo convencional (n= 19) ovularon en promedio a las 77,3 ± 2,9
horas del retiro del dispositivo, coincidiendo con trabajos previos para este protocolo. Las que recibieron
el protocolo J-Synch (n= 16) ovularon a las 104,8 ± 3,2 horas (P< 0,05). Esto demuestra que en vacas –tal
como había sido demostrado en vaquillonas- el protocolo J-Synch prolonga el proestro. Sin embargo, un
resultado interesante es que la ovulación ocurrió unas 11 horas más tarde que cuando este protocolo fue
evaluado en vaquillonas (93,7 ± 12,9 horas en vaquillonas; de la Mata et al., 2018). Esto confirma aún más
la necesidad de atrasar la inseminación en vacas en relación a las vaquillonas. De acuerdo con toda esta
información en conjunto, para vacas con cría en anestro mantendríamos el esquema indicado anteriormente:
vacas en celo: IATF 72 horas; vacas sin celo: IATF 80 horas.

Referencias

Binelli, M., Pugliesi, G., de Oliveira Santana Batista, E., Martins, T., Lopes, E., Sponchiado, M., Gonella-
Diaza, A., Oliveira, M., Rodrigues França, M., de Oliveira Cardoso, B., Piffero Mello, B., Souza
Gomes, N., Latorraca, L., Cuellar Cuadros, F., 2017. Programação da receptividade uterina e
fertilidade em vacas de corte. Rev. Bras. Reprod. Anim. Belo Horiz. 41, 121–129.
https://doi.org/XX6B5WFT80K8P9A2 [pii]\n10.1098/rstb.2005.1620
Bó, G.A., Cutaia, L., Peres, L.C., Pincinato, D., Maraña, D., Baruselli, P.S. 2007. Technologies for fixed-
time artificial insemination and their influence on reproductive performance of Bos indicus cattle.
Society of Reproduction and Fertility supplement 64: 223-236
Bó, G.A., de la Mata, J.J., Baruselli, P.S., Menchaca, A., 2016. Alternative programs for synchronizing
and resynchronizing ovulation in beef cattle. Theriogenology 86, 388–396.
https://doi.org/10.1016/j.theriogenology.2016.04.053
Bó, G.A., Huguenine, E., De La Mata, J.J., Núñez-Olivera, R., Baruselli, P.S., Menchaca, A., 2018.
Programs for fixed-time artificial insemination in South American beef cattle.
https://doi.org/10.21451/1984-3143-AR2018-0025
Bridges, G.A., Helser, L.A., Grum, D.E., Mussard, M.L., Gasser, C.L., Day, M.L., 2008. Decreasing the
interval between GnRH and PGF2αfrom 7 to 5 days and lengthening proestrus increases timed-AI

101
 Memorias
pregnancy rates in beef cows. Theriogenology 69, 843–851.
https://doi.org/10.1016/j.theriogenology.2007.12.011
Bridges, G.A., Mussard, M.L., Burke, C.R., Day, M.L., 2010. Influence of the length of proestrus on
fertility and endocrine function in female cattle. Anim. Reprod. Sci. 117, 208–215.
https://doi.org/10.1016/j.anireprosci.2009.05.002
Bridges GA, Mussard ML, Hesler LA, Day ML. Comparison of follicular dynamics and hormone
concentrations between the 7-day and 5-day CO-Synch þ CIDR program in primiparous beef cows.
Theriogenology 2014;81:632–8.
Day ML. State of the art of GnRH-based timed AI in beef cattle. Anim Reprod 2015;12:473–8.
de la Mata JJ, Bó GA. Estrus synchronization and ovulation using protocols with estradiol benzoate and
GnRH and reduced periods of insertion of a progesterone releasing device in beef heifers. Taurus
2012;55:17–23.
de la Mata JJ, Menchaca A, Bó GA. Treatment with estradiol and progesterone that pronged the proestrus.
In: Caccia M, Bó GA, editors. Proceedings XI International Symposium on Animal Reproduction.
Córdoba, Argentina: Institute of Animal Reproduction Cordoba (IRAC); 2015. p. 143–58.
de La Mata, J.J., Núñez-Olivera, R., Cuadro, F., Bosolasco, D., De Brun, V., Meikle, A., Bó, G.A.,
Menchaca, A., 2018. Effects of extending the length of pro-oestrus in an oestradiol- and
progesterone-based oestrus synchronisation program on ovarian function, uterine environment and
pregnancy establishment in beef heifers. Reprod. Fertil. Dev. 30, 1541–1552.
https://doi.org/10.1071/RD17473
Madsen CA, Perry GA, Mogck CL, Daly RF, MAcNeil MD, Geary TW. Effects of preovulatory estradiol
on embryo survival and pregnancy establishment in beef cows. Anim Reprod Sci 2015;158:96–103.
Menchaca A, Núñez-Olivera R, Wijma R, García-Pintos C, Fabini F, de Castro T. Como mejorar la
fertilidad de los tratamientos de IATF en vacas Bos taurus. 2013. 10º Simposio Internacional de
Reproducción Animal, Córdoba, Argentina. pp;103-133.
Menchaca A, Núñez-Olivera R, García-Pintos C, Cuadro F, Bosolasco D, Fabini F, Dutra S, de la Mata J,
Bó GA. Efecto de la prolongación del proestro en la fertilidad de los programas de IATF. 2017. 12º
Simposio Internacional de Reproducción Animal, Córdoba, Argentina. pp;191-216.
Motta JCL, Colli MHA, Penteado L, Bayeux BM, Mingoti RD, Bó GA, Lugo LC, Rezende RG, Baruselli
PS. 2016. Pregnancy rate to FTAI in Nelore and crossbreed heifers submitted to J-Synch protocol (6
days). Anim Reprod, 13:401. (Abstract).
Núñez-Olivera, R., de Castro, T., García-Pintos, C., Bó, G., Piaggio, J., Menchaca, A., 2014. Ovulatory
response and luteal function after eCG administration at the end of a progesterone and estradiol’
based treatment in postpartum anestrous beef cattle. Anim. Reprod. Sci. 146, 111–116.
https://doi.org/10.1016/j.anireprosci.2014.02.017
Núñez-Olivera R, Bó GA, Menchaca A. 2016. Association between proestrus length, preovulatory follicular
diameter, estrus behavior and pregnancy rate in progesterone-estradiol based treatment J-Synch for
FTAI in Bos taurus beef heifers. Proceedings 18th International Congress on Animal Reproduction
(ICAR). Tours, France: Elsevier. pp. 477. (Abstract).

102
 Memorias
Núñez-Olivera, R., de Castro, T., Bó, G., Piaggio, J., Menchaca, A., 2018. Equine chorionic gonadotropin
administration after insemination affects luteal function and pregnancy establishment in postpartum
anestrous beef cows. Domest. Anim. Endocrin. 62, 24-31.
http://dx.doi.org/10.1016/j.domaniend.2017.08.003

Whittier WD, Currin JF, Schramm H, Holland S, Kasimanickam RK. 2013. Fertility in Angus cross beef
cows following 5-day CO-Synch + CIDR or 7-day CO-Synch + CIDR estrus synchronization and
timed artificial insemination. Theriogenology, 80:963-969.

103
Memorias

104
Memorias

105
 Memorias
Programas de IATF de alta fertilidad con semen sexado.

G.A. Bó 12, E. Huguenine3, J.J. de la Mata 4, R.L.S. de Carneiro5y A. Menchaca6

1
Instituto de Reproducción Animal Córdoba (IRAC), Zona Rural, General Paz (5145), Córdoba,
Argentina.
2
Instituto A.P. de Ciencias Básicas y Aplicadas, Medicina Veterinaria, Universidad Nacional de
Villa María, Villa del Rosario, Córdoba, Argentina.
3
Actividad Privada, SAV, San Luis, Argentina
4
Actividad Privada y Facultad de Ciencias Agrarias, Universidad Nacional de La Pampa,
Argentina
5
ST Genetics Argentina, Carmen de Areco, Argentina
6
Fundación IRAUy, Instituto de Reproducción Animal Uruguay, Montevideo, Uruguay.
e-mail: gabrielbo62@gmail.com

Abstract
Durante años, los investigadores vienen buscando manipular el sexo antes de la
concepción. Si bien la utilización de semen sexado mantuvo gran interés en los últimos 20 años
para inseminar vaquillonas de leche, el uso masivo del semen sexado se vio de alguna manera
limitado debido a que la fertilidad estaba comprometida y no se podía solucionar aumentando el
número de espermatozoides por dosis inseminante. Sin embargo, se han desarrollado
recientemente nuevos procedimientos simplificados y menos traumáticos para los
espermatozoides que han permitido mejorar significativamente las tasas de preñez obtenidas con
semen sexado. Sin embargo, para la utilización masiva de esta tecnología es necesario el desarrollo
de programas de Inseminación Artificial a tiempo fijo (IATF) para semen sexado. Por lo tanto se
realizó una serie de experimentos en vaquillonas en vacas con cría al pie. En todos los casos los
animales fueron sincronizados con la ayuda de pintura en la base de la cola para detectar la
presentación de celos y optimizar los horarios de IATF. Si bien las tasas de preñez fueron en
general mayores para semen convencional que para semen sexado, las tasas de preñez con semen
sexado fueron del 45 al 50%. Por lo tanto, los resultados de los experimentos realizados
demuestran que se pueden adaptar protocolos de IATF para la utilización de semen sexado y de
esta manera posibilitar el uso masivo de esta tecnología.
Introducción
En los últimos 20 años se han realizado progresos significativos en la mejor comprensión
de los patrones del crecimiento de los folículos ováricos bovinos y como se puede sincronizar su
crecimiento y ovulación (Bó et al., 2013). En la actualidad existe una amplia gama de tratamientos
de Inseminación Artificial a Tiempo Fijo (IATF) disponibles para ser utilizados tanto en rodeos
de carne como de leche (Bó et al., 2013). Básicamente los programas de IATF utilizados en la
actualidad se agrupan según el tipo de hormona utilizada. Los protocolos denominados “OvSynch”
(Pursley et al., 1995) y “Co-Synch” (Geary et al., 2001) utilizan análogos de la hormona liberadora

106
 Memorias
de gonadotrofinas (GnRH) y prostaglandinas (PGF) para la sincronización de la ovulación.
También los tratamientos “Co-Synch” han sido utilizados junto a la inserción de un dispositivo
con progesterona (Lamb et al., 2001; Martínez et al., 2002) resultando en mejores tasas de preñez
en vacas y vaquillonas para carne. Por otro lado, están los protocolos que emplean benzoato de
estradiol (EB; Bó et al., 2002) y dispositivos con P4, que son los más utilizados en Argentina (Bó
et al., 2013). En los últimos años, este último tratamiento se vio simplificado debido a la aplicación
de cipionato de estradiol (ECP) como inductor de ovulación (Colazo et al., 2003), logrando
alcanzar aceptables tasas de preñez en vacas de carne (Bó et al., 2013; Uslenghi et al., 2014). Sin
embargo, se han reportado recientemente que las tasas de preñez se podrían incrementar si se
disminuye el período de crecimiento del folículo dominante ovulatorio y se prolonga la duración
del proestro (Bridges et al., 2008, 2012, Colazo y Ambrose, 2011, Bó et al., 2016).
Recientemente se ha desarrollado un nuevo tratamiento utilizando un protocolo basado en
EB y un dispositivo con progesterona (que son las hormonas más usadas en Argentina) pero donde
la remoción del dispositivo fue realizada 6 días después (en lugar de 8) y se prolongó el proestro
administrando GnRH como inductor de la ovulación a las 72 h de retirar el dispositivo en lugar de
ECP al retiro. Este protocolo fue denominado J-Synch (de la Mata y Bó, 2012). En trabajos
posteriores se encontró que las tasas de preñez a la IATF tendieron a ser mayores con el protocolo
J-Synch que con el protocolo convencional utilizado en Argentina en vaquillonas Holstein (Ré et
al., 2014; 2015) y significativamente mayores en vaquillonas de carne y receptoras de embriones
(Bó et al., 2016, Menchaca et al., 2016). Este protocolo promueve modificaciones durante el
proestro y define un perfil endocrino preovulatorio que está positivamente asociado con un CL
más competente y una mejora del medioambiente uterino (de la Mata et al., 2018). La mayor
preñez obtenida con el protocolo J-Synch en vaquillonas sugiere que podría ser una alternativa
interesante para aplicar en programas de IATF con semen sexado.
Uso de Semen Sexado en Programas de Inseminación Artificial
Durante años, los investigadores vienen buscando manipular el sexo antes de la concepción
(Garner y Seidel, 2008). Esta determinación del sexo en rodeos de carne y leche puede ser uno de
los factores determinantes para mejorar el desempeño productivo y económico de la actividad. Por
ejemplo, en los tambos el ternero macho tiene poco o ningún valor zootécnico. Sin embargo, en
los establecimientos de carne el ternero macho es el sexo de interés debido a un mayor potencial
de producción. Teniendo en cuenta esas particularidades, se han realizado muchas investigaciones
con el objetivo de predecir y/o manipular la proporción del sexo de los terneros. La separación de
los espermatozoides Y de los espermatozoides X es posible debido a las diferencias en el contenido
del ADN de esas células espermáticas (espermatozoide X posee cerca del 4% más ADN que el
espermatozoide Y), siendo realizada por citometría de flujo. Esta biotécnica asocia la emisión de
rayos láser, la coloración diferencial (usando el fluorocromo Hoechst 33342) de los
espermatozoides y las fuerzas hidrodinámicas que dirigen el espermatozoide en el momento de la
lectura durante el proceso de separación de los espermatozoides con cromosomas X e Y (Beltsville
Sperm Sexing Technology).

107
 Memorias
Si bien la utilización de semen sexado mantuvo gran interés en los últimos 20 años para
inseminar vaquillonas de leche, el uso masivo del semen sexado se vio de alguna manera limitado
debido a que la fertilidad estaba comprometida y no se podía solucionar aumentando el número de
espermatozoides por dosis inseminante (DeJarnette et al., 2011). Los factores que afectan las tasas
de concepción con semen sexado a la inseminación artificial (IA) dependen del toro (fertilidad
intrínseca), procesamiento del semen, cantidad de espermatozoides, momento de la IA y del
historial reproductivo de la vaca. Estos factores se ven afectados a su vez por potenciales
“estresores” durante el proceso de separación espermática como la adición del fluorocromo
Hoechst 33342, exposición a luz ultravioleta, incubación a altas temperaturas, cambios de presión,
campos electrostáticos, estrés oxidativo, además del proceso de congelación de semen (de Graaf
et al., 2014). Sin embargo, se ha desarrollado recientemente un nuevo procedimiento simplificado
y menos traumático para los espermatozoides sexados denominado SexedULTRA, donde
inclusive se ha planteado la opción de aumentar el número de espermatozoides por pajuela de 2.1
millones como se utilizaba con el semen XY a 4 millones de espermatozoides con el SexedULTRA
(Vishwanath, 2015). Esta nueva tecnología consta de nuevos métodos para la manipulación y
procesado antes de la separación espermática, fundamentalmente cambios en la composición de
los medios utilizados en los estadios del proceso de separación, promoviendo un ambiente más
inocuo que evita cambios de pH y temperatura, respetando la integridad de los espermatozoides
(de Graaf et al., 2014). Estudios recientes reportaron que el proceso SexedULTRA resulta en una
mayor viabilidad e integridad de los espermatozoides pos descongelado (Gonzales-Marín et al.,
2017), resultando en una mayor producción de embriones in vitro en comparación con el método
más antiguo (llamado XY o Legacy; González-Marín et al., 2018). Es indudable que, para la
utilización efectiva de esta tecnología, tanto en rodeos lecheros como de carne se deberían
desarrollar protocolos de IATF para semen sexado (Kasimanickam, 2015). En un experimento
preliminar realizado por nuestro grupo (Ré et al., no publicado) se utilizaron 200 vaquillonas que
fueron tratadas con el protocolo J-Synch con un dispositivo de 0,5 g de progesterona (SynkroXY,
Proagro, Argentina) e inseminadas a las 72 h de la remoción del dispositivo. En este caso las
vaquillonas fueron pintadas en la base de la cola y las despintadas fueron IATF a las 72 h, mientras
que las pintadas fueron IA 12 h después que se despintaran en los próximos dos días. De las 100
vaquillonas con semen convencional se inseminaron todas a las 72 h y se preñó el 56%. De las IA
con semen sexado 72 vaquillonas fueron IA a las 72 h y se preñaron el 51%, 16 vaquillonas fueron
IA a las 96 h y se preñaron el 69% y otras 8 vaquillonas fueron IA a las 120 h y se preñaron el
38%, 5 quedaron sin inseminar. La preñez general no fue diferente entre los grupos (56% para el
semen convencional vs 53% para las con semen sexado; P>0,2).
Objetivo General
El objetivo general de este resumen es presentar resultados de experimentos realizados
recientemente utilizando el protocolo J-Synch en vacas y vaquillonas inseminadas con semen
sexado. El objetivo secundario fue evaluar la tasa de preñez de distintos toros utilizando semen
convencional y SexedULTRA en programas de IATF. Por último, se presentarán resultados
preliminares de un semen sexado con un 65% de sexo elegido, a diferencia del 90% que tiene el
SexedULTRA y con una mayor concentracion de espermatozoides para ser utilizado en vacas de
carne con cría al pie.

108
 Memorias
Experimentos en vaquillonas para carne
Experimento 1
Se utilizaron 357 vaquillonas Angus que fueron tratadas con el protocolo J-Synch. En el
Día 0 recibieron un dispositivo intravaginal (DIB 0,5, Zoetis, Argentina) y 2 mg de EB (Gonadiol,
Zoetis) por vía i.m., 500 µg de cloprostenol (PGF, Ciclase, Zoetis) en el día de la remoción del
dispositivo (Día 6) y se pintó en la base de la cola con pintura como método visual en la detección
de celo. Las vaquillonas que manifestaron celo a las 72 h post remoción del dispositivo (pintura
alterada), fueron divididas en dos subgrupos al azar para ser IATF con semen sexado hembra
(SexedULTRA de 4 millones de espermatozoides) o con semen convencional no sexado
(Convencional). Las vaquillonas que no manifestaron celo a las 72 h (pintura sin alterar) recibieron
100 µg de acetato de gonadorelina (GnRH, Gonasyn gdr, Zoetis) en ese momento y fueron IATF
a las 84 h post remoción del dispositivo con semen sexado o con semen convencional. El semen
sexado y convencional provenía de un mismo toro y del mismo eyaculado y fue provisto por la
Empresa Sexing Technologies de Argentina. Los diagnósticos de gestación se llevaron a cabo 30
días post IATF mediante ultrasonografía (Honda HS 101 v, Japón). Los resultados se encuentran
indicados en la Tabla 1. Hubo un 57,7% (206/357) de vaquillonas en celo a las 72 h y una tasa de
preñez general del 53,8%. Las tasas de preñez fueron mayores (P<0,01) para semen convencional
que para semen sexado. A su vez las vaquillonas que mostraron celo tuvieron una mayor (P<0,01)
tasa de preñez que las que no mostraron celo.
Tabla 1. Tasas de preñez en vaquillonas Angus inseminadas con semen sexado SexedULTRA de
4 millones de espermatozoides o convencional de acuerdo a la expresión o no de celo (lectura de
pintura) a las 72 h de la remoción del dispositivo con progesterona.
Celo 72 h Sin Celo a las 72 h
n IATF 72 h IATF 84 h Total
SexedULTRA 58/106 24/74 82/180
(4 millones) 180 (54,7%) a* (32,4%) a** (45,5%) a
Convencional 70/100 40/76 110/176
(25 millones) 177 (70,0%) b* (52,6%) b** (62,5%) b
ab
los porcentajes entre semen sexado y convencional difieren (P<0,01)
** los porcentajes entre horarios de IATF difieren (P<0,01)

Experimento 2
En el experimento 2 se utilizaron 850 vaquillonas Angus y Angus cruza Simmental que
fueron tratadas con el protocolo J-Synch como en el Experimento 1, excepto que todas las
vaquillonas recibieron 300 IU de eCG (Novormón 5000, Zoetis) en el momento de la remoción
del dispositivo. En este experimento se detectó celo con pintura como en el experimento anterior
pero en este caso la lectura de la pintura se realizó a las 60 y 72 h de la remoción del dispositivo.
Las vaquillonas con la pintura alterada fueron divididas en dos subgrupos para ser IATF con semen
sexado (SexedULTRA de 4 millones de espermatozoides) o con semen convencional. Las
vaquillonas que no manifestaron celo a las 72 h (pintura sin alterar) recibieron GnRH en ese
momento y fueron IATF a las 84 h post remoción del dispositivo con semen sexado o con semen

109
 Memorias
convencional. El semen sexado y convencional provino de 4 toros Angus y fue provisto por la
Empresa Sexing Technologies de Argentina. Los diagnósticos de gestación se llevaron a cabo 30
días post IATF mediante ultrasonografía.
En el Experimento 2 hubo un mayor (P<0,01) porcentaje de vaquillonas en celo a las 60 y
72 h (72,7%) que en el Experimento 1 y una tasa de preñez general del 54%. En este caso hubo
efectos significativos de establecimiento (P<0,01), toros (P<0,02) y tipo de semen (P<0,01) en las
tasas de preñez. También hubo un efecto significativo del horario del celo (P<0,01) pero no hubo
interacción entre tipo de semen y horario del celo (P>0,5). Los resultados están indicados en las
Tablas 2, 3 y 4.
Tabla 2. Tasas de preñez en vaquillonas Angus inseminadas con semen sexado o convencional de
acuerdo a la expresión o no de celo (lectura de pintura) a las 60 o 72 h de la remoción del
dispositivo con progesterona.
N Celo 60 h Celo 72 h Sin celo a las Total
IATF 72 h IATF 72 h 60 o 72 h
IATF 84 h
SexedULTRA 426 104/176 61/134 45/116 210/426
(4 millones) (59,0%)c (45,5%)d (38,8%)e (49,3%)a

Convencional 424 119/172 79/136 49/116 247/424

(25 millones) (69,2%)cd (58,0%)e (42,2%)e (58,3%)b
Total 850 223/348 140/270 94/232
(64,0%)f (51,9%)g (40,5%)g
ab
los porcentajes difieren entre semen sexado y convencional (P<0,01).
cde
los porcentajes difieren entre horarios de celo y entre semen sexado y convencional (P<0,05).
fg
los porcentajes difieren entre los horarios de celo (P<0,01).

Tabla 3. Tasas de preñez en vaquillonas Angus inseminadas con semen sexado o convencional.
Efecto del toro sobre las tasas de preñez.
n Toro 1 Toro 2 Toro 3 Toro 4
SexedULTRA 426 65/123 50/97 73/123 22/83
(4 millones) (52.8%) (51.5%) (59.3%) (26.5%)

Convencional 424 75/123 56/96 82/121 34/84

(25 millones) (61.0%) (58.3%) (67.8%) (40.5%)
TOTAL 850 140/246 106/193 155/244 56/167
(56.9%)b (54.9%)b (63.5%)b (33.5%)a
ab
Los porcentajes totales de preñez difieren entre toros (P<0,02).

Tabla 4. Tasas de preñez en vaquillonas Angus inseminadas con semen sexado o convencional.
Efecto Establecimiento sobre las tasas de preñez.

110
 Memorias
n SexedULTRA Convencional Total
(4 millones) (25 millones)
Establecimiento 1 244 73/123 82/121 155/244a
(59,3%) (67,8%) (63,5%)
Establecimiento 2 128 18/63 22/65 40/128
(28,5%) (33,8%) (31,2%)c
Establecimiento 3 97 26/50 22/47 48/97
(52,0%) (46,8%) (49,5%)b
Establecimiento 4 96 29/47 34/49 63/96
(61,7%) (69,4%) (65,6%)a
Establecimiento 5 181 46/91 61/90 107/181
(50,5%) (67,7%) (59,1%)a
Establecimiento 6 104 18/52 26/52 44/104
(34,6%) (50.0%) (42,3%)b
abc
Los porcentajes totales de preñez difieren entre establecimientos (P<0,02).
Experimento 3
El objetivo del Experimento 3 fue determinar el mejor momento del IATF con semen
sexado en vaquillonas, sobre todo en las que muestran celo a las 72 h de la remoción del
dispositivo. Se utilizaron 783 vaquillonas Angus (253 en el 2017/18 y 530 en el 2018/19) que
fueron tratadas con el protocolo J-Synch. En el Día 0 recibieron un DIB 0,5 y 2 mg de BE; PGF
300 UI de eCG en el día de la remoción del dispositivo (Día 6) y se pintaron en la base de la cola
como método visual de detección de celo, que fue observado a las 60, 72 y 84 h. Las vaquillonas
que manifestaron celo a las 60 h (pintura borrada >50%), fueron IATF a las 72 h post remoción
del dispositivo. Las que a las 72 h estaban despintadas, fueron divididas al azar para ser IATF a
las 72 h o a las 84 h. Las vaquillonas que no manifestaron estro a las 72 h (pintura sin alterar)
recibieron GnRH en ese momento y fueron IATF a las 84 h. Los diagnósticos de gestación se
llevaron a cabo 30 días post IATF mediante ultrasonografía.
Para el análisis estadístico se tuvo en cuenta las que entraron en celo a las 60 h y fueron
IATF a las 72 h, las que estaban en celo a las 72 h y fueron IATF a las 72 h u 84 h y las que no
estaban en celo a las 72 h y recibieron GnRH y fueron IATF a las 84 h. Los diagnósticos de
gestación se llevaron a cabo 30 días post IATF mediante ultrasonografía.
El porcentaje de vaquillonas en celo a las 60 y 72 h fue de 76,6%, con una tasa de preñez
general de 50% en el 2017/18 y de 53% en el 2018/2019 (P>0.4). Por lo tanto, se combinaron los
datos de las dos temporadas para realizar el análisis estadístico. En este caso no hubo efectos
significativos de establecimiento (P>0,4), de toros (P>0,7), del horario del celo (P>0,7) y del
horario de IATF (P>0,8) sobre la tasa de preñez. Los resultados están indicados en las Tablas 5, 6
y 7.
Tabla 5. Tasas de preñez en vaquillonas Angus inseminadas con semen sexado de acuerdo a la
expresión o no de celo (lectura de pintura) a las 60, 72 o 84 h de la remoción del dispositivo con
progesterona.

111
 Memorias
Celo 60 h Celo 72 h Celo 72 h No Celo Total
IATF 72 h IATF 72 h IATF 84 h IATF 84 h
SexedULTRA® 104/176 51/94 39/103 130/249 405/783
(4 millones) (49,0%) (54,3%) (57,3%) (52,2%) (51,7%)a

Tabla 6. Tasas de preñez en vaquillonas Angus inseminadas con semen sexado. Efecto del toro
sobre las tasas de preñez.

n Toro 1 Toro 2 Toro 3

SexedULTRA® 783 238/457 48/110 119/216
(4 millones) (52.1%) (43.6%) (55.1%)
Los porcentajes totales de preñez no difieren entre toros (P>0,7).
Tabla 7. Tasas de preñez en vaquillonas Angus inseminadas con semen sexado. Efecto
Establecimiento sobre las tasas de preñez.

n SexedULTRA®
(4 millones)
Establecimiento 1 293 157/293
(53,6%)
Establecimiento 2 120 51/120
(42,5%)
Establecimiento 3 93 44/93
(47,3%)
Establecimiento 4 75 37/75
(49,3%)
Establecimiento 5 96 52/96
(56,3%)
Establecimiento 6 106 64/106
(60,4%)
Los porcentajes totales de preñez no difieren entre establecimientos (P>0,4).
Los resultados de este último experimento confirman los de las temporadas anteriores, que se
pueden obtener tasas de preñez de alrededor del 50% en vaquillonas de carne inseminadas con
semen sexado. Además, de acuerdo a los resultados de este experimento y los anteriores, la
recomendación de inseminación con el protocolo J-Synch seria inseminar todos los animales en
celo (con la pintura borrada >50%) a las 72 h y los que no tienen la pintura borrada en ese momento
deben recibir GnRH a las 72 h y ser inseminadas con semen sexado o convencional a las 84 h.

Experimentos en vacas de Carne con cría al pie.

Experimento 4

112
 Memorias
En este experimento se utilizaron un total de 877 vacas con cría al pie en cuatro
establecimientos ganaderos de San Luis y La Pampa. Las vacas tenían 45 a 90 días posparto, una
condición corporal de entre 3 a 3,5 y con un CL o Folículos >8 mm de diámetro y fueron tratadas
con el protocolo J-Synch con 400 IU eCG. En este experimento se detectó celo con pintura como
en el Experimento 2 y las vacas fueron divididas en dos subgrupos para ser IATF con semen
SexedULTRA o convencional de 5 toros (3 de los cuales ya habían sido utilizado en los
experimentos de vaquillonas). Los diagnósticos de gestación se llevaron a cabo 30 días post IATF
mediante ultrasonografía. En este experimento el porcentaje de vacas en celo a las 60 y 72 h fue
del 71,3% y la tasa general de preñez fue del 57%. En este caso hubo una diferencia de tipo de
semen, momento de celo (P<0,01) y el toro utilizado (P<0,05). No hubo interacciones y tampoco
hubo diferencias entre los cuatro establecimientos donde se realizó el experimento (Rango 52 a
59%). Los resultados de preñez para los distintos horarios de celo e IATF están indicados en la
Tabla 8 y para cada toro utilizado en la Tabla 9.
Tabla 8. Tasas de preñez en Angus con cría al pie inseminadas con semen sexado o convencional
de acuerdo a la expresión o no de celo (lectura de pintura) a las 60 o 72 h de la remoción del
dispositivo con progesterona.
N Celo 60h Celo 72h Celo 84h No Celo Total
IATF 72h IATF 72h IATF 84h IATF 84h
SexedULTRA 435 93/228 34/79 20/29 50/104 197/435
(4 millones) (40,8%)d (43,0%)d (70,6%)c (48,1%)d (45,3%)a

Convencional 442 154/234 57/84 20/24 69/95 303/442

(25 millones) (65,8%)c (67,9%)c (83,3%)c (72,6%)c (68,6%)b
Total 877 247/462 91/163 40/53 119/199
(53,5%)f (55,8%)f (75,5%)g (59,8%)f
ab
los porcentajes difieren entre semen sexado y convencional (P<0,01).
cd
los porcentajes difieren entre horarios de celo y entre semen sexado y convencional (P<0,05).
fg
los porcentajes difieren entre los horarios de celo (P<0,01).

Tabla 9. Tasas de preñez en vacas Angus con cría al pie inseminadas con semen sexado o
convencional. Efecto del toro sobre las tasas de preñez.
n Toro 1 Toro 2 Toro 3 Toro 4 Toro 5
SexedULTRA 435 26/47 66/153 95/197 3/7 8/31
(4 millones) (55,3%) (43,1%) (48,2%) (43%) (25,8%)

Convencional 442 27/42 113/153 142/208 5/7 17/32

(25 millones) (64,3%) (73,9%) (68,3%) (71,4%) (53,1%)
TOTAL 877 53/89 179/306 237/405 8/14 25/63
(59,6%)a (62,3%)a (58,5%)a (57,1%)a (39,6%)b
ab
Los porcentajes totales de preñez tienden a diferir entre toros (P<0,08).

113
 Memorias
Experimento 5
El objetivo de este experimento fue evaluar las tasas de preñez y proporción de machos y
hembras en vacas de carne con cría al pie IATF con semen convencional (no sexado, 25 millones
de espermatozoides por dosis) y en este caso en lugar de usar semen SexedULTRA de 4 millones
y con un 90% de exactitud en el sexado, se utilizó con semen sexado con el mismo procedimiento
que el sexedULTRA pero con un distintas proporciones de espermatozoides X e Y (65% de
hembras) pero con una mayor concentración espermática por pajuela. La idea de este semen es
poder utilizarlo más masivamente en rodeos comerciales de vacas de carne y darles la opción a los
productores de alterar el porcentaje de terneros producidos de acuerdo a sus necesidades, o sea
tener más terneros machos para engordar o más terneras hembras para crecer en el número de
vacas en el programa productivo. En este caso se utilizaron 558 vacas Angus y Hereford con cría
al pie. En el Día 0 todas las vacas recibieron un dispositivo intravaginal con 0.6 g de P4 (Pluselar,
Calier, Argentina) y 2 mg de EB (Benzoato de estradiol, Calier) por vía IM. En el Día 8 las vacas
recibieron 150 µg de D+cloprostenol (Veteglan, Calier), 400 UI de eCG (Vetegon, Calier) en el
día de la remoción del dispositivo y 0,5 mg de cipionato de estradiol (Cipionato de estradiol,
Calier) y se pintó en la base de la cola con pintura como método visual en la detección de celo que
fue observado a las 48 h. Las vacas que manifestaron celo a las 48 h post remoción del dispositivo
(pintura alterada) fueron IATF en ese momento con semen convencional o con semen sexado
65/35 (denominado semen Superconvencional) en dos concentraciones: 6 y 8 millones de
espermtozoides totales por pajuela. Las que no manifestaron celo (pintura sin alterar) a las 48 h
recibieron GnRH (8 µg, Pluserelina, Calier) IM en ese momento y fueron IATF a las 48-50 h con
los tres tipos de semen ya mencionados. Los diagnósticos de gestación se llevaron a cabo entre los
64 y 74 días post IATF para diagnosticar preñez y determinar el sexo de las mismas.
Los resultados están indicados en la Tabla 10 y Figuras 1 y 2. No hubo diferencias
significativas en la tasa de preñez entre los dos toros utilizados (Figura 2) y el tipo de semen
(Convencional vs Superconvencional; Tabla 10 y Figura 2). Sin embargo las vacas que mostraron
signos de celo antes o durante la IATF (despintadas) tuvieron una mayor (P<0,01) tasa de preñez
que las vacas que no mostraron celo (Tabla 4 y Figura 1). Con respecto a la proporción de machos
y hembras en los tres grupos, el semen convencional tuvo un 51% de hembras (50/98), mientras
que este porcentaje de hembras fue del 65,5% (55/84) para las vacas inseminadas con semen
superconvencional de 8 millones de espermatozoides y del 65,3% (51/78) para las vacas
inseminadas con semen superconvencional de 6 millones de espermatozoides (Figura 3).
Tabla 10. Tasas de preñez en Vacas Angus y Hereford con cría al pie, inseminadas con semen
convencional o superconvencional de acuerdo a la expresión de celos.

Celo No Celo Total

Convencional 82/137 16/50 98/187

(25 millones) (59,8%)a (32,0%)b (52,4%)
SuperConvencional 73/136 10/50 83/186
(8 millones) (53,7%)a (20,0%)b (44,6%)

114
 Memorias
SuperConvencional 63/125 16/60 79/185
a b
(6 millones) (50,4%) (26,7%) (42,7%)
Total 218/398 42/160
(54,8%)a (26,3%)b
ab
denota diferencias en tasas de preñez entre expresión o no de celo (P<0,01)

100
90
80
70
% de Preñez

60
25 M
50
8M
40
6M
30
a a a
20
10 b b b
0
Vacas en celo Vacas sin celo

Figura 1. Tasas de Preñez de acuerdo a la expresion o no de celos a las 48 h y al tipo de semen.

No hay diferencias entre tipo de semen (P>0.13), tanto para las en celo como para las que no
entraron en celo. abPara todos los tipos de semen las tasas de prenez difieren entre las que entraron
o no en celo (P<0,01)

100
90
80
70
% de Preñez

60
25 M
50
8M
40
6M
30
20
10
0
Toro 1 Toro 2 Total

Figura 2. Tasas de preñez de las vacas que entraron en celo a las 48 h, de acuerdo al toro y tipo
de semen. No hubo diferencias entre toros o entre tipo de semen (P>0.1)

115
 Memorias
70
65
60
55
50
45
% de Hembras

40 25 M
35 8M
30
6M
25
20
15
10
5
0

Figura 3. Proporción de gestaciones diagnosticadas como hembra por ultrasonografía realizada

entre los 64 y 74 días despues de la IATF en vacas Angus y Hereford con cría al pie inseminadas
con semen convencional (no sexado) y superconvencional (sexado 65%).
Los resultados de este experimento demuestran que se pueden obtener resultados comparables
entre semen convencional y superconvencional y que las vacas en celo tienen una mayor tasa de
preñez que las que no muestran celo, donde se aprecia una baja substancial en la fertilidad en estas
vacas sin celo. La causa se esto puede estar relacionada con que las vacas que no muestran celo a
las 48 h y reciben GnRH ovulan en promedio 10 h después que las que muestran celo (68 h para
las que muestran celo y 78 h para las que no muestran celo; Cuervo et al., 2017). Por lo tanto se
puede especular que si se atrasa la IATF de todas las vacas a las 54-58 h se pueden tener más vacas
en celo que a las 48 h y mejorar, de esta manera, la tasa general de preñez. Este año se realizaran
más experimentos con semen superconvencional para probar esta hipótesis.
Discusión y conclusiones
Los resultados de los experimentos demuestran que se pueden adaptar protocolos de IATF
con la ayuda de pintura para la detección de celo para la utilización de semen sexado en vacas y
vaquillonas de carne. Cabe destacar que en ninguno de estos experimentos se realizó detección
visual del comportamiento del celo, solo se utilizó una lectura de pintura a todos los animales al
pasar por la manga. Esto se propone como parte del protocolo de IATF, aplicándose de manera
sistemática sin requerir la observación individual del comportamiento de celo. Estos datos
concuerdan con un estudio reciente (Thomas et al., 2017) en el cual vaquillonas para carne que se
IATF con semen sexado cuando fueron sincronizadas con un protocolo de CIDR-B por 14 días
más PGF 16 días después (60% para convencional y 52% para sexado, respectivamente).
Analizando los horarios de celo e IATF de estos experimentos, la recomendación de
inseminación con el protocolo J-Synch seria inseminar todos los animales en celo (con la pintura
borrada >50%) a las 72 h y los que no tienen la pintura borrada en ese momento deben recibir
GnRH a las 72 h y ser inseminadas con semen sexado o convencional a las 84 h. Por las escasas

116
 Memorias
diferencias de tasa de preñez entre semen convencional y sexado en este grupo de animales,
parecería que sería mejor inseminar a estos animales con semen sexado a las 84 h, pero debido a
que las tasas de preñez son menores en las vaquillonas sin celo, queda la decisión en el veterinario
y su cliente de utilizar un semen convencional más barato en estos animales. Finalmente, los
resultados del último experimento demuestran que se pueden obtener resultados comparables entre
semen convencional y superconvencional y que las vacas en celo tienen una mayor tasa de preñez
que las que no muestran celo, donde se aprecia una baja substancial en la fertilidad en estas vacas
sin celo. En conclusión, los resultados de los experimentos realizados hasta ahora demuestran que
utilizando la ayuda de pintura para adecuar el horario de IATF, es posible conseguir tasas de preñez
aceptables utilizando semen sexado en vaquillonas y vacas para carne, con resultados de alrededor
del 50%, confirmando los resultados encontrados en vaquillonas de leche.
Bibliografía
Binelli M., Pugliese G., de Oliveira Santana Batista E., Martins T., Lopes E., Sponchiado M.,
Gonella-Diaza A., Oliveira M., Rodriguez França M., de Oliveira Cardoso B., Piffero Mello B.,
Souza Gomes N., Latorraca L., Cuellar Cuadros F. 2017. Programaçao da receptividade uterina
e fertilidade em vacas de corte. Rev. Bras. Reprod. Anim. 41:121-129.
Bó G.A., Cutaia L. y Tríbulo R. 2002. Tratamientos hormonales para inseminación artificial a
tiempo fijo en bovinos para carne: algunas experiencias realizadas en Argentina. Segunda parte.
Taurus 15: 17-32.
Bó G.A., Baruselli P.S. and Mapletoft R.J. 2013. Synchronization techniques to increase the
utilization of artificial insemination in beef and dairy cattle. Anim. Reprod. 10: 137-142.
Bó G.A., de la Mata J.J., Baruselli P.S., Menchaca A. 2016. Alternative programs for
synchronizing and re-synchronizing ovulation in beef cattle. Theriogenology 86:388-396.
Bridges G.A., Hesler L.A., Grum D.E., Mussard M.L., Gasser C.L. and Day M.L., 2008.
Decreasing the interval between GnRH and PGF2α from 7 to 5 days and lengthening proestrus
increases timed-AI pregnancy rates in beef cows. Theriogenology 69: 843-51.
Bridges G.A., Mussard M.L, Pate J.L., Ott T.L., Hansen T.R. and Day M.L. 2012. Impact of
preovulatory estradiol concentrations on conceptus development and uterine gene expression.
Anim. Reprod. Sci. 133: 16-26
Colazo M.G., Kastelic J.P. and Mapletoft R.J. 2003. Effects of estradiol cypionate (ECP) on
ovarian follicular dynamics, synchrony of ovulation, and fertility in CIDR-based, fixed-time AI
programs in beef heifers. Theriogenology 60: 855-865.
Colazo M.G. and Ambrose D.J. 2011. Neither duration of progesterone insert nor initial GnRH
treaent affected pregnancy per timed-insemination in dairy heifers subjected to a Co-synch
protocol. Theriogenology 76: 578-588.

117
 Memorias
de Graaf S.P., Leahy T. and Vishwanath R. 2014. Biological and practical lessons associated with
the use of sexed semen. Rumin. Reprod. Symp. Proceedings, 9th International Symposium on
Reproduction in Domestic Ruminantes. Pp 125-140.
DeJarnette J.M., Leach M.A., Nebel R.L., Marshall C.E., McCleary C.R., and Moreno J.F. 2011.
Effects of sex-sorting and sperm dosage on conception rates of Holstein heifers: Is comparable
fertility of sex-sorted and conventional semen plausible?. Journal of Dairy Science 94: 3477-
3483.
de la Mata J.J. and G.A. Bó. 2012. Sincronización de celos y ovulación utilizando protocolos de
benzoato de estradiol y GnRH en períodos reducidos de inserción de un dispositivo con
progesterona en vaquillonas para carne. Taurus 55:17-23.
de la Mata JJ, Núñez-Olivera F, Cuadro F, Bosolasco D, de Brund V, Meikle A, Bó GA Menchaca
A. 2018. Impact of extending the proestrus length in an oestradiol and progesterone-based
oestrus synchronization program on follicular and luteal development, uterine gene expression,
and protein localization, and pregnancy rates in beef heifers. Reprod Fertil Dev, Online Early
https://doi.org/10.1071/RD17473
Garner D.L., Seidel Jr G.E. 2008. History of commercializing sexed semen for cattle.
Theriogenology 69:886–895.
Geary T.W. and Whittier J.C. 2001. Effects of timed insemination following synchronization of
ovulation using the Ovsynch or CO-Synch protocol in beef cows. The Professional Animal
Scientist 14: 217-220.
González-Marín C, Lenz RW, Gilligan TB, Evans KM, Góngora CE, Moreno JF and Vishwanath
R. 2017. SexedULTRATM, a new method of processing sex sorted bovine sperm improves
post-thaw sperm quality and in vitro fertility. Reprod Fertil Dev, 29(1) 204-204 (abstract).
González-Marín C, Góngora CE, Gilligan TB, Evans KM, Moreno JF, Vishwanath R. 2018. In
vitro sperm quality and DNA integrity of SexedULTRATM sexed-sorted sperm compared to
non-sorted bovine sperm. Theriogenology, 114:40-45.
Kasimanickam R. 2015. Utilization of sexed-sorted semen. Bovine Reproduction. Chapter 72.
Bovine Reproduction, R.M.Hopper, Wiley Blackwell. Pp 673.
Lamb GC1, Stevenson JS, Kesler DJ, Garverick HA, Brown DR, Salfen BE.2001. Inclusion of an
intravaginal progesterone insert plus GnRH and prostaglandin F2alpha for ovulation control in
postpartum suckled beef cows. J Anim Sci. 79:2253-9
Martínez M.F., Kastelic J.P., Adams G.P. and Mapletoft R.J. 2002. The use of a progesterone-
releasing device (CIDR-B) or melengCelol acetate with GnRH, LH, or estradiol benzoate for
fixed-time AI in beef heifers. J. Anim. Sci. 80: 1746-1751.
Menchaca A., Dutra S., Carrau J.M., Sapriza F., Bo G.A. 2016. Improvements of the new J-Synch
protocol used for fixed time embryo transfer (FTET) in beef cattle recipients transferred with

118
 Memorias
in vitro produced embryos. International Congress of Animal Reproduction (ICAR), Tours,
Francia, P471.
Pursley R.J., Mee M.O. and Wiltbank M.C. 1995. Synchronization of ovulation in dairy cows
using PGF2α and GnRH. Theriogenology 44(7):915-23.
Ré M., de la Mata J.J. and Bó G.A. 2014. Synchronization of ovulation in dairy heifers using a
shortened estradiol-based protocol that provides for a lengthened proestrus. Reprod. Fertil. Dev.
26:118 (abstract).
Ré M.G., Curchod G., Alessio D., Caccia M., de la Mata J.J., Bó G.A. 2015. Tratamientos que
prolongan el proCelo usando estradiol y progesterona en vaquillonas de leche. Resumenes XI
Simposio Internacional de Reproduccion Animal, Cordoba, Argentina, pp. 159-167.
Thomas J.M., Locke J.W.C., Vishwanath R., Hall J.B., Ellersieck M.R., Smith M.F., Patterson
D.J. 2017. Effective use of SexedULTRA sexed-sorted semen for timed artificial insemination
of beef heifers. Theriogenology 98: 88-93.
Uslenghi G., González Chavez S., Cabodevila J. and Callejas S. 2014. Effect of estradiol cypionate
and amount of progesterone in the intravaginal device on synchronization of estrus, ovulation
and on pregnancy rate in beef cows treated with FTAI based protocols. Anim. Reprod. Sci. 145:
1-7.
Vishwanath R. 2015 Sexed sperm vs conventional sperm – a comparative discussion. Proceedings,
Applied Reproductive Strategies in Beef Cattle, pp.250-256.

119
Memorias

120
Memorias

121
 Memorias
PERDIDAS GESTACIONALES EN RECEPTORAS DE EMBRIONES IN VITRO:
FACTORES DE RIESGO Y ESTRATEGIAS PARA DISMINUIRLAS

A. García Guerra1, R. V. Sala3, L. Carrenho-Sala3, J.C.L., Motta1, E. Walleser2, L. F.

Melo1, L. Leffers1, M. Fosado2, J. F. Moreno2, M. C. Wiltbank1
1Department of Animal Sciences, The Ohio State University, 2027 Coffey Rd,
Columbus, OH, 43210, USA.
2 Department of Dairy Science, University of Wisconsin-Madison, 1675 Observatory

Drive, Madison, WI, 53706, USA.

3 Sexing Technologies, Kewaskum, WI, USA.

garciaguerra.1@osu.edu

Introducción

El incremento en el uso de la producción de embriones in vitro ha creado la necesidad

de evaluar en forma precisa la fertilidad de dichos embriones. La fertilidad luego de la
transferencia de embriones producidos in vitro es generalmente menor a la obtenida
con embriones producidos in vivo (Hasler 1998; Ferraz et al. 2016). La fertilidad puede
ser evaluada desde dos puntos de vista complementarios siendo el primero y más
común el porcentaje de preñez obtenido, típicamente en el día 30 a 35 después del
celo o inducción de la ovulación en la receptora. Sin embargo, un enfoque
complementario es evaluar las perdidas gestacionales en diferentes periodos durante el
primer tercio de la gestación. Las pérdidas gestacionales son expresadas normalmente
como el porcentaje de receptoras previamente preñadas que pierden dicha preñez
durante un periodo previamente definido. Un aspecto particular de la transferencia de
embriones es que las pérdidas relacionadas a la fertilización y el desarrollo embrionario
temprano (primeros 7 días) son transferidas al sistema de producción de embriones y
generalmente no consideradas como parte de las perdidas gestacionales ya que
ocurren fuera de la receptora. Las pérdidas durante la fertilización y el desarrollo
embrionario temprano rondan el 10% y 10 a 50%, respectivamente, en protocolos de
IATF (Wiltbank et al. 2016). Por consiguiente, en la transferencia de embriones las
receptoras se asumen técnicamente como preñadas luego de la transferencia. Las
pérdidas gestacionales observadas en diferentes periodos durante los primeros 60 días
de gestación en vaquillonas lecheras receptoras de embriones producidos in vitro son
presentados en la Tabla 1. Estos datos fueron obtenidos retrospectivamente a partir de
una serie de estudios de nuestro grupo y reflejan la situación de un establecimiento en
particular.

122
 Memorias
Tabla 1. Preñez por embrión transferido (P/ET) y perdidas gestacionales durante
distintos periodos de los primeros 60 días de gestación en receptoras de embriones
producidos in vitro.

Preñez por embrión transferido

D21 D28 D32 D60

64,1% 46,1% 40,6% 33,6%
(1606/2504) (1156/2510) (1340/3298) (1109/3296)
Perdidas gestacionales
Primeros 60
D7 a D21 D21 a D28 D28 a D32 D32 a D60
días
35,9% 27,9% 11,1% 17,2% 66.4%
(898/2504) (449/1605) (128/1156) (231/1340) (2187/3296)

Como puede apreciarse en los resultados presentados arriba el porcentaje de perdidas

gestacionales durante los primeros 60 días es significativo indicando que únicamente
~1/3 de los embriones transferidos resulta en una preñez de 60 días. A pesar de que
estos resultados proveen un marco de referencia para investigar los factores de riesgo
relacionados a las perdidas gestacionales, es importante notar que la determinación de
preñez al día 21 se realiza a través de un método indirecto, la medición de
progesterona circulante. Sin embargo, es altamente probable que este porcentaje este
subestimado y que el porcentaje de pérdidas en el periodo siguiente (día 21 a 28) este
sobre estimado. Debido a la falta de métodos precisos y de fácil aplicación para
determinar la presencia de un embrión viable en el día 21, el uso de progesterona
continúa siendo una herramienta útil para su estimación. La categorización de las
perdidas gestacionales en periodos definidos permite obtener un panorama más
preciso y a su vez abocar el desarrollo de estrategias para disminuir las pérdidas en
aquellos periodos de mayor impacto.
Uno de los mayores desafíos en el manejo de perdidas gestacionales es el establecer
los mecanismos por los cuales se producen estas pérdidas gestacionales en los
distintos periodos. Una revisión publicada recientemente intenta explorar la relación
entre las perdidas gestacionales en vacas de leche en lactancia luego de la IATF y los
procesos de desarrollo del embrión y sus membranas con el objetivo de brindar un
marco fisiológico a la temática de las perdidas gestacionales (Wiltbank et al. 2016). La
presente revisión tiene como objetivo presentar información referida a las perdidas
gestacionales en receptoras de embriones producidos in vitro y factores de riesgo
asociados a las mismas. Por último, se presentan algunos estudios recientes que
tuvieron como objetivo evaluar estrategias para disminuir las perdidas gestacionales.

123
 Memorias
Factores que afectan la fertilidad y las pérdidas de gestación en un programa de
transferencia de embriones producidos in vitro
Una multitud de factores han sido identificados que pueden influenciar la fertilidad en un
programa de transferencia de embriones y pueden ser clasificados en aquellos
relacionados a la receptora, al embrión, o a la interacción entre la receptora y el embrión.
Tradicionalmente estos factores han sido identificados en relación a programas de
transferencia de embriones producidos in vivo mediante superovulación. Sin embargo, el
aumento en la producción in vitro de embriones observado en los últimos años ha creado
la necesidad de identificar factores que impacten en la fertilidad de embriones producidos
in vitro. Asimismo, la identificación precisa de periodos durante la gestación y los factores
que impacten en pérdidas gestacionales en dichos periodos puede proveer de un marco
fisiológico que permita la investigación acerca de estrategias para disminuir tales
perdidas. En un estudio reciente investigamos de manera retrospectiva los factores que
afectan la fertilidad en un programa de transferencia de embriones producidos in vitro en
vaquillonas de leche (Carrenho-Sala et al. 2015). Los resultados preliminares son
presentados aquí con la particularidad de que este es un trabajo en progreso y que los
datos finales aún no han sido publicados.
Factores relacionados al embrión
La calidad del embrión transferido afecta de manera significativa los porcentajes de
preñez por embrión transferido (P/ET). Embriones grado 1 (Escala recomendada por la
IETS) presentaron un mayor porcentaje de P/ET al día 32 [Grado 1- 48,4% (1273/2631)
vs. Grado 2- 37,6% (900/2395); P< 0,01] así como al día 60 [Grado 1- 38,9% (1023/2631)
vs. Grado 2- 29,0% (694/2395); P< 0,01]. De manera similar la calidad del embrión
(Grado 1) redujo el porcentaje de perdidas gestacionales entre los días 32 y 60 [Grado
1- 19,6% (250/1273) vs. Grado 2- 22,9% (206/900); P= 0,03]. Resultados similares han
sido reportados para embriones producidos in vivo (Bó et al. 2011) e in vitro (Hasler 1998)
por otros grupos.
El estadio del embrión determinado a través de la evaluación morfológica del mismo es
un practica altamente difundida y comúnmente se realiza siguiendo las recomendaciones
de la IETS (Stringfellow and Givens 2010). En el presente estudio 3 estadios fueron
evaluados: 6 (blastocito); 7 (blastocito expandido); 8 (blastocito eclosionado). El
porcentaje de preñez al día 32 fue significativamente mayor en embriones de estadio
más avanzado [Estadio 6- 35,5%a (582/1641), Estadio 7- 46,3%b (1431/3092) and
Estadio 8- 54,6%c (160/293); P<0,01]. Asimismo, el porcentaje de preñez al día 60 estuvo
influenciado por el estadio embrionario [Estadio 6- 28,2%a (462/1641), Estadio 7- 36,6%b
(1131/3092) and Estadio 8- 41,6%b (122/293); P<0,01]. Sin embargo, no se encontraron
diferencias en las perdidas gestacionales entre el día 32 y 60 para los distintos estadios
embrionarios (P=0,22). Los reportes del efecto del estadio de embriones producidos in
vitro en los porcentajes de preñez muestran gran variabilidad. En un estudio reciente, se
encontraron resultados similares a los reportados aquí, donde los embriones estadio 7
demostraron mayor fertilidad que embriones estadio 6 (Randi et al. 2015). Sin embargo,
en ese estudio no se encontraron diferencias con el estadio 8, aunque numéricamente
fueron superiores. Estos resultados se contradicen con los reportados en otros estudios
(Hasler 1998; Pelizzari et al. 2015) y con los porcentajes de preñez obtenidos con

124
 Memorias
embriones producidos in vivo. Los embriones estadio 4 (mórula) y 5 (blastocito temprano)
producidos in vivo muestran mayor fertilidad que aquellos de estadio 7 (Bó et al. 2011).
Es importante destacar, que por lo menos parte de esta diferencia puede ser atribuida a
una diferencia en la edad del embrión entre ambos sistemas. En ambos sistemas los
embriones tienen 7 días de edad, aunque la determinación del día 0 es distinta ya que
en el sistema de producción de embriones in vivo el día 0 es el momento de detección
de celo de la donante mientras que en el sistema in vitro el día 0 corresponde al momento
de la fertilización. De esta manera, hay una diferencia de por lo menos 28 h (intervalo
celo – ovulación) entre ambos embriones.
La constante búsqueda de animales de alto valor genético y la necesidad de reducir el
intervalo generacional para acelerar el mejoramiento genético ha llevado a que la
producción de embriones en las donantes comience a edades cada más tempranas. A
pesar de que la producción in vitro de embriones permite la obtención de embriones de
animales que aún no han llegado a su edad reproductiva, no hay información disponible
sobre el efecto de la edad de la donante en la fertilidad de los embriones producidos.
Recientemente realizamos una evaluación de este factor en más de 10.000
transferencias encontrando que la edad de la donante ejerce un efecto significativo
(P<0,001) en la fertilidad y las perdidas gestacionales. Observamos que la P/ET aumenta
a medida que la edad de la donante se incrementa alcanzando un máximo entre los 20
y 40 meses para luego reducirse a edades más avanzadas. Un efecto similar fue
observado con las perdidas gestacionales, indicando que el periodo de menores perdidas
es aproximadamente entre los 20 y 40 meses de edad. Estos resultados ponen de
manifiesto la necesidad de investigar esta relación para así poder mejorar los sistemas
de producción actuales.
Factores relacionados a la receptora
La necesidad de criterios que permitan la selección de receptoras aptas que permitan
obtener altos niveles de fertilidad ha llevado a la búsqueda de factores simples de medir
en las receptoras que nos permitan predecir su performance. Uno de los factores
comúnmente evaluados es el tamaño del cuerpo lúteo, ya que es un tipo de información
de fácil acceso debido a la necesidad inherente de evaluar el cuerpo lúteo (CL) para
conocer el lado en que se debe realizar la transferencia del embrión. Sin embargo, los
resultados obtenidos en varios estudios han sido contradictorios. Un estudio realizado en
Colombia con más de 17.000 vaquillonas receptoras de embriones producidos in vitro
encontraron que un diámetro de cuerpo lúteo > 24 mm al momento de la transferencia
(día 7) estaba asociado a una mayor tasa preñez (Gonella-Diaza et al. 2013). Sin
embargo, un estudio reciente sobre 4.214 transferencias en Argentina (Pelizzari et al.
2015) no encontró diferencias significativas en la fertilidad de receptoras entre tres
categorías de diámetro del CL (≥14 a <16 mm; ≥16 a <18 mm, y ≥18 mm). Asimismo, en
un estudio reciente realizado por nuestro grupo el efecto del tamaño del CL (18 a 19.9
mm vs ≥ 20 mm) en el día 5 del ciclo mostro una tendencia a incrementar los porcentajes
de preñez al día 32 (P=0.09) sin embargo, el tamaño del cuerpo lúteo no tuvo efecto
alguno en el porcentaje de pérdidas de preñez (Carrenho-Sala et al. 2015). Más
recientemente evaluamos el efecto del volumen del CL en la fertilidad utilizando datos de
8.222 transferencias en vaquillonas de leche. Los resultados mostraron un efecto

125
 Memorias
cuadrático indicando que el volumen del CL influencia la tasa de preñez por ET en donde
los valores extremos resultan en tasas de P/ET menores. Los CL de aproximadamente
3800 mm3 (rango de diámetro 18.6 a 20 mm) obtuvieron un porcentaje de P/TE entre 3%
y 5% mayor.
La historia reproductiva de la receptora a utilizar ha sido sujeto de algunas
investigaciones y está íntimamente relacionada con la categoría (vaquillona, vaca seca
o en lactancia, etc.). Algunos estudios han señalado que el uso de vaquillonas resulta en
mejores índices de fertilidad que el uso de vacas, particularmente cuando se trata de
animales de producción de leche (Ferraz et al. 2016). Sin embargo, la categoría de la
receptora no necesariamente permite conocer su historia reproductiva. Recientemente
evaluamos (Carrenho-Sala et al. 2015) el número de transferencias recibidas por una
receptora y esta no mostro diferencias significativas en los porcentajes de preñez al día
32 [0- 43,3% (886/2046), 1- 44,1% (639/1450), 2- 43,4% (444/1024), 3- 42,6% (146/343)
and ≥ 4- 35,6% (58/163); P=0,33] o en el porcentaje de pérdidas de preñez entre el día
32 y 60 (P=0,12). Estos resultados se contradicen con aquellos presentados por (Bó et
al. 2011) y (Looney et al. 2006). Sin embargo, es de notar que en nuestros resultados
receptoras con 4 o más transferencias mostraron una disminución en el porcentaje de
preñez. A pesar de la reducción en los porcentajes de preñez reportada previamente, el
mecanismo por el cual ocurre este fenómeno no ha sido todavía elucidado.
Uno de los factores inherentes a la transferencia de embriones es el momento en que se
debe realizar la transferencia en relación al momento de ovulación de la receptora. Un
estudio realizado en Brasil en 4.749 transferencias mostro que la tasa de preñez al día
32 era mayor cuando los embriones eran transferidos 6 o 7 días después del celo,
mientras que transferencias realizadas antes o después de ese intervalo llevaban a una
disminución de la fertilidad (Randi et al. 2015). Sin embargo, resultados preliminares de
un estudio realizado por nuestro grupo no encontró diferencias significativas en los
porcentajes de P/ET al día 32 de embriones transferidos 6, 7 u 8 días después de la
inducción de la ovulación con GnRH en un programa de TETF (Carrenho-Sala et al.
2015). Asimismo, tampoco se encontraron diferencias en el porcentaje de P/ET al día 60
ni en el porcentaje de perdidas gestacionales entre el día 32 y 60. Sin embargo, el análisis
del intervalo celo/inducción de la ovulación y la transferencia debe ser evaluado en el
contexto del estadio del embrión transferido el cual será descripto en la siguiente sección.
La expresión de celo en programas de sincronización de la ovulación ha recibido
recientemente considerable atención. En un trabajo reciente se encontró que la
expresión de celo tuvo un efecto positivo en los porcentajes de preñez (>13%) en vacas
en lactancia, tanto en IATF como en TETF (Pereira et al. 2016). De manera similar, la
expresión de celo disminuyo las pérdidas de preñez entre el día 32 y 60. El efecto de la
expresión de celo en el porcentaje de preñez a la TETF fue independiente del tamaño
del folículo dominante para aquellos animales que demostraron celo. Similares
resultados se encontraron en un estudio reciente en vaquillonas de leche que recibieron
embriones producidos in vitro, con mayores porcentajes de preñez al día 32 (P=0,02) en
vaquillonas que mostraron celo (44,6%; 2513/5635) que aquellas que no fueron
observadas en celo (31,5%; 776/1893). Sin embargo, no se encontraron diferencias
significativas en las perdidas gestacionales (día 32 y 60) entre vaquillonas que mostraron

126
 Memorias
celo y aquellas que no. El mecanismo por el cual aquellas receptoras que mostraron celo
logran una mayor fertilidad no ha sido completamente elucidado, aunque es probable
que la expresión de celo sea una manifestación de un correcto estatus hormonal que
indica un endometrio mejor preparado para recibir una preñez. Una observación
interesante al respecto de la expresión de celo, es que la magnitud del efecto en la
fertilidad es aparentemente mayor cuando se utilizan protocolos de sincronización en
base a estrógenos en comparación con protocolos que utilizan GnRH.
El estado nutricional tanto de donantes como de receptoras ha sido identificado como un
factor contribuyente a la fertilidad de un programa de TE (Pelizzari et al. 2015). La menor
fertilidad en animales con baja condición corporal ha sido bien establecida, sin embargo,
el sobre condicionamiento de receptoras ha recibido menor atención. El estudio de
Pelizzari y col., identifico que receptoras de embriones in vitro con una condición corporal
≥4.5 (escala 1-5) sufren una reducción en los porcentajes de P/ET al día 35. Resultados
similares fueron obtenidos por nuestro grupo, receptoras con una condición corporal ≥3.5
tuvieron un porcentaje de P/ET al día 32 de 39,1% mientras que aquellas con condición
corporal 3 obtuvieron un 45,7% de P/ET. Sin embargo, no se observaron efectos de la
condición corporal en las perdidas gestacionales entre el día 32 y 60.
Interacción embrión-receptora
La interacción entre el embrión y la receptora es medida a través del grado de
sincronización entre la edad-estadio del embrión y el intervalo entre el celo/inducción de
la ovulación. En el trabajo realizado por nuestro grupo se evaluaron 3 estadios (6, 7 y 8)
y 3 intervalos entre la inducción de la ovulación (GnRH) y la transferencia (6, 7 y 8 días).
Es importante remarcar, que en el presente trabajo la edad del embrión es la misma ya
que todos los embriones fueron transferidos 7 días después de la fertilización. Como
resultado, el nivel de sincronización fue establecido considerando el estadio morfológico
del embrión. Resultados preliminares, indican que no hubo interacción entre el estadio
del embrión y el intervalo GnRH-TE en los porcentajes de preñez al día 32 (Tabla 2;
P=0,77). De manera similar, no se registraron diferencias significativas para el porcentaje
de preñez al día 60 (P=0,96) y las perdidas gestacionales entre el día 32 y 60 (P=0,55).
Sin embargo, es interesante recalcar que las diferencias entre estadios embrionarios se
mantienen, por cuanto embriones estadio 7 y 8 logran mayor fertilidad que embriones
estadio 6, independientemente del intervalo entre la inducción de la ovulación y la
transferencia. Los resultados obtenidos son similares a los reportados recientemente por
(Randi et al., 2015). Estos resultados indican que, en cuanto a la interacción entre la
receptora y el embrión, es más importante considerar el estadio del embrión ya que esta
impacta de manera más significativa en la fertilidad.

127
 Memorias
Tabla 2. Efecto de la sincronización entre estadio del embrión e intervalo GnRH-TE en el
porcentaje de preñez al día 32 en receptoras de embriones in vitro (adaptado de
Carrenho-Sala et al. 2015).
Intervalo GnRH- TE (n)
Estadio del
Día 6 Día 7 Día 8 N Valor P
Embrión
35,7% 37,8% 31,8%
6 1641 0,21
(423)A (727) A (491)A
45,3% 48,7% 44,2%
7 3092 0,22
(833)B (1233) B (1026)B
55,6%
8 50,9% (53)B 55,2% (87)B 293 0,79
(153)B
N 1309 2113 1604
Valor P 0,08 <0,01 <0,01
A,B Valores dentro de una columna con distintos superíndices difieren (P<0,05).

Perdidas gestacionales entre el día 30 y 60: ¿muerte embrionaria/fetal o regresión

del cuerpo lúteo?
Las pérdidas gestacionales ocurridas entre los días 20 y 60 en receptoras de
embriones producidas in vitro pueden alcanzar el 45%. Sin embargo, los mecanismos
que median estas pérdidas no han sido elucidados creando una necesidad de entender
mejor la fisiología de las perdidas gestacionales para poder diseñar estrategias que las
reduzcan. Con el objetivo de mejor comprender las perdidas gestacionales realizamos
un estudio que tuvo como objetivos específicos: 1) determinar si las perdidas
gestacionales entre el día 30 y 60 se deben a la muerte del embrión/feto o a la
regresión del cuerpo lúteo, y 2) evaluar si la suplementación de progesterona mediante
dispositivos intravaginales de progesterona puede contribuir a mitigar estas pérdidas
(Garcia Guerra et al. 2016). Se sincronizaron vaquillonas Holstein (n=196) con el
siguiente protocolo: d-8 – colocación CIDR, d-3 - retiro del CIDR, PGF (500μg
cloprostenol), d-2 segunda PGF, d0 - GnRH (100 μg acetato de gonadorelina). En el día
7±1 después de la aplicación de GnRH se transfirió un embrión fresco producido in vitro
al cuerno uterino ipsilateral al cuerpo lúteo. En el día 13 las vaquillonas fueron
asignadas aleatoriamente para recibir uno de 2 tratamientos: 2 CIDR (1,38g
progesterona) o Control (sin tratamiento). Las vaquillonas en el grupo CIDR recibieron
2 CIDR (uno nuevo y uno usado) en el día 13, una semana más tarde (día 20) se
remplazó el CIDR usado por uno nuevo. En semanas subsiguientes y a intervalos de 7
días uno de los CIDR era retirado (el más antiguo) y reemplazado por uno nuevo. Este
proceso continuo hasta el día 62 (día 0 GnRH) y tuvo como objetivo proveer suficiente
progesterona para mantener una preñez en caso de que el cuerpo lúteo regresara.
Todas las vaquillonas fueron evaluadas mediante ultrasonografía una vez por semana

128
 Memorias
comenzando el día 13 y hasta el día 62, asimismo se colectaron muestras semanales
de suero para determinación de progesterona y proteína especifica de la preñez B
(PSPB). Se definió como perdida gestacional la inhabilidad de observar el embrión,
ausencia de latido cardiaco o la regresión del cuerpo lúteo en un animal tratado con
CIDR previamente diagnosticado como preñado.
El tratamiento con CIDR fue efectivo en incrementar los niveles de progesterona, por
ejemplo en el día 27 los niveles de P4 fueron mayores (P=0,03) en el grupo CIDR
(8,5±0,4 ng/ml) que en el grupo Control (7.3±0.4 ng/ml). El porcentaje de preñez en los
distintos momentos evaluados se muestra en la Figura 1. Se encontró una tendencia a
un mayor porcentaje de preñez en el grupo CIDR (P<0,10) en cada evaluación con
excepción del día 27. Esta diferencia estuvo mayormente debida a una reducción en
las perdidas embrionarias (Figura 2) entre el día 27 y 34 en el grupo CIDR (P<0,06).
Figura 1. Preñez por embrión transferido (P/ET) entre el día 20 y 62 en vaquillonas
receptoras de embriones producidos in vitro que fueron tratadas con CIDR (n=97)
durante la gestación o aquellas que permanecieron en el grupo control (n=99).

* Se encontró una tendencia hacia diferencias significativa entre tratamientos (P<0,10).

† La determinación de P/ET en el día 20 se realizó mediante la evaluación de
concentraciones de progesterona en suero (P4>2 ng/ml) y volumen del cuerpo lúteo
(>1436 mm3).
ǂ P/ET al D27 basados en concentración sérica de proteína especifica de la preñez B
(PSPB>0,96 ng/ml).

La determinación de la causa de la perdida gestacional se realizó únicamente en el grupo

tratado con CIDR ya que este grupo proveyó el ambiente necesario para mantener una
preñez aun cuando el CL hubiera regresado. Las perdidas gestacionales se clasificaron
en: pérdidas debidas a muerte embrionaria/fetal (ausencia de un embrión viable en
presencia de un cuerpo lúteo funcional) o perdidas debidas a regresión del cuerpo lúteo
(ausencia del CL con un embrión/feto viable). De esta manera se observó que las
perdidas entre el día 20 y 34 ocurrieron principalmente debido a muerte del embrión
(96,2%; 25/26) y no debido a la regresión del CL (3,8%; 1/26, P<0,01). En contraposición,
las perdidas ocurridas entre el día 34 y 62 se debieron a ambas causas con un 40% (2/5)

129
 Memorias
debido a muerte embrionaria/fetal y un 60% (3/5) debido a regresión del CL (P=0,64).
Estos resultados permiten concluir que las perdidas gestacionales ocurridas entre el día
20 y 34 son mayormente debidas a la muerte del embrión, mientras que las pérdidas
ocurridas entre el día 34 y 62 pueden deberse tanto a la muerte embrionaria/fetal o a la
regresión del CL. Asimismo, estas observaciones plantean la posibilidad de un segundo
periodo de reconocimiento materno de la gestación y consecuente mantenimiento del
CL. El estudio de este fenómeno y las diferencias entre embriones producidos in vivo e
in vitro puede proporcionar información necesaria para entender las mayores pérdidas
encontradas con la transferencia de embriones producidos in vitro, así como el desarrollo
de estrategias para reducirlas.

Figura 2. Perdidas de preñez entre el día 20 y 62 en vaquillonas receptoras de embriones

producidos in vitro que fueron tratadas con CIDR (n=97) durante la gestación o aquellas
que permanecieron en el grupo control (n=99).

* Se encontró una tendencia hacia diferencias significativa entre tratamientos (P≤0,06).

Disminución de las pérdidas de gestación (D30-60) en un programa de
transferencia de embriones producidos in vitro: uso de GnRH en el periodo
posovulatorio

Los niveles de progesterona (P4) en el periodo posovulatorio, a través de su efecto en el

endometrio, han sido asociados con un incremento en la secreción de interferón tau y el
tamaño del embrión (Carter et al. 2008; Clemente et al. 2009). Estos resultados han
conducido al desarrollo de estrategias con el objetivo de incrementar los niveles de
progesterona durante el desarrollo embrionario temprano, previo al reconocimiento
materno. Los estudios realizados con suplementación de P4 en el periodo posovulatorio
muestran resultados contradictorios, con efectos positivos o neutros, o incluso en
algunos casos negativos (Lonergan et al. 2015; Monteiro Jr et al. 2015). Entre las
estrategias utilizadas, la inducción de la ovulación del folículo dominante de la primera
onda folicular ha recibido considerable atención por su relativa simplicidad y duración. El
uso de GnRH y sus análogos o hCG tiene como objetivo inducir la ovulación del folículo
dominante de la primera onda folicular generando así un cuerpo lúteo accesorio y como

130
 Memorias
resultado un incremento en los niveles de P4. El uso de esta estrategia en programas de
IATF en vacas en lactancia fue revisado recientemente (Nascimento et al. 2013),
indicando un incremento del 3% en los porcentajes de preñez. Sin embargo, la inducción
de CL accesorios en programas de TE muestra resultados diversos, con algunos
estudios indicando efectos positivos en los porcentajes de preñez (Marques et al. 2003;
Wilson et al. 2005; Vasconcelos et al. 2011; Wallace et al. 2011) mientras otros no
encontraron beneficio (Ideta et al. 2003; Small et al. 2004; Tribulo et al. 2004). La mayoría
de los estudios citados fueron realizados con embriones producidos in vivo y el número
de animales utilizados es limitado, especialmente considerando los efectos reportados
en programas de IATF (Nascimento et al. 2013). En contraposición, de aquellos trabajos
que encontraron efectos positivos, la mayoría presenta porcentajes de preñez muy por
debajo de los esperado en el grupo control (Marques et al. 2003; Wilson et al. 2005;
Vasconcelos et al. 2011). Finalmente, las perdidas gestacionales y la tasa de ovulación
al tratamiento (% de animales con CL accesorio) no han sido reportadas, haciendo difícil
una precisa interpretación.
Considerando la variación en los resultados obtenidos con el uso de GnRH en el periodo
posovulatorio, y la falta de estudios realizados con receptoras de embriones producidos
in vitro se realizó un estudio en 1562 vaquillonas Holstein en un programa de
transferencia de embriones in vitro (Garcia-Guerra et al. 2015). Las receptoras fueron
asignadas en el día 5.5 pos-GnRH a uno de dos grupos: control o GnRH (200 μg, acetato
de gonadorelina). Embriones producidos in vitro fueron transferidos en fresco el día 7 ±
1. El diagnostico de gestación se realizó en el día 33 y 60 en todos los animales, y se
colectaron muestras de un subgrupo para determinación de P4 en el día 12.
El porcentaje de ovulación a la GnRH en el día 5,5 fue 83,9% (302/360) para las
vaquillonas tratadas con GNRH y de 3,3% (12/358) en el grupo Control (P<0,001). Los
niveles de P4 en el día 12 fueron mayores en el grupo GNRH 7,2 ± 0,1 ng/ml que en el
grupo Control 6,0 ± 0,1 ng/ml (P<0,001). No se encontraron diferencias significativas en
los porcentajes de preñez entre tratamientos al día 33 y 60 (Tabla 3). Sin embargo, se
encontraron diferencias significativas en las perdidas gestacionales entre el día 33 y 60,
donde el tratamiento con GnRH disminuyo las mismas. Un análisis pormenorizado de
este efecto encontró que el mismo se debía exclusivamente a una disminución de las
perdidas en aquellas receptoras que recibieron embriones estadio 7. La longitud del
embrión (céfalo-caudal) en el día 33 no tuvo diferencias significativas entre tratamientos
o entre embriones de diferente estadio (Tabla 3). Asimismo, el volumen de la vesícula
amniótica no fue diferente entre el grupo tratado con GnRH (549,1 ± 16 mm3) y el grupo
Control (543,5 ± 14 mm3; P=0,86). Resultados similares fueron obtenidos en un estudio
reciente realizado en Brasil en animales Girolando (N= 1807) tratados con GnRH (100
μg) al momento de la transferencia de embriones producidos in vitro (Munhoz et al. 2014).
No se encontraron diferencias significativas en los porcentajes de preñez al día 31 y 66
entre tratamientos, sin embargo, hubo una tendencia (P=0,10) a una menor perdida
gestacional en animales que recibieron GnRH (15,9%; 75/473) comparados con el grupo
Control (19,9%; 95/477).

131
 Memorias
Tabla 3. Porcentajes de preñez, perdidas gestacionales y tamaño del embrión en
receptoras de embriones in vitro tratadas con GnRH en el periodo posovulatorio
(adaptado de Garcia-Guerra et al. 2015).

Estadio Perdidas de Longitud

P/ET D33
del Tratamiento P/ET D60 (n) preñez D33- embrión D33
(n)
Embrión 60 (n) (n)
20,6% 10,7±0,3
Control 28,6% (374) 22,7% (374)
(107)AC (50)
6
23,6% 10,6±0,2
GnRH 30,8% (357) 23,5% (357)
(110)AC (61)
27,1% 10,8±0,2
Control 45,9% (394) 33,5% (394)
(181)BC (84)
7
10,6±0,2
GnRH 42,1% (437) 35,7% (437) 15,2% (184)A
(81)
Estadio <0,01 <0,01 0,45 0,98
Valor P Tratamiento 0,90 0,35 0,16 0,46
Interacción 0,30 0,67 0,04 0,33

Las pérdidas gestacionales en receptoras de embriones producidos in vitro son en

general mayores a las observadas en programas de IA o TE producidos in vivo (Farin
and Farin 1995; Peterson and Lee 2003; Hasler 2012) aunque existen controversias al
respecto (Pontes et al. 2009). Asimismo, estudios realizados evaluando el desarrollo
embrionario indican alteraciones significativas, particularmente en el desarrollo de las
membranas fetales (Alberto et al. 2013). El efecto del uso de GnRH en el porcentaje de
perdidas gestacionales fue inesperado. De acuerdo, a la noción de que el aumento de
progesterona en el periodo posovulatorio debe ocurrir de manera temprana (día 4-5) para
influenciar el elongamiento del embrión, el uso de estrategias para inducir CL accesorio
resultan en un incremento de P4 tardío (Bo et al. 2012). Sin embargo, los efectos
observados respecto de las perdidas gestacionales entre el día 30 y 60 con el uso de
GnRH, indicaría la posibilidad de un efecto tardío, potencialmente en el desarrollo de las
membranas fetales.

Transferencia de múltiples embriones: ¿es posible mejorar la fertilidad de

embriones producidos in vitro de baja calidad mediante la transferencia de 2
embriones?
La fertilidad de embriones producidos in vitro se ve afectada por, entre otros factores, el
estadio y la calidad del embrión como fue demostrado en el comienzo de esta revisión.
Con el objetivo de evaluar la posibilidad de mejorar la fertilidad de embriones de baja
calidad o de estadios que poseen menor fertilidad se evaluó la fertilidad de la
transferencia de dos embriones en forma unilateral o bilateral (Carrenho-Sala et al.

132
 Memorias
2016). Un total de 454 vaquillonas Holstein fueron sincronizadas con un protocolo Co-
Synch de 5 días. En el día 7±1 (día 0 aplicación de GnRH) las vaquillonas se asignaron
aleatoriamente en los siguientes grupos: transferencia de un único embrión en el cuerno
ipsilateral al CL (Único; n=188); transferencia de 2 embriones ambos en el cuerno
ipsilateral al CL (Unilateral; n=138); o transferencia de 2 embriones de manera bilateral
(uno en cada cuerno / Bilateral; n=128). Todos los embriones utilizados fueron
producidos in vitro y transferidos en fresco. Se utilizaron embriones de estadios 4
(mórula) a 8 (blastocito eclosionado) y calidad 1 o 2. Como mínimo uno de los embriones
transferidos debía ser de baja calidad (grado 2) o de un estadio que resulte en menor
fertilidad (estadios 4, 5 o 6). No se encontraron diferencias significativas (P>0,10) en el
porcentaje de P/ET en el día 32 o 60 entre vaquillonas que recibieron un embrión único
(d32 30,9% [58/188] y d60 25% [47/188]) o 2 embriones (d32 36,5% [97/266] y d60 22,2%
[59/266]) independientemente de la ubicación. Sin embargo, las perdidas entre el día 32
y 60 fueron significativamente mayores (P<0,01) en receptoras que recibieron 2
embriones (39,2%; 38/97) comparado con aquellas que recibieron un único embrión
(18,9%; 11/58).
La tasa de preñez en el día 32 fue similar (P=0,4) para aquellas receptoras que recibieron
un embrión único 30,9% (58/188), 2 embriones de manera unilateral 36,9% (51/138), y 2
embriones de forma bilateral 35,9% (46/128). Sin embargo, se encontraron diferencias
significativas en el porcentaje de perdidas gestacionales entre el día 32 y 60 (P=0,04).
Las perdidas gestacionales fueron mayores (P=0,01) en el grupo que recibió 2 embriones
en forma bilateral 43,5% (20/46) comparado con el grupo que recibió un embrión único
18,9% (11/58), mientras que el grupo que recibió 2 embriones en forma unilateral fue
intermedio 35,3% (18/51) y mostro una tendencia hacia una diferencia significativa con
el grupo que recibió un embrión único (P=0,1). Cuando las perdidas gestacionales fueron
evaluadas en función de la presencia confirmada de mellizos (mediante ultrasonografía)
se encontró que receptoras con una preñez múltiple al día 32 sufrieron un 62,1% (18/29)
de perdidas entre el día 32 y 60, mientras que aquellas que tenían una preñez única
tuvieron un 24,6% (31/126) de perdidas (P<0,01). En receptoras preñadas con mellizos
no se encontraron diferencias (P=0,9) en las perdidas gestacionales entre aquellas
receptoras con preñeces unilaterales (62,5%; 10/16) y aquellas con preñeces bilaterales
(61,5%; 8/13).
Las receptoras preñadas con un único embrión tuvieron porcentajes de perdidas
gestacionales similares aun cuando hubieran recibido un único embrión (18,9%; 11/58)
o recibieran 2 embriones de forma unilateral (22,9%; 8/35). Sin embargo, receptoras que
recibieron 2 embriones en forma bilateral pero que se diagnosticaron preñadas con un
único embrión en el día 32 mostraron una tendencia (P=0,07) a una mayor pérdida
gestacional (36,4%; 12/33) que las que recibieron un único embrión. Este último hallazgo
tiene como causa probable la presencia de receptoras que habiendo recibido 2
embriones en forma bilateral solo uno de ellos haya logrado establecer una preñez, pero
de forma contralateral al cuerpo lúteo. Como consecuencia, la falta de señales locales al
cuerpo lúteo, provenientes del embrión, haya permitido la regresión del mismo indicando
nuevamente la presencia de un mecanismo de reconocimiento y mantenimiento de la
gestación entre el día 32 y 60. Finalmente, la transferencia de 2 embriones de menor
calidad o desarrollo no mostro una mejora en los porcentajes de preñez, pero mostro un

133
 Memorias
marcado aumento en las perdidas gestacionales. En conclusión, la transferencia de 2
embriones no es una estrategia eficiente para aumentar la fertilidad y disminuir las
perdidas gestacionales en receptoras de embriones producidos in vitro.
Conclusiones
Las mayores pérdidas gestacionales en receptoras de embriones producidos in vitro es
una limitante para la aplicación masiva de este sistema reproductivo. Una serie de
factores de riesgo para la fertilidad, relacionados tanto al embrión y la receptora como a
la interacción entre ambos, han sido identificados y proveen una guía para la selección
de receptoras y embriones que maximicen el potencial de establecer una preñez y su
posterior desarrollo.
Los factores relacionados al embrión que mostraron asociaciones significativas con la
fertilidad fueron el estadio y calidad del embrión, así como la edad de la donante. En
relación a la receptora aquellos factores que mostraron relación con la fertilidad fueron:
el tamaño del CL, la condición corporal y la expresión de celo durante el final del
protocolo de sincronización. Las perdidas gestacionales entre el día 32 y 60 pueden
alcanzar niveles mucho mayores a los encontrados en animales que reciben IATF
siendo de esta manera un área de sumo interés. Debido al tiempo que estos animales,
que sufren pérdidas entre el día 32 y 60, permanecen “improductivos” hace que el
costo de estos animales sea mayor al de aquellos que no establecen inicialmente una
preñez. Sin embargo, como fue demostrado hay relativamente pocos factores que
están relacionados a las pérdidas de gestación entre el día 32 y 60. Estos fueron, la
calidad del embrión y la edad de la donante indicando una preponderancia del rol del
embrión en las perdidas entre el día 32 y 60.
Aun cuando los factores indicados previamente pueden contribuir a seleccionar
aquellas receptoras o embriones que maximicen la fertilidad, esto no es siempre
posible debido a la limitada oferta de ambos en muchas circunstancias. De esta
manera el desarrollo, de estrategias que maximicen la fertilidad disminuyendo las
perdidas gestacionales puede ser una valiosa alternativa. La suplementación de
progesterona ya sea mediante la administración de GnRH o la utilización de
dispositivos intravaginales de progesterona puede contribuir a disminuir estas pérdidas.
De ambas estrategias la administración de GnRH en el periodo posovulatorio para
generar CL accesorios es una forma simple y efectiva de suplementar progesterona,
sin embargo, los resultados presentados indican que el mayor beneficio de esta
estrategia es ejercido en aquellas receptoras que reciben embriones de estadios más
avanzados. Este hallazgo así como el mecanismo por el cual la generación de un CL
accesorio disminuye las perdidas gestacionales no ha sido completamente elucidado y
es necesario llevar a cabo futuras investigaciones con este objetivo. Sin embargo, un
hallazgo importante es la aparente presencia de un segundo periodo en el que el CL
debe ser mantenido mediante una señal de embrión. Como consecuencia, el
incremento en las perdidas gestacionales en receptoras de embriones producidos in
vitro puede ser debido a fallas en este mecanismo. Estudios futuros deberán centrarse
en la investigación de este mecanismo con la consecuente posibilidad de desarrollar
mejores estrategias que permitan disminuir las perdidas gestacionales.

134
 Memorias
Bibliografía
Alberto, M. L. V., F. V. Meirelles, F. Perecin, C. E. Ambrosio, P. O. Favaron, A. L. R.
Franciolli, A. M. Mess, J. M. dos Santos, R. E. G. Rici, M. Bertolini and M. A.
Miglino (2013). "Development of bovine embryos derived from reproductive
techniques." Reproduction Fertility and Development 25(6): 907-917.
Bo, G. A., P. S. Baruselli and R. J. Mapletoft (2012). "Increasing pregnancies following
synchronization of bovine recipients." Animal Reproduction 9(3): 312-317.
Bó, G. A., L. C. Peres, L. E. Cutaia, D. Pincinato, P. S. Baruselli and R. J. Mapletoft
(2011). "Treatments for the synchronisation of bovine recipients for fixed-time
embryo transfer and improvement of pregnancy rates." Reproduction, Fertility
and Development 24(1): 272-277.
Carrenho-Sala, L. C., A. Garcia-Guerra, R. V. Sala, M. Fosado, D. C. Pereira, A. Lopez,
J. F. Moreno and M. C. Wiltbank (2016). "Unilateral and bilateral transfer of 2
invitro-produced embryos increases pregnancy loss between 30 and 60 days."
Reproductions Fertility and Development 29(1): 159.
Carrenho-Sala, L. C., R. V. Sala, M. Fosado, D. C. Pereira, S. Garcia, A. Lopez, J. F.
Moreno, A. Garcia-Guerra and M. C. Wiltbank (2015). "107 factors that influence
fertility in an ivf embryo transfer program in dairy heifers." Reproduction, Fertility
and Development 28(2): 183-184.
Carrenho-Sala, L. C., R. V. Sala, M. Fosado, D. C. Pereira, S. Garcia, A. Lopez, J. F.
Moreno, A. Garcia-Guerra and M. C. Wiltbank (2015). "Factors that influence
fertility in an ivf embryo transfer program in dairy heifers." Reproduction, Fertility
and Development 28(2): 183-184.
Carter, F., N. Forde, P. Duffy, M. Wade, T. Fair, M. A. Crowe, A. C. O. Evans, D. A.
Kenny, J. F. Roche and P. Lonergan (2008). "Effect of increasing progesterone
concentration from day 3 of pregnancy on subsequent embryo survival and
development in beef heifers." Reproduction, Fertility and Development 20(3):
368-375.
Clemente, M., J. de La Fuente, T. Fair, A. Al Naib, A. Gutierrez-Adan, J. F. Roche, D.
Rizos and P. Lonergan (2009). "Progesterone and conceptus elongation in cattle:
A direct effect on the embryo or an indirect effect via the endometrium?"
Reproduction 138(3): 507-517.
Farin, P. W. and C. E. Farin (1995). "Transfer of bovine embryos produced in vivo or in
vitro: Survival and fetal development." Biology of Reproduction 52(3): 676-682.
Ferraz, P. A., C. Burnley, J. Karanja, A. Viera-Neto, J. E. P. Santos, R. C. Chebel and
K. N. Galvão (2016). "Factors affecting the success of a large embryo transfer
program in holstein cattle in a commercial herd in the southeast region of the
united states." Theriogenology 86(7): 1834-1841.
Garcia-Guerra, A., R. V. Sala, G. M. Baez, M. Fosado, L. F. Melo, J. C. L. Motta, L.
Leffers, E. A. Walleser, J. C. Ochoa, J. F. Moreno and M. C. Wiltbank (2015).
"Treatment with gnrh on day 5 reduces pregnancy loss in heifers receiving in
vitro-produced expanded blastocysts." Reproduction, Fertility and Development
28(2): 185-186.

135
 Memorias
Garcia Guerra, A., L. F. Melo, R. V. Sala, J. C. L. Motta, L. Leffers, R. Sartori, J. F.
Moreno and M. C. Wiltbank (2016). Pregnancy loss in ivp-et recipient heifers:
Embryo/fetal death or cl regression? . International Congress of Animal
Reproduction, Tours, France.
Gonella-Diaza, A. M., G. Holguin, D. Montana and D. Valbuena (2013). "Corpus luteum
diameter and embryo developmental stage are associated with pregnancy rate:
Data analysis from 17,521 embryo transfers from a commercial in vitro bovine
embryo production program." Animal Reproduction 10(2): 106-111.
Hasler, J. F. (1998). "The current status of oocyte recovery, in vitro embryo production,
and embryo transfer in domestic animals, with an emphasis on the bovine."
Journal of Animal Science 76(suppl_3).
Hasler, J. F. (2012). Bovine embryo transfer: Are efficiencies improving? Applied
Reproductive Strategies in Beef Cattle, Sioux Falls, SD.
Ideta, A., S. Iwasa, T. Takedomi, M. Konishi, S. Sakai, Y. Okamoto, M. Urakawa, A.
Miyamoto and Y. Aoyagi (2003). "Pregnancy rates in recipient heifers after
administration of human chorionic gonadotropin or a gonadotropin-releasing
hormone agonist on day five of the estrous cycle." Theriogenology 59(1): 359.
Lonergan, P., N. Forde and T. Spencer (2015). "Role of progesterone in embryo
development in cattle." Reproduction, Fertility and Development 28(2): 66-74.
Looney, C. R., J. S. Nelson, H. J. Schneider and D. W. Forrest (2006). "Improving
fertility in beef cow recipients." Theriogenology 65(1): 201-209.
Marques, M. O., L. F. Nasser, R. C. P. Silva, G. A. Bo and P. S. Baruselli (2003).
"Increased pregnancy rates in bos taurus x bos indicus embryo recipients with
treatments to increase plasma progesterone concentrations." Theriogenology 59:
369.
Monteiro Jr, P. L. J., A. B. Nascimento, G. C. S. Pontes, G. O. Fernandes, L. F. Melo,
M. C. Wiltbank and R. Sartori (2015). "Progesterone supplementation after
ovulation: Effects on corpus luteum function and on fertility of dairy cows
subjected to ai or et." Theriogenology 84(7): 1215-1224.
Munhoz, A., M. Pereira, F. Lopes and J. L. M. Vasconcelos (2014). "Effect of gnrh
administration at embryo transfer following a e2/p4 based protocol for ftet in
girolando heifers and cows." Animal Reproduction 11(3): 336.
Nascimento, A. B., R. W. Bender, A. H. Souza, H. Ayres, R. R. Araujo, J. N. Guenther,
R. Sartori and M. C. Wiltbank (2013). "Effect of treatment with human chorionic
gonadotropin on day 5 after timed artificial insemination on fertility of lactating
dairy cows." Journal of Dairy Science 96(5): 2873-2882.
Pelizzari, M., A. Tribulo, J. Garzon, B. Bernal, R. Tribulo, H. Tribulo and G. A. Bó
(2015). "Factors affecting pregnancy rates in recipients receiving in vitr-produced
embryos by fixed time embryo transfer." Reproduction, Fertility and Development
28(2): 184-184.
Pereira, M. H. C., M. C. Wiltbank and J. L. M. Vasconcelos (2016). "Expression of
estrus improves fertility and decreases pregnancy losses in lactating dairy cows
that receive artificial insemination or embryo transfer." Journal of Dairy Science
99(3): 2237-2247.
Peterson, A. J. and R. S. F. Lee (2003). "Improving successful pregnancies after
embryo transfer." Theriogenology 59(2): 687-697.

136
 Memorias
Pontes, J. H. F., I. Nonato-Junior, B. V. Sanches, J. C. Ereno-Junior, S. Uvo, T. R. R.
Barreiros, J. A. Oliveira, J. F. Hasler and M. M. Seneda (2009). "Comparison of
embryo yield and pregnancy rate between in vivo and in vitro methods in the
same nelore (bos indicus) donor cows." Theriogenology 71(4): 690-697.
Randi, F., B. Fernandez-Fuertes, M. McDonald, N. Forde, A. K. Kelly, H. Bastos
Amorin, E. Muniz de Lima, F. Morotti, M. Marcondes Seneda and P. Lonergan
(2015). "Asynchronous embryo transfer as a tool to understand embryo–uterine
interaction in cattle: Is a large conceptus a good thing?" Reproduction, Fertility
and Development: -.
Small, J., M. Colazo, D. Ambrose, R. Mapletoft, J. Reeb and J. Kastelic (2004).
"Pregnancy rate following transfer of in vitro- and in vivo-produced bovine
embryos to lh-treated recipients." Reproduction, Fertility and Development 16(2):
213-213.
Tribulo, R., E. Balla, L. Cutaia, G. A. Bo, P. S. Baruselli and L. Peres (2004). "Effect of
treatment with hcg or gnrh at the time of embryo transfer on pregnancy rates in
cows synchronized with progesterone vaginal devices, estradiol benzoate, and
ecg." Reproduction, Fertility and Development 17(2): 234-234.
Vasconcelos, J. L. M., O. G. Sá Filho, P. L. T. Justolin, P. Morelli, F. L. Aragon, M. B.
Veras and S. Soriano (2011). "Effects of postbreeding gonadotropin treatments
on conception rates of lactating dairy cows subjected to timed artificial
insemination or embryo transfer in a tropical environment." Journal of Dairy
Science 94(1): 223-234.
Wallace, L. D., C. A. Breiner, R. A. Breiner, A. R. Spell, J. A. Carter, G. C. Lamb and J.
S. Stevenson (2011). "Administration of human chorionic gonadotropin at embryo
transfer induced ovulation of a first wave dominant follicle, and increased
progesterone and transfer pregnancy rates." Theriogenology 75(8): 1506-1515.
Wilson, R. D., K. A. Weigel, P. M. Fricke, J. J. Rutledge, M. L. Leibfried-Rutledge, D. L.
Matthews and V. R. Schutzkus (2005). "In vitro production of holstein embryos
using sex-sorted sperm and oocytes from selected cull cows." Journal of Dairy
Science 88(2): 776-782.
Wiltbank, M. C., G. M. Baez, A. Garcia-Guerra, M. Z. Toledo, P. L. J. Monteiro, L. F.
Melo, J. C. Ochoa, J. E. P. Santos and R. Sartori (2016). "Pivotal periods for
pregnancy loss during the first trimester of gestation in lactating dairy cows."
Theriogenology 86(1): 239-253.

137
Memorias

138
 Memorias
Programas de IATF e re-IATF en ganado zebuíno

BARUSELLI, P.S.; VIEIRA, L.M.

Departamento de Reprodução Animal, FMVZ-USP, São Paulo, SP, Brazil

INTRODUÇÃO

O sistema de produção de proteína de origem animal sofre constante pressão da grande

demanda do mercado mundial. Principalmente no caso da carne bovina que, com a diminuição
global de áreas disponíveis para criação e a necessidade de maior eficiência por área,
necessitam de constantes estudos para aumentar a eficiência do modelo tradicional de produção.
A produtividade de carne bovina está diretamente relacionada com a eficiência reprodutiva
do rebanho. A obtenção de elevada eficiência reprodutiva dos rebanhos tem sido associada a
boas técnicas de manejo nutricional e sanitário e com a utilização programada de biotecnologias
da reprodução. O Brasil, um dos líderes no mercado mundial de exportação de carne bovina,
encontra-se em lugar de destaque no desenvolvimento científico e na aplicação comercial de
biotecnologias da reprodução, dentre elas, a inseminação artificial em tempo fixo (IATF). Com o
avanço do emprego da IATF, que atingiu 10 milhões de procedimentos em 2015, observou-se
aumento significativo do emprego da inseminação artificial (100% de aumento nos últimos 10
anos), com impacto direto no progresso do melhoramento genético dos rebanhos pela
intensificação da utilização de sêmen de reprodutores com elevado mérito genético. Verificou-
se, também, aumento da eficiência reprodutiva do rebanho pela antecipação da concepção no
período pós-parto (de 1 a 2 meses) e pelo aumento do número de fêmeas gestantes ao final da
estação de monta (de 8 a 10%), quando comparado ao sistema tradicional de produção de
bezerros por monta natural.
No entanto, a baixa eficiência reprodutiva do rebanho nacional ainda é um fator limitante
para o crescimento sustentável da pecuária. O Brasil possui em torno de 74 milhões de fêmeas
em idade reprodutiva e produz apenas 45 milhões de bezerros por ano (~ 65% de taxa de
desmame). Além disso, o país utiliza pouco a inseminação artificial (somente 11% das matrizes
são inseminadas artificialmente), técnica mundialmente utilizada para promover o melhoramento
genético dos rebanhos. As dimensões e a característica do sistema produtivo nacional exigem o
desenvolvimento de programas de inseminação artificial de fácil aplicação em larga escala,
visando diminuir as dificuldades operacionais para sua execução. Os programas reprodutivos

139
 Memorias
visam principalmente a eficiente multiplicação dos animais (PRODUTIVIDADE), o rápido ganho
genético do rebanho (MÉRITO GENÉTICO) e a facilidade de execução (APLICABILIDADE).

POR QUE UTILIZAR IATF?

A eficiência reprodutiva pode ser definida como a habilidade de fazer a vaca se tornar
gestante após o parto o mais rápido e com o menor número de coberturas possível. A reprodução
ineficiente reduz a produtividade por diminuir o número de bezerros disponíveis para a produção
de carne e para a reposição das matrizes, além de aumentar os custos com tratamentos
reprodutivos e as coberturas. Uma fêmea bovina mantida em condições favoráveis tem o
potencial de produzir um bezerro por ano, mantendo um intervalo entre partos (IEP) próximo a
12 meses, considerado ideal zootecnicamente para o sistema de produção de corte. Para que
esse índice seja alcançado as vacas devem conceber até 75 dias (Bos indicus – 290 dias de
gestação) ou 85 dias (Bos taurus – 280 dias de gestação) após a parição. Como as fêmeas
zebuínas (Bos indicus) apresentam gestação mais longa que as taurinas (Bos taurus), seu
período de serviço (intervalo parto-concepção) é reduzido e, portanto, as atividades reprodutivas
devem ser estabelecidas antecipadamente (Figura 1).

Figura 1. Efeito do período de serviço (intervalo parto/concepção) no intervalo entre partos.

140
 Memorias
Além disso, vacas criadas a pasto em condições tropicais, como é o caso da maior parte
do rebanho brasileiro, possuem alta incidência de anestro pós-parto, o que resulta em aumento
do intervalo parto-concepção, do IEP e, consequentemente, redução do desempenho
reprodutivo. No Brasil, a média nacional do intervalo entre partos está em 17 meses. Esses dados
reforçam que o anestro pós-parto é o principal fator que interfere no desempenho reprodutivo de
bovinos manejados em condições tropicais.
Outro aspecto que dificulta a obtenção de bons índices reprodutivos de fêmeas
inseminadas artificialmente é a baixa eficiência de detecção de estro. Em grande parte do Brasil,
o emprego dessa biotecnologia ainda depende da detecção de fêmeas em estro, dificultado o
estabelecimento do programa reprodutivo e, consideravelmente, limitando o uso da inseminação
artificial (IA). De maneira geral, programas de IA após detecção de estro apresentam resultados
satisfatórios na taxa de concepção (número de animais gestantes por IA). No entanto, baixa taxa
de prenhez (número de animais gestantes por números de animais aptos à reprodução) é
alcançada devido à baixa taxa de serviço (número de animais detectados em cio e inseminados
por números de animais aptos à reprodução), reflexo da baixa eficiência de detecção de estro.
Portanto, os principais entraves que reduzem a eficiência reprodutiva de rebanhos
inseminados artificialmente no Brasil estão associados principalmente ao anestro pós-parto e à
falha na detecção de cio. Tais fatores são agravados quando consideramos as condições
climáticas (o estresse calórico bloqueia a ciclicidade e a manifestação do cio), o sistema de
criação a pasto (condições extensivas diminuem a eficiência de detecção de cio), as
particularidades da espécie Bos indicus (estro de menor duração e predominantemente noturno
– rebanho predominante no Brasil) e as dificuldades com a mão de obra qualificada no campo
(erros de manejo para detecção de cio).
No entanto, esses obstáculos têm sido contornados com sucesso pela utilização de
protocolos de sincronização da ovulação para IATF. O emprego da IA no Brasil tem apresentado
crescimento significativo nos últimos anos (Baruselli et al., 2012). A crescente utilização da
biotécnica da reprodução está associada ao maior emprego da IATF no rebanho bovino. Os
dados mostram que a IATF atingiu 70% do total das inseminações realizadas em nosso país em
2014 (estimativa levando em consideração os dados da Asbia e a venda de produtos para
sincronização). Dessa forma, a expansão da IA tem possibilitado grande avanço no
melhoramento genético, pelo incremento do número de bezerros nascidos de touros
geneticamente superiores.

141
 Memorias
POR QUE UTILIZAR PROGRAMAS DE RESSINCRONIZAÇÃO?

A ressincronização se refere à sincronização do estro e da ovulação de uma fêmea que foi

previamente inseminada após a observação de cio ou após a IATF. O objetivo da técnica é
eliminar a necessidade de observação de cio, diminuir o número de touros para repasse e
melhorar a eficiência reprodutiva dos rebanhos. Essas características reduzem o intervalo entre
inseminações e antecipa a concepção no período pós-parto, reduzindo o entre partos e
aumentando o número de produtos oriundos de IA que podem determinar maior valor agregado
ao produtor.
A ressincronização em fêmeas de corte no Brasil tem sido realizada em dois momentos
distintos: 1. Início da ressincronização em todas as fêmeas 22 dias após a primeira IATF, antes
do diagnóstico de gestação; e 2. Início da ressincronização no dia do diagnóstico de gestação
(28 a 32 dias após a primeira IATF; Figura 2).
A escolha do momento para início do protocolo de ressincronização é dependente do
manejo da propriedade, dos lotes da fazenda, dos custos envolvidos e da mão de obra disponível
(disponibilidade do veterinário para realização da ultrassonografia e dos funcionários da fazenda
para o manejo dos animais). A ressincronização iniciada 22 dias após a IATF prévia proporciona
antecipação em oito dias na realização da 2a IATF quando comparada a ressincronização
realizada no dia do diagnóstico de gestação (com 30 dias após a IATF prévia), Esse programa
reprodutivo pode ser indicado para evitar atraso na concepção do início da estação de monta
(evitar futuros problemas reprodutivos das matrizes) e em lotes de fêmeas vazias
ressincronizados no final da estação reprodutiva (evitando o descarte de animas não gestantes).
Essa possibilidade também pode ser de grande interesse para fazendas que precificam bezerros
por quilo de peso vivo, proporcionando o nascimento precoce dos bezerros na estação de
parição.
Por outro lado, o protocolo para ressincronização antes do diagnóstico de gestação obriga
o tratamento de 100% dos animais do lote (gestantes e não gestantes) previamente inseminados
em tempo fixo. Ainda, com esse tipo de manejo, a realização da ultrassonografia, juntamente
com a retirada de implantes, passa ser data fixa e não flexível, exigindo maior organização e
disponibilidade do médico veterinário.

142
 Memorias

Figura 2. Desenho esquemático dos manejos para a ressincronização de fêmeas de corte para IATF: 1.
Início da ressincronização, em todos os animais submetidos à primeira IATF, 22 dias após a IATF; e 2.
Início da ressincronização no dia do diagnóstico de gestação (28 a 32 dias após a primeira IATF), apenas
nos animais não gestantes. Protocolo IATF - protocolo de sincronização da ovulação; IATF – inseminação
artificial em tempo fixo; US – diagnóstico de gestação por ultrassonografia.

Já, os programas de ressincronização que têm início no momento do diagnóstico de

gestação, apresentam maior flexibilidade. O início do protocolo pode variar do dia 28 ao 32 após
a primeira IATF, de acordo com a rotina e disponibilidade do veterinário e do pessoal na
propriedade. Além disso, o tratamento somente é realizado nas fêmeas não gestantes, o que
reduz os custos com tratamento. Como desvantagem ocorre atraso no intervalo entre
inseminações (aproximadamente 40 dias)
Diante da crescente utilização dos programas de ressincronização nas propriedades,
introduziu-se uma segunda sincronização (3 IATFs; Figura 3). O manejo reprodutivo com duas
ressincronizações (3 IATFs consecutivas), também pode ser realizado utilizando a
ressincronização antes ou após o diagnóstico de gestação. Quando se utiliza a ressincronização
antes do diagnóstico de gestação (22 dias após a prévia IATF), com três IATFs consecutivas
obtêm-se 87,4% de taxa de prenhez ao final do programa reprodutivo (Figura 4) em apenas 64
dias de estação de monta.

143
 Memorias

Figura 3. Manejo reprodutivo durante a estação de monta de bovino de corte: 1. Uma IATF e monta natural
(90 dias de estação de monta); 2. Duas IATFs (ressincronização 32 dias após IATF prévia – após
diagnóstico de gestação) e monta natural (90 dias de estação de monta); 3. Duas IATFs (ressincronização
22 dias após IATF prévia – antes do diagnóstico de gestação) e monta natural (90 dias de estação de
monta); 4. Três IATFs (duas ressincronizações 32 dias após IATF prévia – após diagnóstico de gestação
- 84 dias de estação de monta); 5. Três IATFs (duas ressincronizações 22 dias após IATF prévia – após

144
 Memorias
diagnóstico de gestação - 64 dias de estação de monta). Protocolo IATF - protocolo de sincronização da
ovulação; IATF – inseminação artificial em tempo fixo; US – diagnóstico de gestação.

Figura 4. Taxa de prenhez em vacas de corte Bos indicus após programa de ressincronização com início
22 dias após IATF prévia. Adaptado de Crepaldi et al. (2014).

Outra grande vantagem do emprego dos programas de ressincronização é o

planejamento da estação de monta dos anos consecutivos. Devido ao curto intervalo entre
inseminações (32 a 42 dias), as vacas paridas nos dois primeiros meses de parição (ex.: agosto
e setembro) são capazes de receber 3 IATFs em uma estação de monta de 90 dias. Ainda, as
vacas paridas no terceiro mês (ex.: outubro) estão aptas para receberem 2 IATFs na mesma
estação de monta (ex.: novembro a janeiro). Os resultados desses estudos foram indicativos de
que aproximadamente 85% das vacas se tornam gestantes ao final da estação de monta quando
da utilização desse programa reprodutivo (Tabela 5). Além disso, esses dados, associado ao
fato de que é possível iniciar o tratamento para sincronização com 30 dias pós-parto,
demonstram que 50% das vacas paridas no terceiro mês de parição (ex.: outubro – ou seja,
animais que recebem apenas 2 IATFs) têm antecipação da parição para o segundo mês de
parição (ex.: setembro), viabilizando a utilização nesses animais de 3 IATFs na próxima estação
de monta. Também, as fêmeas paridas nos dois primeiros meses (agosto e setembro) que
concebem apenas na terceira IATF (janeiro) atrasarão a parição na estação de monta seguinte
e receberão apenas 2 IATFs. Dessa forma, após 4 a 5 anos de utilização dos manejos de
ressincronização durante a estação de monta, espera-se que a distribuição dos partos na
propriedade seja 49% no primeiro mês de parição, 34% no segundo mês de parição e 17% no
terceiro mês de parição (Tabela 1). Portanto, 83% das fêmeas receberão 3 IATFs com 87,5% de
prenhez e 17% das fêmeas receberão 2 IATFs com 75% de prenhez, resultando em 85,4% de
taxa de prenhez do rebanho ao final da estação de monta de 90 dias (Tabela 1).

145
 Memorias
Tabela 1. Distribuição dos partos e eficiência reprodutiva em rebanhos bovinos que utilizam programas de
ressincronização em 90 dias de estação de monta (EM).

MÊS DE PARIÇÃO DISTRIBUIÇÃO NÚMERO IATF NA EM TAXA DE PRENHEZ

DOS PARTOS
AGO 49% 3 87,5
SET 34% 3 87,5
OUT 17% 2 75,0

TOTAL 100% 85,4

Visando reduzir ainda mais o intervalo entre inseminações, esforços tem sido empregados para
possibilitar o início do protocolo de ressincronização ainda mais precocemente (super precoce), no diestro
subsequente a IATF (13 a 14 dias após a IATF; VIEIRA, et al., 2014). Para que seja possível a utilização
deste modelo, o diagnóstico dos animais não gestantes deve ser realizado através da avaliação da
vascularização do CL, utilizando-se o ultrassom com função color-Doppler. Assim como na
ressincronização precoce, todas as fêmeas devem iniciar o tratamento de ressincronização, porém,
apenas aquelas diagnosticadas como vazias (CL com baixo fluxo sanguíneo) recebem a segunda
inseminação, resultando intervalo entre inseminações ainda mais curto (Figura 5).

Figura 5. Desenho esquemático dos 3 tipos de manejos para a ressincronização de fêmeas de corte para
IATF: Ressincronização tradicional = início da ressincronização no dia do diagnóstico de gestação (28 a
32 dias após a primeira IATF), apenas nos animais não gestantes; Ressincronização precoce = início da

146
 Memorias
ressincronização, em todos os animais submetidos à primeira IATF, 22 dias após a IATF; e
Ressincronização super precoce = início da ressincronização, em todos os animais submetidos à primeira
IATF, 14 dias após a IATF e diagnóstico de gestação pela vascularização do CL. Protocolo IATF =
protocolo de sincronização da ovulação; IATF = inseminação artificial em tempo fixo; US = diagnóstico de
gestação por ultrassonografia.

Nesses estudos, verificou-se que a aplicação de 2 mg BE no início do protocolo de

ressincronização (13 a 14 dias após prévia IA) induziu luteólise em parte dos animais tratados e reduziu a
taxa de concepção (VIEIRA et al., 2014), fato que não ocorre em vacas ressincronizadas precocemente
(22 dias após a IATF; SÁ FILHO et al., 2014). Esses resultados estão em conformidade com estudos
anteriores que demonstraram redução da habilidade do CL em produzir P4 em fêmeas tratadas com BE
no meio do ciclo estral (EL-ZARKOUNY & STEVENSON, 2004; MUNRO & MOORE, 1985). Isso pode
estar relacionado ao fato de o aumento de E2 estar vinculado a indução da liberação de PGF (THATCHER
et al., 1986; ARAUJO et al., 2009).

Dentro deste contexto, os programas de ressincronização super precoce passaram a ser

realizados sem o uso de estradiol no início do tratamento, utilizando-se somente 100 mg de P4 injetável
(Afisterone®, Hertape Calier) no momento da inserção de dispositivo de P4 (14 após a IATF) para induzir
a emergência de uma nova onda de crescimento folicular. Rezende et al., (2016) verificaram que a nova
onda de crescimento folicular teve início 3,0 ± 0,7 dias após o tratamento com 100 mg de P4 i.m. em vacas
Nelore. Em seguida, Penteado et al., (2016) compararam a ressincronização precoce (22 dias) com a
super precoce (14 dias) em 244 vacas Nelore lactantes. Neste estudo todas as fêmeas receberam a
primeira IATF (Dia 0) e foram distribuídas em dois programas de ressincronização: super precoce (ECC =
3,0; n = 118) e precoce (ECC = 3,0; n = 126). As vacas que receberam ressincronização super precoce
foram tratadas 14 dias após IATF (D14) com dispositivo de P4 associado a 100 mg de P4 i.m. (Afisterone®,
HertapeCalier). No D22 foi realizado o diagnóstico de gestação pelo fluxo sanguíneo do CL, utilizando-se
ultrassonografia com modo Collor Doppler (Mindray M5Vet, DPS São Paulo). As vacas que possuíam CL
com fluxo sanguíneo baixo ou ausente foram consideradas não gestantes e seguiram no protocolo para
IATF [remoção do dispositivo de P4 e administração de 0,530 mg de cloprostenol sódico (PGF), 1 mg de
CE e 300 UI de eCG i.m.; IATF 48 horas após (D24)]. As vacas gestantes passaram por remoção do
dispositivo de P4 sem tratamento adicional. As vacas que recebeu a ressincronização precoce foram
tratadas no D22 com dispositivo de P4 associado a 2 mg de BE i.m.. No D30 o dispositivo foi removido e
foi realizado o diagnóstico de gestação por ultrassonografia convencional (modo B; Mindray, M5VET,
China). As vacas não gestantes foram tratadas conforme descrito para o grupo super precoce, com IATF
no D32. Os resultados obtidos em vacas ressincronizadas super precoce e precocemente foram,
respectivamente: taxa de concepção à primeira IATF 53% vs. 48% (P=0,57), taxa de concepção à
ressincronização 51% vs. 56% (P=0,37) e taxa de prenhez acumulada após a ressincronização [75%
(89/118) em 24 dias de estação de monta e 77% (97/126) em 32 dias de estação de monta; P = 0,77].
Além de manter semelhante taxa de concepção à IATF e reduzir o intervalo entre inseminações, a

147
 Memorias
ressincronização super precoce aumenta consideravelmente a taxa de serviço a cada 21 dias (de 66%
para 87,5%) em relação à ressincronização precoce, como demonstrado na figura 6

TAXA DE SERVIÇO A CADA 21 DIAS (TS 21d) = (intervalo ciclo estral/intervalo entre IATF)*100

RESSINC ANTES DG TS 21d = (21/24) = 87,5%

14 d PÓS IATF IATF 24d IATF 24d IATF
24 d PÓS IATF (ressicronização superprecoce)

RESSINC ANTES DG TS 21d = (21/32) = 66%

22 d PÓS IATF IATF 32d IATF 32d IATF
32 d PÓS IATF (ressincronização precoce)

RESSINC PÓS DG TS 21d = (21/35) = 52,5%

30 d PÓS IATF IATF 40d IATF 40d IATF
(ressincronização tradicional)
40 d PÓS IATF

Modelo IDEAL IA TS IA TS IA TS IA TS IA TS 21d = 100%

100% 100% 100% 100% (todos animais ciclando com
(hipoté co)
100% de detecção de estro)
0 21 42 63 84

Figura 6. Taxa de serviço (TS) nos diferentes modelos de ressincronização. Ressincronização super
precoce (14 dias após IATF prévia, com intervalo entre IATFs de 24 dias) com TS = 87,5%;
Ressincronização precoce (22 dias após IATF prévia, com intervalo entre IATFs de 32 dias) com TS =
66%; Ressincronização após o diagnóstico de gestação, 30 dias após IATF prévia e com intervalo entre
IATFs de 40 dias) com. TS = 52,5%; Modelo ideal considerando retorno ao estro a cada 21 dias com TS =
100%.

A escolha de qual modelo de ressincronização utilizar depende do sistema de produção, do manejo

de pastos e lotes na fazenda, da disponibilidade de mão de obra tanto do médico veterinário para
realização do diagnóstico de gestação, quanto dos funcionários da fazenda para o manejo dos animais.
Nas figuras 4 e 5 são apresentados os desenhos esquemáticos dos diferentes métodos de
ressincronização seguida ou não de monta natural que podem ser utilizados em programas reprodutivos
de gado de corte no Brasil.

CONCLUSÕES

Atualmente, os protocolos de sincronização da ovulação para IATF já estão definidos e

estão sendo utilizados em larga escala pelo produtor brasileiro. Essa tecnologia foi capaz de
contornar alguns dos principais desafios da pecuária brasileira (anestro pós-parto e dificuldade

148
 Memorias
de detecção do cio), viabilizando o emprego sistematizado e eficiente da inseminação artificial
programada. A aplicação da IATF melhora a eficiência reprodutiva dos rebanhos, aumentando a
quantidade e a qualidade de bezerros produzidos com consequente aumento do retorno
econômico da pecuária. Diante desses resultados, hoje os técnicos e os produtores buscam
intensificar a utilização da IATF por meio dos programas de ressincronização, com resultados
bastante promissores. Por fim, é importante reforçar que outros fatores tais como nutrição,
sanidade e a disponibilidade e a qualificação profissional estão diretamente relacionados com o
sucesso do uso dessas biotecnlogias.

REFERÊNCIAS CONSULTADAS

ANUALPEC. Anuário da Pecuária Brasileira. São Paulo: Instituto FNP, 2015.

ARAUJO, R. R.; GINTHER, O. J.; FERREIRA, J. C.; PALHÃO, M. M.; BEG, M. A.; WILTBANK, M. C. Role of
Follicular Estradiol-17beta in Timing of Luteolysis in Heifers. Biology of Reproduction, v. 81, p. 426-437,
2009.
ASBIA. Associação Brasileira de Inseminação Artificial. Disponível em <
http://www.asbia.org.br/novo/relatorios/>. Acesso em: março de 2016.
AYRES, H.; FERREIRA, R. M.; CUNHA, A. P.; ARAÚJO, R. R.; WILTBANK, M. C. Double-Ovsynch in high-
producing dairy cows: effects on progesterone concentrations and ovulation to GnRH treatments.
Theriogenology, v. 1, n. 79(1), p. 159-64, 2013.
BARBUIO, J. P.; GIROTTO, R. W.; MARQUES, M. O.; PENTEADO, L.; REZENDE, R. G.; MINGOTI, R. D.;
COLLI, M. H. A.; VIEIRA, L. M.; BARUSELLI, P. S. Pregnancy rate of lactating nelore cows synchronized
with progesterone devices or new progestogen implants or used for eight or nine days. Animal
Reproduction, Accepted, 2016.
BARUSELLI, P. S.; REIS, E. L.; MARQUES, M. O.; NASSER, L. F.; BÓ, G. A. The use of hormonal treatments
to improve reproductive performance of anestrous beef cattle in tropical climates. Animal Reproduction
Science, v. 82-83, p. 479–486, 2004.
BARUSELLI, P. S.; SALES, J. N. S.; SALA, R. V.; VIEIRA, L. M.; SÁ FILHO, M. F. Evolução e perspectivas
dos programas de inseminação artificial em tempo fixo no Brasil. Animal Reproduction, v. 9, p. 30-43,
2012.
BARUSELLI, P. S. IATF supera dez milhões de procedimentos em apmplia o mercado de trabalho. Revista
CFMV, nº 69, p. 57-60, 2016.
BÓ, G. A.; PIERSON, R. A.; MAPLETOFT, R. J. The effect of estradiol valerate on follicular dynamics and
superovulatory response in cows with Syncro-Mate-B implants. Theriogenology, v. 36, p. 169-183, 1991.

149
 Memorias
BÓ, G. A.; ADAMS, G. P.; NASSER, L. F.; PIERSON, R. A.; MAPLETOFT, R. J. Effect of estradiol valerate
on ovarian follicles, emergence of follicular waves and circulating gonadotropins in heifers.
Theriogenology, v. 40, p. 40:225-239, 1993.
BÓ, G. A.; ADAMS, G. P.; CACCIA, M.; MARTINEZ, M.; PIERSON, R. A.; MAPLETOFT, R. J. Ovarian
follicular wave emergence after treatment with progestogen and estradiol in cattle. Animal Reproduction
Science, v. 39, p. 193–204, 1995.
BÓ, G. A.; BARUSELLI, P. S.; MORENO, D.; CUTAIA, L.; CACCIA, M.; TRÍBULO, R.; TRÍBULO, H.;
MAPLETOFT, R. J. The control of follicular wave development for selfappointed embryo transfer programs
in cattle. Theriogenology, v. 57, p. 53-72, 2002.
BÓ, G.A.; BARUSELLI, P.S.; MAPLETOFT, R. J. Synchronization techniques to increase the utilization of
artificial insemination in beef and dairy cattle. Animal Reproduction, v. 10, p. 137–142, 2013.
BÓ, G. A.; JAVIER DE LA MATA, J.; BARUSELLI, P. S.; MENCHACA, A. Alternative programs for
synchronizing and re-synchronizing ovulation in beef cattle. Theriogenology, v. 86, p. 388–396, 2016.
BURKE, C. R.; MACMILLAN, K. L.; BOLAND, M. P. Oestradiol potentiates a prolonged progesterone-induced
suppression of LH release in ovariectomised cows. Animal Reproduction Science, v. 45, p. 13-28, 1996.
CARVALHAES, R. P. A.; COLLI, M. H. A.; ALMEIDA, T. T.; MINGOTI, R. D.; VIEIRA, L. M.; SANTOS, M. H.;
SALES, J. N. S.; BARUSELLI, P. S. Pregnancy rate following FTA of nelore (Bos indicus) cows submitted
to protocols of 3 or 4 cattle handling with administration of PGF in different moments. Animal Reproduction,
Accepted, 2016.
CARVALHO, J. B. P.; CARVALHO, N. A. T.; REIS, E. L.; NICHI, M.; SOUZA, A. H.; BARUSELLI, P. S. Effect
of early luteolysis in progesterone-based timed AI in Bos indicus, Bos indicus x Bos taurus, and Bos taurus
heifers. Theriogenology, v. 69, p. 167-175, 2008.
CEPEA. Centro de Estudos Avançados em Economia Aplicada – Leite. Disponível em <
http://cepea.esalq.usp.br/leite/>. Acesso em: 01 março de 2016a.
CEPEA. Centro de Estudos Avançados em Economia Aplicada – Leite. Disponível em <
http://cepea.esalq.usp.br/leite/>. Acesso em: 20 de julho de 2016b.
CERRI, R. L. A.; RUTIGLIANO, H. M.; CHEBEL, R. C.; SANTOS, J. E. P. Period of dominance of the ovulatory
follicle influences embryo quality in lactating dairy cows. Reproduction, v. 137, p. 813–823, 2009.
CLARO JÚNIOR, I.; SÁ FILHO, O. G.; PERES, R. F. G.; AONO, F. H. S.; DAY, M. L.; VASCONCELOS, J. L.
M. Reproductive performance of prepubertal Bos indicus heifers after progesterone-based treatments.
Theriogenology, v. 74, p. 903–911, 2010.
COLLI, M. H. A.; CARVALHAES, R. P. A.; MINGOTI, R. D.; VIEIRA, L. M.; REZENDE, R. G.; SANTOS, M.
H.; SALES, J. N. S.; BARUSELLI, P. S. Pregnancy rate to FTAI of Crossbred heifers (B. indicus x B.
taurus) submitted to protocols of 3 or 4 handling cattle. Animal Reproduction, Accepted, 2016.
CREPALDI, G. A.; FREITAS, B. G.; VIEIRA, L. M.; SÁ FILHO, M. F.; GUERREIRO, B. M.; BARUSELLI, P.
S. Reproductive efficiency of Nelore females submitted to three consecutive FTAI programs with 32 days

150
 Memorias
of interval between inseminations. In: Proceedings of the 28th Annual Meeting of Brazilian Embryo
Technology Society (SBTE), Anais...2014.

DAVOODI, S.; COOKE, R. F.; FERNANDES, A. C. C.; CAPPELLOZZA, B. I.; VASCONCELOS, J. L. M.;
CERRI, R. L. A. Expression of estrus modifies the gene expression profile in reproductive tissues on day
19 of gestation in beef cows. Theriogenology, v. 85, p. 645-655, 2016.
DAY, M. L. State of the art of GnRH - based timed AI in beef cattle. Animal Reproduction, v. 12, p. 473–478,
2015.
EL-ZARKOUNY, S. Z., and J. S. STEVENSON. Resynchronizing estrus with progesterone or progesterone
plus estrogen in cows of unknown pregnancy status. Journal of Dairy Science, v. 87, p. 3306-3321, 2004.
FREITAS, B. G.; MINGOTI, R. D.; RAMOS, L.; VASCONCELLOS, G. S. F. M.; CREPALDI, G. A.;
MONTEIRO, B. M.; GUERREIRO, B. M.; VIEIRA, L.M.; SÁ FILHO, M.F., BARUSELLI, P.S. Evaluation of
different nutritional and physical development parameters on reproductive efficiency of Nellore heifers at
13 months of age submitted to FTAI. Animal Reproduction, v. 11, p. 343, 2014.
GEARY, T. W.; WHITTIER, J. C.; HALLFORD, D. M.; MACNEIL, M. D. Calf removal improves conception
rates to the Ovsynch and Co-synch protocols. Journal of Animal Science, v. 79, p. 1–4, 2001.
GUERREIRO, B. M.; FREITAS, B. G.; MINGOTI, R. D.; BATISTA, E. O. S.; CREPALDI, G. A.; SÁ FILHO, M.
F.; VIEIRA. L. M.; MONTEIRO, B. M.; BARUSELLI, P. S. Reproductive efficiency of 24 months old
primiparous Nelore cows and submitted to resynchronization programs after TAI. Animal Reproduction, v.
12, p. 633, 2015.
HAWK, H. W. Sperm survival and transport in the female reproductive tract. Journal of Dairy Science, v. 66,
p. 2645–2660, 1983.
HILLEGLASS, J.; LIMA, F. S.; SÁ FILHO, M. F.; SANTOS, J. E. P. Effect of time of artificial insemination and
supplemental estradiol on reproduction of lactating dairy cows. Journal of Dairy Science, v. 91, p. 4226–
4237, 2008.
LIMA FILHO, R.R.; AGUIAR, G.A.M; TORRES JUNIOR, A.D. 2014. Rentabilidade em 2013 - O agronegócio
e o mercado financeiro. Agroanalysis, Mar. 2014.
LONERGAN, P. Influence of progesterone on oocyte quality and embryo development in cows.
Theriogenology, v. 76, n. 9, p. 1594–1601, 2011.
MANN, G. E.; LAMMING, G. E. The role of sub-optimal preovulatory oestradiol secretion in the aetiology of
premature luteolysis during the short oestrous cycle in the cow. Animal Reproduction Science, v. 64, p.
171–180, 2000.
MANTOVANI, A. P.; NICHI, M.; SÁ FILHO, M. F.; AYRES, H.; VETTORATO, L. F.; BÓ, G. A. Follicular growth
and plasma progesterone patterns in Bos indicus x Bos taurus heifers submitted to different PGF2α /
progesterone-based synchronization protocols, Animal Reproduction, v. 7, p. 91–96, 2010.
MENDANHA, M. F.; SALA, R. V.; REIS, T. A. N. P. S.; CARVALHO, F. J.; GUIMARÃES, L. H. C.; MACEDO,
G. G.; SÁ FILHO, M. F.; BARUSELLI, P. S. Momento da administração de prostaglandina e número de

151
 Memorias
utilizações do dispositivo de progesterona na eficiência da IATF em novilhas girolando. In: Anais da XXVI
Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões (SBTE), Anais...2012.
MENEGHETTI, M.; SA FILHO, O. G.; PERES, R. F. G.; LAMB, C. G.; VASCONCELOS, J. L. M. Fixed-time
artificial insemination with estradiol and progesterone for Bos indicus cows I: Basis for development of
protocols. Theriogenology, v. 72, p. 179–189, 2009.
MINGOTI, R. D.; VIEIRA, L. M.; RAMOS, R. S.; BASTOS, M. R.; REZENDE, M. L. G.; CARNEIRO, T. BELLI,
R. S.; MARTIGNONI, L. G.; BARUSELLI, P. S. Conception rate of Holstein cows submitted to TAI protocol
using intravaginal progesterone-releasing device for 8 or 9 days. In: 18th International Congress on Animal
Reproduction, Le Vinci in Tours, França, p. 507, 2016a.
MINGOTI, R. D.; BASTOS, M. R.; TEIXEIRA, A. A.; REZENDE, M. L. G.; CASTRO, M. W.; FAQUIN, A.; SÁ
FILHO, M. F.; BARUSELLI, M. F. Pregnancy rate to TAI Nelore (Bos indicus) protocol submitted to 3 or 4
managements using Sincrogest® or CIDR® New and Reused. Animal Reproduction, Accepted, 2016b.
MOREIRA, F.; ORLANDI, C.; RISCO, C. A.; MATTOS, R.; LOPES, F; THATCHER, W. W. Effects of
presynchronization and bovine somatotropin on pregnancy rates to timed artificial insemination protocol
in lactating dairy cows. Journal of Dairy Science, v. 84, p. 1646–59, 2001.
MOTTA, J. C. L.; PENTEADO, L.; MINGOTI, R. D.; REZENDE, R. G.; COLLI, M. H. A.; LUGO, L. C.;
BAYEUX, B. M.; BÓ, G. A.; BARUSELLI, P. S. Pregnancy rate to FTAI in Nelore and Crossbreed heifers
submitted to J-Synch protocol (6 days). Animal Reproduction, Accepted, 2016.
MUNRO, R. K.; MOORE, N. W. Effects of progesterone, oestradiol benzoate and cloprostenol on luteal
function in the heifer. Journal of Reproduction and Fertility,;v. 73, p. 353–359, 1985.
NAVANUKRAW, C.; REDMER, D. A.; REYNOLDS, L. P.; KIRSCH, J. D.; GRAZUL- BILSKA, A. T.; FRICKE,
P. M. A modified presynchronization protocol improves fertility to timed artificial insemination in lactating
dairy cows. Journal of Dairy Science, v. 87, p. 1551–1557, 2004.
O'ROURKE, M.; DISKIN, M. G.; SREENAN, J. M.; ROCHE, J. F. The effect of dose and route of oestradiol
benzoate administration on plasma concentrations of oestradiol and FSH in long-term ovariectomised
heifers. Animal Reproduction Science, v. 59, p. 1-12, 2000.
PENTEADO, L.; REZENDE, R. G.; MINGOTI, R. D.; COLLI, M. H. A.; MOTTA, J. C. L.; BAYEUX, B. M.;
SANTOS, F. B.; VIEIRA, L. M.; SÁ FILHO, M. F.; BARUSELLI, M. F. Pregnancy rate of Nelore cows
submitted to resynchronization 14 or 22 days after TAI. Animal Reproduction, Accepted, 2016.
PITALUGA, P. C. S. F.; SÁ FILHO, M. F.; SALES, J. N. S.; BARUSELLI, P. S.; VINCENTI, L. Manipulation of
the proestrous by exogenous gonadotropin and estradiol during a timed artificial insemination protocol in
suckled Bos indicus beef cows. Livestock Science, v. 154, p. 229–234, 2013.
POHLER, K. Y.; GEARY, T. C.; ATKINS, J.; PERRY, G.,; JINKS, E.; SMITH, M. Follicular determinants of
pregnancy establishment and maintenance. Cell and Tissue Research, v. 349, p. 1–16, 2012.
PURSLEY, J. R.; MEE, M. O.; WILTBANK, M. C. Synchronization of ovulation in dairy cows using PGF2alpha
and GnRH. Theriogenology, v. 44, p. 915–923, 1995.

152
 Memorias
PURSLEY, J. R.; SILCOX, R. W.; WILTBANK, M. C. Effect of time of artificial insemination on pregnancy
rates, calving rates, pregnancy loss, and gender ratio after synchronization of ovulation in lactating dairy
cows. Journal of Dairy Science, v. 81, p. 2139–2144, 1998.
REZENDE, R. G.; FREITAS, B. G.; MINGOTI, R. D.; COLLI, M. H. A.; CARVALHO, J. B. P.; SÁ FILHO, M.
F.; MOTTA, J. C. L.; MACEDO, G. G.; BARUSELLI, P. S. Follicular dynamics of Nelore cows submitted
to resynchronization 14 days after TAI using injectable P4 for synchronization of follicular wave. Animal
Reproduction, Accepted, 2016.
ROBINSON, R.; MANN, G.; LAMMING, G.; WATHES, D. Expression of oxytocin, oestrogen and progesterone
receptors in uterine biopsy samples throughout the oestrous cycle and early pregnancy in cows.
Reproduction, v. 122, p. 965–979, 2001.
SÁ FILHO, M. F.; AYRES, H.; FERREIRA, R. M.; MARQUES, M. O.; REIS, E. L.; SILVA, R. C. P.;
RODRIGUES, C. A.; MADUREIRA, E. H.; BÓ, G. A.; BARUSELLI, P. S. Equine chorionic gonadotropin
and gonadotropin-releasing hormone enhance fertility in a norgestomet-based, timed artificial insemination
protocol in suckled Nelore (Bos indicus) cows. Theriogenology, v. 73, p. 651–658, 2010a.
SÁ FILHO, M. F.; TORRES-JÚNIOR, J. R. S.; PENTEADO, L.; GIMENES, L. U.; FERREIRA, R. M.; AYRES,
H.; CASTRO E PAULA, L. A.; SALES, J. N. S.; BARUSELLI, P. S. Equine chorionic gonadotropin improves
the efficacy of a progestin-based fixed-time artificial insemination protocol in Nelore (Bos indicus) heifers.
Animal Reproduction Science, v. 118, p. 182–187, 2010b.
SÁ FILHO, M.F.; SANTOS, J. E. P.; FERREIRA, R. M.; SALES, J. N. S.; BARUSELLI, P. S. Importance of
estrus on pregnancy per insemination in suckled Bos indicus cows submitted to estradiol/progesterone-
based timed insemination protocols. Theriogenology, v. 76, p. 455–463, 2011a.
SÁ FILHO, M. F.; BALDRIGHI, J. M.; SALES, J. N. S.; CREPALDI, G. A.; CARVALHO, J. B. P.; BÓ, G. A.;
BARUSELLI, P. S. Induction of ovarian follicular wave emergence and ovulation in progestin-based timed
artificial insemination protocols for Bos indicus cattle. Animal Reproduction Science, v. 129, p. 132–139,
2011b.
SÁ FILHO, M. F.; PENTEADO, L.; REIS, E. L.; REIS, T. A. N. P. S.; GALVÃO, K. N.; BARUSELLI, P. S.
Timed artificial insemination early in the breeding season improves the reproductive performance of
suckled beef cows. Theriogenology, v. 79, p. 625–632, 2013.
SÁ FILHO, M. F., MARQUES, M. O.; GIROTTO, R.; SANTOS, F. A.; SALA, R. V.; BARBUIO, J. P.;
BARUSELLI, P. S. Resynchronization with unknown pregnancy status using progestin-based timed
artificial insemination protocol in beef cattle. Theriogenology, v. 81, p. 284-290, 2014.
SÁ FILHO, O. G.; MENEGHETTI, M.; PERES, R. F. G.; LAMB, G. C.; VASCONCELOS, J. L. M. Fixed-time
artificial insemination with estradiol and progesterone for Bos indicus cows II: Strategies and factors
affecting fertility. Theriogenology, v. 72, p. 210–218, 2009.
SALES, J. N. S.; CREPALDI, G. A.; GIROTTO, R. W.; SOUZA, A. H.; BARUSELLI, P. S. Fixed-time AI
protocols replacing eCG with a single dose of FSH were less effective in stimulating follicular growth,

153
 Memorias
ovulation, and fertility in suckled-anestrus Nelore beef cows. Animal Reproduction Science, v. 124, p. 12–
18, 2011.
SANTOS, M. H. dos. Desenvolvimento de procolos para IATF com 7 dias de permanência do CIDR® em
fêmeas Nelore. 2016. São Paulo, 80p. Dissertação (Mestre em Ciências), Faculdade de Medicina
Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, São Paulo, 2016.
SOUZA, A. H.; GÜMEN, A.; SILVA, E. P. B.; CUNHA, A. P.; GUENTHER, J. N.; PETO, C. M.; CARAVIELLO,
D. Z.; WILTBANK, M. C. Supplementation with estradiol-17β before the last gonadotropin-releasing
hormone injection of the ovsynch protocol in lactating dairy cows. Journal of Dairy Science, v. 90, p. 4623–
4634, 2007.
SOUZA, A. H.; AYRES, H.; FERREIRA, R. M.; WILTBANK, M. C. A new presynchronization system (Double-
Ovsynch) increases fertility at first postpartum timed AI in lactating dairy cows. Theriogenology, v. 70, p.
208–215, 2008.
SOUZA, A. H.; VIECHNIESKI, S.; LIMA, F. A.; ARAUJO, R. ; BÓ, G. A.; WILTBANK, M. C.; BARUSELLI, P.
S. Effects of equine gonadotropin and type of ovulatory stimulus (GnRH or ECP) on progesterone-based
timed AI protocols in dairy cows. Theriogenology, v. 72, p. 10-21, 2009.
TEIXEIRA, A. A. Impacto da IATF na eficiência reprodutiva de vacas de leite de alta produção. 2010 . São
Paulo, 69p. Dissertação (Mestre em Ciências), Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia,
Universidade de São Paulo, São Paulo, 2010.
THATCHER, W. W.; BAZER, F. W.; SHARP, D. C.; ROBERTS. R. M. Inter-relationships between uterus and
conceptus to maintain corpus luteum function in early pregnancy: Sheep, cattle, pigs, horses. Jounal of
Animal Science, v. 62 (Suppl. 2), p. 25–46, 1986.
TORRES-JÚNIOR, J. R. S.; PENTEADO, L.; SALES, J. N. S.; SÁ FILHO, M. F.; AYRES, H.; BARUSELLI, P.
S. A comparison of two different esters of estradiol for the induction of ovulation in an estradiol plus
progestin-based timed artificial insemination protocol for suckled Bos indicus beef cows. Animal
Reproducion Science, v. 151, p. 9-14, 2014.
VASCONCELLOS, G. S. F. M.; VIEIRA, L. M.; GUERREIRO, B. M.; FREITAS, B. G.; KAMETANI, M. K.;
MIRANDA, M. S.; MOREIRA, R. C.; VIANNA, F. P.; BARUSELLI, P. S. Evaluation of the resynchronization
efficiency using GnRH or estradiol benzoate at the beginning of the protocol in lactating Holstein cows.
Animal Reproduction, v. 11, p. 360, 2014.
VIEIRA, L. M., SÁ FILHO, M. F.; PUGLIESI, G.; GUERREIRO, B. M.; CRISTALDO, M. A.; BATISTA, E. O.
S.; FREITAS, B. G.; CARVALHO, F. J.; GUIMARÃES, L. H. C.; BARUSELLI, P. S. Resynchronization in
dairy cows 13 days after TAI followed by pregnancy diagnosis based on corpus luteum vascularization by
color Doppler. Animal Reproduction, v. 11, p. 378, 201

154
Memorias

155
Memorias

156
 Memorias
Implementación de programas de IATF a gran escala

Alejo Menchaca
Instituto de Reproducción Animal Uruguay, Fundación IRAUy, Montevideo, Uruguay.
La Inseminación Artificial a Tiempo Fijo (IATF) es una tecnología que permite preñar un alto
número de animales en un mismo día sin la necesidad de detectar celo. El porcentaje de preñez al
final de la estación de monta aumenta de manera significativa, y además se genera un fuerte
impacto en la mejora genética por el uso masivo de la inseminación. La adopción de esta tecnología
ha venido creciendo en los países de Latinoamérica de manera ininterrumpida en los últimos 20
años. Esto ha generado beneficios para los veterinarios que la aplican, para las compañías de
semen, para los laboratorios farmacéuticos, y fundamentalmente para los ganaderos y la industria
de la carne y leche. Sin embargo, uno de los desafíos que genera el crecimiento en la demanda de
una tecnología, es como lo capitalizamos en una oportunidad. La principal medida del éxito que
ven nuestros clientes es la tasa de preñez al final del programa, y por lo tanto sólo es posible
alcanzar un nivel de gran escala, únicamente se si mantenemos resultados aceptables.
Al momento de implementar programas de IATF en empresas comerciales, el éxito depende
principalmente de un gran factor: la planificación. Esto permitirá diseñar el programa de manera
correcta en cuanto a los aspectos técnicos, pero también la planificación abarca otros factores que
van más allá de la técnica como lo son el manejo de los animales, la alimentación, el estado
sanitario, el personal necesario, las instalaciones y el clima, entre otros. A continuación, se
enumeran los principales puntos que deben ser considerados al planificar un programa de IATF en
bovinos. No se incluyen aquellos aspectos vinculados con los protocolos hormonales y con la
técnica de inseminación, ya que estos se han abordado en reiteradas ocasiones.

Manejo de los animales

- Las vaquillonas deben llegar a la sincronización con un desarrollo corporal adecuado y

preferentemente deberían estar ciclando. Las vacas paridas deben estar con más de 45 días posparto
al momento de la IATF.
- Si bien los protocolos permiten preñar vaquillonas y vacas cíclicas y en antestro, es recomendable no
ingresar al programa animales en anestro profundo. Aquellas hembras sin cuerpo lúteo y con
folículos menores a 8 mm es recomendable mejorarles las condiciones de alimentación e ingresarlas
algunas semanas más tarde.
- Todo factor de estrés al que se enfrente el rodeo afecta la fertilidad y disminuye la tasa de preñez.
- Desde una semana previa al inicio del tratamiento y hasta 45 días luego de la IATF no deben realizarse
transportes en camión, traslados innecesarios, manejo violento, descensos abruptos de la
alimentación.
- Jamás deben utilizarse perros en las mangas ni mucho menos picana eléctrica.

157
 Memorias
Alimentación
- La alimentación debe mejorarse desde el momento de iniciar el tratamiento hasta un mes luego de
la IATF.
- Es necesario que las hembras tengan una condición corporal individual no menor a 2.0 (escala 1 a 5)
al momento de iniciar el tratamiento.
- Las vaquillonas deben recibir una buena alimentación durante la recría para llegar al servicio en buen
estado corporal y con un adecuado desarrollo reproductivo.
- Las vacas adultas deben llegar al parto en la mejor condición corporal posible, y durante el periodo
posparto se debe evitar una pérdida significativa de la condición corporal. Al momento de iniciar la
sincronización deberán estar en un plano de ganancia de peso o condición corporal.

Sanidad

- Todo programa de IATF debe ser conducido por un veterinario especialista en reproducción animal,
quien también es responsable por el manejo sanitario que pueda afectar el resultado reproductivo.
- Todo manejo sanitario debe ser aplicado previo al inicio del programa ya que luego debe evitarse
todo tipo de tratamiento.
- El régimen de vacunación previo deberá definirlo el equipo técnico que llevará adelante el programa
de IATF, siempre en mutuo acuerdo con el veterinario de la empresa.
- Desde la semana previa al inicio del programa y hasta 45 días luego de la inseminación evite
tratamientos como baños, uso de vacunas, inyectables, etc. Algunos de estos tratamientos generan
muerte embrionaria y pérdidas de gestación.

Personal para el programa de IATF

- Buena parte de los resultados dependen del manejo de los animales implementado
generalmente por el personal del campo. Por este motivo, esta tecnología requiere un esfuerzo
colectivo de varios actores involucrados, y por lo tanto el éxito dependerá también de la
capacidad del técnico a cargo de coordinar las responsabilidades de todos quienes participan.
El manejo del personal es un punto a resolver con el suficiente tiempo antes de iniciar el
programa.
- Es necesario definir un número mínimo de operarios de campo para el día de inicio del tratamiento
y para el día en que se realiza la IATF. Este número de personas se definirá en función de la cantidad
de animales con los que se trabajará, el estado de las instalaciones y la experiencia de los operarios.
- En todos los casos los horarios de trabajo deben definirse de acuerdo a las indicaciones de los
protocolos hormonales.

158
 Memorias
Infraestructura

- Se requieren instalaciones en un adecuado estado de funcionamiento.

- Es necesario prever una estructura mínima que asegure la protección del sol y de la lluvia, de manera
de poder realizar las actividades a tiempo fijo sin vernos condicionados por la situación climática
- Se requiere un recinto cerrado y limpio para descongelar el semen junto al sitio donde se realizará la
IATF.
- Es necesario contar con agua potable en una cantidad suficiente para el día del inicio del tratamiento
para mantener los dispositivos y aplicadores con la limpieza e higiene adecuada.

En suma, para implementar con éxito un programa de IATF no solo es necesario aplicar los protocolos
hormonales precisos y realizar una correcta técnica de inseminación. También se requiere controlar todos
los factores –ajenos a la propia técnica- que afectan el resultado de preñez. Todo esto debe integrarse en
una planificación bien elaborada, y esta planificación es el aspecto más relevante para lograr el éxito. La
aplicación a escala de la IATF, es decir la ejecución de varios programas de inseminación en muchas
empresas distintas y en la misma temporada de servicios, solo es posible si logramos prever todos los
riesgos y si somos capaces de mitigarlos. Así, podremos inseminar varios miles de vacas con la misma
facilidad y probabilidad de éxito que cuando inseminamos unas pocas. Al masificar el uso de esta
tecnología, incrementaremos nuestra actividad profesional y nuestro negocio, pero principalmente
generaremos un mayor impacto de esta tecnología en la productividad ganadera y la economía de la
región.

159
Memorias

160
Memorias

161
 Memorias
ESTRATEGIAS PARA EL USO EFICIENTE DE RECEPTORAS DE EMBRIONES IN
VITRO
A. García Guerra1, R. V. Sala3, J.C.L., Motta1, E. Walleser2, L. F. Melo1, L. Leffers1,
M. Fosado2, J. F. Moreno2, M. C. Wiltbank1
1Department of Animal Sciences, The Ohio State University, 2027 Coffey Rd,
Columbus, OH, 43210, USA.
2 Department of Dairy Science, University of Wisconsin-Madison, 1675 Observatory

Drive, Madison, WI, 53706, USA.

3 Sexing Technologies, Kewaskum, WI, USA.

garciaguerra.1@osu.edu

Introducción

La necesidad de reproducir animales de alto valor genético ha llevado al desarrollo y

difusión de biotecnologías reproductivas como la producción in vitro de embriones. En el
año 2015, se colectaron 111.704 donantes produciendo 612.709 embriones bovinos in
vitro en todo el mundo, representando con respecto a 2014 una reducción del 13% y un
incremento del ~4%, respectivamente, basado en los datos de la IETS. Una multitud de
factores han sido relacionados con la eficiencia y el éxito de programas de transferencia
de embriones (TE), particularmente de embriones producidos in vivo (Looney et al. 2006;
Hasler 2012).
Una de las mayores limitantes a la aplicación masiva de la transferencia de embriones
es la baja eficiencia de utilización de las receptoras debido a la detección de celos y las
dificultades en su implementación (Bó et al. 2011). El costo asociado a mantener
receptoras disponibles junto a una baja eficiencia en su utilización puede atentar contra
la rentabilidad de un programa de transferencia de embriones. En consecuencia, el
desarrollo de protocolos de sincronización de la ovulación para la transferencia de
embriones a tiempo fijo (TETF) ha sido el foco de investigaciones a lo largo de los últimos
años.
En Norteamérica, los protocolos de sincronización para TETF están basados en la
utilización de GnRH. Comúnmente estos protocolos incluyen la inserción de un
dispositivo de progesterona intravaginal y la aplicación de GnRH en el día 0. Siete días
después el dispositivo es retirado y se aplica PGF (día 7). Finalmente, la inducción de la
ovulación se realiza el día 9 mediante la aplicación de GnRH. Más recientemente, con la
expansión de protocolos que prolongan el proestro el dispositivo es retirado en el día 5 y
la inducción de la ovulación se realiza en el día 8 reduciendo la longitud total del
protocolo. Este tipo de tratamientos de proestro prolongado ha sido adoptado como
consecuencia de una mejor tasa de preñez cuando son utilizados en programas de
inseminación a tiempo fijo (Bridges et al. 2008). Sin embargo, aún no se han realizado
comparaciones formales entere los tratamientos con GnRH de 5 o 7 días.
En Sudamérica los protocolos comúnmente utilizados se basan principalmente en el uso
de estrógenos para la sincronización de la onda folicular, junto a la inserción de un

162
 Memorias
dispositivo de progesterona. Siete días luego de colocado el dispositivo el mismo se retira
y se administra una inyección de prostaglandina F 2α (PGF) y potencialmente
(dependiendo del protocolo) 400UI de ECG. La inducción de la ovulación se realiza 24 h
después del retiro del dispositivo con la administración de benzoato de estradiol o más
recientemente se ha propuesto la administración de cipionato de estradiol al momento
del retiro del dispositivo. De esta manera, se reduce el número de encierre necesarios
(Bó et al. 2011; Bo et al. 2012).
El crecimiento sostenido de la producción de embriones in vitro, particularmente en
Norteamérica, ha generado la necesidad de información relacionada a factores que
afectan la fertilidad en programas de transferencia de embriones producidos in vitro, así
como a la evaluación de estrategias para aumentar la eficiencia y la fertilidad en los
mismos. Asimismo, la utilización eficiente de receptoras y recursos requiere la evaluación
de estrategias que reduzcan los costos de los programas de transferencia de embriones
in vitro manteniendo al mismo tiempo altos niveles de fertilidad. La presente revisión tiene
como objetivo presentar información acerca de estrategias para el uso eficiente de
receptoras como resultado de estudios realizados por nuestro grupo en un programa de
transferencia de embriones producidos in vitro en Wisconsin y Ohio.
Sincronización de receptoras
Detección de celos vs Sincronización de la ovulación
La utilización de prostaglandina F2α y sus análogos ha sido uno de los pilares
fundamentales en el desarrollo de programas de sincronización del celo y la ovulación
(Wiltbank and Pursley 2014). La extensión de programas de transferencia de embriones
in vitro a gran escala ha puesto de manifiesto la necesidad de evaluar estrategias para
mejorar la eficiencia de dichos sistemas. A pesar de la gran cantidad de evidencia en
favor de la utilización de protocolos de sincronización de la ovulación en programas de
transferencia de embriones producidos in vivo (Bó et al. 2011), los mismos no han sido
evaluados con igual detalle con embriones producidos in vitro. Un trabajo reciente tuvo
como objetivo evaluar la tasa de utilización y la fertilidad en receptoras sincronizadas
con PGF y transferidas en base a la detección de celos versus receptoras sincronizadas
con dispositivos de progesterona por 5 días con GnRH y transferidas a tiempo fijo (Sala
et al. 2015). Un total de 520 vaquillonas Holstein fueron asignadas aleatoriamente a los
siguientes dos grupos: sincronización con PGF + detección de celos (PGF+DC) o
sincronización de la ovulación con dispositivos de progesterona + GnRH (TETF). Los
animales asignados al grupo PGF+DC fueron sincronizados con dos aplicaciones de
PGF con un intervalo de 14 días, seguido por detección de celo diaria por 5 días. El grupo
TETF fue sincronizado con un dispositivo de progesterona intravaginal (CIDR 1,38g) por
5 días, con aplicación de PGF al retiro del dispositivo y nuevamente 24 horas más tarde.
La ovulación fue inducida con GnRH 72 horas después del retiro del dispositivo.
Embriones producidos in vitro fueron transferidos 7 ± 1 días después del celo/GnRH.
La utilización de un protocolo de TETF incremento la tasa de utilización de receptoras
(transferidas/tratadas) sin afectar los porcentajes de preñez por embrión transferido
(Tabla 1). Asimismo, el incremento de la tasa de utilización resulto en un incremento en
el porcentaje de preñez por animal tratado, aumentando de esta manera la eficiencia.

163
 Memorias
Tabla 1. Tasa de utilización y porcentajes de preñez en receptoras de embriones in vitro
sincronizadas con prostaglandinas o con dispositivos de progesterona (adaptado de Sala
et al. 2015).

Parámetro PGF + DC TETF Valor P

N 166 354
Tasa de utilización
65,6% (109/166) 87,3% (309/354) <0,0001
(transferidas/ tratadas)
Preñez por ET D33 41,3% (45/109) 43,4% (134/309) 0,50

Preñez por ET D60 30,3% (33/109) 32,4% (100/309) 0,37

Preñez por Tratada D33 27,1% (45/166) 37,9% (134/354) 0,02

Preñez por Tratada D60 19,9% (33/166) 28,2% (100/354) 0,04

Perdida de Preñez D33-60 26,7% (12/45) 25,4% (34/134) 0,63

Reutilización de dispositivos intravaginales de progesterona en programas de TETF

La utilización de dispositivos intravaginales de progesterona ha tenido un impacto
significativo en la habilidad de manipular la función ovárica y en el desarrollo de
programas de sincronización tanto para inseminación artificial a tiempo fijo (IATF) como
para la TETF. La utilización eficiente de los mismos podría tener un impacto significativo
en los programas de transferencia de embriones producidos in vitro. La reutilización de
dispositivos intravaginales de progesterona como estrategia para reducir los costos de
sincronización, ha sido evaluada recientemente para su uso en IATF (Sales et al. 2015).
La concentración de progesterona circulante fue menor en animales tratados con
dispositivos de progesterona reutilizados 1 (8 días) o 2 (16 días) veces comparado con
vaquillonas que recibieron un dispositivo nuevo. El tamaño del folículo dominante al retiro
del dispositivo fue mayor en vacas que recibieron el dispositivo utilizado 2 veces que en
aquellas que recibieron un dispositivo nuevo, e intermedio en vacas que recibieron un
dispositivo usado 1 vez. Sin embargo, la tasa de ovulación y el porcentaje de preñez en
vacas Nelore fueron similar para los tres grupos.
Teniendo en cuenta los resultados mencionados, en un trabajo realizado por nuestro
grupo evaluamos la reutilización de dispositivos intravaginales de progesterona (CIDR
1,38g) en un programa de transferencia de embriones producidos in vitro (Sala et al.
2015). Vaquillonas Holstein fueron sincronizadas con un CIDR por 5 días, aplicación de
PGF al retiro del dispositivo y nuevamente 24 h más tarde, y GnRH 72 h después del
retiro del CIDR. En el experimento 1, las vaquillonas fueron asignadas en 2 grupos: CIDR
nuevo o CIDR 2do uso (usado previamente por 5 días). Los animales con un cuerpo lúteo
presente al día 6 fueron transferidos 7 ± 1 días después de la aplicación de GnRH con
embriones frescos producidos in vitro. No se encontraron diferencias significativas en la

164
 Memorias
tasa de utilización, porcentajes de preñez o perdidas gestacionales entre los grupos
(Tabla 2).
Tabla 2. Tamaño del cuerpo lúteo, tasa de utilización y porcentajes de preñez en
receptoras de embriones in vitro sincronizadas con dispositivos de progesterona nuevos
o de segundo uso (Sala et al. 2015).

Parámetro TETF CIDR Nuevo TETF CIDR 2do uso Valor P

N 178 176
Volumen CL D6 (mm3) 5189,4 ± 163 5849,6 ± 267 0,1

Tasa de utilización
88,2% (157/178) 86,4% (152/176) 0,65
(transferidas/ tratadas)
Preñez por ET D33 43,9% (69/157) 42,8% (65/152) 0,87

Preñez por ET D60 33,8% (53/157) 30,9% (47/152) 0,55

Perdida de Preñez D33-60 23,2% (16/69) 27,7% (18/65) 0,39

En el experimento 2, las vaquillonas fueron asignadas en 2 grupos: CIDR nuevo o CIDR

3er uso (usado previamente 2 veces, 5 días/uso). Los animales fueron evaluados de la
misma manera que en el experimento 1. El tamaño del cuerpo lúteo 5 días después de
la aplicación de GnRH fue mayor en vaquillonas tratadas con CIDR de 3 er uso, y hubo
una tendencia a una mayor tasa de utilización (Tabla 3). Sin embargo, no se encontraron
diferencias significativas en los porcentajes de preñez o perdidas gestacionales entre los
tratamientos.
Tabla 3. Tamaño del cuerpo lúteo, tasa de utilización y porcentajes de preñez en
receptoras de embriones in vitro sincronizadas con dispositivos nuevos o de tercer uso
(Sala et al. 2015).

TETF CIDR 3er

Parámetro TETF CIDR Nuevo Valor P
uso
N 213 209
Volumen CL D5 (mm3) 3872,9 ± 127 4378,2 ± 195 0,04
Tasa de utilización
88,3% (188/213) 93,8% (196/209) 0,05
(transferidas/ tratadas)
Preñez por ET D33 41,0% (77/188) 42,3% (83/196) 0,73
Preñez por ET D60 32,4% (61/188) 33,2% (65/196) 0,82
Perdida de Preñez D33-60 20,8% (16/77) 21,7% (18/83) 0,96

Como respuesta a los excelentes resultados obtenidos con dispositivos de 3er uso
realizamos el experimento 3. En el experimento 3, las vaquillonas fueron asignadas en 2

165
 Memorias
grupos: CIDR nuevo o CIDR 4to uso (usado previamente 3 veces, 5 días/uso). Los
animales fueron evaluados de la misma manera que en el experimento 1 y 2. El tamaño
del cuerpo lúteo 5 días después de la aplicación de GnRH fue mayor en vaquillonas
tratadas con CIDR de 4to uso. Sin embargo, no se encontraron diferencias significativas
en la tasa de utilización, porcentajes de preñez por embrión transferido o perdidas
gestacionales entre los días 33 y 60 (Tabla 4).

Tabla 4. Tamaño del cuerpo lúteo, tasa de utilización y porcentajes de preñez en

receptoras de embriones in vitro sincronizadas con dispositivos nuevos o de 4to uso.

TETF CIDR 4to

Parámetro TETF CIDR Nuevo Valor P
uso
N 338 324
Volumen CL D5 (mm3) 3470,8 ± 102 4460,1 ± 138 <0,001
Tasa de utilización
87,6% (296/338) 88,0% (285/324) 0,88
(transferidas/ tratadas)
Preñez por ET D33 39,2% (116/296) 46,7% (133/285) 0,14
Preñez por ET D60 31,4% (93/296) 38,9% (111/285) 0,11
Perdida de Preñez D33-60 19,8% (23/116) 16,5% (22/133) 0,47

Los resultados obtenidos hasta el momento indican que la reutilización de dispositivos

intravaginales de progesterona no afecta de manera significativa la eficiencia de
utilización de receptoras ni los porcentajes de preñez luego de la transferencia de
embriones producidos in vitro. Sin embargo, los niveles de progesterona logrados con el
presente esquema de reutilización, así como su efecto en la dinámica folicular no han
sido investigados hasta el momento. En un ensayo preliminar realizado recientemente
por nuestro grupo se encontró que la reutilización de dispositivos de progesterona
conlleva una disminución en los niveles de progesterona circulante (P<0,001),
particularmente en los dispositivos de 3er y 4to uso. En consecuencia, el tamaño del
folículo preovulatorio aumenta con el incremento en la reutilización de dispositivos.
Asimismo, el intervalo entre el retiro del dispositivo de progesterona y la ovulación mostro
una reducción de 8 h en los dispositivos de 4to uso comparados con los dispositivos
nuevos. Sin embargo, la tasa de ovulación no mostro diferencias significativas. La
estrategia de reutilización de dispositivos podría contribuir a la eficiencia de los
programas de transferencia de embriones in vitro a través de la reducción del costo de
sincronización.
Número y momento de aplicación de prostaglandina durante el protocolo de
sincronización en programas de TETF
El protocolo que utiliza GnRH y un dispositivo de progesterona por 7 días (Co-Synch 7
días) es uno de los protocolos más utilizados en vacas y vaquillonas de carne para IATF
en EEUU. Sin embargo, en los últimos 10 años el desarrollo del protocolo de 5 días (Co-

166
 Memorias
Synch 5 días) con el consecuente incremento en las tazas de preñez con este protocolo
ha llevado a su utilización de manera extensiva (Bridges et al. 2008). Como consecuencia
de la necesidad de aplicar dos dosis de PGF en los protocolos de 5 días (Nascimento et
al. 2014) varias modificaciones han sido propuestas recientemente con el objetivo de
reducir el manejo de los animales. Una de las primeras modificaciones propuestas fue la
eliminación de la segunda dosis de PGF. Los resultados obtenidos con una o dos
aplicaciones de PGF al retiro del dispositivo de progesterona muestran resultados
contradictorios. Algunos estudios en vaquillonas lecheras no encontraron diferencias en
la regresión del CL o el porcentaje de preñez a la IATF al aplicar 1 vs 2 dosis de PGF al
retiro del dispositivo (Rabaglino et al. 2010). De manera similar, resultados de otro
estudio en vaquillonas de carne y leche no encontraron diferencias significativas entre 1
o 2 aplicaciones de PGF (Kasimanickam et al. 2014). Sin embargo, otros estudio en
vaquillonas de carne (Peterson et al. 2011) y de leche (Say et al. 2016) encontraron una
tendencia o una evidente mejora en los porcentajes de preñez a la IATF cuando dos
dosis de PGF fueron administradas con un intervalo de por lo menos 6h.
La otra modificación implementada es la eliminación de la primera GnRH (al momento
de la inserción del dispositivo). Esta estrategia fue basada en la baja tasa de ovulación
(~30%) obtenida normalmente con la administración de GnRH y también como estrategia
para eliminar la segunda aplicación de PGF ya que con esta estrategia no se generan
cuerpos lúteos nuevos. Los resultados obtenidos con esta estrategia han mostrado cierta
controversia. Algunos estudios demostraron tasas de preñez similares en vaquillonas
lecheras (Colazo and Ambrose 2011; Kasimanickam et al. 2014) o de carne (Cruppe et
al. 2014). Sin embargo, otros estudios han mostrado mejoras significativas en el
porcentaje de preñez de vaquillonas de carne (Kasimanickam et al. 2014) y leche (Lima
et al. 2013) cuando se administra GnRH al inicio del protocolo. El estudio de Lima y col.,
mostro también que la inclusión de GnRH al comienzo del protocolo sumado a la
aplicación de 2 PGF con un intervalo de 24 h al retiro del dispositivo logro tasas de preñez
significativamente mayores que las obtenidas con protocolos sin GnRH al inicio.
A pesar de la gran cantidad de estudios realizados para evaluar la necesidad de dos
aplicaciones de PGF en los protocolos Co-Synch de 5 días para IATF, no hay información
disponible sobre los efectos de estas modificaciones en el uso de estos protocolos en
programas de TETF. Los protocolos de sincronización en los programas TETF
contribuyen de manera significativa al costo de un programa de producción y
transferencia de embriones in vitro. Los costos asociados al protocolo de sincronización
están representados por el costo de las hormonas y el costo asociado con la utilización
del personal para administrar dichos tratamientos. La optimización de los protocolos de
sincronización con el objetivo de reducir su costo, pero manteniendo altos niveles de
fertilidad presentan una oportunidad para incrementar la eficiencia y la rentabilidad. Una
de las posibles estrategias para reducir el costo de los programas de sincronización es
la disminución en el número de tratamientos y/o dosis de las hormonas a aplicar. Los
protocolos de sincronización de receptoras basados en el CO-Synch 5 d + CIDR
conllevan como fue discutido anteriormente el uso de dos aplicaciones de PGF con el
consecuente incremento en el número de manejos y producto utilizados. Con el objetivo
de evaluar la posibilidad de reducir el número y dosis de PGF durante un protocolo de

167
 Memorias
sincronización para TETF basado en el CO-Synch 5d + CIDR sin GNRH al inicio se
realizaron una serie de ensayos.
El primer ensayo realizado tuvo como objetivo la evaluación de la luteolisis y el desarrollo
del folículo dominante después del tratamiento con dos vs una aplicación de PGF y con
el uso de media vs dosis completa de PGF. Vaquillonas Holstein (N = 430) fueron
sincronizadas con un protocolo CO-Synch 5 d + CIDR modificado: d-8 – inserción CIDR,
d-3 – retiro del CIDR y PGF2a, d0 - GnRH (100μg acetato de gonadorelina). En el día -
3, al momento del retiro del dispositivo de progesterona, lo animales fueron distribuidos
aleatoriamente a un diseño 2x2 factorial como muestra la Figura 1. A fin de evaluar la
luteolisis se colectaron muestras de sangre para determinación de progesterona y se
realizó la evaluación mediante ultrasonografía en los días -3 y 0. El porcentaje de
vaquillonas con cuerpo lúteo al momento del retiro del dispositivo y aplicación de PGF
fue del 80% (344/430) y no se encontraron diferencias entre tratamientos. La
concentración de progesterona, en vaquillonas con cuerpo lúteo, al momento del retiro
del dispositivo (d-3) fue similar entre los tratamientos (P>0,10), sin embargo, se encontró
una tendencia (P<0,10) para una mayor concentración de progesterona en el d0 en el
grupo tratado con media dosis en una aplicación (Tabla 5). Asimismo, el porcentaje de
vaquillonas con progesterona > 0,5 ng/ml en el d0 fue significativamente mayor (P<0,05)
en el grupo tratado con una única aplicación de media dosis de PGF. Sin embargo, no
se encontraron diferencias significativas en el tamaño del folículo dominante en el d-3
(P>0,10) o d0 (P>0,20). En conclusión, el uso de media dosis de PGF aplicada
únicamente en el d-3 resulta en una concentración de progesterona ligeramente mayor
al momento de la aplicación de GnRH, sin embargo, el tamaño del folículo dominante no
fue influenciado por el tratamiento.
Figura 1. Esquema de tratamiento en vaquillonas receptoras de embriones para la
evaluación del uso de una vs dos aplicaciones y media o dosis completa de PGF durante
el protocolo de sincronización.

168
 Memorias

Tabla 5. Concentración de progesterona durante el final del protocolo de sincronización

en vaquillonas receptoras de embriones in vitro tratadas con una o dos aplicaciones y
media o dosis completa de PGF y que presentaban un cuerpo lúteo al momento de retirar
el dispositivo de progesterona.

P4 d0 % P4 >0.5
Dosis Aplicaciones N P4 d-3 (ng/ml)
(ng/ml) ng/ml d0

1,2%a
2 86 6,05 ± 0,3 0,03 ± 0,01
Completa (1/86)
(500μg) 1,2%a
1 82 5,78 ± 0,3 0,06 ± 0,01
(1/82)
1,1%a
2 88 6,60 ± 0,3 0,07 ± 0,02
(1/88)
Media (250μg)
10,3%b
1 87 6,21 ± 0,4 0,39 ± 0,03
(9/87)
a-b Indican diferencias significativas (P<0,05).
Los resultados alentadores obtenidos en el primer ensayo dieron lugar a un segundo
ensayo que tuvo como objetivo la evaluación de la fertilidad y el porcentaje de perdidas
gestacionales después del tratamiento con dos vs una aplicación de PGF y con el uso
de media vs dosis completa de PGF durante el protocolo de sincronización para TETF.
Vaquillonas Holstein (N = 3766) fueron sincronizadas con un protocolo CO-Synch 5 d +
CIDR modificado: d-8 – inserción CIDR, d-3 – retiro del CIDR y PGF2a, d0 - GnRH (100μg
acetato de gonadorelina). En el día -3, al momento del retiro del dispositivo de
progesterona, lo animales fueron distribuidos aleatoriamente a un diseño 2x2 factorial de
la siguiente manera:

 Grupo 1) dos aplicaciones de PGF día -3 y -2 dosis completa (500 μg

Cloprostenol/por aplicación; n=938)
 Grupo 2) una aplicación de PGF día -3 dosis completa (500 μg
Cloprostenol/por aplicación; n=938)
 Grupo 3) dos aplicaciones de PGF día -3 y -2 media dosis (250 μg
Cloprostenol/por aplicación; n=946)
 Grupo 4) una aplicación de PGF día -3 media dosis (250 μg
Cloprostenol/por aplicación; n=944)

Todas las vaquillonas fueron evaluadas mediante ultrasonografía 5 días después de la

GnRH para evaluar presencia y ubicación del CL. Embriones frescos producidos in vitro

169
 Memorias
fueron transferidos en el día 7 ± 1 después de la GnRH, y el diagnóstico de gestación se
realizó mediante ultrasonografía en el día 32 y 60.

Figura 2. Porcentaje de vaquillonas que exhibieron comportamiento de celo y taza de

utilización (transferidas/tratadas) luego de recibir 1 o 2 aplicaciones de media o dosis
completa de PGF (adaptado de (Sala et al. 2016).

No se encontraron diferencias significativas entre tratamientos en la tasa de

aprovechamiento o en el porcentaje de vaquillonas que fueron detectadas en celo
(P>0,10). Asimismo, no se encontraron diferencias significativas en el porcentaje de
P/ET al día 32 (P>0,3), día 60 (P>0,3) ni en el porcentaje de perdidas gestacionales
entre el día 32 y 60 (P>0.5, Tabla 6). La utilización de media dosis de PGF en el día -3
junto al retiro del dispositivo resulta en niveles de utilización y fertilidad similares a los
obtenidos con dos aplicaciones de dosis completa en el día -3 y -2. En consecuencia,
esta estrategia permite la reducción del costo del protocolo de sincronización en
vaquillonas receptoras de embriones producidos in vitro y logrando al mismo tiempo
niveles de fertilidad comparables a los obtenidos con tratamientos más costosos.

170
 Memorias
Tabla 6. Parámetros de fertilidad y perdidas gestacionales en vaquillonas receptoras de
embriones in vitro sincronizadas con 1 o 2 aplicaciones de media o dosis completa de
PGF (Cloprostenol sódico) durante el protocolo de sincronización (Sala et al. 2016).

Perdidas
Dosis Aplicaciones P/ET d32 P/ET d60 gestacionales
32-60
19,6%
2 43,2% (362/838) 34,7% (291/838)
(71/362)
Completa (500μg) 19,4%
1 43,2% (351/812) 34,8% (283/812)
(68/351)
17,9%
2 44,5% (375/842) 36,6% (308/842)
(67/375)
Media (250μg)
20,5%
1 45,3% (381/842) 36,0% (303/842)
(78/381)

Conclusiones
El crecimiento y difusión de la producción in vitro de embriones bovinos, trae aparejada
la necesidad de tener información sobre la utilización de programas de sincronización, y
estrategias que permitan aumentar la eficiencia de este tipo de programas. La utilización
de programas de sincronización de la ovulación permite programar el inicio de los
tratamientos en momentos predeterminados, y a la vez aumentar la eficiencia de
utilización de receptoras. Es importante recordar que uno de los costos más importantes
en un programa de TE es el mantenimiento de receptoras, particularmente en sistemas
intensivos, donde el costo de alimentación es significativo. Como resultado, el uso de
estrategias que permiten aumentar la eficiencia de utilización y al mismo tiempo lograr
altos niveles de fertilidad puede aumentar la eficiencia global del programa, así como su
rentabilidad. Estudios futuros deberán centrarse en estrategias que permitan la
reutilización de receptoras vacías como estrategia para aumentar la eficiencia.
La posibilidad de reutilizar dispositivos de progesterona plantea una nueva estrategia
para disminuir los costos de la sincronización sin afectar la fertilidad, contribuyendo
también a aumentar la eficiencia global del programa de TE. Asimismo, la posibilidad de
reducir el número de aplicaciones de PGF, así como la dosis utilizada manteniendo
niveles altos de fertilidad plantea un método adicional para mantener un uso eficiente de
receptoras a un costo menor. Finalmente, a pesar de que las estrategias presentadas
obtuvieron resultados favorables es importante recordar que otros factores (condición
corporal, ciclicidad, etc.) pueden afectar o condicionar el efecto de estas estrategias en
programas de TETF en receptoras de embriones in vitro.

Bibliografía

Bo, G. A., P. S. Baruselli and R. J. Mapletoft (2012). "Increasing pregnancies following

synchronization of bovine recipients." Animal Reproduction 9(3): 312-317.

171
 Memorias
Bó, G. A., L. C. Peres, L. E. Cutaia, D. Pincinato, P. S. Baruselli and R. J. Mapletoft
(2011). "Treatments for the synchronisation of bovine recipients for fixed-time
embryo transfer and improvement of pregnancy rates." Reproduction, Fertility
and Development 24(1): 272-277.
Bridges, G. A., L. A. Helser, D. E. Grum, M. L. Mussard, C. L. Gasser and M. L. Day
(2008). "Decreasing the interval between gnrh and pgf2α from 7 to 5 days and
lengthening proestrus increases timed-ai pregnancy rates in beef cows."
Theriogenology 69(7): 843-851.
Colazo, M. G. and D. J. Ambrose (2011). "Neither duration of progesterone insert nor
initial gnrh treatment affected pregnancy per timed-insemination in dairy heifers
subjected to a co-synch protocol." Theriogenology 76(3): 578-588.
Cruppe, L. H., M. L. Day, F. M. Abreu, S. Kruse, S. L. Lake, M. V. Biehl, R. S. Cipriano,
M. L. Mussard and G. A. Bridges (2014). "The requirement of gnrh at the
beginning of the five-day co-synch + controlled internal drug release protocol in
beef heifers." Journal of Animal Science 92(9): 4198-4203.
Hasler, J. F. (2012). Bovine embryo transfer: Are efficiencies improving? Applied
Reproductive Strategies in Beef Cattle, Sioux Falls, SD.
Kasimanickam, R. K., P. Firth, G. M. Schuenemann, B. K. Whitlock, J. M. Gay, D. A.
Moore, J. B. Hall and W. D. Whittier (2014). "Effect of the first gnrh and two
doses of pgf2α in a 5-day progesterone-based co-synch protocol on heifer
pregnancy." Theriogenology 81(6): 797-804.
Lima, F. S., E. S. Ribeiro, R. S. Bisinotto, L. F. Greco, N. Martinez, M. Amstalden, W.
W. Thatcher and J. E. P. Santos (2013). "Hormonal manipulations in the 5-day
timed artificial insemination protocol to optimize estrous cycle synchrony and
fertility in dairy heifers." Journal of Dairy Science 96(11): 7054-7065.
Looney, C. R., J. S. Nelson, H. J. Schneider and D. W. Forrest (2006). "Improving
fertility in beef cow recipients." Theriogenology 65(1): 201-209.
Nascimento, A. B., A. H. Souza, A. Keskin, R. Sartori and M. C. Wiltbank (2014). "Lack
of complete regression of the day 5 corpus luteum after one or two doses of
pgf2α in nonlactating holstein cows." Theriogenology 81(3): 389-395.
Peterson, C., A. Alkar, S. Smith, S. Kerr, J. B. Hall, D. Moore and R. Kasimanickam
(2011). "Effects of one versus two doses of prostaglandin f2alpha on ai
pregnancy rates in a 5-day, progesterone-based, co-synch protocol in crossbred
beef heifers." Theriogenology 75(8): 1536-1542.
Rabaglino, M. B., C. A. Risco, M. J. Thatcher, I. H. Kim, J. E. P. Santos and W. W.
Thatcher (2010). "Application of one injection of prostaglandin f2α in the five-day
co-synch+cidr protocol for estrous synchronization and resynchronization of dairy
heifers." Journal of Dairy Science 93(3): 1050-1058.
Sala, R. V., L. C. Carrenho-Sala, M. Fosado, L. C. C. Tosta, R. D. Tosta, M. Stoll, J. F.
Moreno, B. M. Monteiro, P. S. Baruselli, A. Garcia-Guera and M. C. Wiltbank
(2015). "Comparison of methods for synchronizing recipients of in vitro produced
embryos." Reproduction, Fertility and Development 28(2): 185-185.
Sala, R. V., A. Garcia-Guerra, L. C. Carrenho-Sala, M. Fosado, E. Peralta, R. D. Tosta,
L. C. C. Tosta, J. F. Moreno, P. S. Baruselli and M. C. Wiltbank (2016). "Dose
and timing of administration of prostaglandin f2α during ftet in an ivp program."
Reproduction Fertility and Development 29(1): 158.

172
 Memorias
Sales, J. N. S., J. B. P. Carvalho, G. A. Crepaldi, J. G. Soares, R. W. Girotto, J. R. G.
Maio, J. C. Souza and P. S. Baruselli (2015). "Effect of circulating progesterone
concentration during synchronization for fixed-time artificial insemination on
ovulation and fertility in bos indicus (nelore) beef cows." Theriogenology 83(6):
1093-1100.
Say, E., S. Çoban, Y. Nak, D. Nak, U. Kara, S. White, V. Kasimanickam and R.
Kasimanickam (2016). "Fertility of holstein heifers after two doses of pgf2α in 5-
day co-synch progesterone-based synchronization protocol." Theriogenology
86(4): 988-993.
Wiltbank, M. C. and J. R. Pursley (2014). "The cow as an induced ovulator: Timed ai
after synchronization of ovulation." Theriogenology 81(1): 170-185.

173
Memorias

174
Memorias

175
 Memorias
MOMENTO DE INSEMINACIÓN Y EXPRESIÓN DE CELOS EN VACAS DE LECHE
SINCRONIZADAS CON DISPOSITIVOS CON PROGESTERONA Y ESTRADIOL.

Tschopp, J.C.1 y Bó G.A 1,3.

1
Instituto de Reproducción Animal Córdoba, Córdoba, Argentina.

2
Instituto A.P. de Ciencias Básicas y Aplicadas, Medicina Veterinaria, Universidad Nacional de
Villa María, Villa del Rosario, Córdoba, Argentina.

ABSTRACT

El objetivo de estos experimentos fue evaluar el efecto de la adición de GnRH al inicio y

al final de un tratamiento con estradiol (E2) y dispositivos con progesterona (P4) y la expresión de
celos sobre la tasa de preñez (TP) de vacas lecheras en lactancia inseminadas a tiempo fijo (IATF).
Para la sincronización de celos se utilizó un tratamiento de 8 días con dispositivo intravaginal con
P4 y EB en el día de la inserción y ECP como inductor de la ovulación. En el Experimento 1 se
evaluó si la adición de GnRH al inicio del protocolo mejoraba la TP y si la división del horario de
inseminación (IA), inseminando a las 48 h solo a las que presentaban celo y la adición de GnRH a
las que no mostraron celo y la IA 12 h después (60 h) mejoraba la TP en comparación con la IATF
de todas las vacas a las 48 h. Se demostró que la adición de GnRH en el Día 0 no mejoró la TP
(44% vs 40%) como sí lo hizo la división del horario de IA con adición de GnRH (53% vs 31%;
P<0,01). El objetivo del Experimento 2 y 3 fue estudiar la dinámica folicular y evaluar si la TP
varía utilizando diferentes horarios de IA (48 h vs 60 h) de acuerdo a la expresión de celos en vacas
tratadas con dispositivos con P4 y ECP como inductor de la ovulación. Se demostró que la división
del horario de IA y la adición de GnRH disminuye la dispersión del intervalo entre la IA y la
ovulación. Se encontró una interacción (P<0,05) entre el horario de IA y la expresión de celos. Las
tasas de preñez fueron mayores en las vacas en celo a las 48 h que fueron IA en ese momento
(47,8%) y las que no estaban en celo a las 48 h y que fueron IA a las 60 h (53,4%) que las que no
estaban en celo a las 48 h y que fueron IA en ese momento (19,4%) y las que estaban en celo a las
48 h y que fueron IA a las 60 h (29,7%). En el Experimento 4 se evaluó la TP en función de la
adición o no de GnRH a las vacas que no presentaban celo a las 48 h. La tasa de preñez general
fue mayor en el grupo tratado con GnRH a las vacas que no mostraron celo (50,6%; 268/530 vs
42,7%; 229/236; P<0,01). Además, cuando se consideraron solo las vacas que no presentaron celo
a las 48 h se encontró una interacción significativa (P<0,05) entre las las que mostraron celo a las
60 h (horario de la segunda IATF) y si recibieron o no GnRH. No hubo diferencia en las tasas de
preñez entre las vacas que presentaron celo a las 60 h, con GnRH (61,1%; 55/90) o sin GnRH
(53,5%; 54/101) y las que no presentaron celo a las 60 h pero que recibieron GnRH 12 h antes
(57%; 90/158; P>0,1), mientras que las vacas que no presentaron celo ni recibieron GnRH tuvieron
una menor tasa de preñez que los otros grupos (30,3%; 46/152; P< 0,001). En conclusión, la
administración de GnRH a las vacas que no dan celo a las 48 h de un protocolo de IATF con EB,

176
 Memorias
dispositivo con progesterona y ECP aumentó la tasa de preñez, debido probablemente a la
ovulación de las vacas que nunca mostraron celo durante el tratamiento.
Palabras Claves: Vacas en lactancia, IATF, ECP, GnRH, horario de inseminación.

INTRODUCCIÓN

Aunque los sistemas de manejo de los rodeos lecheros comerciales difieren en distintas
partes del mundo, el objetivo reproductivo principal es preñar a las vacas lecheras lo más rápido
posible después del parto (Lucy, 2004). Una de las preguntas es si existe un antagonismo entre alta
producción y fertilidad. Varios autores sostienen que la vaca lactante en sistemas estabulados con
producciones superiores a los 10.000 Kg (Butler, 2003; Lucy, 2001; Thatcher et al., 2006) y en
sistemas pastoriles superiores a los 7.500 Kg (Diskin et al., 2006; Diskin y Morris 2008, Piccardi
et al., 2012) son vacas que poseen algún grado de subfertilidad. Sin embargo, otros autores
sugieren que esta relación no existe, sino que este fenómeno no es más que una relación temporal
que no implica una relación causa efecto (Le Blanc, 2010; Walsh et al., 2011). No obstante, el
aumento de la producción en vacas de leche que ocurrió en las últimas décadas ha sido asociado a
una menor eficiencia reproductiva de las vacas de alta producción (Washburn et al., 2002; Lopez
et al., 2004). Uno de los motivos de esta problemática reproductiva es la dificultad para la
detección de celos debido a la baja expresión de los mismos (Washburn et al., 2002; Wiltbank et
al., 2006). Se atribuye la baja expresión de celos a menores concentraciones circulantes de
estrógeno debido a un mayor metabolismo hepático de hormonas esteroideas como resultado del
mayor consumo de materia seca y mayor irrigación sanguínea a nivel hepatocelular (Sangsritavong
et al., 2002; Wiltbank et al., 2000). A su vez, los métodos tradicionales de detección de celos son
ineficientes cuando son aplicados a grandes rodeos lecheros debido a la alta relación
vacas/operarios, resultando en una disminución de la precisión y eficiencia en la detección de los
celos (Nebel et al., 1987).

Por tal motivo es que se diseñaron diferentes tratamientos hormonales para solucionar el
problema de baja tasa de servicios. Una de las alternativas más útiles para incrementar la cantidad
de vacas inseminadas en un período corto de tiempo es la utilización de protocolos que sincronizan
la ovulación y permiten la inseminación sistemática sin la necesidad de detectar celo, denominados
protocolos de inseminación artificial a tiempo fijo (IATF). Además, el desarrollo de protocolos a
base de dispositivos con P4 para las vacas en anestro posparto permitió la inseminación de una
población de animales significativamente mayor (Bó et al., 2009, Bryan et al., 2013).

Los tratamientos de IATF que más se usan en Latinoamérica son en base a sales de estradiol
y dispositivos con P4 (Bó et al., 2009; 2013) y consiste en administrar 2 mg de benzoato de estradiol
(EB) por vía intramuscular (i.m.) junto con la inserción del dispositivo, en lo que nosotros
denominamos el Día 0 del tratamiento para sincronizar la emergencia de la onda folicular. En el
Día 7 u 8 se extrae el dispositivo y se aplica PGF2α i.m. para asegurar la luteólisis, junto con la
administración de 400 UI de gonadotrofina coriónica equina (eCG) y 24 h después se administra

177
 Memorias
1 mg de EB i.m. para sincronizar la ovulación realizando la IATF entre las 52 y 56 h de la remoción
del dispositivo (Bó et al., 2002b; 2009).

La finalidad de aplicar estrógenos junto con la inserción del dispositivo con P4 en el inicio
del tratamiento es inhibir la FSH provocando la atresia de los folículos pequeños e inhibir la LH
que altera la actividad estrogénica del folículo dominante y producir su consecuente atresia (Bó et
al., 1994; 1995; 2000; Burke et al., 2003). La atresia folicular es seguida de un aumento de FSH
iniciando una nueva onda folicular, impidiendo de esta manera la formación de folículos
persistentes que interfieren negativamente en la fertilidad (Bó et al., 2002a; 2002b). En contraste,
en situaciones de baja P4 y en ausencia de un tratamiento que produzca la atresia folicular, el
folículo preovulatorio y el ovocito están expuestos durante un período prolongado a una alta
frecuencia de pulsos de LH, llevando a la ovulación de un ovocito sobre-estimulado o
prematuramente activado con disminución de la fertilidad pos-inseminación (Wiltbank et al.,
2006). Cuando se utiliza EB, la atresia es seguida por el comienzo de una nueva onda folicular a
los 4 días, asegurando de esta manera la presencia de un folículo nuevo y un ovocito viable en el
momento de retirar el dispositivo, 7 u 8 días después (Bó et al., 2009). Se ha sugerido que la
combinación de E2 y P4 tiene un efecto aditivo sobre la supresión de la secreción de LH, así, cuando
se administran ambos esteroides en forma conjunta se logra un mayor control sobre la secreción
de gonadotrofinas y subsecuentemente una manipulación más precisa de la dinámica folicular (Bó
et al., 1994). La segunda administración de EB es fundamental para sincronizar la ovulación en
promedio a las 66 h de retirado el dispositivo (Cutaia et al., 2001) y obtener buenos índices de
preñez a la IATF. La mayoría de los estudios que han usado estradiol como estímulo ovulatorio
emplearon EB administrado a las 24 h de retirado el dispositivo (Macmillan y Burke, 1996; Bó et
al., 2000).

Se ha demostrado que los estrógenos (E2) administrados en la fase de elevados niveles de

P4 inducen la regresión folicular y la emergencia de una nueva onda folicular sincrónica, mientras
que la administración en la fase de bajos niveles de P4 inducen liberación de LH y la ovulación
(Mapletoft et al., 2003). Los niveles de estrógenos en el proestro en vacas de alta producción son
más bajos que en animales no lactantes (Sartori et al., 2002a) y animales de baja producción (Lopez
et al., 2004), probablemente debido a la alta tasa de metabolismo hepático de los esteroides
(Sangsritavong et al., 2002). Estas menores concentraciones de estradiol pueden estar causando
disminución en la eficiencia de transporte espermático por el tracto uterino (Hawk, 1975), menor
tasa de fertilización de los ovocitos y menor calidad embrionaria (Sartori et al., 2002b).

Además del EB, otro ester de estradiol muy utilizado en la sincronización de celos y
ovulaciones en bovinos es el cipionato de estradiol (ECP). Es importante destacar que la molécula
de estradiol-17β es la única biológicamente activa, y que los esteres de estradiol solamente
producirán efectos biológicos luego de la liberación de la molécula de estradiol-17β por medio de
la enzima estearasa a nivel sanguíneo (Mapletoft et al., 2003).

El ECP es una sal de estradiol con mayor vida media que el EB, que posee una absorción
retardada desde su administración intramuscular con una actividad biológica mucho más sostenida

178
 Memorias
que el estradiol-17β y se adapta a un esquema de aplicación de estradiol como inductor de la
ovulación en el momento de retirar el dispositivo con P4, evitando de esta manera tener que volver
a pasar los animales por la manga a las 24 h de retirado el dispositivo. La administración i.m. de
EB produce un pico de estradiol plasmático de gran magnitud y corta duración, mientras que el
ECP produce un pico de menor magnitud, mayor amplitud y más prolongado en el tiempo
(Vynckier et al., 1990).

Souza et al. (2009) describió que el ECP (1 mg i.m.) aplicado al retiro del dispositivo
incrementó el porcentaje de vacas en celo dentro de las 48 h, las cuales ovularon antes y fueron
menos sincronizadas comparadas con vacas sin celo prematuro, existiendo una mayor variabilidad
al momento del pico de LH en vacas tratadas con ECP en relación con las tratadas con GnRH.
Debido a esta dispersión en la ovulación las vacas que presentarían un celo prematuro tendrían una
buena fertilidad cuando se las insemina a las 48 h, mientras que cuando se las insemina a las 54 h
se estaría logrando una buena concepción en aquellas hembras que sufren un atraso en la ovulación.
Debido a la poca información detallada sobre la utilización de ECP en protocolos de IATF en
vacas Holando Argentino es que resulta de interés profundizar el estudio sobre dinámica folicular,
expresión de celos y ovulación, y su relación con la tasa de preñez cuando se lo utiliza como
inductor de ovulación

Otra manera de disminuir el número de encierres fue utilizar GnRH en el momento de

realizar la IATF como inductor de la ovulación, con resultados similares al tratamiento tradicional
en vacas de carne (Bó et al., 2000). En presencia de un folículo dominante de más de 9 mm la
administración de GnRH induce la ovulación entre las 24 a 32 h (Pursley et al., 1998). La
administración de GnRH produce un pico de liberación de LH aproximadamente 2 h después de
su administración i.m., en una magnitud que depende de los niveles de P4 en el momento de su
aplicación. La ovulación del folículo dominante está asociada con la disminución de la
concentración plasmática de estradiol y por lo tanto se ha reportado una menor expresión de celos
en los tratamientos que utilizan GnRH en lugar de estradiol como inductor de la ovulación
(Martinez et al., 2002).
Se diseñaron cuatro experimentos de inseminación a tiempo fijo con estradiol y
dispositivos con progesterona y ECP como inductor de ovulación en vacas Holando Argentino en
lactancia, para evaluar el efecto de la adición de GnRH al inicio y al final de un tratamiento y la
expresión de celos sobre la tasa de preñez.

El objetivo del experimento 1 fue evaluar si la adición de GnRH al tratamiento con EB

aplicado al momento de la inserción de un dispositivo con P4 mejora la tasa de preñez.

El objetivo del experimento 2 fue estudiar la dinámica folicular y el horario inseminación

ovulación utilizando diferentes horarios de inseminación (48 h vs 60 h) de acuerdo a la expresión
de celos.

179
 Memorias
El objetivo del experimento 3 fue evaluar si la tasa de preñez varía utilizando diferentes
horarios de inseminación (48 h vs 60 h) de acuerdo a la expresión de celos.

El objetivo del experimento 4 fue evaluar si la administración de GnRH a las vacas sin
síntomas de celo a las 48 h de retirado el dispositivo y que son inseminadas a las 60 h aumenta la
tasa de preñez.

MATERIALES Y METODOS

Se utilizaron vacas lactantes Holando Argentino provenientes de un establecimiento

lechero comercial de aproximadamente 400 vacas en ordeño de la localidad de Marull, ubicado al
sudeste de la Provincia de Córdoba (República Argentina), alimentadas con dietas totales
mezcladas (TMR) y suministradas en calle de comida. Todas las categorías de animales se
encontraban encerradas en piquetes con piso de tierra con dietas a base de silo de maíz, heno de
alfalfa, expeler de soja, semilla de algodón o expeler de girasol, maíz molido y sales minerales,
balanceadas para atender o exceder los requerimientos nutricionales mínimos de cada categoría
(NRC, 2001).

Los diferentes estudios se realizaron desde septiembre 2013 hasta junio del año 2015. En
los experimentos 1, 2 y 3 las vacas recibieron su primer servicio posparto. Se utilizó semen apto
al examen de calidad seminal. Para la asignación de los tratamientos en cada experimento las vacas
fueron primero bloqueadas teniendo en cuenta las estructuras ováricas (presencia de CL o por lo
menos un folículo ≥25 mm, un folículo grande ≥10 y < 25 mm o un folículo chico < 10 mm de
diámetro), condición corporal, producción al control lechero anterior al inicio de la sincronización,
número de lactancia y días de parida; y luego distribuidas al azar en cada grupo de tratamiento.
Para la visualización de las estructuras ováricas, el diagnóstico de gestación y la reconfirmación
de la preñez se realizó ecografía transrectal con un ecógrafo Honda HS-101 V (Honda Electronics,
Japón) equipado con un transductor de 5 MHz en modo B. Para la determinación de la condición
corporal (CC) se utilizó la escala de 1 a 5, donde 1 corresponde a vacas emaciadas y 5 vacas obesas,
con divisiones de 0,25 puntos. (Edmonson et al., 1989).
Para el procesamiento estadístico de los datos de estos experimentos se utilizó el Software
Estadístico Infostat (Di Rienzo et al., 2015). Se ajustó un análisis de varianza (ANOVA) para
evaluar el efecto del tratamiento sobre las variables tamaño del folículo dominante en el momento
de la remoción del DIB y previo a la ovulación, crecimiento diario del folículo dominante y
momento de la ovulación. Luego, se analizaron los residuos del primer ajuste y se observó la
presencia de homogeneidad de varianzas entre los diferentes tratamientos para el momento de
ovulación. Para testear homogeneidad de varianzas entre tratamientos se utilizó el test de Bartlett.
Las comparaciones de media se realizaron con la diferencia media mínima (DMS) de Fisher (alfa
= 0,05) bajo el modelo extendido. Para analizar las curvas de la dinámica folicular bajo los distintos
tratamientos se ajustó un ANOVA para modelos mixtos. Para analizar el intervalo entre la IA y la
ovulación y la tasa de preñez, se realizó un gráfico de dispersión donde la variable independiente

180
 Memorias
fue el intervalo entre la IA y la ovulación y la variable dependiente fue la tasa de preñez. Se analizó
mediante modelo lineal generalizado bajo distribución binaria.
Por último, se ajustaron regresiones logísticas múltiples utilizando una aproximación de
modelos mixtos para variables binarias (preñada o vacía) y con enlace logit para evaluar qué
factores y en qué medida afectaron la preñez. Cuando se encontraron diferencias significativas
entre los factores o sus interacciones se utilizó la diferencia media mínima (DMS) de Fisher
(alfa=0,05) bajo el modelo logístico extendido. La tendencia se fijó en P<0,10.
Experimento 1

Para este experimento se utilizaron 200 vacas Holando Argentino en lactancia, con 72,3 ±
29,1 días desde la parición, 2,5 ± 1,3 partos, 33,2 ± 7,1 litros de producción de leche/día, con una
condición corporal de 2,8 ± 0,4 (escala 1-5) y que recibían su primer servicio.
El protocolo de sincronización de los celos utilizado fue en el Día 0: colocación de un
dispositivo intravaginal de silicona inerte impregnados con 1g de progesterona de liberación
controlada (DIB® 1 g de P4; Zoetis) junto con la aplicación intramuscular de 2 mg de un análogo
sintético de estradiol (Benzoato de Estradiol 1mg/ml, Gonadiol®; Syntex SA). En el Día 8 se
retiraron los DIB y se aplicó 500 µg de un análogo sintético de Prostaglandina F2α (Cloprostenol
Sódico 250 μg/ml, Ciclase® DL; Syntex SA), 1 mg de análogo sintético de estradiol de acción
prolongada (Cipionato de Estradiol 0,5 mg/ml, Cipiosyn®; Syntex SA) y 400 UI de Gonadotrofina
Coriónica Equina (eCG 200 UI/ml, Novormon 5000®; Syntex SA). Los animales fueron divididos
en un diseño factorial 2x2 para recibir una dosis de análogo sintético de la Hormona Hipotalámica
Liberadora de Gonadotrofinas (GnRH; Gonadorelina Acetato 50 μg/ml, Gonasyn GDR®; Syntex
SA) al momento de la colocación del DIB (Día 0; n=100) o permanecer como controles no tratados
(n=100), y para dividir el horario de inseminación inseminando a las 48 h las vacas que presentaban
celo a las 48 h y aplicar una dosis de GnRH (Día 10) a las 48 h de retirado el dispositivo y atrasar
a las 60 h la IA en animales que no manifiestan celo (n=100) o permanecer como controles no
tratados y ser inseminadas todas las vacas a las 48 h independientemente de la manifestación de
celo (n=100).

Para la determinación de presencia o ausencia de celo en los animales se contó con la ayuda
de pinturas (Celotest, Biotay SA, Argentina), considerándose como animal en celo a todo aquel
que a las 48 o 60 h de retirado el dispositivo presentaba más del 40 % de pérdida de color, tomando
como referencia el experimento realizado en vacas Braford por Stharinger et al. (2011).

Experimento 2

El experimento 2 es complementario del experimento 1 y se realizó una parte intensiva con

ultrasonografía frecuente para evaluar la dinámica folicular y el intervalo inseminación ovulación,
examinándose cada 12 h desde el momento del retiro del DIB hasta la ovulación o 120 h del retiro.
Las unidades experimentales constituyeron una muestra de 40 vacas Holando Argentino en

181
 Memorias
lactancia, con 92,3 ± 12,1 días desde la parición, 2,8 ± 1,4 partos, 33,3 ± 4,4 litros de producción
de leche/día, con una condición corporal de 2,7 ± 0,3 (escala 1-5) y que recibían su primer servicio.

Para el diseño del experimento se las dividió en cuatro grupos: Grupo IATF 48: recibieron
en el Día 0, 2 mg de EB junto con la aplicación de un DIB. En el Día 8 se removieron los DIB y
se administró PGF2α, 400 UI de eCG y 1 mg de ECP. En el Día 10 se les realizó la IATF a las 48
h de retirado los dispositivos. Grupo IATF 60: ídem al grupo 1 pero se inseminaron todas a las
60 h. Grupo GnRH IATF 60: el tratamiento hormonal es similar al del grupo 2 y se las inseminó
a todas a las 60 h con la diferencia de que se les aplicó GnRH a las vacas que a las 48 h de retirado
el DIB no habían mostrado celo. Grupo GnRH IATF 48 y 60: el tratamiento hormonal es similar
al del grupo 3 con la diferencia de que las vacas que a las 48 h de retirado el dispositivo habían
estado en celo se las inseminó en ese momento y las que no mostraron celo a las 48 h se les aplicó
GnRH en ese momento y se las inseminó a las 60 h.

Experimento 3

El diseño del experimento es igual al anterior pero menos intensivo, para evaluar las tasas
de preñez a la IATF de los diferentes tratamientos. Se utilizaron 400 vacas Holando Argentino con
lactancia, con 77,0 ± 22,0 días desde la parición, 2,3 ± 1,4 partos, 33,8 ± 6,3 litros de producción
de leche/día, con una condición corporal de 2,8 ± 0,2 (escala 1-5) y que recibían su primer servicio.
Experimento 4

Se utilizaron 1066 vacas Holando Argentino en lactancia con 115,5 ± 69,2 días desde la
parición, 2,2 ± 1,2 partos, 31,6 ± 8,0 litros de producción de leche/día y una condición corporal de
2,9 ± 0,2 (escala 1-5). Para la asignación de los tratamientos se las dividió en dos grupos y se les
asignó dos tratamientos al azar. Se utilizó un tratamiento de 8 días con DIB de 1 g. En el Día 0 se
administró 2 mg de EB junto con la aplicación del dispositivo. En el Día 8 se retiraron los
dispositivos y se administró PGF2α, 400 UI de eCG, 1 mg de ECP y pintura en la base de la cola.
A las 48 h de retirado el dispositivo se inseminó a todas las vacas que presentaron celo (pérdida
de más del 40% de la pintura, n=565) y las que no manifestaron celo (n=501) recibieron una dosis
de GnRH a las 48 h (n=248) y o permanecieron como controles no tratadas (n=253) y fueron IATF
a las 60 h.

RESULTADOS

Experimento 1

Del total de animales, el 62,0% (124/200) presentó celo dentro de las 48 h de retirado el
dispositivo, mientras que el 38,0% (76/200) restante no. La aplicación de GnRH en las vacas que
no mostraron celo a las 48 h y atrasar su IATF a las 60 h mejoró el porcentaje de preñez (53% vs

182
 Memorias
31%, P<0,01). Por otro lado, la colocación de GnRH a la inserción del dispositivo en el Día 0 no
mejoró significativamente las tasas de preñez (44% vs 40%, P>0.5), ni hubo una interacción entre
la aplicación de GnRH en el Día 0 y el horario de inseminación (P>0,1). Las variables condición
corporal, días de parto, número de parto, producción y número de servicios no fueron
estadísticamente significativas (P>0,05), así como tampoco la interacción entre tratamiento inicial
con GnRH y división del horario de IA y aplicación de GnRH en las vacas que no manifestaron
celo (P>0,1).

Experimento 2

Los resultados sobre expresión de celos, tasa y hora de ovulación y desarrollo folicular
según tipo de tratamiento se resumen en la Tabla 1. Se puede observar que si bien en el Grupo 4
(GnRH IATF 48 y 60) en el cual se utilizó GnRH como apoyo para inducir la ovulación del folículo
preovulatorio disminuyó la expresión de celos (P<0,05), no afectó la hora de celo (P>0,4), tasa de
ovulación (P>0,5) y hora de ovulación (P>0,9). Tampoco existió diferencia entre el diámetro del
folículo ovulatorio (P>0,2) y la tasa de crecimiento folicular (P>0,3).

Tabla 1. Expresión de celo y respuesta ovárica en vacas Holando Argentino en lactancia

inseminadas a tiempo fijo según tratamiento.
Grupo** Tasa de Hora de Tasa de Hora de Diámetro del Tasa de Tasa
celo (celo/ celo ovulación ovulación * folículo crecimiento Preñéz
sincroniza (ovuladas ovulatorio folicular
das) /sincronizadas) (mm)* (mm/día)*

IATF 48 90,0% b 61,3 ± 4,2 90,0% (9/10) 78,7 ± 16,1 15,4 ± 2,5 1,5 ± 0,2 40,0%

IATF 60 100,0% b 56,4 ± 4,4 100,0% (10/10) 74,4 ± 18,3 16,2 ± 4,2 1,3 ± 0,3 50,0%

GnRH 70,0% ab 51,4 ± 2,2 90,0% (9/10) 74,7 ± 13,2 13,7 ± 1,6 1,4 ± 0,2 50,0%
IATF 60

GnRH 44,0% a 57,0 ± 3,0 100,0% (9/9) 76,0 ± 10,4 15,1 ± 1,9 1,4 ± 0,3 67,0%
IATF 48 y 60

P-Valor <0,05 0,404 0,599 0,924 0,267 0,382 0,106

ab denotan diferencias significativas (P<0.05)

*Desde el retiro del dispositivo hasta la ovulación.

** IATF 48: IATF todas a las 48 h; IATF 60: IATF todas a las 60 h; GnRH IATF 60: No despintadas GnRH a las 48 h y todas
IATF a las 60 h; GnRH IATF 48 y 60: Despintadas IATF 48 h, no despintadas GnRH a las 48 h e IATF 60 h.

Si analizamos el tamaño del FPO y momento de ovulación con respecto a la expresión de

los celos podemos ver que las vacas que presentaron celo a las 48 h ovularon antes y con un folículo
de mayor diámetro que las que no presentaron celo a las 48 h (P<0,05, Tabla 2).

183
 Memorias
Tabla 2. Momento de ovulación y tamaño de FPO en vacas Holando Argentino según presencia
(despintadas) o ausencia (pintadas) de celo a las 48 h de retirado el dispositivo.
Grupo n Momento de Tamaño del FPO
ovulación (h)* (mm)
Celo (Despintadas) 23 61,7 ± 6,4 a 16,3 ± 4,2 a
No Celo (Pintadas) 14 84,5 ± 10,5 b 14,5 ± 1,2 b
ab denotan diferencias significativas (P<0.05)

*Desde el retiro del dispositivo hasta la ovulación.

Para observar la dinámica de presentación de celos según tratamientos se unieron los

Grupos IATF 48 y IATF 60 (sin GnRH) y Grupos GnRH IATF 60 con GnRH IATF 48 y 60 (con
GnRH). La tasa de expresión celos fue mayor en las vacas que no recibieron GnRH en
comparación con las vacas que se les adicionó GnRH (P<0,05). En las vacas sin GnRH la expresión
de los celos estuvo comprendida en un rango horario que fue de las 36 h a las 84 h, con una
dispersión mayor (varianza P<0,01) que en las vacas que recibieron GnRH, que mostraron celo
entre las 48 y 60 h.
Si analizamos la dinámica de ovulación para el grupo sin GnRH (grupo IATF 48 + grupo
IATF 60) y con GnRH (grupo GnRH IATF 60 y grupo GnRH IATF 48 y 60) podemos observar
que la tasa de ovulación fue del 95,0% para ambos grupos. Esto demuestra como la administración
de GnRH induce ovulación disminuyendo la expresión de celos. Tampoco hubo diferencia
significativa en la hora media de ovulación. Sin embargo, si observamos la ventana de ovulación
se aprecia una tendencia (P<0,1) a una menor dispersión del momento de ovulación en las vacas
que se les adicionó GnRH en comparación con las que no recibieron GnRH. Ver tabla 3.

Tabla 3. Porcentaje y hora promedio de ovulación en vacas IATF con ECP como inductor de la
ovulación con o sin adición de GnRH.
Tratamiento % de Media Varianza CV Min Máx Mediana
Ovulación (h) (h) (h) (h)

Sin GnRH 95,0% a 76a 276,0c 22,30 48 96 84

Con GnRH 95,0% a 75a 124,0d 15,20 60 96 78

a Los porcentajes y media no difieren (P>0.05)

cd Las varianzas tienden a diferir (P<0,1)

En la Tabla 4 se puede ver el intervalo entre las horas de inseminación y la ovulación que
fue mayor para el grupo IATF 48 (P<0,05) que para el resto de los grupos. Se puede observar que
el coeficiente de variación y la varianza fueron menores en el Grupo GnRH IATF 48 y 60 donde

184
 Memorias
se dividió el horario de inseminación según expresión del estro y se administró GnRH a las vacas
que a las 48 h de retirado el dispositivo no habían mostrado signos de estro, que en el resto de los
grupos (P<0,05).
Tabla 4. Intervalo en horas entre el momento de inseminación y la hora promedio de ovulación en
vacas Holando Argentina IATF según tratamiento.
Grupo* n Media Mediana Varianza C.V. Min Max

IATF 48 9 30,7±5,3a 36,0 227,6

b
52,0% 12 48

IATF 60 10 18,0±6,1b 16,0 333,6

b
129,0% -12 36

GnRH IATF 9 18,7±4,4b 16,0 152,9

b
89,0% 0 36
60

GnRH IATF 9 18,7±2,1b 24,0 35,6

a
34,0% 12 24
48 y 60
ab denotan diferencias significativas (P<0.05)

* IATF 48: IATF todas a las 48 h; IATF 60: IATF todas a las 60 h; GnRH IATF 60: No despintadas GnRH a las 48 h y todas
IATF a las 60 h; GnRH IATF 48 y 60: Despintadas IATF 48 h, no despintadas GnRH a las 48 h e IATF 60 h.

En la Figura 1 se puede observar la dispersión de la ovulación con respecto a la

inseminación según tratamientos si se toma como hora 0 al momento de la inseminación. Se puede
ver como en el grupo 4 (GnRH IATF 48 y 60) las ovulaciones se concentraron entre las 12 y 24 h
desde el momento de inseminación a diferencia del resto de los tratamientos donde la dispersión
fue mayor.

185
 Memorias
Intervalo IA - Ovulación
5
N
ú
m 4
e
r
o 3 Grupo 1
A Grupo 2
n Grupo 3
i
2
Grupo 4
m
a
l 1
e
s
0
-12 0 12 24 36 48 60
Horas

Grupo1: IATF 48 h; Grupo 2: IATF 60 h; Grupo 3: No despintadas GnRH a las 48 h y todas IATF a las 60 h; Grupo 4:
Despintadas IATF 48 h, no despintadas GnRH a las 48 h e IATF 60 h

Figura 1. Dinámica de dispersión de la ovulación con respecto a la inseminación en vacas Holando

Argentino IATF según tratamientos.
En la Figura 2 se observó que el mayor porcentaje de preñez se logró cuando las vacas
ovularon entre las 12 y 24 h desde el momento de la inseminación, donde la máxima probabilidad
de preñez se dio a las 23,7h. Se evidenció que dicho intervalo es estadísticamente diferente a los
restantes. Se ajustó un modelo lineal generalizado cuadrático (regresión logística) para la variable
binaria diagnóstico en función del intervalo IA-OV, resultando una dependencia estadísticamente
significativa entre diagnóstico e intervalo IA-OV (P<0,01).

186
 Memorias
Probabilidad de Preñez (modelo ajustado)

0.9

0.8

0.7

0.6
Probabilidad de
Preñez 0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0
-20 -10 0 10 20 23,7 30 40 50 60 70
IA/OV (horas)

Figura 2. Probabilidad de preñez en función del intervalo desde la inseminación a la ovulación

(P<0,01).

Experimento 3

Al analizar la Tasa de Preñez entre grupos se observó que no existió diferencia entre grupos
Grupo IATF 48: 42,9% (42/98), Grupo IATF 60: 39,0% (39/100); Grupo GnRH + IATF 60: 40,2%
(39/97); GnRH + IATF 48 y 60: 46,0% (46/100). Del total de 400 vacas iniciadas en el
experimento, 5 vacas se han perdido debido a que fueron descartadas por venta o muerte antes del
diagnóstico de gestación.

Si bien los diferentes tratamientos no afectaron la tasa de preñez, cuando se analizaron los
datos teniendo en cuenta la expresión de celos y el horario de inseminación (Tabla 5) se observó
una interacción (P<0,01) entre estos factores. Las vacas que no presentaron celo a las 48 h y fueron
inseminadas a las 60 h y las vacas que presentaron celo a las 48 h y fueron inseminadas a las 48 h
se preñaron más que las que mostraron celo a las 48 h y fueron inseminadas a las 60 h y las que
no mostraron celo y fueron inseminadas a las 48 h (P<0,01). Esto demuestra que la división del
horario de inseminación en vacas inseminadas a tiempo fijo utilizando ECP como inductor de la
ovulación mejora el porcentaje de preñez. Se pudo observar que las vacas que mostraron celo al

187
 Memorias
momento de la inseminación después de la aplicación de GnRH tuvieron una mayor tasa de preñez
(59,5%, 29/67) que las que no lo hicieron (43,3%, 53/89 P<0,05).
Tabla 5. Tasa de preñez según presencia o ausencia de celo a las 48 h en relación a la hora de
inseminación.
Celo a 48 h Hora de Inseminación Tasa de Preñez

US 30 Días (n=395)

No 60 53,4% (70/131) a

Si 48 47,8% (56/117) a

Si 60 29,7% (33/111) b

No 48 19,4% (7/36) b

Diferentes superíndices dentro de una misma columna representan diferencias significativas (p< 0,01).

Experimento 4
La tasa de preñez general fue mayor en el grupo tratado con GnRH a las vacas que no
mostraron celo a las 48 h de retirado el dispositivo (50,6%; 268/530 vs 42,7%; 229/236; P<0,01).
Además, cuando se consideraron solo las vacas que no presentaron celo a las 48 h se encontró una
interacción significativa (P<0,05) entre las las que mostraron celo a las 60 h (horario de la segunda
IATF) y si recibieron o no GnRH. No hubo diferencia en las tasas de preñez entre las vacas que
presentaron celo a las 60 h con GnRH (61,1%; 55/90) o sin GnRH (53,5%; 54/101) y las que no
presentaron celo a las 60 h pero que recibieron GnRH 12 h antes (57%; 90/158; P>0,1), mientras
que las vacas que no presentaron celo ni recibieron GnRH tuvieron una menor tasa de preñez que
los otros grupos (30,3%; 46/152; P< 0,001).

DISCUSIÓN

Si bien la inclusión de GnRH al inicio del protocolo no mejoró el porcentaje de preñez, y

tampoco habría mejorado el inicio de la nueva onda folicular, mediante estos experimentos se
confirmó la hipótesis de que la inclusión de una dosis de GnRH al final del tratamiento de
sincronización y la modificación del horario de inseminación aumentan la tasa de preñez en vacas
tratadas con dispositivos con P4 que no hayan manifestado celo al momento de la IATF cuando se
utiliza ECP como inductor de la ovulación.

188
 Memorias
En el Experimento 1, la idea de colocar GnRH en el Día 0 fue mejorar la sincronía de una
nueva onda folicular al estimular la liberación de LH y consecuentemente la ovulación de los
folículos de mayor tamaño, con la subsiguiente formación de un CL evitando de esta manera la
existencia de folículos persistentes de menor fertilidad (Pereira et al., 2015). No obstante, se
observó que este tratamiento no mostró diferencias significativas en las tasas de preñez con los
que solo utilizaron EB al inicio del tratamiento, indicando que el posible efecto ovulatorio de la
GnRH sobre los folículos >10 mm de diámetro (Wiltbank et al., 2013) no influenció la respuesta
al tratamiento. Pereira et al. (2015) realizaron un experimento para evaluar el efecto de la
administración de GnRH en el Día 0 en vacas lecheras de alta producción en Brasil y observaron
que el tratamiento con GnRH solo tuvo un aumento marginal en la tasa de preñez especialmente
durante la temporada fría del año y en vacas con ausencia de CL y baja P4 en el inicio del protocolo
(<3 ng/ml), mientras que en las con CL no se encontraron diferencias. Esto estaría indicando que
la ausencia de diferencias significativas en el Experimento 1 de esta tesis, se puede deber
principalmente a que la mayoría de las vacas (68%) tenían un CL en el momento del iniciar el
tratamiento. La razón por la diferencia en el efecto de adicionar GnRH en las vacas sin CL con las
vacas con CL puede ser debido a que la liberación de LH en respuesta a la administración de GnRH
es mayor en vacas con bajos niveles de P4 que las que tienen altos niveles de P4 (Kastelic y
Mapletoft, 1998). Por lo tanto, es lógico pensar que la GnRH va a tener un mayor efecto inductor
de la ovulación del folículo dominante en las vacas con baja P4. De hecho, en el experimento de
Pereira et al. (2015) la administración de GnRH en el Día 0 del tratamiento resultó en un mayor
porcentaje de vacas que formaron un nuevo CL y mayores niveles circulantes de P4 en el Día de
la remoción del dispositivo que en el grupo control que no recibió GnRH. Por lo tanto, el
experimento de Pereira et al. (2015) como el nuestro, muestra solo diferencias marginales en las
vacas con CL, cuestionando la justificación de adicionar GnRH en el Día 0 en forma sistemática
en vacas lecheras cuando la mayoría de ellas está ciclando al inicio del protocolo. Por lo tanto,
debido a su alta eficiencia y simplicidad, el tratamiento que más se sigue utilizando en América
Latina para iniciar una nueva onda folicular sincrónica en protocolos de IATF, es la combinación
de P4 más estradiol, ya que suprime eficientemente la secreción de FSH y LH dando inicio a una
nueva onda entre los 2 y 5 días, con un promedio de 4 días en un 90% de las vacas de carne (Bó et
al., 1994; 1995; 2002) y un 75% de las vacas de leche (Balla et al., 2005) con variaciones según el
nivel de producción. Souza et al. (2007b) demostraron que existe una correlación negativa
significativa entre la producción de leche y la emergencia de la onda folicular, las vacas con
mayores producciones de leche (> 35 kg/día) poseen una emergencia más temprana de la onda
folicular (3,5 ± 0,2 días) que las que poseen una producción menor (< 25 kg/día; 4,6 ± 0,3 días).

En este experimento los tratamientos en los que se dividió el horario de inseminación con
respecto a la expresión de celos tuvieron mayor tasa de preñez (53% vs 31%, P< 0,01) que los que
fueron IATF a las 48h, coincidiendo con los datos reportados por Souza et al., (2009) quien
sostuvo que la división del horario de inseminación mejoraría la tasa de preñez debido a que las
vacas que presentan un celo prematuro presentarían una buena fertilidad cuando se las insemina a
las 48 horas, mientras que cuando se las insemina a las 56 horas se estaría logrando una buena
concepción en aquellas vacas que sufren un atraso en la ovulación.

189
 Memorias
El objetivo del Experimento 2 fue estudiar mejor la dinámica folicular en protocolos de
IATF con E2 y dispositivos con P4 utilizando ECP como inductor de la ovulación y en base a estos
hallazgos evaluar cuál era el mejor horario de inseminación y si la división del horario de
inseminación y la adición de una dosis de GnRH a las que no presentaban signos de celo mejoraba
la tasa de preñez en comparación con las que utilizaban un único horario de inseminación. Los
inductores de ovulación que más se utilizan en protocolos de IATF son hormonas que inducen un
pico de LH, tales como los ésteres de estradiol y la GnRH. Con la aplicación de ECP al retiro del
dispositivo la concentración plasmática de estradiol comienza a aumentar a las 12 horas (Vinckier
et al., 1990; Souza et al., 2009; Uslenghi, 2016) y en presencia de un folículo dominante grande
podría inducir un pico de LH anticipado, debido a la sumatoria del estradiol sintético y el estradiol
endógeno producido por el propio folículo, adelantando la ovulación de los folículos de mayor
tamaño (Colazo et al., 2003). De esta manera podrían llegar a ovular en forma temprana (antes de
las 60 h) viéndose afectada la fertilidad de las vacas que ovulan tempranamente. Por otra parte el
pico de LH que produce el ECP es de menor magnitud que el producido cuando se utiliza EB como
inductor de la ovulación (9,4 ± 2,2 vs 20,5 ± 1,9 ng/ml) pero de mayor duración (50,5 ± 3,6 vs
19,6 ± 1,2 h) que explica la mayor dispersión de celos y las ovulaciones (Sales et al., 2012;
Uslenghi et al., 2014). Las vacas tratadas con ECP como inductor de ovulación tienen una ventana
de ovulación más amplia que cuando se utiliza EB, de aproximadamente 48 h (entre 42 y 90 h pos
retiro del dispositivo) según reportó Ayres et al. (2008); por lo cual los animales que entran en celo
a las 48 h y se inseminan más tarde ven dificultada su preñez debido a que al ovular tempranamente
tienen un ovocito envejecido al momento de la inseminación, disminuyendo la tasa de fecundación
o produciendo muertes embrionarias tempranas (Dalton et al., 2001).

En el experimento 2 se pudo observar que si bien los tratamientos en los cuales se utilizó
GnRH como apoyo para inducir la ovulación del folículo pre-ovulatorio disminuyó la expresión
de celos, no afectó la hora de celo, tasa de ovulación y hora de ovulación. En las vacas sin GnRH
la expresión de los celos estuvo comprendida en un rango horario que fue de las 36 a las 84 h, con
una dispersión mayor que en las vacas que recibieron GnRH, que mostraron celo entre las 48 y 60
h. Esto demuestra como la administración de GnRH induce ovulación disminuyendo la expresión
de celos coincidiendo con lo reportado por Martinez et al. (2002) quien reportó que la ovulación
del folículo dominante al administrar GnRH está asociada con la disminución de la concentración
plasmática de estradiol y por lo tanto menor expresión de celos. Tampoco existió diferencia entre
el diámetro del FPO y la tasa de crecimiento folicular. Si analizamos el tamaño del FPO y momento
de ovulación con respecto a la expresión de los celos podemos ver que las vacas que presentaron
celo a las 48 h ovularon antes y con un folículo de mayor diámetro que las que no presentaron celo
a las 48 h, similar a lo reportado por Salfen et al. (1999). Así mismo, hubo una tendencia (P<0,1)
a una menor varianza en la hora de ovulación en las vacas que recibieron GnRH en comparación
con las que no. Cuando se analizó el horario de ovulación con respecto a la inseminación se pudo
observar una menor dispersión desde el momento de la inseminación a la ovulación en el
tratamiento donde se dividió el horario de inseminación y se utilizó GnRH en las vacas que no
presentaron celo a las 48 h con respecto al resto de los tratamientos. Con este tratamiento las
ovulaciones se concentraron entre las 12 y 24 h desde el momento de inseminación, siendo el
mejor intervalo inseminación/ovulación para lograr una adecuada tasa de fertilización según
sostienen Dransfield et al. (1998) y Rodríguez Hernández et al. (1995), a diferencia del resto de
los tratamientos donde la dispersión fue mayor. Dransfield et al. (1998) demostraron que la

190
 Memorias
probabilidad de que ocurra una concepción disminuía a medida que la inseminación se aproxima
mucho al momento de la ovulación y cuando la inseminación se realizaba en animales ya ovulados.
En este experimento se pudo determinar que el intervalo inseminación/ovulación donde se logró
la mayor tasa de preñez fue entre las 12 y las 24 h, donde la máxima probabilidad de preñez se dio
a las 23,7 h. Esto demuestra que la división del horario de inseminación y la adición de GnRH en
vacas IATF utilizando ECP como inductor de la ovulación disminuye la dispersión entre la
inseminación y la ovulación resultando en un adecuado control y sincronización de las
ovulaciones. Las vacas que presentan un celo prematuro presentaran una buena fertilidad cuando
se las insemina a las 48 h, mientras que la aplicación de GnRH para evitar retrasos en las
ovulaciones y el atraso del horario de inseminación a las que no presentaron celo a las 48 h
mejoraron el porcentaje de preñez.

El experimento 3 se realizó para evaluar las tasas de preñez a la IATF de los diferentes
tratamientos, donde se observó que no hubo diferencia significativa entre tratamientos,
contrariamente a lo encontrado en el Experimento 1. En el Experimento 1, el grupo que se
inseminó de acuerdo a la expresión de celos tuvo una tasa de preñez significativamente mayor que
el grupo en el cual todas las vacas fueron IATF a las 48 h. Si bien se esperaba una mayor tasa de
preñez en este tratamiento, en este caso no hubo diferencias significativas. Es difícil poder explicar
el motivo de estos resultados diferentes. Una diferencia posible puede ser el semen utilizado en
cada uno de los experimentos. Se ha estimado que la máxima viabilidad espermática en el tracto
genital femenino es de 24 a 30 h (Hiers et al., 2003) por lo cual lograr una mejor sincronía entre la
ovulación y el arribo de los espermatozoides debería mejorar la tasa de fecundación. Sin embargo,
hay grandes variaciones entre toros en cuanto a la persistencia de espermatozoides viables en el
tracto reproductivo femenino (Dalton, 2013). Por lo tanto, es posible que el semen utilizado en
este estudio haya sido de una calidad superior o de mayor fertilidad individual que el utilizado en
el Experimento 1, compensando en parte la deficiencia en la distribución de las ovulaciones,
permaneciendo viable en el tracto genital femenino durante un mayor período de tiempo.
Desafortunadamente, estas diferencias de persistencia en el oviducto no son posibles de determinar
por los test in vitro convencionales de evaluación de la calidad seminal (Dalton, 2013). No
obstante, a pesar que las diferencias entre grupos no fueron significativas los valores favorecieron
numéricamente al grupo en el que se dividió la inseminación de acuerdo a la expresión de celos.

La conclusión más importante del Experimento 3 es que a pesar de no haber diferencias en

la tasa de preñez entre grupos, cuando se analizaron los datos teniendo en cuenta la expresión de
celos y el horario de inseminación se encontró una interacción significativa entre ellas. Se
demostró que las vacas que presentaron celo a las 48 h del retiro del dispositivo se preñaron más
cuando se las inseminó a las 48 h y las que no presentaron celo se preñaron más cuando se las
inseminó a las 60 h, afirmando que la división en el horario de inseminación en protocolos de
IATF que utilizan ECP como inductor de la ovulación sería una medida adecuada para disminuir
la a sincronía inseminación/ovulación.

Además de eso, se observó que las vacas que demostraron celo previo a la IA obtuvieron
mayor tasa de preñez que las que no lo hicieron, tanto en las que presentaron celo a las 48 h (48%
vs 30%) como las que mostraron celo luego de la aplicación de GnRH (60% vs 43%). Según Perry

191
 Memorias
et al. (2014) existe una interacción entre el diámetro del folículo preovulatorio, el ambiente
hormonal óptimo (demostrado por la expresión de celos), y el establecimiento y mantenimiento de
la preñez. Las vacas que presentan celo antes de la inseminación tienen más chances de ovular y
lograr una preñez en comparación con las que no lo hacen (Perry et al., 2007). El diámetro folicular
al momento de la IATF y la ocurrencia de estro al final del protocolo de sincronización es uno de
los factores que pueden influenciar las respuestas de los protocolos de sincronización (Sa Filho et
al., 2010; 2011b) porque está relacionado con la producción de E2, el tamaño del CL de la fase
luteal subsiguiente y la producción de P4 (Thatcher et al., 2001; Souza et al., 2009). El crecimiento
folicular final y el diámetro del folículo dominante en el momento de la IATF pueden afectar
significativamente la calidad de los ovocitos, la ovulación, el ambiente uterino, y por consiguiente,
la preñez. En vacas tratadas con EB al inicio del protocolo, los folículos ovulatorios más grandes
en el día de la IATF muestran una mayor expresión de celos, mayor tasa de ovulación y dan lugar
a un mayor número de preñeces por IA (Sá Filho et al., 2010; Tschopp y Bó, 2015). En base a esto,
podríamos concluir que en vacas que presenten celo al momento de la IATF podríamos utilizar
semen de mayor valor genético debido a que tienen mayor probabilidad de preñarse.

En el experimento 4 se evaluó la tasa de preñez en función de la adición o no de GnRH a

las vacas que no presentaban celo a las 48 h y se difería su inseminación a las 60 h. En este caso
se encontró una diferencia estadística en favor del tratamiento que utilizó GnRH, demostrando que
con la adición de GnRH a las vacas que no presentaron celo a las 48 h mejora la tasa de preñez
general a la IATF (50,6% vs 42,7%). Además, el hallazgo más importante de este experimento fue
que no hubo diferencia en las tasas de preñez entre las vacas que presentaron celo a las 60 h con
GnRH (61,1%; 55/90) o sin GnRH (53,5%; 54/101) y las que no presentaron celo a las 60 h pero
que recibieron GnRH 12 h antes (57%; 90/158; P>0,1), mientras que las vacas que no presentaron
celo ni recibieron GnRH tuvieron una menor tasa de preñez que los otros grupos (30,3%; 46/152;
P< 0,001). Trabajos de Ribadu et al. (1999) informaron que el tratamiento de vacas lecheras
repetidoras con GnRH al momento de la inseminación resultó en el aumento de los índices de
preñez, pudiéndose deber simplemente a la estimulación de un pico de LH en el subconjunto de
vacas que presentan celo evidente sin el posterior pico de LH u ovulación. Del mismo modo, la
adición de GnRH a las vacas sin síntomas de celo a las 48 h parecería estar adelantando la
ovulación en las vacas que todavía no han tenido un pico de LH y por lo tanto tendrían una
ovulación muy retrasada. La administración de GnRH produce un pico de liberación de
gonadotrofinas hipofisarias dos horas después de su administración i.m., en una magnitud que
depende del estado en que se encuentra la onda folicular, desencadenando la ovulación en vacas
con un FD > a 9 mm de diámetro (Martinez et al., 1999).

Esto demuestra que la administración de GnRH mejora la tasa de preñez induciendo una
ovulación más sincrónica en las vacas que no presentan celo a las 60 h de retirado el dispositivo,
probablemente debido a que la administración de GnRH induce la ovulación de las vacas que
todavía no habían tenido un pico de LH y por lo tanto tendrían una ovulación muy retrasada y tal
vez la ovulación de vacas con folículos más pequeños (Pereira et al., 2013; Vasconcelos et al.,
2013).
A diferencia de lo ocurrido que en el Experimento 2 donde se pudo observar que las vacas
que presentaron celos se preñaron más que las que no presentaron celo, tanto a las 48 h como a las

192
 Memorias
60 h, coincidiendo con Perry et al. (2007) que observó que en general, las vacas que expresan celo
antes de la inseminación tienen más chances de ovular en comparación con las que no lo hacen;
en este experimento las vacas que no presentaron celo pero que recibieron la adición de una dosis
de GnRH como inductor de la ovulación, se preñaron igual que las que expresaron celo a la hora
de la IA. Pereira et al. (2016) reportaron que la expresión de celos al momento de la IATF o TETF
se asoció con un aumento de la fertilidad mejorando la tasa de preñez (sin estro 25,5% vs con estro
38,9%) y disminución de la pérdida de preñez (sin estro 20,1% vs con estro 14,4%).

BIBLIOGRAFIA
Ayres, H.; Martins C.M.; Ferreira R.M.; Mello J.E.; Dominguez J.H.; Souza H.A.; Vslentín R.;
Santos I.C.C.; Baruselli P.S. 2008. Effect of timing of estradiol benzoate administration
uponsynchronization of ovulation in suckling Nelore cows (Bos Indicus) treated with a
progesterone-releasing intravaginal device. Anim. Reprod. Sci. 109, 77-87.
Balla E., Filippi D., Maraña Peña D., Pincinato D., Perez L.C., Cutaia L., Veneranda G., Martinez
M.F., Bó G. 2006. Efectos de diferentes protocolos de sincronización de la ovulación con
dispositivos intravaginales con progesterona sobre el desarrollo folicular y las tasas de
preñez en vacas lecheras en lactancia. Jornadas de actualización en biotecnologías de la
reproducción en bovinos. IRAC 2006, Huerta Grande. Córdoba. 30 de junio y 1 de julio
del 2006. CD.
Bó G.A., Adams G.P., Pierson R.A., Caccia M., Tríbulo H., Mapletoft R.J. 1994. Follicular wave
dynamics after estradiol-17β treatment of heifers with or without a progestogen implant.
Theriogenology, 41, 1555-1569.
Bó G.A., Adams G.P., Pierson R.A., Mapletoft R.J. 1995. Exogenous control of follicular wave
emergence in cattle. Theriogenology, 43, 31-40.
Bó G.A., Medina M., Tegli J.C., Costamagna A. and Brogliatti G.M. 2000. Fixed-timed artificial
insemination in CIDR-B treated cows induced to ovulatedwith estradiol benzoateor GnRH.
Proc. 14 thInternational Congress on Animal Reproduction (ICAR), 14-14, págs. 2-45.
Stockolm, Sweden.
Bó G.A., Barusselli P.S., Moreno D., Cutaia L., Caccia M., Tríbulo R., Tríbulo H., Mapletoft R.J.
2002a. The control of follicular wave development for self-appointed embryo transfer
programs in cattle. Theriogenology, 57, 53-72. 3.
Bó G.A., Cutaia L., Tribulo R. 2002b. Tratamientos hormonales para inseminación artificial a
tiempo fijo en bovinos para carne: algunas experiencias realizadas en Argentina. Segunda
Parte. Taurus, 15, 17-32.
Bó G.A., Cutaia L.E., Souza A.H., Baruselli P.S. 2009. Actualización sobre protocolos de IATF
en Bovinos de leche utilizando dispositivos con progesterona. Taurus, 41, 20-34.
Bó G.A., Baruselli P.S., Mapletoft R.J. 2013. Synchronization techniques to increase the utilization
of artificial insemination in beef and dairy cattle. Anim. Reprod. Sci, 10, 137-142.

193
 Memorias
Burke C.R., Mussard M.L., Gasser C.L., Grum D.E., DAy M.L. 2003. Estradiol benzoate delays
new follicular wave emergence in a dose-dependent manner after ablation of the dominant
ovarian folicle in cattle. Theriogenology, 60, 647-658.
Butler, W. 2003. Energy balance relationships with folicular development, ovulation and fertility
in pospartumdairy cows. Livest Prod, 83, 211-218.
Colazo M.G., Kastelic J.P., Mapletoft R.J. 2003. Effects of estradiol cypionate (ECP) on ovarian
follicular dynamics, synchrony of ovulation, and fertility in CIDR-based, fixed-time AI
programs in beef heifers. Theriogenology, 60, 855-865.
Cutaia L., Moreno D., Villata L., Bó G.A. 2001. Synchrony of ovulationin beef cows treated with
progeterone vaginal devices and estradiol benzoate admnistered at device removal or 24 h
hours later. Theriogenology, 55, 244.
Dalton J.C., Nadir J.H., Bame M., Noftsinger, R.L. Nebel, and R.G., Saacke. 2001. Effect of time
of insemination on number of accessory sperm, fertilization rate, and embryo quality in
nonlactating dairy cattle. J. Dairy Sci., 84:2413-2418.
Dalton, J. 2013. Características del semen de relevancia para la inseminación artificial a tiempo
fijo. Resúmenes X Simposio Internacional de Reproducción Animal, (págs. 183-198).
Córdoba, Argentina.
Di Rienzo J. A., Casanoves F., Balzarini M. G., Gonzalez L., Tablada M., Robledo C. W. (s.f.).
InfoStat versión 2015. Obtenido de Grupo Infostat, FCA, Universidad Nacional de
Córdoba, Argentina.: http://www.infostat.com.ar.
Diskin M.G., Ausstin E.J., Roche J.F. 2002. Exogenous hormonal manipulationof ovarian activity
in cattle. Dom. Anim. Endocrinol, 23, 211-228.
Diskin M.G., Morris D.G. 2008. Embryonic and fetal loses in cattle and other rumiants. Reprod
Dom Anim., 43 (supl 2), 260-267.
Diskin MG., Murphy JJ., Sreenan JM. . 2006. Embryo survival in dairy cows managed under
pastoral conditions. Animal Rep. Sci., 96, 297-311.
Dransfield, M.B.G., R.L. Nebel, R.E. Pearson, and L.D. Warnick. 1998. Timing of insemination
for dairy cows identified in estrus by a radiotelemetric estrus detection system. J. Dairy
Sci. 81:1874-1882.
Edmonson A.J., Lean I.J., Weaver L.D., Farver T., Webster G. 1989. A body condition scoring
chart for Holstein dairy cows. J. Dairy Sci., 72, 68-78.
Ginther, O. J. 2000. Selection of the dominant follicle in cattle and horses. Anim. Reprod. Sci., 60,
61-79.
Hawk, H. W. 1975. Hormonal control of changes in the direction of uterine contractions in the
estrous ewe. Biol. Reprod., 12, 423-430.

194
 Memorias
Hiers E., Barthle C., Dahms V., Portillo G., Bridges G., Rae D., Thacher W., Yelich J. 2003.
Synchronization of Bos Indicus x Bos Taurus cows for timed artificial insemination using
gonadotropin-releasing hormone plus prostaglandina F2α in combination with melegestrol
acetate. J. Anim. Sci., 81, 830-835.InfoStat. (2007). InfoStat/Profesional, versión 2007.
Grupo InfoStat/FCA. Universidad Nacional de Córdoba. Ed. Brujas, Córdoba, Argentina.
Kasteic J.P. y Mapletoft R.J. 1998. Ovarian Follicular responses in dairy cows treated with
GnRH and cloprostenol. Can Vet J. 39 (2) 107-9.
Le Blanc, S. 2010. Does higher production imply worse reproduction? WCDS. Advances in dairy
technology., 22, 253-263.
Lopez H., Satter L.D., Wiltbank M.C. 2004. Relationship between level of milk production and
estrous behavior of lactating dairy cows. Anim. Reprod. Sci., 81, 209-223.
Lucy, M. C. 2001. Reproduction Losses in high production dairy cattle: where will it end? J. Dairy
Sci., 84, 1277-1293.
Lucy M.C., 2004. The use of treatments to improve the reproductive performance of lactating
dairy cows in feedlot or pasture based management systems. Anim Reprod Sci., 82-83,
495-512.
Mapletoft, R.J., Colazo M.G., Martinez M.F., Kastelic J.P. 2003. Ésteres de estrógenos para la
sincronización de la emergencia de la onda folicular y la ovulación en animales tratados
con dispositivos con progesterona. V Simposio Internacional de Reproducción Animal,
(págs. 55-67). Córdoba, Argentina.
Martinez M.F., Adams G.P., Bergfelt D.R., Mapletoft R.J. 1999. Effect of LH or GnRH on the
dominant follicle of the first follicular wave in beef heifers. Anim. Reprod. Sci., 57, 23-
33.
Martinez M.F., Kastelic J.P., Adams G.P., Mapletoft R.J. 2002. The use of a progesterone-
releasing device (CIDR-B) or melengestrol acetate with GnRH, LH or estradiol benzoate
for fixed time AI in beef heifers. J. Animal Sci., 80, 1746-1751.
Nebel R.L., Jobst S.M., Dransfield M.B., Bailey T.L. 1987. Use of radio frequency data
communication system, HeatWatch®, to describe behavioral estrus in dairy cattle. J. Dairy
Sci., 80, 179-197.
Nett T.M., Turzillo A.M., Baratta M., Rispoli L.A. 2002. Pituitary effects of steroid hormones on
secretion of follicle-stimulating hormone and luteinizing hormone. Domest. Anim.
Endocrinol, 23, 33-42.
NRC. Nutrient requirements of dairy cattle. 7th Revised edition, National Academic of Sciences.
Washington, DC, Estados Unidos, 2001.
ination program for lactating dairy cattle. J. Dairy Sci., 85, 1222-1231.
Pereira, M. H., A. D. Rodrigues, T. Martins, W. V. Oliveira, P. S. Silveira, M. C. Wiltbank, and J.
L. Vasconcelos. 2013. Timed artificial insemination programs during the summer in

195
 Memorias
lactating dairy cows: Comparison of the 5-d Cosynch protocol with an estrogen/
progesterone-based protocol. J. Dairy Sci., 96, 6904–6914.
Pereira M. H. C., M. C. Wiltbank, L. F. S. P. Barbosa, W. M. Costa Jr., M. A. P. Carvalho, and J.
L. M. Vasconcelos. 2015. Effect of adding a gonadotropin-releasing-hormone treatment at
the beginning and a second prostaglandin F2 treatment at the end of an estradiol-based
protocol for timed artificial insemination in lactating dairy cows during cool or hot seasons
of the year. J. Dairy Sci, 98, 947-959.
Pereira M. H . C., M. C. Wiltbank,J. L. M. Vasconcelos. 2016. Expression of estrus improves
fertility and decreases pregnancy losses in lactating dairy cows that receive artificial
insemnation or embryo transfer. J. Dairy Sci., 99, 2237-2247.
Perry G. A., Smith M. F., Roberts A.J., Macneil M.D., Geary T.W. 2007. Relationship between
size of the ovulatory follicle and pregnancy success in beef heifers. J. animal Sci., 85, 684-
689.
Perry, G. A., O. L. Swanson, E. L. Larimore, B. L. Perry, G. D. Djira. 2014. Relationship of follicle
size and concentrations of estradiol among cows exhibiting or not exhibiting estrus during
a fixed-time AI protocol. Domest. Anim. Endocrinol., 48, 15-20.
Piccardi M., Capitaine Funes A., Balzarini M., Bó G.A. 2012. Some Factors affecting the number
of days open in Argentinean dairy heards. Theriogenology, 30, 1-6.Piccardi M, Capitaine
Funes A, Balzarini M, Bó GA. 2013. Some factors affecting thenumber of days open in
Argentinean dairy herds. Theriogenology 79:760-765.
Pursley J.R., Silcox R.W., Wiltbank M.C. 1998. Effect of time of artificial insemination on
pregnancy rates, calving rates, pregnancy loss, and gender ratio after synchronization of
ovulation in lactating dairy cows. J. Dairy Sci., 81, 2139-2144.
Ribadu A.Y., Nakada K.,Tanaka Y., Moriyoshi M., Zhang W.C., Nakao T. 1999. Lack of LH
response to exogenous estradiol in heifers with ACTH-induced ovarian folicular cysts. J
Vet Med Sci, 61, 979-981.
Rodríguez Hernández, T., Espinoza, J. and Verde, O. 1995. Efecto del momento de inseminación
artificial, masaje clitórico, temperatura rectal y otros factores sobre la preñez en bovinos.
Zootécnia. Tropical. 13:129.
Sá Filho M.F., A.M. Crespilho, J.E.P. Santos, G.A. Perry, P.S. Baruselli. 2010. Ovarian follicle
diameter at timed insemination and estrous response influence likelihood of ovulation and
pregnancy after estrous synchronization with progesterone or progestin-based protocols in
suckled Bos indicus cows. Anim. Reprod. Sci., 120, 23-30.
Sá Filho M.F., J.E.P. Santos, R.M. Ferreira, J.N.S. Sales, P.S. Baruselli. 2011b. Importance of
estrus on pregnancy per insemination in suckled Bos indicus cows submitted to
estradiol/progesterone-based timed insemination protocols. Theriogenology, 76, 455-463.
Sales J.N.S., Carvalho J.B.P., Crepaldi G.A., Cipriano R.S., Jacomini J.O., Maio J.R.G., Souza
J.C., Nogueira G.P., Baruselli P.S. 2012. Effects of two estradiol esters (benzoate and

196
 Memorias
cypionate) on the induction of synchronized ovulations in Bos indicus cows submitted to
a timed artificial insemination protocol. Theriogenology ( 78), 510-516.
Salfen B.E., Cresswell J.R., Xu Z.Z., Bao B., Garverick H.A. 1999. Effects of the precense of a
dominant follicle and exogenous oestradiol on the duration of the luteal phase of the bovine
oestrous cycle. J. Reprod. Fertil, 115, 15-21.
Sangsritavong S., Combs D.K., Sartori R., Armentano L.E., Wiltbank M.C. 2002. High feed intake
increases liver blood and metabolism of progesterone and estradiol-17β in dairy cattle. J.
Dairy Sci., 85, 2831-2842.
Sartori R., Rosa G.J.M.; Wiltbank M.C. 2002a. Ovarian structures and circulating steroids in
heifers and lactating cows in summer and lactating cows and dry cows in Winter. J. Dairy
Sci., 85, 2813-2822.
Sartori R., Sartor-Bergfelt R., Mertens S.A., Guenther J. N., Parrish J.J., Wiltbank, M.C. 2002b.
Fertilization and early embryonic development in heifers and lactating cows in summer an
lactating and dry cows in winter. J. Dairy Sci., 85, 2803-2812.
Souza, A.H., Gumen, A., Silva, E.P.B., Cunha, A.P., Guenther, J.N., Peto, C.M., Caraviello, D.Z.,
Wiltbank, M.C. 2007b. Supplementation with Estradiol-17β before the last Gonadotropin-
Releasing Hormone injection of the Ovsynch protocol in lactating dairy cows. J. Dairy Sci.,
90, 4623-4634.
Souza A.H., Viechnieski S., Lima F.A., Silva F.F., Araujo R., Bó G.A., Wiltbank M.C., Baruselli
P.S. 2009. Effects of equine chorionic gonadotropin and type of ovulatory stimulus in a
timed-AI protocol on reproductive responses in dairy cows. Theriogenology, 72, 10-21.
Stahringer R.C., Vispo P.E:, Prieto P.N., Fogliatti G. 2011. Evaluación del pintado en a base de la
cola en protocolos de IATF en vacas Bradford pluríparas. IX Simposio Internacional de
Reproducción Animal , (pág. 335). Córdoba, Argentina.
Thatcher W.W., Moreira F., Santos J.E.P., Mattos R.C., Lopez F.L., Pancarci S.M., Risco C.A.
2001. Effects of hormonal treatments on reproductive performance and embryo production.
Theriogenology, 55, 75-90.
Thatcher W.W., Bilby T.R., Bartolome J.A., Silvestre F., Staples C.R., Santos J.E.P. 2006.
Strategies for improving fertility in the modern dairy cow. Theriogenology, 65, 30-44.
Tschopp J.C. y Bó G.A. 2015. Momento de inseminación y expresión de celos en vacas lecheras
sincronizadas con dispositivos con progesterona y estradiol. XI Simposio Internacional de
Reproducción Animal, (págs. 209-233). Córdoba, Argentina.
Uslenghi G., Gonzales Chavez S., Cabodevila J., Callejas S. 2014. Effect of estradiol cypionate
and amount of progesterone in the intravaginal device on synchronization of estrus,
ovulation and om pregnancy rate in beef cows treated with FTAI based protocols. Anim.
Reprod. Sci.145, 1-7.

197
 Memorias
Uslenghi G. 2016. Factores que afectan la eficiencia reproductiva en bovinos para carne
inseminados a tiempo fijo: sal de estradiol, sincronización de la ovulación y calidad
seminal. Tandil, Buenos Aires, Argentina: Facultad de Ciencias Veterrinarias,
U.N.C.P.B.A.105 pp.
Vasconcelos, J. L. M., M. H. C. Pereira, M. Meneghetti, C. C. Dias, O. G. SaFilho, R. F. G. Peres,
A. D. P. Rodrigues, and M. C. Wiltbanck. 2013. Relationships between growth of the
preovulatory follicle and gestation success in lactating dairy cows. Anim. Reprod., 10, 206-
214.
Vynckier L., Debackere M., De Kruif, Coryn M. 1990. Plasma estradiol-17β concentration in the
cow during induced estrus and after injection of estradiol-17β benzoate and estradiol-17β
cypionate – a preliminary study. J. Vet. Pharmacol Theriogenology, 13, 36-42.
Walsh S.W., Williams E.J., Evans A.C.O. 2011. A review of the causes of poor fertility in high
milk producing dairy cows. Anim. Reprod. Sci., 123, 127-138.
Washburn S.P., Silvia W.J., Brown C.H., McDaniel B.T., McAllister A.J. 2002. Trends in
reproductive performance in southeastern Holstein and Jersey DHI herds. J. Dairy Sci., 85,
244-251.
Wiltbank M.C., Fricke P.M., Sangsritavong S., Sartori R., Ginther O.J. 2000. Mechanisms that
prevent and produced doeble ovulations in dairy cattle. J. Dairy Sci., 83, 1-10.
Wiltbank M.C., Lopez H., Sartori R.,Sangsritavong S., Gümen A. 2006. Changes in reproductive
physiology of lactating dairy cowsdue to elevated steroid metabolism. Theriogenology, 65,
17-29.
Wiltbank M.C., Souza A., Carvalho P., Bender R., Nascimento A. 2013. Como mejorar la
fertilidad a la IATF mediante la manipulación de las concentraciones de progesterona
circulante en el ganado lechero. Resúmenes X Simposio Internacional de Reproducción
Animal, (págs. 77-90). Córdoba, Argentina.

198
Memorias

199
 Memorias
Animales del futuro, la revolución CRISPR
Alejo Menchaca

Instituto de Reproducción Animal Uruguay, Fundación IRAUy, Montevideo, Uruguay.

Introducción

La generación de animales por edición génica es la revolución actual de la biología. Hoy es posible editar
el genoma mediante la herramienta CRISPR-Cas que permite cortar y pegar secuencias muy precisas de
ADN como nunca antes se había logrado. Así podemos mejorar prácticamente todas aquellas
características que estén determinadas por un gen, y entonces modificar completamente el fenotipo de
cualquier especie. Corderos con mayor producción de carne y lana, animales resistentes a enfermedades
virales, moscas que no producen miasis, garrapatas que casi no se reproducen, mosquitos que no
transmiten dengue, Zika ni malaria, son solo algunas de los avances que se están logrando con esta
tecnología. En pocos años, frente a una demanda mundial de alimentos cada vez mayor, la producción
animal habrá cambiado por completo. Las oportunidades y amenazas, las controversias y los consensos,
la ética y la ciencia, deberán ser revisadas para entrar entonces al nuevo futuro CRISPR.

Contexto mundial para la producción ganadera

La actividad ganadera tiene como principal objetivo abastecer a la humanidad de alimentos. La población
mundial crece sin pausa, pero el incremento demográfico que superará los 9 mil millones de habitantes
para 2050 no será el único responsable de la mayor demanda de alimento. Esto se deberá también al
mayor consumo por habitante de proteínas animales sobre carbohidratos vegetales. Los índices de
pobreza han mejorado en los últimos 200 años, y la gente tiene cada vez más acceso a alimentos de mejor
calidad. El desafío es lograr el equilibrio para alcanzar esta producción, haciéndolo de manera sustentable
en términos de beneficio económico, desarrollo social y cuidado del medio ambiente.

La creciente demanda de alimentos ya ha impactado en el crecimiento de la producción ganadera, y este

será mucho mayor en los próximos años. Tanto el sector primario como el resto de las cadenas
agroindustriales se están transformado a un ritmo sin precedentes. Esto se ha logrado básicamente
mediante el incremento de la inversión en capital financiero y la incorporación de nuevas tecnologías.
Esta expansión tiende a hacer un uso más intensivo del suelo y otros recursos naturales de manera
extrema, pudiendo afectar el equilibrio del medio ambiente a corto, mediano y largo plazo. Al mismo
tiempo, en otro escenario millones de personas en zonas rurales aún siguen criando ganado mediante
sistemas tradicionales de producción, en los que basan su subsistencia y seguridad alimentaria familiar.

Si bien este crecimiento y transformación ofrece grandes oportunidades económicas y permite mejorar
el abastecimiento de alimentos a la población con menor acceso, la rapidez de estos cambios genera
también ciertos riesgos. Por ejemplo es probable que -entre otros desequilibrios- los pequeños ganaderos
queden al margen y entren en la pobreza o en la migración con consecuencias globales, que las naciones

200
 Memorias
con menor desarrollo no puedan acceder a las nuevas tecnologías profundizando su dependencia, o que
los recursos naturales y la salud sistémica del planeta sea perjudicada.

Los desafíos hacia el futuro presentan mayor dificultad que en el pasado, principalmente por el dilema
entre producir a niveles como nunca antes, pero en un contexto con recursos naturales finitos como el
suelo y el agua. Multiplicar el abastecimiento de proteínas supondría una carga considerable para unos
recursos naturales que ya están sometidos a una fuerte presión. Por ejemplo, en los últimos 50 años el
consumo de carne per cápita se incrementó aproximadamente 50% y el de productos lácteos
aproximadamente 60% (FAO, 2017). Se estima que para el 2050 el consumo de ambos alimentos se
incrementará otro 60%, y este aumento será mucho mayor en los países que hoy se encuentran en
desarrollo. En los últimos 50 años la producción también creció acompañando a la demanda, pero de
acuerdo con la FAO las estrategias clásicas están explotadas al máximo y el incremento de la producción
puede verse frenado para poder acompañar la mayor demanda de las próximas décadas.

La ganadería es responsable de la mayor parte del uso mundial de suelos y no podrá crecer mucho más.
Los pastizales y tierras de cultivo dedicadas a la producción de alimentos para el ganado representan casi
el 80% de todas las tierras agrícolas. La superficie total de tierra ocupada por pastos equivale al 26% de la
superficie terrestre libre de hielo, y sumado a esto los cultivos forrajeros para animales se siembran en un
tercio de todas las tierras cultivadas (FAO, 2016). Así, la ganadería compite por el recurso suelo con otras
actividades y no se prevé un crecimiento en el área destinada a la producción animal, por el contrario,
deberá competir con la expansión agrícola -limitada a su vez por la necesidad de evitar la deforestación
para mitigar el cambio climático-.

Sumado a este contexto caracterizado más por las limitantes que por las libertades para el crecimiento,
el consumidor con mayor poder de compra también incrementa su nivel de exigencia, y exigirá mayor
cuidado sobre el medio ambiente, mayor control en la inocuidad de los alimentos, trazabilidad desde el
origen y bienestar de los animales. Los costos de producción no solo estarán definidos por el valor de la
tierra, el personal y la alimentación o el manejo de los animales, sino más aun por la necesidad de alcanzar
que sus productos cumplan con todas estas exigencias.

Frente a este futuro, la pregunta es cómo aumentar la producción de alimentos de origen animal sin
aumentar el área destinada a la ganadería, y además contemplando las nuevas exigencias planteadas.
Conocida como “la tormenta perfecta de eventos globales” (Beddington, 2011), este es el mayor desafío
que enfrenta nuestra especie.

Cómo mejorar la producción animal

Es claro que el aumento en la producción no ocurrirá por un aumento del área destinada a la ganadería,
sino solo mediante la mejora de la productividad y de la eficiencia, primero a nivel de cada unidad
productiva pero también a nivel individual de los animales. Esto será posible con la ayuda de importantes
innovaciones tecnológicas y cambios estructurales en el sector. Los abordajes clásicos para mejorar la
productividad basados en la mejora de la alimentación, la salud, la genética, la reproducción y el manejo,
harán un aporte importante pero no suficiente. Este artículo pone énfasis en la contribución que harán

201
 Memorias
las nuevas tecnologías, en particular las biotecnologías de la reproducción y la edición del genoma. Las
primeras contribuyen de manera muy valiosa tanto a la eficiencia reproductiva como a la mejora genética
clásica. La segunda es absolutamente disruptiva y permitirá transformaciones nunca antes planteadas.

Los bajos índices reproductivos en especies rumiantes muestran que globalmente tendría mucho más
impacto mejorar la eficiencia reproductiva que cualquier característica de mejora genética que hoy exista.
No obstante, también se debería maximizar el uso de los cruzamientos y la selección de razas puras, que
solo es posible mediante la implementación de las biotecnologías de la reproducción. Tecnologías como
la inseminación artificial a tiempo fijo (IATF), los programas de superovulación y transferencia de
embriones, y la producción de embriones in vitro, pueden contribuir tanto a la mejora de la eficiencia
reproductiva y del manejo, así como a la mejora genética de la población. El uso de semen sexado tanto
para IATF como para la producción de embriones es otra tecnología de alto impacto en la mejora de la
productividad ganadera. Todas estas tecnologías han sido desarrolladas, validadas o mejoradas en los
últimos tiempos, y todas ellas harán una importante contribución en los próximos años. Esto genera
oportunidades para diferentes actores vinculados a dichas tecnologías, tanto en el ámbito científico en
investigación y desarrollo, como para el sector proveedor de insumos, equipamiento y servicios necesarios
para aplicar dichas tecnologías.

El primer nivel de mejora en la productividad ganadera debería entonces estar dado por incrementar el
uso de estas biotecnologías para mejorar la reproducción y la genética de los animales. Por ejemplo en
los países de América Latina y el Caribe, que representa una de las regiones del mundo que produce más
carne y leche, la eficiencia reproductiva está muy lejos de su potencial. Considerando estos países en
conjunto, la tasa de procreo anual (terneros producidos cada 100 vacas) ni siquiera alcanza el 50%, lo que
implica que cada vaca produce un ternero cada dos o tres años, o dicho de otro modo se necesitan más
de dos vacas para producir un ternero por año. Si además consideramos que en estos países las vacas
tienen su primer parto no mucho antes de los cuatro años de vida (cuando podrían hacerlo antes de los
dos años), el resultado es peor aún. Si bien existen diferencias entre los distintos países de esta región,
aún en Uruguay y Argentina que poseen los mejores índices reproductivos, la productividad individual es
baja. Esto conduce a una baja eficiencia por unidad productiva, y globalmente -considerando toda la
región- a muy bajos índices de producción de carne o leche.

La IATF: un negocio creciente.

Actualmente en los países del Mercosur (Argentina, Brasil, Paraguay y Uruguay) se inseminan a tiempo
fijo aproximadamente unos 16 millones de vacas por año (Mapletoft et al., 2018). Este volumen tiene un
impacto en la región muy importante para la mejora de la eficiencia reproductiva, para la mejora genética
de los rodeos, y para el negocio de la cría en general. La adopción de la IATF no ha parado de crecer a
partir de su desarrollo en los años 2000, y seguramente continúe creciendo en las próximas décadas.
Cuando hace 20 años en estos países se inseminaba no mucho más del 3% de todas las vacas (la mayoría
con la tecnología anterior mediante celo detectado), actualmente se insemina aproximadamente el 10%
de las hembras (la mayoría por IATF). El hecho que en menos de 20 años la adopción de la inseminación
haya crecido más de 300%, es un buen ejemplo de la revolución tecnológica en la que hemos ingresado:
se sustituyó una tecnología clásica que tenía más de 50 años por una nueva que la supera en diversos

202
 Memorias
aspectos. Y el hecho que aun quede un 90% de las vacas que no se inseminan, indica que el potencial de
crecimiento es enorme y que la expansión de la IATF será mucho mayor. La industria del semen, la
farmacéutica, las empresas de servicios, los proveedores de equipamiento y otros insumos, también
participan y se benefician de esta tecnología.

La industria de los embriones en expansión

La producción de embriones in vitro también ha tenido un impacto importante y se incrementará aún

más. Es una tecnología que si bien se aplica y se conoce casi tanto como la IATF, en una perspectiva de
largo plazo aún se encuentra en su fase inicial. La transformación de la ganadería impulsará un uso mucho
más intensivo de esta herramienta. Así comenzó a ocurrir en Brasil hace unos años y también está
ocurriendo en los otros países de la región. Hoy Brasil es el país que produce la mayor cantidad de
embriones con esta tecnología en el mundo. Cuando en 1999 en este país se transferían
aproximadamente 70 mil embriones bovinos por año, no se transferían más de 100 embriones producidos
in vitro (Viana et al., 2018). Hoy en Brasil se transfieren más de 300 mil embriones por año y casi el 90%
son producidos in vitro (datos de la IETS; Perry et al., 2017). Y aun así, esto representa menos del 0,5% de
la población de vacas en Brasil, mostrando que esta tecnología puede crecer mucho más aún. El modelo
de Brasil se está replicando en otros países vecinos, con ciertos matices pero con una tendencia al
crecimiento. Existen también aquí oportunidades que ya son una realidad y están siendo explotadas por
diversos sectores asociados a esta industria.

El sexado de semen y el cambio de paradigma

El sexado de semen también es una biotecnología de la reproducción que en las próximas décadas se
transformará en una herramienta de uso corriente. Hoy se encuentra en una fase de inserción en el
mercado, siendo aplicado por los más innovadores y sin llegar aun al público más pragmático o
convencional. La mejora de algunos aspectos técnicos que permita porcentajes de preñez similares al
semen convencional, asociado a una mejor relación costo/beneficio, permitirán que esta herramienta
genere un cambio de paradigma. Cada ganadero podrá generar sus hembras de reposición utilizando
semen XX y en el resto de las vacas producir terneros machos para el abasto (incluso con razas terminales),
o mantener sistemas solo machos o solo hembras dependiendo de cada objetivo de producción. Y esto
será lo corriente y no la excepción.

Estas tecnologías asociadas a otras herramientas también novedosas como la selección genómica, o
incluso asociadas a las pruebas genéticas clásicas, permitirán que la mejora en la productividad ocurra de
manera más rápida, eficaz y precisa. Si bien todas estas tecnologías ya existen y se están aplicando, su
expansión en los próximos años será mucho mayor. Asociado a esto, surge también la necesidad de
generar capacidades locales para aplicarlas correctamente, y también para mejorar su desempeño o
incluso desarrollar otras aún mejores. La investigación deberá estar muy presente, no existe innovación

203
 Memorias
tecnológica sin ciencia previa. Las oportunidades entonces estarán presentes en varios ámbitos, no solo
para el sector productivo o industrial de alimentos, sino también para quienes desarrollan, proveen y
aplican estas tecnologías.

CRISPR: ¿y si generamos nuevos animales?

¿Cómo sería la producción ganadera con animales resistentes a enfermedades, o con características de
producción que hoy no tienen, o incluso si erradicamos otras especies o plagas que hoy perjudican a la
ganadería? Esto ya es posible: la nueva tecnología que ha revolucionado el campo de la biología es
conocida como CRISPR. Con CRISPR podríamos plantearnos erradicar ciertas enfermedades
transfronterizas que generan pérdidas cuantiosas en pandemias, o que requieren planes de vacunación
permanentes, podríamos generar animales que alcancen altos niveles de producción, o que no requieran
prácticas que afectan al bienestar animal, podríamos plantearnos erradicar otras especies como
garrapatas y moscas que hacen difícil la producción en algunas regiones. Y si lo hacemos ¿de qué modo el
sector productivo tendrá acceso a estas innovaciones? ¿y como otros sectores asociados al agro
aprovecharán las diversas oportunidades o amenazas que surjan para su negocio?

El éxito en la generación de animales editados requiere la confluencia de tres disciplinas complementarias:

la ingeniería genética, la biología molecular y las biotecnologías de la reproducción. CRISPR permite editar
el genoma y obtener de forma rápida y sencilla animales knock out (KO) para uno o varios genes (algo que
no era posible mediante la transgénesis), así como también incorporar una secuencia determinada al
genoma para generar una nueva función (knock in o KI). La edición génica no es transgénesis, no requiere
incorporar ADN exógeno. Se realiza mediante la microinyección de una construcción genética en el cigoto
recién formado, motivo por el cual la producción de embriones in vitro y la micromanipulación son
absolutamente necesarias para aplicar esta tecnología (Menchaca et al., 2016). El sistema CRISPR-Cas
funciona diseñando una secuencia de ARN idéntica (ARN guía) a la secuencia de ADN que se pretende
modificar, de esta manera una vez inyectada en el cigoto esta construcción reconoce de manera muy
precisa mediante las reglas de complementariedad a la misma secuencia en el ADN. A su vez, a este ARN
guía se le asocia una nucleasa (Cas9) que funciona a modo de tijera molecular para cortar el ADN en el
sitio preciso al que fue dirigida por el ARN guía inyectado. Una vez que ocurre el corte, el proceso de
reparación puede ser de dos maneras: a) desapareciendo o sustituyendo algún nucleótido en esta región
de corte, por lo que el gen pierde su función y la proteína codificada no estará presente en el nuevo
individuo (animal KO), o b) insertándo una secuencia preestablecida con una función conocida que
permitirá corregir problemas genéticos o agregar una nueva proteína en el individuo, y para esto hay que
incluir dicha secuencia en la construcción inyectada (animal KI). Por todo esto, el mecanismo descrito es
completamente diferente al de la transgénesis clásica, permitiendo así editar o corregir el genoma de
manera muy precisa, mucho más simple y menos costosa.

204
 Memorias
Más carne y mejor lana

El primer avance en nuestro Laboratorio vinculado a la modificación del genoma ocurrió en 2012 con el
nacimiento de los primeros corderos transgénicos reportados en Latinoamérica (Crispo et al., 2015a).
Posteriormente en 2014 logramos el nacimiento los primeros corderos editados con CRISPR. En estos
corderos editamos una secuencia del gen responsable de la producción de miostatina, proteína que está
vinculada al desarrollo y diferenciación muscular. Al anular la función de este gen la miostatina no estaba
presente en los corderos nacidos. Como resultado obtuvimos individuos doble músculo, logrando así la
producción de mucha más carne en ovejas con genética Merino superfino. El desarrollo de los animales
KO luego del nacimiento fue mayor que el de los corderos control (25% más pesados a los 90 días de vida;
P< 0,05) manteniendo las mismas características de lana del Merino superfino que fue la raza que
utilizamos como fondo genético (Crispo et al., 2015b). Es interesante el hecho que esta mutación existe
de manera espontánea en algunas razas ovinas como Texel, así como también en bovinos (como Belgian
Blue o Piemontesa). Es decir que la carne de animales con esta mutación siempre se ha consumido, y
entonces no deberían existir barreras para su uso en producción animal.

Resistentes a enfermedades

La salud animal es parte fundamental de la producción ganadera por varios motivos. El impacto que tienen
algunas enfermedades infecciosas en la producción y en la economía de un país puede ser trágico. Y el
alcance del impacto dependerá del grado del evento sanitario, algunas pandemias pueden incluso afectar
la economía global como está ocurriendo actualmente con la peste porcina africana en China. Otro
aspecto relevante para la salud animal es la importancia cada vez mayor de las exigencias relativas al
bienestar animal. Los conceptos actuales recomendados por la OIE y exigidos por los principales países
consumidores indican que los animales deben vivir libres de enfermedades y sufrimiento. Y desde una
visión más holística, el concepto One Word, One Health impulsado por la OMS, la FAO y la OIE también
está enfocado en mantener los mejores estándares de salud posible en el planeta. Así subrayan la
necesidad imperiosa en la toma de conciencia colectiva del vínculo entre las enfermedades animales y la
salud pública. En un mundo que transita hacia la intensificación en la producción, la salud animal debe ser
una área prioritaria y nuevos abordajes deberían ser contemplados.

CRISPR permite generar animales resistentes a enfermedades. En nuestro laboratorio hemos trabajado
en un modelo ovino para generar animales resistentes a un virus. Pero más claro aún es el modelo
generado en cerdos contra el virus del Síndrome Respiratorio y Reproductivo Porcino (PRRSV). Este virus
genera una enfermedad que produce pérdidas anuales por más de 600 millones de dólares en EEUU y
más de 1.500 millones de euros en Europa, y se estima que las pérdidas son mayores aun en China y resto
de Asia. No existe tratamiento eficaz y la protección con vacunas es cuestionada, y debido además a la
alta tasa de contagio y expansión, prácticamente termina alcanzando al total de la población en las granjas
afectadas. El PRRSV inicia la infección mediante la unión del virus a un receptor celular en el huésped. Con
CRISPR fue posible generar cerdos en los que se anuló la expresión del gen que codifica el receptor celular
para este virus. El resultado fue el nacimiento de lechones que cuando se los enfrentó a un desafío con el
virus, no expresaron ningún síntoma clínico ni sufrieron infección. Todos sus hermanos no editados que
fueron sometidos al desafío padecieron la enfermedad. Se crearon así cerdos resistentes al PRRSV, y

205
 Memorias
detrás de este avance estuvieron varias universidades y la mayor compañía mundial de genética porcina.
El trabajo fue publicado en Nature Biotechnology en 2016 (Whitworth et al., 2016), y en 2018
investigadores del Instituto Roslin en Escocia (Burkard et al., 2018) generaron un modelo similar para la
cepa europea de este virus que posee algunas diferencias con la cepa americana.

Este año 2019 será recordado por el inicio de la mayor crisis mundial de la carne. Fue generada en China
debido a la peste porcina africana. Se estima que esta crisis va a tener consecuencias en el abastecimiento
del mercado global -y particularmente en China- por más de 10 años. China ha sacrificado decenas de
millones de cerdos en pocos meses y se estima que terminará perdiendo una cifra cercana a los 100
millones de cerdos. EEUU, el segundo productor de carne porcina detrás de China, tiene un stock de 70
millones de cerdos, lo que muestra la incapacidad de abastecer la pérdida asiática y el desequilibrio que
se generará. Se estima que China debería incrementar un 50% su importación de carne porcina, o
sustituirlo por otras carnes. El mundo entero está replanteando su producción de carne, tanto porcina
como bovina y ovina. Y el impacto también puede afectar a la agricultura ya que gran parte del maíz y la
soja que se producían en el mundo es para abastecer el stock porcino de China. La expansión de la
pandemia hacia otros países vecinos aún está lejos de ser controlada, y según algunos especialistas es la
mayor peste que ha afectado al planeta en los últimos siglos. Este es un buen ejemplo del desafío
planteado en este artículo: ¿cómo vamos a asegurar hacia el futuro una mayor producción de carne con
este tipo de amenazas presente? Evidentemente se deberían mejorar las estrategias tradicionales que no
han logrado controlar enfermedades como esta.

La fiebre porcina africana es una enfermedad vírica altamente contagiosa que puede matar la totalidad
de los cerdos en las granjas afectadas. El virus es muy resistente y puede sobrevivir por semanas e incluso
meses en la carne de cerdo curada o salada. No existe vacuna ni tratamiento alguno, y el desarrollo de la
enfermedad puede llevar varios años haciendo difícil su identificación y control. La mejor solución es
matar a todos los animales afectados. Hace unos años, el Instituto Roslin en Edimburgo hizo importantes
avances con la edición génica vinculada con este virus. Primero se demostró que el cerdo doméstico es
sensible al virus de la peste porcina africana debido a una variante en un gen específico. Este mismo gen
posee una variante con el cerdo silvestre africano, que confiere resistencia de este jabalí a la infección de
este virus. Los investigadores del Roslin lograron editar la secuencia de este gen en los cerdos domésticos
simulando la variante silvestre, reportando así en 2016 el nacimiento de cerdos editados de esta manera
(Lillico et al., 2016). La fase final está en ejecución y consiste en someter a estos cerdos al desafío de virus
vivo, difícil de realizar en Europa debido al riesgo en bioseguridad. Este es un buen ejemplo del gran poder
de la edición génica aplicada a la salud animal. China además es el país que ha reportado más cantidad de
nacimientos de animales editados por CRISPR. Se conjuga así en un mismo país un escenario interesante:
la necesidad de resolver un problema a cualquier precio, la disponibilidad de una tecnología que puede
contribuir en esto, y el poder económico y los recursos para impulsarlo. Es probable que en los próximos
años haya grandes avances en este sentido.

Otras enfermedades virales que hasta hoy son difíciles de controlar o tienen alto impacto como la leucosis
bovina, fiebre aftosa, vaca loca, entre otras, podrían ser abordadas con esta nueva herramienta. La
difusión luego a través de compañías de genética puede ser un buen canal para llegar al ganadero. El
ejemplo de los cerdos resistentes al virus del PRRSV y el interés mostrado desde la compañía más
importante de genética porcina, es un buen reflejo de cómo se está gestando el futuro.

206
 Memorias
Más bienestar animal

Las prácticas en la producción ganadera fueron incorporadas a lo largo de la historia de la domesticación.

Muchas de ellas fueron generadas en contextos completamente diferentes al actual, y fueron transmitidas
por los ganaderos de generación en generación. Los consumidores de hoy exigen un trato con valores
éticos diferentes. En las últimas décadas se ha intentado avanzar hacia un trato más compasivo y de
respeto hacia los animales, que procuran evitar el sufrimiento innecesario. El bienestar animal hoy está
muy presente en todas las cadenas agroalimentarias de origen animal, y cada vez lo estará más aún. Al
proyectarnos hacia una producción ganadera más intensiva ¿cómo podemos generar estrategias que
permitan mejorar las prácticas de bienestar animal? La edición génica también puede contribuir en este
sentido.

La edición de animales Holstein para que nazcan sin cuernos es un buen ejemplo. La presencia de cuernos
es un problema para el manejo de los bovinos, algo que los ganaderos solucionan en pocos segundos y
de manera permanente quemando el botón cornual en los terneros o cortando con una sierra la base del
cuerno contra el cráneo. Millones de terneros son sometidos a esta práctica cada año. Claro que el ternero
sufre, pero quienes promueven las prácticas de bienestar animal recomiendan que los animales no posean
cuernos durante la vida adulta para evitar lesiones y problemas mayores, y entonces se ven obligados a
aceptar el descorne en las primeras semanas de vida del ternero. Todos sabemos que algunas razas no
poseen cuernos, y la ausencia de ellos se debe a un alelo mutante que se expresa de manera dominante.
Identificada la secuencia de ADN responsable de esta característica polled en la raza Angus, un grupo de
la Universidad de Minnesota y de la empresa Recombinetics se planteó inducir esta misma mutación en
embriones Holstein (Carlson et al., 2016). Trabajaron con TALEN, una tecnología previa a CRISPR pero que
también permite la edición génica. Así lograron dos terneras Holstein sin cuernos que publicaron en
Nature Biotechnology en 2016. A este ejemplo pueden seguirlo otros que eviten prácticas asociadas a
crueldad o sufrimiento de los animales. Por ejemplo la castración en los machos es otra práctica inevitable
en la actualidad y permanentemente cuestionada, que también podría ser abordada con CRISPR para
editar animales que no expresen el comportamiento del macho evitando además la producción de semen
fértil.

Actualmente varias compañías de genética bovina, las más importantes del mundo, tienen proyectos de
I+D en edición génica. En un futuro, es probable que el semen que compren los ganaderos provendrá de
toros sobre los que se habrá aplicado edición génica. Esta será una de las formas como CRISPR llegará al
campo.

Sin moscas ni garrapatas

La tecnología CRISPR también puede aplicarse en otras especies que si bien no se utilizan para producir
alimentos, afectan directamente a la ganadería. La salud animal puede verse favorecida si -además de
generar animales resistentes a enfermedades infecciosas- también podemos intervenir en el control de
parásitos. Actualmente se están planteando nuevas ideas con el uso de CRISPR en insectos y artrópodos,

207
 Memorias
técnica conocida como gene drive. Estas especies pueden generar pérdidas tanto por el efecto directo
sobre el huésped o como agentes vectores de otras enfermedades. Actualmente estamos conduciendo
un proyecto en Uruguay en conjunto con otras instituciones e investigadores del MIT y de Carolina del
Norte en la que nos proponemos controlar la mosca de la bichera o gusano barrenador del ganado, la
Chocliomyia hominivorax. Las pérdidas económicas generadas por este parásito estimadas para América
del Sur y el Caribe son tremendas. Para un productor agropecuario en cualquiera de estos países, le es
difícil imaginarse la producción de ovejas o vacas sin la mosca de la bichera. Mediante la edición génica
con CRISPR, es posible anular genes vinculados a la reproducción de la mosca, generar infertilidad o
subfertilidad, introducirlos en la población silvestre, y controlar así a esta especie (o suprimirla
completamente). La ventaja de esta estrategia además, es que si la dirigimos por ejemplo a inducir
letalidad en las hembras y que solo los machos sobrevivan, los propios individuos nacidos se encargarán
de difundir esta edición en la población silvestre. De manera muy simplista, podríamos decir que solo
bastaría con liberar unas pocas moscas editadas para extinguir una especie en todo un continente. Hasta
hoy esta mosca es parte de la realidad y nadie se plantea un escenario diferente, este parásito ha estado
presente desde mucho antes de que domesticáramos a los animales. Por eso CRISPR es disruptivo.

El ejemplo de la mosca de la bichera es válido para otros problemas no tan distintos. Existen más insectos
y otros artrópodos afectando la ganadería de los que normalmente tenemos en mente. No solo los
bovinos, ovinos y caprinos se ven afectados, también los equinos, cerdos y mascotas. La lucha contra la
garrapata es una batalla eterna que venimos perdiendo con los métodos convencionales de control, los
métodos químicos y el manejo no logran controlarlo fácilmente y mucho menos erradicarlo. Y la
leishmaniasis en perros o la anemia infecciosa equina, o incluso el virus del dengue, el zika o el parásito
de la malaria también utilizan insectos como vectores. Por ejemplo se afirma que liberación del 1% de
mosquitos editados mediante CRISPR podría erradicar la malaria en todo África en un solo año (Kahn
2019). Esto es eficacia.

El desafío ya no es técnico.

Hace cinco o seis años plantear todo esto en un evento científico no era posible, no había lugar para estas
ideas porque no existía tecnología capaz de lograrlo. Quizás tampoco se le ocurría ni siquiera a un
productor de Hollywood. De la noche a la mañana, la realidad ha superado a la ficción, hoy con CRISPR el
límite está en nuestra propia imaginación.

Entonces, cual es la limitante actual para esta tecnología. Para que CRISPR genere los beneficios
planteados, hay barreras que superan aspectos técnicos. En ocasiones es más clara la capacidad del ser
humano para desarrollar soluciones tecnológicas muy complejas, que la capacidad para ponerse de
acuerdo y utilizarlas. Con CRISPR podemos abordar infinidad de soluciones, pero la opinión pública y la
sociedad civil, las agencias regulatorias y el poder político, deben ponerse de acuerdo sobre cómo utilizar
esta tecnología. Al final de cuentas, la ciencia responde a la política. Las tecnologías son herramientas que
la gente define como usarlas, y de nada sirven los grandes avances si no se está dispuesto a incorporarlos.
Dicho esto, el futuro con CRISPR también es promisorio. Más temprano que tarde esta tecnología va a ser
aplicada como parte de la globalización que todos vivimos. El hecho que la regulación sea particular para
cada país, hace que las restricciones de unos se transforman en oportunidades para los otros. Por ejemplo

208
 Memorias
el resultado de las restricciones europeas son oportunidades para EEUU y China, quien restrinja se
trasformará en un pasivo espectador y verá pasar una revolución como pocas. En el futuro, quien hoy
restringe lo veremos pagando por esta tecnología, y quien hoy promueve será quien fije las condiciones
para usarla. Aun podemos decidir de qué lado nos va a encontrar este futuro.

Conclusión.

Frente a una inminente mayor demanda de alimentos de origen animal, aún existe cierto espacio para
mejorar los índices reproductivos y la genética de la ganadería. En ambos casos, tanto para incrementar
la eficiencia reproductiva como para acelerar el progreso genético, se incrementará el uso de las
biotecnologías de la reproducción como la IATF, la producción de embriones y el sexado de semen. Por su
parte, la nueva revolución CRISPR nos permitirá generar nuevos tipos de animales, y lograremos producir
más en el mismo espacio, generando alimentos con la inocuidad necesaria, asegurando la salud y
respetando el bienestar animal, cuidando el medio ambiente y el planeta. La intensificación sustentable
es posible, pero solo haciendo uso de la ciencia, la innovación y las nuevas tecnologías.

Referencias.

Burkard, C., Opriessnig, T., Mileham, A.J., Stadejek, T., Ait-Ali, T., Lillico, S.G., Whitelaw, C.B.A.,
Archibald, A.L. Pigs lacking the scavenger receptor cysteine-rich domain 5 of CD163 are resistant to
porcine reproductive and respiratory syndrome virus 1 infection. J Virol 2018; 92: e00415-18.

Crispo, M., Mulet, A.P., Tesson, L., Barrera, N., Cuadro, F., Dos Santos-Neto, P.C., Nguyen, T.H., Crénéguy,
A, Brusselle, L, Anegon, I, Menchaca, A. Efficient generation of myostatin knock-out sheep using
CRISPR/Cas9 technology and microinjection into zygotes. PLoS ONE 2015a; 10(8):e0136690.

Beddington J. Food, energy, water and the climate: a perfect storm of global events?
http://webarchive.nationalarchives.gov.uk/20121206120858/http://www.bis.gov.uk/assets/goscienc
e/docs/p/perfect-storm-paper.pdf Acceso julio de 2019.

Carlson DF, Lancto CA, Zang B, Kim E-S, Walton M, Oldeschulte D, et al. Production of hornless dairy cattle
from genome-edited cell lines. Nat Biotech 2016;34:479–481.

Crispo, M., Vilariño, M., dos Santos-Neto, P.C., Núñez-Olivera, R., Cuadro, F., Barrera, N., Mulet, A.P.,
Nguyen, T.H., Anegon, I, Menchaca, A. Embryo development, fetal growth and postnatal phenotype of
eGFP lambs generated by lentiviral transgenesis. Transg Res 2015b, 24:31-41.

FAO. Estado Mundial del Recurso Suelo. Organización de las Naciones Unidas para la Alimentación y
Agricultura, y Grupo Técnico Intergubernamental del Suelo. Roma, Italia, 2016.

FAO. The future of food and agriculture: Trends and challenges. Organización de las Naciones Unidas para
la Alimentación y Agricultura, Roma, Italia, 2017.

209
 Memorias
Kahn J. Gene editing can now change an entire species – forever. Acceso julio de 2019
https://www.youtube.com/watch?v=OI_OhvOumT0

Lillico SG, Proudfoot C, King TJ, Tan W, Zhang L, Mardjuki R, Paschon DE, Rebar EJ, Urnov FD, Mileham AJ,
McLaren DG, Whitelaw CBA. Mammalian interspecies substitution of immune modulatory alleles by
genome editing. Sci Rep 2016;6:21645

Menchaca, A., Anegon, I., Whitelaw, C.B.A., Baldassarre, H., Crispo, M. New insights and current tools for
genetically engineered (GE) sheep and goats. Theriogenology 2016, 86:160-169.

Mapletoft, R.J., Bó, G.A., Baruselli, P.S., Menchaca, A., Sartori, R. Evolution of knowledge on ovarian
physiology and its contribution to the widespread application of reproductive biotechnologies in South
American cattle. Anim Reprod 2018; 15:1003-1014

Perry G. 2017. 2016 statistics of embryo collection and transfer in domestic farm animals. Embryo Transfer
Newsl, 35(4):8-23.

Viana, J.H.M., Figueiredo, A.C.S., Gonçalves, R.L.R., Siqueira, L.G.B.. A historical perspective of embryo-
related technologies in South America. Anim Reprod 2018; 15:963-970.

Whitworth, K.M., Rowland, R.R.R., Ewen, C.L., Trible, B.R., Kerrigan, M.A., Cino-Ozuna, A.G., Samuel, M.S.,
Lightner, J.E., McLaren, D.G., Mileham, A.J., Wells, K.D.,, Prather, R.S. Gene-edited pigs are protected
from porcine reproductive and respiratory syndrome virus. Nat Biotech 2016, 34:20-22.

210