IDENTIFICACIÓN

HUMANA FORENSE:
ESTUDIO DENTAL
BIOLOGÍA MOLECULAR Y GENÉTICA

24 de noviembre 2022

Integrantes:
Raimundo Efrain Castellanos Medina
Eduardo Flores Gutiérrez
Pedro Salvador Garcia Estrada

UNIVERSIDAD DE
GUADALAJARA
 INTRODUCCION
Cuando un cuerpo se descompone, los tejidos duros, como los dientes,
pueden proporcionar la única fuente de ADN para la identificación
humana.

 INTRODUCCION
-La identificación de una persona fallecida es una

parte esencial de la investigación médico-legal de la

muerte , para brindar un cierre a los familiares

sobrevivientes .

CÀMARA PULPAR

FUENTE VALIOSA

-LOS DIENTES SON UNA

DE ADN, DEBIDO A QUE SU REVESTIMIENTO

DE ESMALTE Y SU MATRIZ ÓSEA

PROPORCIONAN UNA BARRERA Y

PROMUEVEN LA CONSERVACIÓN DEL ADN

 IDENTIFICACION HUMANA

El estandar de oro es el perfilado de ADN para la

informacion humana, para el caso de obtener
ADN a partir de los dientes y se ha evaluado el
método de fenol-cloroformo en dientes
humanos.
METODOLOGÍA
METODOLOGÍA
MUESTRAS
1. Se utilizaron 52 muestras de dientes de todos los
tipos de dientes (incisivos, caninos, premolares y
molares).
2. Procedían de 3 personas fallecidas donadas
para la investigación.
3. Se pidio autorización por el comité de ética de
Investigación Humana de la Facultad de Ciencias
de la Salud de la Universidad de Ciudad del Cabo.
METODOLOGÍA
MUESTRAS

Molino de bolas TissueLyser II

 METODOLOGÍA
EXTRACCIÓN DE ADN
1. El ADN se extrajo de 0,1 g de polvo utilizando el
QIAamp DNA Investigator Kit de acuerdo con el
protocolo del fabricante, excepto con una
incubación prolongada de 20 horas a 56°C.
2. El ADN también se extrajo del polvo dental
utilizando el método modificado de fenol
cloroformo.
3. Después de la optimización, las alteraciones del
protocolo incluyeron la utilización de fenol a pH
8,0 y la incubación de muestras a 56°C durante
la noche en un horno con agitación manual
cada 20 minutos durante la primera hora. QIAamp DNA Investigator Kit
4. Además, el material de partida se aumentó a
0,5 g, cuando estaba disponible. Se utilizó un
volumen de elución de 50 µl para ambos
métodos.
5. Se incluyeron controles positivos y negativos a lo
largo del flujo de trabajo.
 METODOLOGÍA
QIAAMP DNA INVESTIGATOR KIT
 METODOLOGÍA
EVALUACIÓN DE LA RECUPERACIÓN DE ADN
1. La cantidad y la calidad del ADN se evaluaron utilizando el kit de
cuantificación de ADN Quantifiler Trio. kit de cuantificación
2. El ensayo qPCR amplificó un objetivo autosómico pequeño (80 pb) y grande de ADN Quantifiler
(214 pb), así como un marcador del cromosoma Y. Trio
3. La concentración media de ADN se calculó utilizando las concentraciones
de los objetivos pequeños y grandes.
4. La proporción de la concentración se utilizó para calcular el índice de
degradación (DI).
5. Los valores de DI se dividieron en cuatro categorías: 0-1,5 (no degradado),
1,5-4 (ligeramente degradado), 4 –10 (degradado), >10 (gravemente
degradado).
6. Cuando el ADN estaba demasiado degradado para que lo amplificara el
marcador grande, no se podía calcular la DI, y esto se denotaba como
"fallido".
 METODOLOGÍA
PERFILES FORENSES DE ADN
1. Se realizó un perfil de ADN para evaluar si el ADN recuperado era
informativo para la identificación humana forense.
2. Se utilizó el sistema PowerPlex ESI 16, en el que se agregaron 0,5 ng
de ADN. En los casos en que el rendimiento de ADN fue demasiado
bajo, se añadió el volumen máximo (17,5 µl) de ADN.
3. El ciclado térmico se realizó en un termociclador T100, luego se
realizó la electroforesis capilar en Applied Biosystems Genetic
Analyzer 3130xl, utilizando polímero POP-7 con una matriz de 50 cm
y un voltaje de inyección de 3 kV. PowerPlex ESI 16
4. Los resultados se analizaron utilizando el software GeneMapper v4.1.
El éxito del perfilado de ADN se clasificó según el número de
marcadores que se amplificaron con éxito: 0–3 (fallo), 3,5–11,5
(parcial), 12–15 (completo).
5. Se consideró que un perfil de ADN completo se podía utilizar para la
identificación humana forense.
 METODOLOGÍA
POWERPLEX ESX 16 Y ESI 16 RESULTADOS RÁPIDOS DE MUESTRAS
DEGRADADAS
1. Los sistemas rápidos PowerPlex ESX 16 y ESI 16 cumplen con las recomendaciones de ENFSI
para compartir perfiles de ADN en toda Europa y permiten la coamplificación y detección de
dieciséis loci.
2. Estos kits se pueden utilizar tanto para muestras de casos como de bases de datos, lo que
simplifica los flujos de trabajo. La tecnología de ciclos rápidos permite realizar la
amplificación en menos de 50 minutos. Además, estos kits tienen una tolerancia superior a los
inhibidores comunes y una sensibilidad superior para obtener perfiles completos a partir de
ADN de bajo nivel y son lo suficientemente robustos para genotipar muestras de ADN
degradado mediante el uso de loci miniSTR.
Perfiles genéticos PowerPlex 1 ESI 16 System
(Promega) de dos hermanos que comparten 10
de 11 loci usando el kit AmpFLSTR SGM Plus TM
(Applied Biosystems). Las diferencias se
muestran en círculos rojos.
 METODOLOGÍA
MÉTODO MODIFICADO DE FENOL CLOROFORMO

En este metodo se aprovecha que el fenol es inmiscible en el agua para

separar los acidos nucleicos y las proteinas este metodo brinda un alto
rendimiento pero es frecuente que restos de solventes orgánicos
contaminen la muestra.
 METODOLOGÍA
MÉTODO MODIFICADO DE FENOL CLOROFORMO

En este metodo se aprovecha que el fenol es inmiscible en el agua para

separar los acidos nucleicos y las proteinas este metodo brinda un alto
rendimiento pero es frecuente que restos de solventes orgánicos
contaminen la muestra.

MODIFICACIONES
Fenol a pH 8,0
◦
Incubación de las muestras a 56 C ( durante la noche en un horno con
agitación manual cada 20 min durante la primera hora)
RESULTADOS Y
CONCLUSIÓN
RESULTADOS
RESULTADOS
RESULTADOS
RESULTADOS
 CONCLUSION
El éxito del perfil de ADN no fue significativamente diferente entre los
dos procesos

Las medidas cuantitativas entre los tipos de dientes no fueron

significativas

Deben evitarse los dientes con empastes

La presencia de periodontitis mejoró significativamente la

concentración de ADN
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