IDENTIFICACIÓN DE UN

TOBAMOVIRUS AFECTANDO
PETUNIAS DOBLES

Maria Claudia Sánchez-Cuevas

Universidad de Oriente, Núcleo de Monagas, Venezuela

Stephen T. Nameth
The Ohio State University, Columbus, EE.UU.
 Introducción

El género Petunia es uno de los seis

miembros de la familia Solanaceae
producidos principalmente por su valor
ornamental y el más importante debido a
su uso hortícola y a su utilización como
especie modelo para investigaciones
biológicas.
 Introducción
 Existen cientos de
cultivares de petunia,
muchos adaptados a
las condiciones
locales. Algunos de
estos pueden tener
flores con corolas
simples (sencillas) o
corolas dobles
(múltiples pétalos).
 Petunias dobles

 Las petunias dobles son usualmente estériles porque los

pistilos están ausentes o malformados. Por ésta razón,
estas petunias son propagadas comercialmente por
estacas.
 El fitomejoramiento de las petunias está orientado al
vigor, hábito de floración (color, tamaño, earliness,
etc.), altura, ramificación, color del follaje, tamaño de
las hojas, producción de polen, resistencia a
condiciones ambientales, etc. No se ha trabajado en la
resistencia de las petunias a enfermedades y se
desconoce si existen fuentes de resistencia genética.
 Enfermedades en petunias
 Las petunias se desarrollan relativamente
libres de enfermedades, pero pueden ser
atacadas por hongos de los géneros
Pythium, Rhizoctonia, Phytophthora,
Alternaria y Botrytis.
 Estas enfermedades pueden ser
controladas a través de prácticas
culturales y aplicación de fungicidas.
 Enfermedades virales
 Las enfermedades virales constituyen un
gran riesgo para la producción y la
calidad de las petunias.
 Petunia x hybrida es susceptible a muchos
virus. La lista de virus capaces de
infectar a las petunias es muy larga
porque las petunias son usadas
comúnmente como plantas indicadoras.
 Revisión de literatura
Muchos virus reportados en petunia:
Alfamovirus (1), bromovirus (2), capillovirus (1),
carlavirus (6), carmovirus (5), caulimovirus (2),
closterovirus (2), comovirus (2), cucumovirus (2),
fabavirus (2), furovirus (2), geminivirus (9),
hordeivirus (1), ilarvirus (11), ipomovirus (1),
luteovirus (1), necrovirus (1), ourmiavirus (4),
potexvirus (6), potyvirus (35), nepovirus (24),
rhabdovirus (6), sequivirus (1), sobemovirus (2),
tobamovirus (11), tobravirus (3), tombusvirus (5),
tospovirus (2), tymovirus (5), umbravirus (1),
varicosavirus (1).
 Enfermedades virales

Los síntomas inducidos por los virus en

petunias son variables debidos a la
influencia de la especie del virus y sus
razas, la diversidad genética de los
cultivares de las petunias y las
condiciones ambientales.
 Enfermedades virales

Los síntomas más comunes son:

Deformación del follaje, achaparramiento,
deformación y decoloramiento de las flores,
clorosis irregular de las nervaduras, reducción
del número y tamaño de las flores, etc.
Aparentemente las infecciones mixtas agravan
los síntomas.
 Problema
Un productor y exportador de plantas
ornamentales observó en progenitores machos
de petunia doble síntomas indicativos de
infección viral:
 Mosaico moderado a severo
 Mosaico blanco
 Ampollamiento y deformación
de las hojas
 Baja producción y reducida
viabilidad del polen
 Objetivo

Identificación y caracterización
del agente causal de la
enfermedad en petunias dobles.
 Materiales y Métodos.
Para la identificación y caracterización del virus se
utilizaron:
Expresión de síntomas
Transmisión
Plantas indicadoras
Serología (ELISA)
Punto de inactivación termal
Inclusiones virales
Microscopía electrónica
Purificación
Electroforesis (ARN, dsRNA, proteínas)
 Transmisión
1. Mecánica
1. Inóculo: Hojas sintomáticas trituradas en bufer
(fosfato de potasio 0.02M), pH 7.0 con 1% de
celita (1:10).
2. Inoculación: Frotando hojas con gasa o algodón
impregnado en el inóculo.
Muy eficiente.
 Por insectos
1. Áfidos (Aphis gossypi): sin alimento por 3 hr,
colocados en plantas inoculadas por 5, 15, 30, y
120 min y después colocados en grupos de 5-7 por
planta, en diferentes plantas indicadoras.
No hubo transmisión.
 Plantas indicadoras
Especie Síntoma
Nicotiana tabacum cv.‘Glurk’ LNL
N. tabacum cv. ‘Turk’ MS
N. rustica MS, A, DH
N. benthamiana ANL, MS, A, DH
N. clevelandii LNL, NS
N. sylvestris MS
Gomphrena globosa LNL
Chenopodium quinoa LCL
Ch. amaranticolor LCL
NOTA: Lesión necrótica local (LNL), mosaico sistémico (MS),
ampollamiento (A), anillo necrótico local (ANL), deformación de hojas
(DH), necrosis sistémica (NS), lesión clorótica local (LCL),
 Plantas indicadoras

Nicotiana tabacum ´Glurk´ N. bentha,miana

Nicotiana tabacum ´Turk

Diagnóstico serológico comercial

Compañía AGDIA determinaba:

CMV, INSV, PVX, PNRSV, TMV,
TRSV, TSV, TAV, ToRSV, PVY, y
grupo POTY (72)
 Serología (ELISA)
Las plantas sintomáticas de petunia doble
resultaron positivas serológicamente (DAS
ELISA) para la raza común del virus del
mosaico del tabaco (TMV), pero la reacción se
desarrolló muy lentamente y la absorbancia fue
baja:
OD 405 nm TMV: 2.065
OD 405 nm PV: 0.896
 Serología (ELISA)
Negativo:
AMV alfamovirus Negativo para los
ApMV ilarvirus
ArMV nepovirus tobamovirus:
CMV cucumovirus ORSV
INSV tospovirus
TMWV tospovirus PMMoV
PLRV luteovirus CGMMV
PVA potyvirus
PVY potyvirus RMV
TRSV nepovirus SHMV
TEV potyvirus
TuMV potyvirus ToMV
TSV ilarvirus
Grupo potyvirus (72)
 Serología (ELISA)
 La reacción del estuche serológico comercial
(AGDIA) de TMV resultó positivo para PV,
pero débil y muy lento.
 Se produjeron anticuerpos policlonales contra
el PV en conejos.
 La concentración alcanzada fue baja y no la
esperada para un tobamovirus (Gibbs, 1977;
Van Regenmortel, 1986). Reacciones positivas
para extracto fresco de plantas inoculadas con
PV, TMV y ToMV. Muy baja reactividad
contra RMV, PMMV, SHMV y CGMMV.
 Punto de inactivación termal
 Las hojas de plantas de tabaco ´Glurk
´fueron inoculadas mecánicamente con
savia extraída de plantas de tabaco
´Turk´ infectadas con el virus de la
petunia. La savia fue calentada por 10
min a 80, 82, 84 y 86ºC.

 El PIT está alrededor de 86 ºC.

 Inclusiones virales

 Cristales cuadrados, rectangulares,

hexagonales e irregulares.
 La mayoría ubicados alrededor de los
estomas.
 Microscopía Electrónica

A C
311 xx 17 nm
645 x 17 nm
B
126 x 17 nm

Imágenes del microscopio eléctrónico de las

Partículas virus de las petunias teñidas con
Acetato de uranilo 1%
 Purificación

Gradiente de sucrosa
mostrando
las partículas virales
sedimentadas
en dos zonas distintas
 Electroforesis

Proteína de la cápside
 Conclusiones

1. La etiología de la enfermedad de las petunias

dobles es de origen viral.
2. La morfología del virus, la sintomatología de
las plantas indicadoras, la reacción
serológica, las inclusiones virales, el punto de
inactivación termal, el tamaño de la proteína
de la cápside y los perfiles del ARN y dsRNA
indican que se trata de un tobamovirus.
 Conclusiones
3. El tamaño de las partículas, las diferencias de
sintomatología inducida en algunas plantas
indicadoras, la reacción serológica indican la
presencia de un virus diferente a TMV o una
raza diferente de TMV.
4. Es necesario determinar la secuencia del
virus para dilucidar su identificación y
relación con otros tobamovirus.
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