Universidad de las Fuerzas Armadas

ESPE

Microbiología II

Andrés Izquierdo Ph.D.

Quito, 2018
Estrategias de biorremediación.
Biaumento, Bioestimulación y
Atenuación natural monitorizada
(MNA)
 Biorremediación

• La biorremediación es una tecnología basada en la

biodegradación o transformación microbiana de
contaminantes para eliminarlos o transformarlos en otros
productos menos peligrosos para el medio ambiente y la salud
humana.
 Biorremediación

• Idealmente los productos son convertidos en CO2, agua, sales

inorgánicas y/o biomasa, pero a menudo una parte del
contaminante se puede acumular como productos de
transformación parcial.
 Biorremediación

• La biodegradación es un proceso que se produce de forma

natural en el medio ambiente y la biorremediación intenta
potenciarlo.

• Se trata de una tecnología económica, aplicable en suelos y

aguas, y que no requiere grandes infraestructuras.
 Biorremediación

• En el sentido más amplio, la biorremediación incluye el uso

de enzimas, estimulantes del crecimiento, bacterias, hongos o
plantas para degradar, transformar, secuestrar o movilizar
contaminantes orgánicos, inorgánicos, o metales en el suelo,
agua o aire.
 Biorremediación

• Los tratamientos biológicos se llevan utilizando muchos años

y son importantes para el tratamiento de aguas residuales,
tanto industriales como urbanas, pero ha sido en los últimos
tiempos cuando han empezado a implementarse de forma
habitual en tratamiento de aguas subterráneas y suelos (US-
EPA, 2000; US-EPA, 1998).
 Biorremediación de emplazamientos contaminados por
hidrocarburos

La remediación de suelos contaminados con componentes del

petróleo merece especial atención por la frecuencia de los
derrames y fugas accidentales que se producen en diferentes
ubicaciones en todo el mundo (Swannell et al. 1996).
 Biorremediación de emplazamientos contaminados por
hidrocarburos

Durante los derrames accidentales, el retiro o recuperación de

los contaminantes se debe realizar de forma inmediata, sin
embargo los contaminantes pueden persistir durante décadas
en las costas, amenazando la especies que las habitan (Owens
et al. 2008).
 Estrategias de biorremediación

Bioaumento

El bioaumento o biorefuerzo consiste en la adición de

poblaciones microbianas especializadas (cepas individuales o
consorcios), que generalmente se cultivan por separado en
condiciones definidas, para realizar una tarea específica de
remediación en un ambiente dado (in situ o en un biorreactor)
(Alvarez y Illman, 2006).
 Bioaumento

• Es una de las estrategias más utilizadas en procesos de

biorremediación.

• Esta técnica es la más adecuada para emplazamientos que

no posean suficientes células microbianas o donde la
población nativa no posea las rutas metabólicas necesarias
para metabolizar los contaminantes.

• Los estudios de viabilidad son un pre-requisito previo para

cualquier intervención planificada (Tyagi et al., 2011).
 Bioaumento

• Se han desarrollado dos enfoques distintos para el

biorefuerzo.

• Uno se basa en la inoculación con microorganismos con el

potencial catabólico deseado para complementar o sustituir a
una población de microorganismos nativos.

• En este caso, las bacterias o consorcios seleccionados son

capaces de sobrevivir y competir con los microorganismos
nativos, y ocupan un nicho metabólico específico dentro del
ambiente contaminado (Vogel y Walter, 2002).
 Bioaumento

• El segundo enfoque consiste en la adición de una gran

concentración de células que actúan momentáneamente como
biocatalizadores y que degradan significativamente un
contaminante objetivo antes de convertirse en inactivas o
morir (Duba et al,1996; Krumme et al, 1994).
 Bioaumento

• En este caso, los microorganismos inoculados no son capaces

de establecerse debido al estrés abiótico y biológico
encontrado en el nuevo entorno.
 Bioaumento

• Los inóculos utilizados para el bioaumento pueden ser de

diferentes tipos de microorganismos, incluyendo tanto
bacterias como hongos, como los hongos lignolíticos.

• Los inóculos más utilizados para bioaumento incluyen:

 Bioaumento

1.Cultivos mixtos

Cultivos de bacterias nativas que han sido altamente

enriquecidos utilizando el contaminante o los contaminantes
de interés.

El inóculo inicial se obtiene normalmente del propio suelo o

de plantas de tratamiento de aguas residuales contaminadas.
 Bioaumento

2. Cultivos puros

Inoculación con una única cepa capaz de degradar el

contaminante.

Muchas cepas están disponibles en las colecciones de cultivos

tipo (por ejemplo, http:/www.atcc.org), como por ejemplo
Pseudomonas stutzeri KC(ATCC # 55595), que puede degradar
el tetracloruro de carbono.
 Bioaumento

3. Elementos genéticos

Introducción de genes mediante la utilización de vectores (por

ejemplo, plásmidos) que serán incorporados por las bacterias
nativas.

Esta estrategia permite introducir nuevas funciones

catabólicas minimizando las dificultades asociadas con la
inyección, distribución y supervivencia de células bacterianas
exógenas.
 The naphthalene catabolic plasmid and
degradation pathway in P. putida G7. (A) NAH7.
Bioaumento

3. Elementos genéticos

Introducción de genes mediante la utilización de vectores (por

ejemplo, plásmidos) que serán incorporados por las bacterias
nativas.

Esta estrategia permite introducir nuevas funciones

catabólicas minimizando las dificultades asociadas con la
inyección, distribución y supervivencia de células bacterianas
exógenas.
 Bioaumento

4. Microorganismos genéticamente modificados (OGM)

Aunque existe una vasta literatura sobre el desarrollo y

potencial de bacterias degradadoras obtenidas por
modificación genética, muchos países han puesto barreras
legales para la liberación de OMG en emplazamientos
contaminados debido a los riesgos potenciales para el
ecosistema y la salud pública.
 Bioaumento

Los tipos de inóculos descritos anteriormente se encuentran

disponibles en el mercado y se pueden adquirir a menudo
como microorganismos liofilizados que pueden ser
rehidratados y activados.
 Bioaumento

Desde una perspectiva aplicada es más ventajosa la utilización

de un consorcio microbiano en lugar de un cultivo puro ya que
proporciona una diversidad metabólica y la robustez necesaria
para su aplicación en el campo.
 Bioaumento

Por otro lado, aunque los microorganismos nativos posean las

funciones necesarias para la descontaminación de un suelo, a
menudo la inoculación reduce significativamente el tiempo de
tratamiento.
 Bioaumento

•Por ejemplo, en un estudio llevado a cabo por Li et al.,

(2009) se mostró que los microorganismos nativos podían
degradar los HAPs en un suelo contaminado en un periodo
largo de tiempo, pero la adición de consorcios microbianos

(cinco hongos: Phanerochaete chrysosporium, Cunninghamella

sp., Alternaria alternate, Penicillium chrysogenum, y
Aspergillus niger, y tres bacterias: Bacillus sp., Zoogloea sp., y
Flavobacterium)

•mejoró significativamente la tasa de degradación (41,3%).

 Bioaumento

La biomasa que va a ser utilizada como inóculo para el

bioaumento se produce en biorreactores, de modo que la
transferencia de estos cultivos al emplazamiento a menudo
resulta crítica.
 Bioaumento

En casos reales, la población introducida comienza a disminuir

poco después de su adición debido a varios tipos de estrés
abiótico y biótico.
Factores que influyen en los procesos de bioaumento (Tyagi et
al., 2011).
 Bioaumento

A menudo se utilizan materiales de soporte, como

subproductos agrícolas, para transferir efectivamente el
consorcio bacteriano al emplazamiento.
 Bioaumento

Ello proporciona un soporte físico para la biomasa microbiana,

así como un mejor acceso a los nutrientes, humedad y la
aireación, lo que favorece a la tasa de supervivencia de los
microorganismos (Mishra et al. 2001).

La encapsulación de células microbianas o su inmovilización

puede ofrecer una mejor tasa de supervivencia de las células
bajo condiciones de estrés ambiental, por lo general
permitiendo una biodegradación más rápida y eficiente en
comparación con las células libres vivas (Moslemy et al 2002).
 Bioestimulación

La bioestimulación consiste en incrementar la actividad de los

microorganismos nativos de un ambiente natural por medio
de:

• la adición de nutrientes
• humedad
• aire
• u otros agentes

destinados a aumentar la velocidad de biodegradación de los

contaminantes en un emplazamiento contaminado (Swannell
et al. 1996).
 Bioestimulación

Identificar las condiciones limitantes para que los

microorganismos nativos puedan llevar a cabo una
remediación es un paso crítico.

Los parámetros que limitan la actividad microbiana

generalmente son nutrientes inorgánicos y orgánicos.
 Bioestimulación

Los nutrientes más comunes son:

•agua,
•oxígeno
•nitrógeno
•y fósforo

En el subsuelo terrestre, el agua puede ser limitante, pero

generalmente no lo es.
 Bioestimulación

El contaminante puede ser utilizado como una fuente de

carbono y energía por los microorganismos, y si su
concentración excede en gran medida la entrada de oxígeno
necesario por los microorganismos, este se puede convertir en
limitante.
 Bioestimulación

La introducción de aire, oxígeno o peróxido de hidrógeno a

través de galerías de infiltración, arado, burbujeo o volteo ha
demostrado ser extremadamente eficaz la en biorremediación
de contaminantes derivados del petróleo y una variedad de
otros compuestos orgánicos que no son particularmente
recalcitrantes (Thomas y Ward, 1992).
 Bioestimulación

Está claramente demostrado que la degradación de

hidrocarburos por la población microbiana nativa se puede
producir favoreciendo la presencia de nutrientes requeridos
en un emplazamiento contaminado (Delille et al. 2004).
 Bioestimulación

En un ambiente que ha sido anaerobio por largos periodos de

tiempo, el contaminante tiene un alto contenido de carbono,
y es probable que la desnitrificación haya reducido el
contenido total de nitrógeno del medio ambiente haciendo de
este un nutriente limitante.
 Bioestimulación

El nitrógeno se ha introducido con éxito en el subsuelo

terrestre para bioestimulación usando amonio, nitrato, urea, y
óxido nitroso (USEPA, 1989).
 Bioestimulación

Naturalmente el fósforo es muy bajo en la mayoría de

entornos, como el subsuelo terrestre; incluso si hay
concentraciones altas de fósforo este podría estar en una
forma mineral no disponible biológicamente, por ejemplo, la
apatita.
 Bioestimulación

En ambientes contaminados se han utilizado con éxito varias

formas inorgánicas y orgánicas de fosfato como biostimulantes
(USEPA, 1989).