2023

28 de febrero

Ing. de reacciones químicas

Antonino Baez Rogelio

Tarea U2
Durante una prueba de cinética enzimática se obtuvieron los siguientes datos:
Tabla 1:Prueba de cinética enzimática

S Vo
Eo (g/L) T (°C) l (mmol/ml) 1/[S] 1/Vo
(mmol/ml) (mmol/(ml*min))
1.6 30 0 0.1 2.63 10 0.38022814
1.6 30 0 0.033 1.92 30.3030303 0.52083333
1.6 30 0 0.02 1.47 50 0.68027211
1.6 30 0 0.01 0.96 100 1.04166667
1.6 30 0 0.005 0.56 200 1.78571429
1.6 49.6 0 0.1 5.13 10 0.19493177
1.6 49.6 0 0.033 3.7 30.3030303 0.27027027
1.6 49.6 0 0.01 1.89 100 0.52910053
1.6 49.6 0 0.0067 1.43 149.253731 0.6993007
1.6 49.6 0 0.005 1.11 200 0.9009009
0.92 30 0 0.1 1.64 10 0.6097561
0.92 30 0 0.02 0.9 50 1.11111111
0.92 30 0 0.01 0.58 100 1.72413793
0.92 30 0.6 0.1 1.33 10 0.7518797
0.92 30 0.6 0.033 0.8 30.3030303 1.25
0.92 30 0.6 0.02 0.57 50 1.75438596

a) Determinar km y kcat
Reacciones sin inhibidor a 30°C con Eo= 1.6g/L

T 30°C Eo 1.6
2
1.8
1.6 f(x) = 0.00740798403017313 x + 0.303471183205386
1.4 R² = 0.999916158743922
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0 50 100 150 200 250

y=0.0074 x+ 0.3035

1
=
km 1
+
[]
1
Vo Vmax S Vmax
y=mx+b
 1 1 mM
=0.3035= =3.2948
Vmax 0.3035 s
km
=0.0074=km=0.0074 ( 3.2948 )=0.0243 mM
Vmax
Vmax 3.29
kcat= = =2.056
[ E] 1.6

Reacciones sin inhibidor a 49.6°C con Eo= 1.6g/L

T 49.6°C Eo 1.6
1
0.9
0.8 f(x) = 0.00368946365693688 x + 0.157660458669951
R² = 0.999660978761147
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 50 100 150 200 250

y=0.0037 x +0.1577
1
=
km 1
+
1
[]
Vo Vmax S Vmax
y=mx+b
1 1 mM
=0.1577= =6.3411
Vmax 0.1577 s
km km
= =0.0037=km=0.0037 ( 6.3411 )=0.0234 mM
Vmax 6.3411
Vmax 6.3411
kcat= = =3.96
[ E] 1.6

Observaciones
En ambas el comportamiento de Km se mantiene estable con valores parecidos por lo que
se concluye que la afinidad de la enzima no se ha perdido.
 b) Determinar km y Vmax
Reacción sin inhibidor a 30°C con Eo de 1.6 g/L

T 30°C Eo 1.6
2
1.8
1.6 f(x) = 0.00740798403017313 x + 0.303471183205386
1.4 R² = 0.999916158743922
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0 50 100 150 200 250

y=0.0074 x+ 0.3035

1
=
km 1
+
1
Vo Vmax S Vmax []
y=mx+b
1 1 mM
=0.3035= =3.2948
Vmax 0.3035 s
km
=0.0074=km=0.0074 ( 3.2948 )=0.0243 mM
Vmax

Reacción sin inhibidor a 30°C con Eo de 0.92 g/L

T 30°C Eo 0.92
2
1.8 f(x) = 0.0117623595580444 x + 0.709519427162441
1.6 R² = 0.687889292944313
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0 20 40 60 80 100 120

y=0.0118 x +0.7095

1
=
km 1
+
1
Vo Vmax S Vmax []
 y=mx+b
1 1 mM
=0.7095= =1.4094
Vmax 0.7095 s
km
=0.0118=km=0.0118 ( 1.4094 )=0.0166 mM
Vmax

Observaciones
En este caso se puede observar que la km disminuye lo que quiere decir que la afinidad no
se ha perdido y, en consecuencia, la velocidad máxima de la enzima también disminuye.

c) Determinar constante de inhibición (Ki) para el inhibidor a 30°C

Inhibidor competitivo
2
1.8
1.6 f(x)
f(x) == 0.0250599478649182
0.0123770415205565 xx ++ 0.497758810907443
0.488226165472509
R² == 0.999960679971412
R² 0.999847338719738
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
0 20 40 60 80 100 120

 Con inhibidor
y=0.0251 x +0.4 978
1 1 mM
=0.4 978= =2.0 088
Vmax 0.4 978 s
km
Vmax
=0.0251=km=0.0251
2.0 088 mM
s (
=0.0 504 mM )
 Sin inhibidor
y=0.0124 x+ 0.4882
 1 1 mM
=0. 4882= =2.0483
Vmax 0. 4882 s
km
Vmax
=0. 0.124=km=0. 0124
s (
2.0483 mM
)
=0.0 253 mM

[l ]
ki= app
km
−1
km
0.6 m M /ml 0.6 m M /ml
ki= = =0.60 mM /ml
0.050 4 m M 0.99
−1
0.0253 m M

¿Qué tipo de inhibidor se está usando?

El inhibidor que se usa es competitivo, es decir, que compite por el sitio catalítico
afectando a la km pero sin modificar la velocidad máxima de la enzima siendo estos valores
similares en ambas.