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Revista de ciencia cromatográfica, vol. 48, noviembre/diciembre 2010

Cinética de degradación de telitromicina

determinado por metodo HPLC

Vale LC1,2*, CS pago1, AD Lange1,yEES Schapoval1

1Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas, Faculdade de Farmácia, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Porto Alegre, RS,
Brasil y2Departamento de Farmácia Industrial, Centro de Ciências da Saúde, Universidade Federal de Santa Maria.97.105-900, Santa Maria,RS,
Brasil.

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Todas las estructuras de macrólidos y sus derivados cetólidos se basan
Resumen
en un anillo de macrolactona, siendo los macrólidos más relevantes desde
Se demuestra la cinética de degradación del antibiótico telitromicina el punto de vista terapéutico que comprenden un anillo de 14, 15 o 16
utilizando un método de cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) miembros. Eritromicina A, un antibiótico natural aislado deStreptomyces
indicador de estabilidad. La fotodegradación se realiza mediante erythreusconsta de un anillo de lactona de 14 miembros con dos grupos de
lámpara UVC-254 nm (15W), instalada en una cámara revestida
azúcar unidos: L-cladinosa en C3 y desosamina en C5.
internamente con espejos, donde las soluciones de telitromicina
preparadas a partir de tabletas recubiertas se colocan en celdas de
La telitromicina se diferencia estructuralmente de los macrólidos de
cuarzo. Para promover la oxidación, se lleva a cabo la reacción entre la
tres formas, que se asocian con una mejora específica de las
solución de telitromicina y la solución de peróxido de hidrógeno al 3%.
Los parámetros cinéticos de orden de reacción y las constantes de propiedades antimicrobianas (4,5).
velocidad de degradación se determinan para ambas condiciones. El Los ensayos informados en la literatura para la determinación de
proceso de degradación de la telitromicina se puede describir mediante telitromicina en fluidos biológicos incluyen cromatografía líquida de alta
una cinética de primer orden en las dos condiciones experimentales resolución-espectrometría de masas (6), cromatografía líquida (LC) con
utilizadas en este estudio. detección de fluorescencia (7) y ensayos microbiológicos (8). Sobre la
base de los resultados, los autores han realizado un análisis crítico de las
actividades in vitro e in vivo, las
consideraciones farmacocinéticas y farmacodinámicas relacionadas con
el uso de este nuevo agente para el tratamiento de infecciones
respiratorias. Otros investigadores han descrito un método sensible para
Introducción
el examen de 20 macrólidos y cetólidos a granel, utilizando un método
de CL con fase móvil volátil, que permite la recuperación y posterior
Telitromicina (Figura 1) 3-De[(2,6-didesoxi-3-C-metil-α- análisis de estos antibióticos (8). Se ha estudiado la cuantificación de
Lribohexopiranosil)oxi]-11,12-didesoxi-6-O-metil-3-oxo-12,11- telitromicina en presencia de sus productos de degradación. Hace poco,
[oxicarbonil[[4-[4-(3-piridinil)-1H-imidazol-1-1-il]butil]imino]]eritromicina; se realizó un ensayo microbiológico y método de CL para la
[191114-48-4]; C43Hsesenta y cinconorte5O10 determinación de antibiótico en la forma de dosificación farmacéutica y
; peso molecular 812,00; es el primer antibiótico que pertenece a una en una muestra expuesta a condiciones de degradación. Se realizó un
nueva clase de macrólidos de anillo de 14 miembros, llamados ensayo microbiológico aplicando el método cilindro-placa
cetólidos, para lograr uso clínico. Esta nueva incorporación al
macrólido-lincosamida-estreptogramina B (MLSB) fue desarrollado
específicamente para el tratamiento de infecciones del tracto
respiratorio adquiridas en la comunidad (1,2).
El descubrimiento de los cetólidos, derivados de la eritromicina que
incorpora una modificación de la cetona C-3, reveló una clase de compuestos
con excelente actividad contra algunas bacterias resistentes a los macrólidos,
especialmente patógenos de las vías respiratorias clínicamente importantes,
comoNeumonía por esteotococos.Los resultados positivos mostrados por el
uso de cetólidos podrían ser los responsables del aumento de la investigación
de antibióticos macrólidos en la industria farmacéutica (3).

Figura 1. La estructura química de la telitromicina.

* Autor a quien debe dirigirse a la correspondencia: correo electrónico lauvau@terra.com.br..

Se prohíbe la reproducción (fotocopia) del contenido editorial de esta revista sin el permiso del editor. 835
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y descrito en un estudio previo (9). El ensayo microbiológico
revela cambios sutiles no demostrables por métodos químicos.
Este ensayo permite la evaluación de la potencia, muy
importante en el análisis de antibióticos (10).
Se presentó y validó un método de cromatografía líquida de alta
resolución (HPLC) selectivo y confiable de acuerdo con los requisitos
de la Conferencia Internacional de Armonización (ICH) Q2 (R1) (11),
para la evaluación cuantitativa del fármaco y en presencia de sus
productos de degradacion. (12).
Las investigaciones preliminares de estabilidad realizadas por nuestro
grupo de investigación revelaron que la telitromicina se degrada con la
exposición a la luz y al agente oxidante. Su labilidad a la luz y la oxidación se
produjo mediante pruebas de degradación forzada (pruebas de estrés). La
directriz ICH presenta las condiciones estándar para las pruebas de estabilidad
con bomba binaria modelo LC-10 ADvp, automuestreador SIL-10
ADvp y detector UV modelo SPD-M10 Avp (Kyoto, Japón).
La detección se realizó a 265 nm. Se utilizó un controlador de sistema
SCL-10 Avp y un software de cromatografía CLASS-VP. Se cambió un
horno CTO-10 Acvp para mantener la temperatura a 50°C. La fase
estacionaria fue una columna de octadecilosilano Ace RP-18 (250
mm×4,6 mm, 5 µm) y se operó a 40°C. La fase móvil estaba compuesta
por metanol y tampón de fosfato monobásico de potasio M 0,067
ajustado a pH 4,0 con ácido ortofosfórico (55:45, v/ v). Se prepara
diariamente, se filtró a través de un filtro de membrana de 0,45 µm y se
desgasificó utilizando el desgasificador del sistema cromatográfico antes
de su uso. El caudal de la fase móvil fue de 1 mL/min y el volumen de
inyección fue de 20 µL.

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y requiere que se realicen pruebas de estrés para dilucidar las características Estudios de desmontaje

de estabilidad inherentes de la sustancia activa en una preparación estudio de fotodegradacion

farmacéutica. Siguiendo las recomendaciones de esta guía, las pruebas de luz
deben ser una parte integral de las pruebas de estrés. Además, es necesario
un método indicador de estabilidad para cuantificar el fármaco en presencia
de sus productos de degradación. El método debe ser capaz de resolver y
detectar los degradantes fotolíticos que aparecen durante el estudio (13). El
propósito de este trabajo fue establecer el efecto de la oxidación y la luz sobre
la descomposición de este antibiótico; determinar la cinética de degradación
describiendo los cambios de concentración en función del tiempo; y estimar
parámetros cinéticos como la constante de velocidad de degradación de orden
aparente (k) yt90%(tiempo en el que el 90% de la concentración original del
fármaco permanece sin cambios), utilizando un método HPLC indicador de
estabilidad.
La fuente de luz utilizada fue una lámpara fluorescente UV modelo
Ecolume, 30W, que emite radiación a 254 nm, fijada a una cámara en posición
horizontal. La cámara estaba revestida internamente con espejos para
distribuir la luz de manera uniforme. El efecto de la luz se estudia exponiendo
las soluciones de muestra en celdas de cuarzo de 1 cm. La temperatura se
controló en la cámara. Se prepara una solución madre (1 mg/ml) en metanol
a partir de los comprimidos recubiertos. El estudio de degradación por
esfuerzos se realizó exponiendo las soluciones contenidas en las celdas de
cuarzo en la cámara. Las muestras se colocan horizontalmente para
proporcionar el área máxima de exposición a la fuente de luz. Teniendo en
cuenta la absorción UV de la telitromicina, la irradiación se realizó a 254 nm
en diferentes intervalos de tiempo (0, 1, 2, 3, 4, 5,

Tabla I. Resultados de la Concentración Residual de las Soluciones de Telitromicina

después de la Fotodegradación y Degradación Oxidativa, Utilizando el Método HPLC

Experimental
Muestra Medido Pariente

quimicos tiempo concentración concentración* estandar

El metanol, el hidróxido de sodio, el ácido clorhídrico, el (h) (µg/mL) (µg/mL) Desviacion

peróxido de hidrógeno, el dihidrogenofosfato de potasio y el

ácido ortofosfórico (grado reactivo) de grado HPLC se
0 40,00 (100%) 1.88
1 32,86 (82,16%) 2.44
adquirieron de Merck (Darmstadt, Alemania). Se usó agua
2 21,08 (52,71%) 1.75
destilada purificada por un aparato Millipore Milli-Q UF-Plus
3 16,13 (40,34%) 2.22
(Millipore, Bellerica, MA) para preparar la fase móvil.
Fotodegradacion 4 40.00 14,77 (36,93%) 2.65
5 10,44 (26,10%) 1.50
Se afirmó que las tabletas recubiertas con película de 6 9,52 (23,78%) 2.75
telitromicina contenían 400 mg (como base anhidra) del 7 6,78 (16,96%) 1.98
fármaco y los siguientes ingredientes inactivos: almidón de 8 5,73 (14,31%) 2.32
maíz, croscarmelosa sódica, hipromelosa, lactosa monohidrato,
0 40,00 (100%) 0.76
estearato de magnesio, celulosa
1 21,53 (53,83%) 1.64
microcristalina, polietilenglicol, povidona, ácido férrico rojo. 2 18,10 (45,26%) 0,95
óxido, talco, dióxido de titanio y óxido férrico amarillo. 3 10,61 (26,53%) 0,67
El patrón de referencia de telitromicina (99,3%), la degradación oxidativa 4 40.00 11,11 (27,78%) 1.93
forma farmacéutica y los excipientes fueron 5 5,32 (13,31%) 1.50
suministrados por Aventis Pharma (São Paulo, Brasil). 6 5,22 (13,05%) 1.75
7 3,79 (9,47%) 2.23
cromatografía 8 3,55 (8,88%) 2.05
El método HPLC indicador de estabilidad se abrió y * Cada valor es la media de tres análisis.
validó usando un Shimadzu LC equipado

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8 horas). Para evaluar la contribución del cambio inducido térmicamente al
cambio total, se usaron muestras protegidas, envueltas en papel de aluminio,
como controles oscuros. Se analizaron tres muestras para cada intervalo de
tiempo. Después de cada punto de tiempo, las muestras se diluyeron con la
fase móvil para dar una concentración final de 40 µg/mL). Las soluciones
estándar preparadas en metanol se diluyeron con la fase móvil en la
concentración de 40 µg/mL para la cuantificación del fármaco y luego se
analizaron por HPLC. Todas las soluciones se inyectaron por triplicado. Las
soluciones de placebo se prepararon de la misma manera para verificar la
influencia de los excipientes en el proceso de degradacion.
Las muestras se analizaron en diferentes intervalos de tiempo 0, 1, 2,
3, 4, 5, 6, 7 y 8 h de exposición. Se analizaron tres muestras para cada
intervalo de tiempo. Después de cada tiempo, las muestras se diluyeron con la
fase móvil para dar una concentración final de 40 µg/mL. Las soluciones
estándar, preparadas en metanol, se diluyeron con la fase móvil en la
concentración de 40 µg/mL para la cuantificación del fármaco, luego se
ensayaron por HPLC. Todas las soluciones se inyectaron por triplicado. De
manera similar se prepararon soluciones de placebo para verificar la
influencia de los excipientes en el proceso de degradación.

Cálculos de cinética
estudio de degradacion oxidativa La cinética de la tasa de degradación de la telitromicina se traza
Para promover la oxidación, se realizaron pruebas preliminares utilizando rápidamente la concentración del fármaco restante en función del tiempo
la reacción entre las soluciones de telitromicina y una solución de peróxido de (proceso de orden cero), el logaritmo de la concentración del fármaco en

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hidrógeno al 1% y al 3%.
Se preparó una solución madre (1 mg/mL) cuando se transfirió el
equivalente a 50 mg de telitromicina a un matraz volumétrico de 50 mL,
se solubilizó con 5 mL de metanol y se desarrolló el volumen con
peróxido de hidrógeno al 1% y 3 %, respectivamente. . Las muestras se
envolvieron en papel de aluminio y se abandonaron a temperatura
ambiente.
función del tiempo (proceso de primer orden) y el recíproco de la
concentración del fármaco en función del tiempo. tiempo (proceso de
segundo orden). Coeficientes de regresion (r), y el mejor ajuste observado
indica el orden de reacción. Los parámetros cinéticos como la constante de
tasa de degradación de orden aparente (k) yt90(tiempo en que queda el 90% de
la concentración original del fármaco). El modelo cinético se puede
representar como:

Figura 2.Gráficos de concentración: reacción de orden cero, logaritmo de concentración (A0), reacción de primer orden y recíproco de concentración (A1), reacción de segundo orden de

telitromicina restante frente al tiempo para estudio de fotodegradación y gráficos de concentración (A2), cero- reacción de orden, logaritmo de concentración (B0), reacción de primer orden

y recíproco de concentración (B1), reacción de segundo orden de telitromicina restante frente al tiempo para el estudio de degradación oxidativa (B2).

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hacer = hacer0–kt t90%= 0,1C0/k(reacción degradacion para determinar el orden de reaccion. Para determinar la
de orden cero) cinética de degradación y estimar los parámetros cinéticos, es fundamental
alcanzar al menos el 50% de degradación. Cuando los valores están por
en do = en do0–kt t90%= 0,106/k(reacción de
debajo del 50%, no es posible establecer el orden de reacción (14).
primer orden)

1/C = 1/C0+kt t90%= 1/9kC0 El proposito de las pruebas de estabilidad es proporcionar evidencia
(reacción de segundo orden)

donde C0es la concentracion de los reactivos considerados en el tiempo cero,

C es la concentracion despues del tiempo de reacciontykes la constante de
velocidad de reacción.

Resultados

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El efecto de la luz y la oxidación sobre la concentración residual de
telitromicina en muestras degradadas se muestra en la Tabla I.

Las cinéticas de fotodegradación y degradación oxidativa se calculan a

través de la caída de la concentración del fármaco con el tiempo. La
concentración de telitromicina remanente se calculó en cada intervalo de
tiempo para las tres repeticiones, en comparación con la concentración
media de la solución estándar del fármaco en cada condición de degradación.
Los gráficos de concentración, logaritmo de la concentración y recíproco de la
concentración del fármaco restante frente al tiempo se muestran en la Figura
2. A través de la evaluación de los coeficientes de confirmación, se puede
demostrar que las soluciones de telitromicina se pueden describir mediante
una cinética de primer orden bajo ambas condiciones experimentales
utilizadas en este estudio. A partir de los pendientes de las rectas,k, y elt90
para cada prueba de esfuerzo (Tabla II).

Figura 3.Cromatogramas HPLC de telitromicina degradada 40 µg/mL. Leyenda: (A)

Discusión solución de control de telitromicina en el tiempo 0; (B) solución de telitromicina

después de 4 h de exposición a la luz; (C) solución de telitromicina después de 4 h de

exposición al reactivo oxidante.

El método HPLC fue previamente desarrollado y validado
(11) para la cuantificación de telitromicina en formas farmacéuticas. En
este trabajo previo, el estudio preliminar de estabilidad mostró
sensibilidad a la oxidación ya la luz. En este estudio, se aplicó el método
HPLC en la determinación de la cinética de fotodegradación y
degradación por oxidación de la telitromicina, pudiendo separarse
efectivamente el fármaco de sus productos de degradación, como se
muestra en la Figura 3. Cuando se sacó la solución de peróxido de
hidrógeno al 1% para promover la degradación oxidativa, los resultados
obtenidos no mostraron

Cuadro II. Constante de tasa de degradación (k), yt90para

soluciones de telitromicina despues de la fotodegradacion y la
degradacion oxidativa determinada por el metodo HPLC

k t90
(h–1) (h)

Fotodegradacion 0.2591 0.4091 Figura 4.Cromatogramas de HPLC de telitromicina oxidativa degradada 40 µg/mL

degradación oxidativa 0.3951 0.2683 durante 8 h. Clave: (A) telitromicina; (B) producto de degradación mayoritario.

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con respecto a cómo la calidad de la droga varía con el tiempo bajo la
influencia de la luz y la oxidación. La prueba de estrés es la primera
parte de la evaluación de la estabilidad y puede ayudar a identificar los
posibles productos de degradación, establecer las vías de degradación y
la estabilidad intrínseca de la molécula, así como validar el poder
indicador de estabilidad del procedimiento analítico utilizado .
En este trabajo se llevó a cabo la cinética de degradación lumínica y
oxidativa de la telitromicina mediante el empleo de condiciones de estrés. Se
encontró que la exposición a la luz y al reactivo oxidante eran importantes
factores adversos de estabilidad. Use el método HPLC para la determinación
del fármaco en las muestras degradadas. El perfil de degradación oxidativa y
de luz de la telitromicina se evalúa a diferentes intervalos de tiempo. Después
de 4 h de exposición a la luz, más del 50 % del compuesto original se
degradó. Los cromatogramas típicos, que muestran los cambios observados
durante la degradación en comparación con la muestra inicial, se muestran
en la Figura 3.
Se acabó un producto de degradación mayoritaria alrededor de los 9,7
min despues de la reaccion entre la solucion de telitromicina y la solucion de
peróxido de hidrógeno al 3%. El pico alrededor de 1,5 min representa la
solución de peróxido de hidrógeno al 3%. La figura 4 muestra una
disminución en el nivel del fármaco y un aumento de un producto de
gradacion mayoritaria durante el intervalo de tiempo de esta prueba de
estrés. No se encontraron productos de degradación en las muestras
utiliza como controles oscuros.
Los cromatogramas de las soluciones placebo no presentado pico;
ni en el tiempo de retención de telitromicina, ni en los productos de
degradación. Por tanto, no hay influencia de los excipientes en la
determinación de la cinética de este fármaco. Durante la condición de
fotodegradación, la temperatura, que se controló en la cámara,
estuvo siempre por debajo de 30°C.
Conclusiones
Se determinaron las cinéticas de fotodegradación y degradación
oxidativa de las soluciones de telitromicina. La fotodegradación y la
degradación oxidativa de la telitromicina siguen una cinética de reacción
de primer orden.
El método de HPLC indicador de estabilidad es capaz de separar la
telitromicina de sus productos de degradación y excipientes de tabletas por
su sensibilidad y reproductibilidad, después de eso se pueden predecir los
parámetros cinéticos de la velocidad de degradación constante, yt90.
Expresiones de gratitud
Los autores agradecen a CAPES y CNPQ (Brasilia, Brasil) por el
apoyo financiero.
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Manuscrito recibido el 16 de marzo de 2009.
revisión recibida el 22 de junio de 2009.
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