ESCUELA DE CIENCIAS AGRICOLAS Y AMBIENTALES

Maestría en Agronomía con Mención en Sanidad Vegetal y Agroecología

Mecanismos de comportamiento de plagas

TAREAS INDIVIDUALES

Nombre: Jorge Luis Malla Granda

Fecha: 10/06/2022

Effects of Bactericera cockerelli Herbivory on Volatile Emissions of Three

Varieties of Solanum lycopersicum

1. ¿Cuál era el problema que los autores querían responder?

Encontrar los compuestos volátiles para la repelencia o atracción de la plaga psílido del
tomate/papa, Bactericera cockerelli Sulc (Hemiptera: Triozidae), una plaga importante
en los cultivos de solanáceas.

2. ¿Cuál o cuáles son los objetivos del trabajo?

En este estudio, el objetivo fue evaluar perfiles de compuestos orgánicos volátiles
(VOC) emitidos por tres variedades de plantas de tomate ( Solanum lycopersicum cv.
Floradade, S. lycopersicum cv. Micro-Tom y S. lycopersicum cv. wild), antes y después
de la alimentación de ninfas de B. cockerelli . El sistema HS-SPME-GCMS detectó
cambios en las emisiones de COV durante las interacciones tomate- B. cockerelli.

3. ¿Cuál es la metodología que los autores usaron para realizar el

experimento?

 Crecimiento de la planta

La semillas de tomate (Solanum lycopersicum) de tres variedades se germinaron en

turba hasta que obtuvieron dos hojas. Las plántulas de plantas domesticadas (S.
lycopersicum cv. Floradade, Crown Seeds, Homestead, FL, EE. UU.), Micro-Tom (S.
lycopersicum cv. Micro-Tom) y de tipo salvaje (S. lycopersicum CV. salvaje) se
trasplantaron en macetas de 1,5 L que contenían turba: perlita (70:30 v/v). Las plantas
se regaron cada 3 días y se fertilizaron una vez por semana con solución nutritiva de
Steiner (25%). Las plantas de tomate se mantuvieron en condiciones de invernadero a
28 ± 2 °C, HR = 45 %, y se dejaron crecer hasta que alcanzaron los 20 cm de altura o
tuvieron de cuatro a cinco hojas completamente extendidas para los bioensayos. Las
semillas de Micro-Tom empleadas fueron gentilmente proporcionadas por el Dr. John
Délano-Frier (CINVESTAV-Unidad Irapuato), mientras que las semillas de tipo salvaje
fueron recolectadas en el verano de 2015 en Irapuato (20°34′34.3″ N 101°23′24.3″ W),
Guanajuato, México. El tomate de tipo silvestre se caracterizó taxonómicamente como
miembro de Solanum lycopersicum y fue depositado con número de catálogo
XAL0148356 en Herbario XAL por Carlos Durán Espinoza del Instituto de Ecología
AC en Veracruz, México.

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  Cría de insectos

Los psílidos de la patata/tomate (Bactericera cockerelli Sulc) se criaron en plantas de

tomate en condiciones de invernadero. B. cockerelli (CaLso positivo) se mantuvo en
jaulas de 50 × 50 × 50 cm con las mismas condiciones descritas anteriormente. Los
psílidos fueron donados por el Dr. Alberto Flores del Departamento de Parasitología de
la Universidad Autónoma Agraria Antonio Narro (UAAAN), en Saltillo, México.

 Recolección de espacio de cabeza y análisis de volátiles de plantas

Se seleccionaron tres variedades de plantas de tomate (2 semanas después del

trasplante) para recolectar las emisiones volátiles (plantas sanas). En primer lugar, para
obtener los perfiles de volátiles, empleamos el sistema de espectrometría de masas-
cromatografía de gases-microextracción en fase sólida y espacio de cabeza (HS-SPME-
GCMS). Las plantas individuales se colocaron en un desecador de polipropileno
previamente adaptado con trampa de carbón activado y se pasó un flujo de aire (6
L/min) sobre la planta durante 5 min (Floradade); Se utilizaron bolsas de polietileno
(Sunbag, MERCK KGaA, Darmstadt, Alemania) para Micro-Tom y wild. Para obtener
los perfiles de VOC, se realizaron tres variedades con tres repeticiones biológicas (n =
3) para un solo bioensayo en plantas de tomate sanas (libres de psílido).
Para evaluar los COV liberados en las tres variedades durante la alimentación de las
ninfas de B. cockerelli, se realizaron dos bioensayos de forma independiente con tres
réplicas biológicas para todas las variedades. Con un pincel pequeño, 25 ninfas de B.
cockerelli (cuarta y quinta etapas) se colocaron suavemente en cada planta y se les
permitió 2 h alimentándose de las hojas de tomate (las ninfas se dejaron en las plantas).
Después de la alimentación, se recolectaron plantas individuales, usando bolsas o un
desecador, para evaluar el espacio de cabeza de cada tratamiento por SPME. Para
SPME, se utilizó fibra gris (50/30 µm, DVB/CAR/PDMS, MERCK KGaA, Darmstadt,
Alemania) en todas las evaluaciones. La fibra se expuso durante 2,5 h. Las plantas sanas
(sin ninfas) se expusieron al mismo tiempo para SMPE. Los bioensayos se realizaron a
28 ± 2 °C en condiciones de invernadero.
Todas las fibras se inyectaron y desorbieron en un cromatógrafo de gases (GC 7890A,
Agilent Technologies, Wilmington, DE, EE. UU.) Acoplado a un detector selectivo de
masas (Agilent Technologies MSD 5975 C). Todos los análisis se realizaron en
condiciones de funcionamiento: temperatura inicial del horno de 60 °C durante 1 min,
aumentando 8 °C/min hasta 280 °C durante 1 min. La temperatura del inyector era de
230 °C. Los COV se analizaron empleando una columna capilar Agilent Technologies
HP-5MS (30 m × 0,25 mm × 0,25 µm). Después de 15 minutos, la fibra se retiró del
inyector y se almacenó hasta su uso. Todos los compuestos fueron identificados por una
biblioteca NIST92 y Wiley, según el porcentaje de calidad presentado (> 90%); los
tiempos de retención se compararon con la biblioteca, y también se determinaron los
índices de Kovats para compuestos individuales.

 Análisis de los datos

Todos los COV recolectados del espacio de cabeza de las tres variedades de tomate
(sano e infestado) se graficaron utilizando GraphPad Prism versión 5 para Windows,
GraphPad Software, La Jolla, California, EE. UU. Antes del análisis, los datos sin
procesar de las áreas de los picos se transformaron logarítmicamente y se probaron

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usando ANOVA univariante, la prueba no paramétrica de Kruskal-Wallis. Los análisis
estadísticos se realizaron utilizando R Statistical Software (R Core Team 2004).

4. ¿Considera usted que la metodología usada fue suficiente para alcanzar los
objetivos propuestos?

Considero que el objetivo a evaluar se cumplió en su totalidad.

5. ¿Cuál o cuáles son los resultados del trabajo?

 Perfil de Compuestos Orgánicos Volátiles en Plantas Sanas

Se detectaron cualitativamente los perfiles de VOC recolectados en tres variedades

diferentes de tomate (plantas sanas) y fue posible identificar 14 VOC para variedad
silvestre, 17 VOC en Floradade y 4 VOC presentados en Micro-Tom. Entre las
variedades Floradade y silvestres, se compartieron 11 compuestos en las mezclas de
COV: 1, 6, 8, 10, 13, 14, 16, 17, 18 y 19. Micro-Tom presentó una baja emisión de
COV en plantas sanas; solo se detectaron cuatro compuestos: 1, 4, 5 y 6.
En Floradade, solo se detectaron seis compuestos abundantes (área del pico > 10 8 ) en
plantas sanas: o-cimeno, (+)-4-careno, α-tujeno, (+)-2-careno, ɣ-terpineno y
cariofileno . Los parientes silvestres mostraron tres compuestos abundantes (área del
pico > 10 8): (+)-4-careno, (+)-2-careno y β-felandreno. En Micro-Tom, solo se
detectaron dos compuestos abundantes (área del pico > 10 7): α-pineno y l -β-pineno
(menor que en Floradade y silvestre).
Para comparar los compuestos compartidos en las tres variedades de tomate (sano), la
muestra los 15 COV y sus cambios de nivel entre variedades. Para plantas silvestres y
Floradade, los compuestos 6 y 10 fueron los principales compuestos emitidos en plantas
libres de psílidos, aunque no se detectaron diferencias significativas en ambos
compuestos. Sin embargo, los compuestos 18 y 20 fueron estadísticamente diferentes en
emisiones entre plantas silvestres y Floradade.
 Compuestos orgánicos volátiles liberados en plantas infestadas con
Bactericera cockerelli
Cuando las tres variedades de tomate fueron infestadas con ninfas de B. cockerelli, los
cambios en los perfiles de VOC emitidos entre variedades fueron evidentes. En
Floradade, las hojas infestadas liberaron una mezcla de volátiles que incluía los
siguientes: 2, 6, 7, 8, 10, 11, 14, 18, 20 y 22. Para el tipo salvaje, se detectaron los
siguientes volátiles en las hojas infestadas: 1, 3, 6, 8, 9, 10, 11, 12, 14, 18 y 20. Micro-
Tom mostró tres volátiles emitidos en respuesta a la alimentación de las ninfas: 1, 5 y
18.
En la interacción Floradade- B. cockerelli , los compuestos (+)-4-careno, α-tujeno y (+)-
sabineno (área máxima > 10 8 ) fueron los VOC más abundantes emitidos en respuesta a
la alimentación de las ninfas. Mientras tanto, en la interacción salvaje- B. cockerelli, los
compuestos (+)-4-careno y β-felandreno (área máxima > 10 8 ) fueron las emisiones más
abundantes. Por último, los compuestos α-pineno y β-pineno (área del pico > 10 7)

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fueron los más abundantes en Micro-Tom infestados después de 2 h de herbivoría en
hojas de tomate.
Aquellas plantas que fueron infestadas con psílidos mostraron un perfil diferencial para
los ocho COV identificados, en el que los compuestos (+)-4-careno, β-felandreno y (+)-
sabineno (área de pico > 10 8) fueron los más abundantes. Sin embargo, solo el
compuesto α-pineno fue estadísticamente diferente entre plantas silvestres y Micro-Tom
(P = 0.000154).
Las tres variedades de plantas de tomate emitieron cambios cualitativos y cuantitativos
en las emisiones de COV. Por ejemplo, las plantas de Floradade presentaron ocho
compuestos y la mayoría de estos compuestos se redujeron en las plantas infestadas;
además, siete COV fueron exclusivos de plantas sanas. En plantas silvestres, cinco
compuestos fueron exclusivos de plantas sanas y dos compuestos se encontraron
exclusivos de plantas infestadas. Las plantas Micro-Tom presentaron emisiones muy
bajas en todos los ensayos realizados aquí.

6. ¿Considera usted que los resultados tendrían aplicaciones prácticas para el

manejo de insectos-plagas?

No considero realizar este ensayo porque no disponemos de equipos para medir los
COV que emiten las plantas para repeler o atraer este tipo de plagas como es B.
cockerelli.

7. ¿Cómo usted ejecutaría un experimento para probar la aplicación de estos

resultados en campo?

Utilizar cada 15 días trampas cromáticas de color amarillo para la captura de plagas en
este caso B. cockerelli, y añadir dispensadores a cada una de las trampas un volátil
anisaldehído (volátil floral) y utilizar viales para poder liberar el compuesto volátil que
me va servir para la atracción de enemigos naturales e insectos plaga. Cuando se cambia
la trampa se la lleva a laboratorio y se realiza el conteo de cuantos psílidos se logra
capturar, con este resultado disminuyo las plagas en estado larval y adulto que afecta
gravemente al umbral económico de los cultivos de papa y tomate.