infrared microspectroscopy could be defined as the coupling of a microscope to an infrared

spectrometer. This coupling allows one to focus IR radiation onto a detector, and to view and
position the sample. The essential features required to perform these aforementioned functions
include an optical microscopic system for viewing the sample and reflective optics for imaging the
IR radiation. in addition, the system contains one or more remote apertures used for defining the
sample area of interest. Specific details concerning the design of infrared microscope accessories
have been adequately reviewed elsewhere.

“ La microespectroscopia infrarroja podría definirse como el acoplamiento de un microscopio a un

espectrómetro infrarrojo. Este acoplamiento permite enfocar la radiación IR hacia un detector, así
como visualizar y posicionar la muestra. Las características esenciales necesarias para llevar a cabo
estas funciones mencionadas incluyen un sistema microscópico óptico para visualizar la muestra y
una óptica reflectante para obtener imágenes de la radiación IR. Además, el sistema contiene una
o más aperturas remotas utilizadas para definir el área de interés de la muestra. Los detalles
específicos relativos al diseño de los accesorios de los microscopios infrarrojos se han revisado
adecuadamente en otros lugares.”

Perhaps another definition of IR microspectroscopy is the study of how infrared radiation interacts
with microscopic particulates. Indeed, diffraction, refraction, reflection, and absorption
effects(which result from the interaction of IR radiation with microscopic samples) routinely play a
much more important role in microspectroscopy than in its macroscopic counterpart.
Consequently, by virtue of size, the microscopic sample is an integral part of the
microspectrometer. One must therefore consider how to minimize these effects by altering the
sample or by changing instrumental parameters in order to obtain the most representative,
meaningful spectra possible.

“Quizás otra definición de la microespectroscopia IR sea el estudio de cómo interactúa la radiación

infrarroja con las partículas microscópicas. De hecho, los efectos de difracción, refracción,
reflexión y absorción (que resultan de la interacción de la radiación IR con muestras
microscópicas) desempeñan habitualmente un papel mucho más importante en la
microespectroscopia que en su homóloga macroscópica. En consecuencia, en virtud del tamaño, la
muestra microscópica es parte integrante del microespectrómetro. Por lo tanto, hay que
considerar cómo minimizar estos efectos alterando la muestra o cambiando los parámetros
instrumentales para obtener los espectros más representativos y significativos posibles.”

Regardless of the definition, IR microspectroscopy provides the capability to obtain spectra on

extremely small samples, as small as about 10mm in diameter. Another significant advantage,
however, is that it can allow one to acquire spectra on microscopic and macroscopic samples “as
is”. For instance, substances which are expensive and/or which react with IR transparent salts,
such as certain solid proteins of biological interest, can be easily sampled without preparation of a
salt pellet using the microscope. Polarization studies can be performed on single fibers or small
single crystals, rather than large, artificially prepared films. The infrared spectrum of an intact, red
blood cell in saline solution can be obtained with the infrared microscope, facilitating the study of
carbon monoxide binding under conditions which are not unlike those found in the body.

“Independientemente de la definición, la microespectroscopia IR permite obtener espectros de

muestras extremadamente pequeñas, de unos 10 mm de diámetro. Otra ventaja importante es
que permite obtener espectros de muestras microscópicas y macroscópicas "tal cual". Por
ejemplo, las sustancias que son caras y/o que reaccionan con sales transparentes al IR, como
ciertas proteínas sólidas de interés biológico, pueden muestrearse fácilmente sin necesidad de
preparar un pellet de sales utilizando el microscopio. Los estudios de polarización pueden
realizarse en fibras individuales o pequeños cristales individuales, en lugar de grandes películas
preparadas artificialmente. El espectro infrarrojo de un glóbulo rojo intacto en solución salina
puede obtenerse con el microscopio infrarrojo, lo que facilita el estudio de la unión del monóxido
de carbono en condiciones que no difieren de las que se dan en el organismo.”

Another advantage to IR microspectroscopy is that the heterogeneity of microscopic and

macroscopic samples can be examined, or even profiled, using the microscope accessory. For
example, hydrocarbon fluid inclusions inside quartz and halite crystals can be analyzed using
infrared microspectroscopy, thus aiding in the study of the geological history of these minerals.
The identification of the various layers of fiber optics or polymer laminates can be obtained by
cross-sectioning the materials and focusing on individual layers with the IR microscope. The
profiling can be automated by the use of a computer-controlled x, y mapping stage which can be
stepped in small increments. A functional group image in one or two dimensions can be obtained,
and the two-dimensional images can be represented as axonometric or contour plots.

“Otra ventaja de la microespectroscopia IR es que la heterogeneidad de las muestras

microscópicas y macroscópicas puede examinarse, o incluso perfilarse, utilizando el accesorio del
microscopio. Por ejemplo, las inclusiones de fluidos de hidrocarburos en el interior de cristales de
cuarzo y halita pueden analizarse mediante microespectroscopia infrarroja, ayudando así al
estudio de la historia geológica de estos minerales. La identificación de las distintas capas de fibras
ópticas o laminados poliméricos puede obtenerse seccionando transversalmente los materiales y
enfocando las capas individuales con el microscopio IR. El perfilado puede automatizarse mediante
el uso de una platina de mapeado x, y controlada por ordenador que puede escalonarse en
pequeños incrementos. Puede obtenerse una imagen de grupo funcional en una o dos
dimensiones, y las imágenes bidimensionales pueden representarse como diagramas
axonométricos o de contorno.”

Infrared microspectroscopy is a versatile technique and the microscope a versatile accessory; both
permit a wide range of samples to be studied. In this chapter, the basic experiments which can be
done with an IR microscope will be examined, along with the unwanted optical effects from
microscopic samples, how they affect each experiment, and how to correct them by proper
sampling. Then, sample purity and homogeneity will be addressed. Finally, additional instrumental
parameters affecting performance and other special sampling techniques will be mentioned.

“La microespectroscopia infrarroja es una técnica versátil y el microscopio un accesorio versátil;

ambos permiten estudiar una amplia gama de muestras. En este capítulo se examinarán los
experimentos básicos que pueden realizarse con un microscopio IR, junto con los efectos ópticos
no deseados de las muestras microscópicas, cómo afectan a cada experimento y cómo corregirlos
mediante un muestreo adecuado. A continuación, se abordará la pureza y homogeneidad de la
muestra. Por último, se mencionarán otros parámetros instrumentales que afectan al rendimiento
y otras técnicas especiales de muestreo.”
The American Society of Testing and Materials has suggested that when publishing the results of
an infrared microspectroscopic study, the following parameters should be noted: the area of the
specimen being analyzed; the size an type of detector element; the mode(reflection or
transmission) in which the spectra were obtained; the specimen geometry and method of
preparation the shape, location, and type of masking apertures used. In addition, the spectral
resolution, the data collection time, the nature of the background spectrum, and any computer
manipulation of the spectrum should be noted.

“La American Society of Testing and Materials ha sugerido que, al publicar los resultados de un
estudio microespectroscópico por infrarrojos, se indiquen los siguientes parámetros: la superficie
de la muestra analizada; el tamaño y el tipo de elemento detector; el modo (reflexión o
transmisión) en que se obtuvieron los espectros; la geometría de la muestra y el método de
preparación; la forma, la ubicación y el tipo de aberturas de enmascaramiento utilizadas. Además,
debe indicarse la resolución espectral, el tiempo de recogida de datos, la naturaleza del espectro
de fondo y cualquier manipulación informática del espectro.”