Entamoeba histolytica, E. dispar y E.

moshkovskii son las especies más frecuentes descritas en la

infección humana, donde E. histolytica es el único patógeno verdadero. La epidemiología de esta
infección es compleja debido a la ausencia de un examen de rutina que permita una correcta
discriminación del complejo de especies de Entamoeba. Por lo tanto, los métodos moleculares
aparecen como la herramienta epidemiológica única para lograr la discriminación de especies. En
este documento, realizamos un estudio transversal para determinar la frecuencia de infecciones
por especies de Entamoeba en un grupo de individuos asintomáticos de una zona rural del centro
de Colombia.

Se recolectaron un total de 181 muestras fecales de niños asintomáticos menores de 16 años del
caserío La Vírgen, Cundinamarca (Colombia) que voluntariamente aceptaron participar en el
estudio. Las muestras fecales fueron examinadas por microscopía óptica y extraído el ADN,
posteriormente sometido a discriminación molecular de E. dispar / E. histolytica / E. Moshkovskii
basado en un ensayo de PCR multiplex dirigido al fragmento de rRNA 18S. Para confirmar la
descripción de la especie, veinte muestras fueron sometidas aleatoriamente a secuenciación de
ADN del fragmento mencionado anteriormente. Mediante examen microscópico directo, la
frecuencia del complejo E. histolytica / E. dispar / E. moshkovskii fue del 18,8% (34/181). La PCR
mostró una frecuencia de 49,1% (89/181), discriminada como 23,2% (42/181) que fueron positivas
para E. dispar, 25,4% (46/181) para E. moshkovskii y 0,55% (1/181) para E. histolytica. Además, se
detectaron infecciones mixtas entre E. dispar y E. moshkovskii en el 4,42% (8/181) de las muestras.
El código de barras molecular confirmó el diagnóstico descrito por el ensayo de PCR multiplex.

Esta es la primera descripción de E. moshkovskii en Colombia y el segundo informe en Sudamérica

que sepamos. Nuestros resultados sugieren la necesidad de desentrañar la verdadera
epidemiología de infecciones por Entamoeba en todo el mundo, incluido el papel patógeno real
que puede tener E. moshkovskii.

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Cuando se comparó por edad y sexo, no se observaron asociaciones significativas en la infección

por E. dispar, E. moshkovskii y / o E. histolytica (Tabla 1). Sin embargo, la infección por E.
moshkovskii en el grupo de 12 a 15 años se observa como un factor de riesgo en comparación con
el grupo de edad de 5 a 8 años. Mediante examen microscópico directo, la frecuencia del complejo
E. histolytica / E. dispar / E. moshkovskii fue del 18,8% (34/181). La PCR mostró una frecuencia del
49,2% (89/181), discriminada como 23,2% (42/181) positiva para E. dispar, 25,4% (46/181) para E.
moshkovskii y 0,55% (1/181) para E. histolytica. Además, se detectaron infecciones mixtas entre E.
dispar y E. moshkovskii en el 4,42% (8/181) de las muestras. Finalmente, la correlación entre PCR y
microscopía óptica fue moderada en la escala de Altman: Kappa 0.451 (p <0.05; IC 95%: 0342–
0560).

Se obtuvieron secuencias de ARNr 18S de 20 muestras (una E. histolytica, nueve E. dispar y diez E.
moshkovskii). Las secuencias se depositaron en GenBank con los números de acceso KT825974-
KT825993. Los resultados de BLAST (programa informatico) mostraron una similitud del 100% para
una muestra de E. histolytica, siete muestras de E. dispar y siete muestras de E. moshkovskii. Dos
muestras de E. dispar (n103 y n100) y tres de E. moshkovskii (n009, n129 y n181) mostraron una
similitud del 97%. Se construyó un árbol ML de acuerdo con las secuencias 18S para confirmar la
detección de E. dispar, E. histolytica y E. moshkovskii (Fig 1). Los resultados mostraron la
asignación correcta de las especies de Entamoeba y la congruencia con el ensayo de PCR. No
obstante, la primera y novedosa descripción de E. moshkovskii en Colombia

Entre los pacientes incluidos en el estudio, al 85,1% (154/181) se les diagnosticó al menos un
parásito intestinal. El veinticinco por ciento (45/181) de los individuos estaban infectados por un
parásito, el 26,5% (48/181) con 2 parásitos y el 30,9% (56/181) con 3 o más parásitos. En total, la
frecuencia de parásitos intestinales en las muestras de heces recolectadas fue: Ascaris
lumbricoides (7%), Trichuris trichiura (14%), Anquilostoma (15%), Hymenolepis nana (1%),
Chilomastix mesnili (3%), E. coli (34%), Endolimax nana (45%), Iodamoeba butschlii (7%),
Blastocystis (34%), E. hartmanni (3%) y Giardia duodenalis (13%). Las asociaciones de
coinfecciones con E. dispar y E. moshkovskii se muestran en la Tabla 2. No se observó asociación
estadística entre las coinfecciones con la frecuencia de la especie Entamoeba (p = 0,123).

Discusión.

La amebiasis es un desafío diagnóstico, claramente debido a la existencia de tres especies

morfológicamente indistinguibles que conducen al sobrediagnóstico del parasitismo producido por
E. histolytica. En este estudio, por microscopía óptica, el método más comúnmente empleado para
el diagnóstico, se encontraron 34 muestras positivas para el complejo E. histolytica / E.dispar /
E.moshkovskii pero solo un paciente presentó infección por E. histolytica, 42 con E. dispar y 46 con
E. moshkovskii cuando se utilizó la PCR como método de diagnóstico. Esta prueba aumentó la
sensibilidad y la especificidad conduciendo a un tratamiento apropiado para el individuo
infectado. Si el diagnóstico se realiza únicamente por microscopía, la medicación debe
administrarse innecesariamente desde el punto de vista clínico. Esto refuerza la necesidad de un
diagnóstico diferencial de E. histolytica con las otras especies que forman el complejo porque
hasta ahora esta es la única especie del género Entamoeba que requiere una acción de
tratamiento de un solo nivel. Por otro lado, se ha informado de resistencia al metronidazol en el
contexto clínico en casos de absceso hepático amebiano [35, 36]. Esto ha sido más difícil de
demostrar en casos de amebiasis intestinal.

El hallazgo de E. dispar como responsable de la mayoría de las infecciones del complejo E.

histolytica / E. dispar / E. moshkovskii ha aparecido en diferentes estudios [21, 38] y en aquellos
estudios que utilizan métodos moleculares para dividir el complejo ha sido la especie más
prevalente. La frecuencia informada de E. dispar por PCR en nuestro estudio fue del 23,2%
(42/181). Esto concuerda con estudios nacionales específicos que informan que la frecuencia de E.
dispar varía entre el 15% y el 17% [30, 41]. El hallazgo de un solo caso de E. histolytica podría
deberse al tamaño de la muestra, ya que la prevalencia informada en nuestro país no supera el
1,5% cuando se utilizan métodos de detección de antígenos [30, 41]. Curiosamente, en nuestro
estudio la frecuencia de E. moshkovskii fue un poco más alta que la frecuencia de E. dispar, lo que
sugiere que la circulación de esta especie existe y no se detectó en exámenes anteriores.

Hasta donde sabemos, este es el segundo estudio en América del Sur que buscó identificar E.
moshkovskii por PCR y es el primer informe de infección humana por E. moshkovskii en Colombia
[21]. A pesar de lo mencionado anteriormente, el hecho de detectar en nuestro país por métodos
moleculares E.moshkovskii en aguas residuales utilizadas para la agricultura (datos no publicados,
pares de respuesta pendientes) y la evidencia reciente que respalda la patogenicidad de esta
ameba [42] sugiere la probable posibilidad de que este especie de ameba está circulando en
humanos en nuestro país. Además, necesitamos más estudios con muestras más grandes para
determinar la epidemiología de esta infección. Este hallazgo presenta trascendencia
epidemiológica ya que es el primer reporte de E. moshkovskii en Colombia y el segundo en
Sudamérica y sugiere la existencia de esta especie como un posible patógeno emergente en países
en desarrollo. Corroboramos estos hallazgos mediante la secuenciación del ADN de los
marcadores de ARNr 18S observando una similitud del 97-100% con las secuencias de E. dispar, E.
histolytica, E. moshkovskii de GenBank (Fig. 1). Además, detectamos una baja cantidad de
desviación en nuestras muestras (n103, n100, n009, n129 y n181) que deben analizarse más a
fondo mediante marcadores moleculares de alta resolución.

Otro factor a considerar es que las especies de Entamoeba que no forman parte del complejo E.
histolytica / E. dispar / E. moshkvoskii como E. hartmanii, E. bangladeshi y E. poleckii en ocasiones
pueden ser morfológicamente similares a las mencionadas anteriormente. complejo [3] e incluso
para personas capacitadas en el diagnóstico de amebiasis puede generar falsos positivos. Este
problema se acentúa aún más en los laboratorios que no son centros de referencia donde
estructuras como macrófagos o linfocitos pueden dar lugar a falsos positivos [19]. La principal
ventaja de utilizar la PCR es la capacidad de distinguir las diferentes especies del complejo,
especialmente cuando hay una alta prevalencia de E. dispar o E. moshkovskii, lo que lo convierte
en el método de elección para comprender la epidemiología de esta infección [12]. . Sin embargo,
en áreas endémicas, esta prueba no se puede aplicar de manera rutinaria debido a las dificultades
para extraer ADN de las muestras de heces y el costo en tiempo y dinero que llevó a la realización
de esta técnica.

La microscopía todavía tiene un lugar importante en el contexto del diagnóstico porque identifica
una variedad de parásitos intestinales que causan enfermedades y que a menudo aparecen en
coinfecciones con E. histolytica, E. dispar, E. moshkovskii, como fue el caso de nuestro estudio
donde detectamos Infecciones por E. dispar y E. moshkovskii con otros patógenos protozoarios (es
decir, Giardia, Blastocystis) y helmintos (es decir, Ascaris lumbricoides, Trichiuris trichiura,
anquilostomas) pero sin asociación significativa (Tabla 1; Tabla 2). En cuanto a los factores de
riesgo de infección por E. dispar y E. moshkovskii ni la edad ni el sexo tuvieron relación con esta
infección, lo que muestra que los principales determinantes para adquirir esta infección son el
saneamiento de la población [43] (Tabla 1; Tabla 2). Dentro de las limitaciones de este estudio se
encuentra la selección por parte de voluntarios participantes pero al comparar en base a los
registros de las escuelas de la población, no mostró diferencias significativas entre los estudiantes
al compararlos por edad, sexo y lugar de origen. Uno pensaría que en una selección aleatoria, el
número de participantes con síntomas gastrointestinales, y por lo tanto el número de casos de E.
histolytica, se incrementaría de modo que solo se encontró un paciente con este parásito en este
estudio. Si bien es importante señalar que cuando diferentes autores han seleccionado solo
pacientes con síntomas gastrointestinales, E. dispar es más prevalente que E. histolytica [44, 45,
46] y en muchos casos la infección por E. histolytica se presenta en coinfección con otros parásitos
intestinales o bacterias como Escherichia coli o Shigella spp que pueden explicar la sintomatología
gastrointestinal [45, 46].