SORBENTES UTILIZADOS EN SPE

APLICACIONES
NATURALEZA DE LOS SORBENTES

OXIDOS INORGÁNICOS

Óxidos inorgánicos más importantes: sílica-gel, alúmina, florisil

Sílica-gel (gel de sílice)
Área superficial: 300 – 800 m2/g
 Tamaño de poro: 4 – 10 nm
 pH aparente = 5.5 – 7.5
pH aparente: pH de una suspensión de sorbente en agua al 5% en peso

Alúmina (óxido de aluminio) Florisil (silicato de magnesio)

Área superficial:  150 m2/g Área superficial:  250 - 300 m2/g

 Tamaño de poro: 6 nm  pH aparente = 8.5

 pH aparente:
neutra: pH = 7.5  0.5
débilmente ácida: pH = 6.0  0.5
ácida: pH = 4.5  0.5
básica: pH = 9.5  0.5
Propiedades de retención de Gran superficie
los óxidos inorgánicos
Elevada actividad

CONTROL

Adición de agua al sorbente seco Secado de las muestras con Na2SO4 anhidro
(antes de usarlo) (antes de pasarlas por el sorbente)

Inconvenientes:
 Adsorción irreversible Bajas recuperaciones
 Descomposición catalítica
 Ampliamente utilizados para aislar contaminantes en
SORBENTES DE BAJA ESPECIFICIDAD
disoluciones acuosas
 Fases enlazadas a sílice
LA PARTÍCULA DE SÍLICA
 Sorbentes poliméricos

El agua desactiva la sílica impidiendo la retención de la mayoría de las sustancias

No es posible usar la sílica directamente con disolventes acuosos

Es necesario modificarla haciéndola hidrófoba para poder emplearla vs dichos disolventes

FASES ENLAZADAS

Sorbente típico para SPE Partícula de sílica (sílica-gel) sobre la cual

se enlaza químicamente una fase líquida
(cadenas hidrocarbonadas)

pH > 7.5
Solubilidad de la sílica aumenta
pH < 2.0

Los sorbentes basados en sílica tienen un rango de pH de trabajo limitado (2.0 – 7.5)
Fases enlazadas tipo siloxano Si-O-Si-C (más comunes)

Preparación Organoclorosilano monofuncional

Reacción anhidra de los silanoles (silica-gel) +

Organoalkoxysilano monofuncional

R (2,4,8,18) C2,C4,C8,C18

Capacidad sorbente
C2  5%
…
…
C18  19%
 Superficie recubierta de cadenas de dimetiloctilsilil (como
las fibras de una brocha)

DERIVATIZACIÓN MONOFUNCIONAL Sólo un enlace Si-O-Si entre la superficie de la

sílica y cada fase enlazada alkyl

Las fases enlazadas de tipo monofuncional fueron el sorbente de fase reversa más popular
(4, 8, 18 at. de C)
En la actualidad se han desarrollado otras fases enlazadas (Tabla 1.1)

Más versátil (útil para muestras de

C18 un amplio rango de polaridad)
El enlace Si-O-Si-C puede sufrir hidrólisis por ácidos o bases

DERIVATIZACIÓN TRIFUNCIONAL


Derivatización con un tricoloralkylsilano

El organosilano se une a la sílica por más de un punto

Fase más estable frente a los ácidos

Importante para aislar

compuestos ácidos

pH de trabajo (ácidos orgánicos = pKa -2)

pKa ácidos carboxílicos  4
pH óptimo = 2
Fase recomendada
Grupos silanoles libres (sitios de adsorción fuertes)

Interacciones no deseadas con los analitos

Endcapping (reacción de la sílica derivatizada con un trimetilclorosilano)

Bloqueo de los grupos silanoles

Superficie de la sílica-gel más hidrofóbica

Información suministrada por los fabricantes
Ventajas de las fases enlazadas a sílica

Son estables frente a disolventes orgánicos

Son estables a pH ácido (los sorbentes trifuncionales hasta pH = 2.0)

Son materiales rígidos con buenas características de flujo

Son fácilmente mojados por disolventes polares y no polares

Son razonablemente baratos

Se comercializan en jeringas y cartuchos con un amplio rango de masa de sorbente (50 mg – 10 g)

El grupo R puede contener un amplio rango de grupos funcionales

Inconvenientes de las fases enlazadas a sílica

Las moléculas altamente polares de pequeño tamaño son poco retenidas
En algunos casos: elevada concentración de grupos silanoles ionizados  retienen
solutos, difícilmente recuperables
Inestables a 2 > pH > 8
 SORBENTES POLIMÉRICOS Basados en el uso de polímeros orgánicos

Carbón activado
Más utilizados
Styreno-divynilbenceno (SDB)

Características

Grandes áreas superficiales

Polímeros: 600 -1200 m2/g

Fases enlazadas: 200 – 600 m2/g

Mayor % de C

Superficie más hidrofóbica

Mayor capacidad sorbente que las fases enlazadas

 Sorbentes de C activado (C grafitizado)
Útiles en el enriquecimiento de solutos de diferente naturaleza (neutros, ácidos y básicos)
Características
Altas áreas superficiales
 Efecto hidrofóbico
 Potencial para interacciones específicas con el analito

Inconveniente: sorción irreversible

Sorbentes de stireno-divinylbenceno

CH CH2 CH CH2

CH CH2 CH CH2 CH

CH CH2
Estireno Divinilbenceno

CH2 CH CH CH2 CH2 CH2

CH2 CH CH CH2 CH2 CH

Copolímero de Estireno-Divinilbenceno con

enlaces cruzados
 Anillos aromáticos en la red Interacciones entre los e- del sorbente y los e-  del soluto

Mayor poder de retención que las fases enlazadas

Dopados con grupos hidrofílicos Mejora el movimiento del agua dentro del sorbente y
(ácido sulfónico, N-vinylpirrolidona) la transferencia de masa

Mayor eficacia

Otras ventajas vs fases enlazadas

Más capacidad para compuestos polares (30-40 veces dependiendo del compuesto)

Análisis de trazas

Mayor tolerancia al pH: Estables entre pH 2 y 12

SORBENTES ESPECIFICOS

STIRENO-DIVYNILBENCENO FUNCIONALIZADO

SDB (styrene-divynilbenzene) (International Sorbent Technology)

SDB-1 (Isolute styrene-divynilbenzene) (J.T. Baker)
Oasis HLB (Poly(divynilbenzene-co-N-vinylpirrolidone) (Waters)

Contienen trazas de carácter hidrofílico que mejoran su mojado, y por tanto:

Transferencia de masa mejorada
 Elevada capacidad para retener compuestos orgánicos polares

SDB y SDB-1
- Áreas superficiales > 1000 m2/g
- Ligera sulfonación  incrementa su capacidad de mojado y proporciona buena transferencia de
masa
- Elevado % de C (90% vs 18 % C18)  elevada capacidad para retener analitos polares
- Interacciones - más moderadas que el carbono grafitizado  mejora las recuperaciones durante la
elución

Razones que los han hecho muy populares para la extracción de compuestos polares en aguas
Oasis HLB (Styreno-divynilbenceno-co-N-vinylpirrolidona)
- Único polímero que tiene la propiedad de acondicionarse sólo con agua
- Retiene eficazmente los compuestos polares
INMUNOSORBENTES

Muy utilizados en medicina, biología y ciencia de los alimentos

Aplicaciones relativamente recientes en análisis medioambiental debido a:
- Dificultad para obtener anticuerpos selectivos frente a pequeñas moléculas

Interés ELEVADA SELECTIVIDAD Interacciones antígeno-anticuerpo

Extracción Concentración Clean-up

Matrices complejas
Grandes cantidades de muestra

Único analito
Diseño
Familia de analitos

Algunos están comercializados (micotoxinas, PAHs, herbicidas fenilureas,…)

Preparación:
Enlace covalente de un anticuerpo a sílica u otro sorbente adecuado

Sorción:
El analito de interés encaja en el sitio de enlace como una llave en la cerradura

Elución:
-Ácido o tampón
-Agentes enlazantes competitivos
-Variaciones de temperatura
-Mezclas acuosas de disolventes orgánicos

Desnaturalización del anticuerpo

Formato:
Cartuchos desechables
Multiresidue method for determination of 35 pesticides in virgin olive oil by using Liquid-Liquid extraction
techniques coupled with Solid Phase Extraction clean up and gas chromatography with NPD and ECD
E.G. Amvrazi; T.A. Albanis
J. Agric. Food Chem. 54 (2006) 9642-9651

Muestras: 21 muestras de aceite de oliva comercial + 2 muestras de aceite de almazara

Analitos: 35 plaguicidas (30 insecticidas + 5 herbicidas)

Procedimientos LLE (n=9)

LLE-1
10 ml Acetonitrilo

Pesada para determinar el extracto con

5 ± 0.001 g aceite de oliva + 5 ml n-hexano
2 veces

LLE-2

menor contenido en aceite

LLE-1
A sequedad en rotavapor
10 ml AcN saturado con n-hexano
5 ± 0.001 g aceite de oliva +
2 veces
5 ml hexano saturado con AcN

LLE-3
10 ml Acetonitrilo
5 ± 0.001 g aceite de oliva
2 veces
 Procedimientos clean-up

Cartuchos N-Alumina, Florisil, C18 y Envicarb

Acondicionamiento 6 mL AcN

Carga de la muestra 6 mL de LLE-1

Plaguicidas retenidos en el sorbente

Elución 12 mL AcN

Extractos
A sequedad en
rotavapor

Pesada

Redisolución en 0.5 mL de acetona + 200 g/L de IS (bromophos ethyl)

Análisis en GC-NPD

Mejores resultados
con Envicarb*
 Procedimientos clean-up

Cartuchos Diol, CN, Ph, NH2

6 mL MeOH
Acondicionamiento
6 mL n-hexano

Carga de la muestra Extracto de Envicarb* previamente llevado a sequedad y

redisuelto en 2 mL de n-hexano

Plaguicidas retenidos en el sorbente

Elución 12 mL n-hexano

A sequedad en
rotavapor

Redisolución en 1 mL de n-hexano + 100 g/L de IS (Endrin)

Análisis en GC-ECD

Mejores resultados
con NH2
Simultaneous determination of selected trace contaminants in drinking water using solid-phase extraction-
high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry
H. Zang, D. West, H. Shi, Y. Ma, C. Adams, T. Eichhotz
Water Air Soil Pollut 28 (2919) 1-10

Analitos
2 fármacos (fluoxetina, gemfibrozil)
3 plaguicidas (3-hidroxicarbofuano, azinfos-metil, clorpirifos)
2 hormonas (testosterona, progesterona)

Fluoxetina: ISRS
Gemfibrozil: regulador lipídico
3-hidroxicarbofuano: metabolito del carbofurano (carbamato)
Azinfos-metil: insecticida organofosforado (inhibidor de la colinesterasa)
Clorpirifos: Insecticida organofosforado (inhibidor de la colinesterasa)
Terapia de sustitución hormonal
Testosterona Disruptores
Anticonceptivos
Progesterona Paliativos en el tratamiento del endocrinos
cáncer
Muestras: 18 muestras de aguas superficiales y subterráneas (verano e invierno)

Toma y conservación de las muestras

Standard Method 540 (US EPA 2013)
500 mL de muestra en botellas ámbar con tapón de teflón (previamente lavadas)
0.1 g/L de ácido ascórbico y 2 g/L de 2-cloroacetamida (antimicrobianos)
Almacenadas en hielo

Pre-tratamiento de la muestra
Filtrar 500 mL de muestra a vacío a través de filtros de nylon de 0.45 µm
Ajustar a pH=7.00 ± 0.05
Almacenar a 4 C en la oscuridad no más de 48 horas, antes del análisis

Extracción en fase sólida (SPE)

6 mL de metanol 12 mL de H2O ultrapura 500 mL de muestra 6 mL de H2O ultrapura 5 min aire
200 mg Oasis HLB
Preacondicionamiento del sorbente Flujo=10-15 mL/min Lavado Secado

Disolver con MeOH Evaporar con N2 6 mL de MeOH

1 mL
Elución