Unidad# 4 Espectroscopia Del Ultravioleta e Infrarrojo

ANALISIS QUIMICO 2 INGENIERÍA BIOTECNOLOGICA Ing.
Armando Salinas Sánchez 50
UNIDAD # 4
ESPECTROFOTOMETRÍA EN LA REGIÓN
ULTRAVIOLETA
En el estudio de la absorción de la absorción de radiación visible puede aplicarse por igual a los
métodos que emplean radiación ultravioleta. Los dos métodos se diferencian unos de otro en función
del tipo de radiación electromagnética, en que la cantidad de energía que proporciona cada fotón
para lograr el estado de excitación en el átomo, ion o molécula absorbente es mayor en la región del
ultravioleta que en la región espectral del visible.
Muchas sustancias químicas que son incoloras experimentales fácilmente excitaciones electrónicas
por absorción de radiación ultravioleta, sobre las transiciones se superponen transiciones que
involucran niveles vibracionales y rotacionales muy próximos, y muchas de las excitaciones totales en
líquidos y sólidos están influidas por la presencia de moléculas vecinas.
Los espectros de absorción UV son similares a los espectros visibles, y consisten en general sólo de
uno o más picos de absorción, las muestras que se encuentran en la fase gaseosa y algunos líquidos,
como son el benceno, sus espectros presentan mayor número de picos o máximos de absorción.
FUNDAMENTO
El intervalo de longitud de onda de la radiación ultravioleta se extiende desde 200 - 400 nm (límite
violeta de la luz visible). Muchos iones y moléculas que tienen dobles ligaduras y que pueden
representarse como híbridos de resonancia de distintas estructuras, absorben radiaciones
ultravioletas en la región de 200 a 400 nm. La aplicación más importante de la absorción en la región
ultravioleta reside en la determinación cuantitativa de compuestos orgánicos que contienen grupos
funcionales. Las excitaciones electrónicas están en general asociadas a ciertos tipos de enlaces
dentro de la molécula absorbente.
Además, varias especies inorgánicas, particularmente entre los metales de las tierras raras, estos
absorben radiación ultravioleta, siendo, así pues, susceptibles también al análisis por este método.
Entre las sustancias inorgánicas que absorben energía radiante ultravioleta se encuentran los haluros
complejos de muchos iones metálicos, por ejemplo, telurios puede ser analizado a longitudes de onda
de 335 nm, cuando se encuentra en forma de ion complejoTeI6 - .
La radiación UV es la banda de radiación óptica que presenta las longitudes de onda más corta, o
bien las frecuencias más altas (superiores a las del espectro visible). Desde el punto de vista
energético, es la zona del espectro con energía inmediatamente superior a la del espectro visible.
Más allá del UV están los rayos X, de mayor frecuencia y energía.
El término ultravioleta deriva etimológicamente de MAS ALLÁ DEL VIOLETA, razón por la que esta
radiación no es visible para el ojo humano
Subtipos
Según su longitud de onda, se distinguen varios subtipos de rayos ultravioleta:
Nombre Abreviación Longitud de onda (nm) Energía por fotón (eV)
Ultravioleta cercano NUV 400 – 200 3,10 – 6,30
Onda larga UVA 400 – 320 6,30 – 3,87

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Onda media UVB 320 – 280 3,87 – 4,43
Onda corta UVC 283 - 200 4,43 – 6,20
Ultravioleta lejano FUV, VUV 200 – 10 6,20 - 124
En forma general la radiación UV se clasifica en tres bandas de longitudes de onda:
 UV – A (ONDA LARGA): de 320 nm - 380 nm. Es la más próxima al espectro

visible, el espectro solar contiene gran cantidad de estas radiaciones, son inofensivas para la
biomasa.
 UV – B (ONDA MEDIA): de 280 nm – 320 nm, también abundante en la radiación

solar, la mayor parte filtrada por el aire. Activa la producción de melanina en la piel y es
beneficiosa para la salud en dosis moderadas.
 UV – C (ONDA CORTA): de 100 nm – 280 nm, peligrosas para ojos y piel de

animales y seres humanos.
Desde otro punto de vista se señala que la región UV abarca desde 100 a 350 nm y se divide en dos
regiones diferentes, la región de " vacío" (100 a 200 nm) y la región de "cuarzo" (200 a 380 nm).
Esta subdivisión es necesaria por razones experimentales. Por debajo de los 200 nm, el cuarzo y el
aire (particularmente el oxígeno y el dióxido de carbono) absorben energía muy intensamente y por
eso debe colocarse en un medio exento de tales sustancias (vacío).
La región de cuarzo recibe este nombre porque las cubetas que contienen la muestra están hechas
de material de cuarzo, debido a que el vidrio absorbe intensamente por debajo de 300 nm.
USOS
La luz ultravioleta tiene diversas aplicaciones:
 Una de las aplicaciones de los rayos ultravioleta es como forma de esterilización, junto con
los rayos infrarrojos (pueden eliminar toda clase de bacterias y virus sin dejar residuos, a
diferencia de los productos químicos).
 Está en estudio la esterilización UV de la leche como alternativa a la pasteurización.
 En análisis cuantitativo de sustancias
SUSTANCIAS QUE ABSORBEN EN LA REGIÓN ULTRAVIOLETA

Todos los compuestos orgánicos pueden absorber radiación electromagnética porque todos
contienen electrones de valencia que pueden ser excitados a niveles de energía más altos. Las
energías de excitación asociados con los electrones que forman la mayoría de los enlaces sencillos
son altas, por tanto, la absorción por este tipo de electrón se limita a la región llamada ultravioleta en
el vacío (< 185 nm) donde los componentes de la atmósfera absorben también fuertemente.
Los átomos y moléculas constan de núcleos y electrones, la absorción de energía por parte de las
moléculas, así como el movimiento de los electrones alrededor del núcleo, en niveles de energía
definidas, está establecida por la teoría cuántica. Si la energía de los electrones es mínima, se
encuentran en el menor estado energético, es decir, en el estado fundamental. Sin embargo, los
electrones pueden absorber energía radiante pasando, entonces, a un estado energético superior o
estado excitado. Este fenómeno recibe el nombre de excitación electrónica y para que se produzca,
la frecuencia de la radiación se relaciona con la energía mediante la ecuación E = h v. La cantidad
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de energía necesaria para un tránsito electrónico desde el estado fundamental, E o a un estado

excitado E1, viene dado por la ecuación:
(E1 - E o ) = h v
h : constante de plank (6,63 x 10E-34 J. s)
v : frecuencia (Hz)
TIPOS DE ELECTRONES QUE PRODUCEN ABSORCIÓN

Las especies absorbentes que contienen electrones  sigma,  pi, n o no enlazante incluyen iones y
moléculas orgánicas, así como algunos aniones inorgánicos. Todos los compuestos orgánicos son
capaces de absorber radiación electromagnética porque todos contienen electrones de valencia que
pueden ser excitados a niveles de energía superiores.
Los electrones que contribuyen a la absorción por una molécula orgánica son:
a) Aquellos que participan directamente en la formación del enlace entre átomos y, por tanto, se
asocian con más de un átomo
b) Electrones no enlazantes o electrones que no participan en ningún enlace que están en gran
parte localizados alrededor de átomos como oxígeno, halógenos, azufre y nitrógeno.
En las moléculas orgánicas se pueden distinguir tres tipos de electrones. En primer lugar, los
electrones que intervienen en los enlaces sencillos o saturados, como son los que existen entre
carbono e hidrógeno en las parafinas o hidrocarburos saturados, estos enlaces se llaman enlaces
Sigma ( ). Los orbitales moleculares asociados con los enlaces sencillos en las moléculas orgánicas
se designan como orbitales sigma ( ) y los electrones correspondientes son electrones . Los
electrones de un enlace covalente sencillo está unidos fuertemente y para su excitación se necesita
radiación de alta energía o de longitud de onda corta. Por ejemplo, los alcanos, que sólo contienen
enlaces sencillos C- H y C-C, no muestran absorción arriba de los 160 nm. El metano presenta un
pico a los 122 nm y se designa como una transición σ -σ *, esto significa que un electrón que está en
un orbital de enlaces sigma se excita a un orbital anti enlace sigma.
Los orbitales moleculares asociados con los enlaces sencillos en las moléculas orgánicas se
designan con esta denominación sigma y los electrones son electrones . La energía necesaria para
excitar electrones de enlace  es muy elevada y, desde luego, superior a la que puede suministrar la
luz UV. Por esta razón, los compuestos parafínicos no absorben esta radiación y son muy adecuados
como disolventes.
El segundo tipo de electrones son aquellos que forman enlaces no saturados en hidrocarburos
.Estos enlaces constan de un enlace  (sigma) y un enlace  (Pi). El doble enlace en las moléculas
orgánicas contiene dos tipos de orbitales moleculares: un orbital sigma correspondiente a uno de los
pares de electrones de enlace, y un orbital molecular pi asociado con el otro. Ejemplos de estos
compuestos con enlaces  son los trienos conjugados y los compuestos aromáticos.
Distribución electrónica de los orbitales moleculares sigma y pi.

Los electrones de los enlaces dobles y triples se excitan con mayor facilidad hasta la orbital pi más
elevada. Cuando un electrón pi que está en un orbital de enlace pi se eleva a un orbital de anti enlace
pi, se designa a la transición como π –π *. Por lo general, la absorción de energía en este caso es más
débil que las transiciones σ –σ * .En las moléculas conjugadas, es decir, en aquellas que contienen
una serie de dobles enlaces alternados, la absorción se traslada hacia longitudes de onda más
largas.
En tercer lugar, muchas moléculas orgánicas contienen electrones que no forman enlaces, estos
electrones no compartidos se representan con el símbolo” n”. Los compuestos orgánicos con átomos
de nitrógeno, oxígeno, azufre o halógenos, tienen, todos electrones no enlazantes. Como estos
electrones " n " son excitados por radiación UV, todo compuesto que los posea absorberá dicha
radiación. Si una molécula contiene un átomo como el cloro que tiene pares electrónicos sin
compartir, uno de estos electrones se puede excitar a un nivel de energía más elevado. Ya que los
electrones sin compartir no están unidos tan fuertemente como los electrones en enlaces sigma, la
absorción tiene lugar a longitudes de onda más largas. El CH3Cl la transición ocurre en los 173 nm y
que las transiciones del CH3Br y del CH3I suceden en longitudes de onda aún más largas; esto se
debe a que los electrones están unidos con menor fuerza en el bromo y en el yodo, a la transición que
acabamos de describir se le llama n-σ * para indicar que un electrón no compartido se elevó a un
orbital sigma antienlace.
Un ejemplo en el que se apreciar los tres tipos de electrones lo constituye una molécula
(formaldehido):
Los compuestos aromáticos pueden absorber radiación UV; los grupos funcionales que absorben
radiación en la región UV se llaman CROMOFOROS. Un cromóforo es el grupo funcional de una
molécula que le imparte su color, el término se aplica a un grupo funcional que absorbe en la región
UV y visible.
Los compuestos parafínicos que sólo contienen enlaces  no absorben radiación en la región visible
ni ultravioleta, para detectarlos es necesario operar en la región UV vacío que se extiende desde 200
nm hasta la zona de rayos X (100 Ao). En este intervalo de longitudes de onda, el nitrógeno y el
oxígeno de la atmósfera absorben radiación, y en consecuencia, los trabajos se realizan con haces
de radiación en ausencia de aire, es decir, a vacío.
Aunque algunas sustancias inorgánicas absorben radiaciones ultravioleta, la principal aplicación de
la espectroscopia del ultravioleta es para determinar ciertos tipos de compuestos orgánicos. Su
principal aplicación es la determinación de compuestos aromáticos (compuestos que tienen un
benceno u otro anillo aromático) y de compuestos que tienen dobles ligaduras conjugadas. Los
grupos funcionales que absorben radiación en la región U.V, se llaman cromóforos.
La mayoría de los iones de los metales de transición absorben en la región ultravioleta o visible del
espectro. En la serie de los lantánidos ( cerio, lantano, erbio) y los actínidos (actinio, torio, uranio),
este proceso se debe a las transiciones electrónicas de los electrones 4f y 5 f; en el caso de los
elementos de la primera y la segunda series de metales de transición, el fenómeno se debe a los
electrones 3 d y 4d.
Algunos aniones inorgánicos presentan picos de absorción ultravioleta que son consecuencia de las
transiciones n--- π *, como ejemplos, se incluyen los iones nitrato (313 nm), carbonato (217 nm),
nitrito (360 y 280 nm), azida (230 nm) y tritiocarbonato (500 nm)
ESPECTROS DE ABSORCIÓN
Los espectros del ultravioleta, al igual que los del visible suelen ser muy sencillos. Con frecuencia,
un espectro del ultravioleta tendrá solamente uno o dos picos de absorción anchos, en la región de
200 a 400 nm. Otros, como el espectro ultravioleta del benceno tienen varios picos de absorción
pronunciados. Los espectros del UV a menudo son de utilidad para la caracterización cualitativa de
sustancias, particularmente de determinados tipos de compuestos orgánicos.
Los espectros de compuestos en fase condensada, puros, o en disolución presentan generalmente
fajas de absorción anchas y poco numerosas. Sin embargo, los espectros obtenidos a partir de
muestras en estado gaseoso y a baja presión presentan una estructura fina. Como se ha mencionado
muchos elementos lantánidos y actínidos absorben en las regiones UV y visible. En claro contraste
con el comportamiento de muchas especies absorbentes inorgánicas y orgánicas, sus espectros
constan de estrechos picos de absorción bien definidos y característicos que son pocos afectados
por el tipo de ligante asociado con el ion metálico. En la detección de grupos funcionales, aunque
esta técnica no puede proporcionar la identificación inequívoca de un compuesto orgánico, el
espectro de absorción en las regiones del ultravioleta y visible es, sin embargo, útil para detectar la
presencia de ciertos grupos funcionales que actúan como cromóforos. Por ejemplo, una banda de
absorción débil en la región de 280 a 290 nm, que se desplaza hacia longitudes de onda más cortas
cuando aumenta la polaridad de los disolventes, indica firmemente la presencia de un grupo
carbonilo.
Algunos espectros típicos de absorción en el ultravioleta
GRUPOS FUNCIONALES ORGANICOS QUE ABSORBENEN LA

REGIÓN ULTRAVIOLETA
Las moléculas que experimentan excitación por la radiación ultravioleta da lugar a excitaciones
electrónicas, procesos que son afectados por la distribución de los electrones en la molécula
completa. La posición de una banda de absorción con un grupo funcional dado, viene determinada,
por lo menos en parte, por una estructura global de la molécula.
Tiene lugar absorción en la región del ultravioleta por encima de 200 nm, siempre que la molécula
contenga alguno de ciertos grupos funcionales.
CARACTERÍSTICAS DE ABSORCIÓN DE ALGUNOS CROMÓFOROS
Características de absorción de compuestos aromáticos

DISOLVENTES
Al desarrollar un método de análisis que utilice radiación ultravioleta un problema importante es el de
la elección del disolvente. El solvente tiene que ser una sustancia que cumpla dos funciones:
 Disolver completamente a la muestra
 Además, debe ser transparente en la región espectral de interés, es decir, no debe absorber
radiación. Al elegir un disolvente no sólo se debe tener en cuenta su transparencia sino
también sus posibles efectos sobre el sistema absorbente.
Con bastante frecuencia, los disolventes polares como el agua, alcoholes, esteres y cetona tienden a
borrar la estructura fina del espectro que resulta de los cambios vibracionales; es lo más probable
obtener espectros parecidos a los originales en fase gaseosa cuando se utilizan disolventes no
polares como los hidrocarburos. El agua, que transmite radiación de longitud de onda corta como
200 nm, es excelente desde el punto de vista, pero raras veces es un buen disolvente para los
compuestos orgánicos.
Cuando se utiliza disolventes no polares como los hidrocarburos alifáticos, los alcoholes metílicos,
etílico y el éter etílico son transparentes a la radiación UV y se usan frecuentemente como
disolventes; sus determinaciones emplean cubetas de cuarzo o de sílice. Los disolventes señalados
en el cuadro enumeran las longitudes de onda aproximada por debajo de la cual no pueden usarse
debido a la absorción. Este mínimo depende en gran medida de la pureza del disolvente.
Disolventes para las regiones Ultravioleta y Visible

Disolvente Mínimo aproximado de transparencia nm
Agua 190
Etanol 210
n- hexano 195
Ciclohexano 210
Benceno 280
Dietil éter 210
Acetona 330
1,4 Dioxano 220
SENSIBILIDAD
Los análisis de absorción ultravioleta son bastantes sensibles y es posible detectar sustancias a
concentraciones tan bajas como 1 ppm. La espectroscopia visible y ultravioleta presenta esta
sensibilidad.
La sensibilidad de una técnica analítica se define como la menor concentración que puede
determinarse cuantitativamente por dicho método, los límites de detección de 10 -4. a 10 –5 M, con
frecuencia este intervalo puede ampliarse de 10 -6 a 10 -7 M con ciertas modificaciones, además,
estos métodos presentan selectividad de moderada a elevada, facilidad y comodidad en el trabajo,
precisión buena, se encuentran incertidumbres relativas de 1 a 3 por ciento, aunque, con
precauciones especiales, los errores, se pueden reducir a algunas décimas por ciento. La
selectividad que presenta es de moderada a alta.
APLICACIONES
Los compuestos capaces de absorber radiación ultravioleta son aquellos que poseen electrones no
enlazantes (electrones n) o dobles enlaces conjugados (electrones pi), tales como los aromáticos.
Estos compuestos absorben en rangos de longitudes de onda similares, por lo que sus espectros de
absorción se solapan considerablemente; la curva de absorción se encuentra influenciada, no sólo

por el grupo que contiene los electrones que absorben, sino también, por el resto de la molécula. En
consecuencia, la absorción U.V, ofrece menos posibilidades para la identificación de grupos
funcionales que otros métodos espectroscópicos, como el infrarrojo o la RMN. En cambio, es muy útil
para detectar compuestos aromáticos y olefinas conjugadas.
Las aplicaciones cualitativas son limitadas porque el espectro de la mayoría de los compuestos en
solución consiste en uno o, cuando mucho, unos pocos picos amplios sin estructura fina que podrían
ser requeridos para su identificación precisa. En contraste, el método es uno de los más poderosos
y utilizados para el análisis cuantitativo en sistemas orgánicos, inorgánicos y bioquímicos.
Algunas aplicaciones características de la espectroscopia UV son las determinaciones de los
siguientes compuestos:
 Compuestos aromáticos polinucleares de carácter cancerígeno
 Productos naturales, como esteroides o clorofila
 Sustancias colorantes
 Vitaminas (vitamina A)
En la determinación de impurezas en muestras orgánicas, tales como residuos de plantas

industriales, en la detección de posibles sustancias cancerígenas en alimentos, bebidas, cigarrillos o
contaminadores atmosféricos.
En agricultura, se utiliza en la determinación de pesticidas en plantas, ríos, y animales que comen y
beben sustancias contaminadas.
En medicina, se aplica en el análisis de enzimas, vitaminas, hormonas, alcaloides, barbitúricos, etc.
ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIÓN
INFRARROJA
La espectroscopia del Infrarrojo es la medida de la interacción de la radiación IR con la materia por
fenómenos de absorción, se utiliza para estudiar e identificar sustancias químicas o grupos
funcionales en diferentes estados de agregación en forma sólida, líquido o gaseosa.
La región del infrarrojo del espectro electromagnético se extiende desde el extremo del rojo del
espectro visible hasta la región de las microondas. La región del Infrarrojo (IR) desde el punto de
vista analítico, reagrupa una variedad de métodos no destructivos de identificación y determinación
basados en la absorción o reflexión, por parte de la muestra.
La espectroscopia IR es la rama de la espectroscopia que trata con la parte infrarroja del espectro
electromagnético. Esta cubre un conjunto de técnicas, siendo la más común una forma de
espectroscopia de absorción.
La región infrarroja abarca las regiones del espectro comprendidas entre los números de onda de
12800 a 10 cm -1 aproximadamente, lo que corresponde a las longitudes de onda de 0.78 a 1000 µm
(micrómetros). La espectrometría de infrarrojo involucra el examen de los modos vibracionales y
rotacionales de torsión y flexión de los átomos en una molécula. En la interacción con la radiación
infrarroja, parte de la radiación incidente es absorbida a longitudes de onda específicas; la
multiplicidad de vibraciones que ocurren simultáneamente produce un espectro de absorción muy
complejo que es característico solamente de los grupos funcionales que están presentes en la
molécula y de la configuración global de la molécula.
Aunque la región del IR cercano es pobre en absorciones específicas, ha despertado un gran interés
en los laboratorios de control como medio de análisis cuantitativo. Sin embargo, el IR medio es más
rico en información acerca de la estructura de los compuestos examinados. De hecho, se utiliza para
la identificación de moléculas orgánicas, ya que permite registrar una especie denominada " huella
digital" porque el espectro de absorción es muy característico debido a la multiplicidad de máximos y
mínimos que presenta.
REGIONES DEL ESPECTRO INFRARROJO

La porción infrarroja del espectro electromagnético se divide en tres regiones por su relación con el
espectro visible. El IR lejano se encuentra adyacente a la región de microondas, posee una baja
energía y puede ser usado en espectroscopia rotacional. El IR medio puede ser usado para estudiar
las vibraciones fundamentales y la estructura rotacional vibracional, mientras que el IR cercano
puede excitar vibraciones armónicas.
La región más utilizada es, con mucha diferencia la región del infrarrojo medio que se extiende
entre aproximadamente entre 2.5 y 14.9 micrómetros (µm). En esta región, para los análisis
cualitativos y cuantitativos, se emplean los espectros de absorción, reflexión y emisión.
La región del infrarrojo cercano está situada entre la luz visible y el infrarrojo medio, comprendida
entre 0.78 y 2.5 µm. La espectroscopia IR cercano es menos útil para la identificación, y más útil
para el análisis cuantitativo de compuestos que contengan agrupaciones funcionales con hidrógenos
unidos a carbonos, nitrógenos y oxígenos. Estos compuestos se pueden determinar a menudo con
exactitudes y precisiones más semejantes a las de espectroscopia UV/Visible que a las de
espectroscopia de IR medio.
También encuentra una considerable utilidad en la determinación cuantitativa de rutina de ciertas
especies, como el agua, dióxido de carbono, azufre, hidrocarburos de bajo peso molecular, nitrógeno
amínico, y muchos otros compuestos sencillos que tienen interés en agricultura y en industria
La principal utilidad de la región infrarroja lejana consiste en la determinación de estructuras de
especies inorgánicas y organometálicas que se basan en las medidas de absorción.
REGIONES DE LA ESPECTROSCOPIA DEL INFRARROJO
Región Intervalo de Intervalo de Intervalo de

longitudes de longitudes de longitudes de
onda en m onda en cm-1 onda en nm
Cercano 0.78 a 2.5 12800 a 4000 780 a 2500
Medio 2.5 a 50 4000 a 200 2500 a 50000
Lejano 50.0 a 1000 200 a 10 50000 a 1000000
Más utilizado 2.5 a 15 4000 a 670 2500 a 15000
Debemos recordar que 1 m (micrómetro = 10 –6 m = 10 –4 cm = 1  (micra)
ABSORCION EN EL INFRARROJO
La mayoría de las transiciones electrónicas requieren energía de las regiones ultravioleta o visible; la
absorción de radiación infrarroja se limita así en gran parte a especies moleculares para los cuales
existen pequeñas diferencias de energía entre los distintos estados vibratorios y rotatorios.
Por lo general, la radiación infrarroja no es suficientemente energética como para producir
transiciones electrónicas, pero sí puede inducir transiciones en los estados vibracionales y
rotacionales asociados con el estado electrónico basal de la molécula. Para absorber radiación
infrarroja, una molécula debe experimentar un cambio neto en el momento dipolar como
consecuencia de su movimiento vibratorio o rotatorio
REGIÓN DEL INFRARROJO CERCANO (IRC)

Casi todo compuesto químico exhibe absorción selectiva de energía radiante en la región I.R del
espectro electromagnético. Algunas de las absorciones que se encuentran dentro de la región
infrarroja cercana (0.78 – 2.5 micrómetros) son resultado de transiciones electrónicas dentro de las
moléculas absorbentes debido a su cercanía a la región visible.
En la región del IRC, que se toca con la región visible aproximadamente a los 0.78 m y se extiende
aproximadamente a los 2.5 m, hay muchas bandas de absorción que provienen de sobretonos
armónicos de la banda fundamental o de bandas de combinación asociadas con los átomos de
hidrógeno. Entre éstas se encuentran los primeros sobre tonos de las vibraciones de estiramiento de
los enlaces O – H y N-H, cerca de 1.40 m y de 1.50 m, respectivamente. También se encuentran
bandas de combinación que resultan de las vibraciones de estiramiento y de deformación del enlace
C-H de los grupos alquilo, a los 2.20 m y a los 2.60 m.
Debido a que las bandas del espectro son sobretonos o combinaciones, sus absorbancias molares
son pequeñas y los límites de detección son del orden del 0.1%. Los espectrofotométros utilizados
en la región del IR cercano son parecidos a los que se emplean para la espectroscopía de absorción
UV-VIS, como fuentes de radiación se utilizan las lámparas de tungsteno, y las celdas son de cuarzo
o sílice fundida, como las que se utilizan en el intervalo de 200 µm a 770 µm.
Las longitudes de las celdas varíannde0.1 cm a 10 cm. Los detectores normalmente son
fotoconductores de sulfuro de plomo. Algunos espectrofotómetros comerciales se han diseñado para
trabajar desde 180 µm a 2500 µm y se pueden usar para obtener espectros de IR cercano.
La espectrometría en el infrarrojo cercano es una herramienta de aplicación valiosa para analizar
mezclas de aminas primarias y secundarias. Las aminas primarias se determinan directamente
midiendo la absorbancia de una combinación de la banda de tensión N-H alrededor de 5000 cm-1 (2
µm); en esta región no absorben ni las aminas secundarias ni las terciarias, estas tienen varías
bandas de absorción superpuestas en la zona de 3300 cm-1 a 10000 cm-1 (1 a 3 µm) debido a las
vibraciones de tensión N-H y sus sobretonos, mientras que las aminas terciarias no pueden
presentar estas bandas.
Se aplica en análisis cuantitativo de compuestos que contengan agrupaciones funcionales con
hidrógenos unidos a carbonos, hidrógenos y oxígenos
Permite analizar cuantitativamente de fenoles, alcoholes, ácidos orgánicos, y se basan en el primer
sobretono de la vibración de la tensión O-H que absorbe alrededor de 7100 cm-1 (1.4 µm)
Analiza también ésteres, cetonas, y ácidos carboxílicos, y se basan en la absorción en la región de
3300 cm-1 a 3600 cm-1 (2.8 µm a 3 µm)
REGION DEL INFRARROJO INTERMEDIO (IRI)

En la región IR intermedia, que se extiende desde 2.5 a 50 micrómetros, la absorción surge
primariamente de elevación de las moléculas de que está compuesta la muestra a niveles de energía
vibracional excitados.
Esta región se divide en la región de frecuencias de grupo entre 2.50-7.69 m, y la región de la
“huella digital” , que corresponde entre 8-15.4 m. En la región de frecuencias de grupo las bandas
principales de absorción se asignan a unidades consistentes en vibraciones de sólo dos átomos de
una molécula, esto es, unidades que más o menos dependen sólo del grupo funcional que da la
absorción y no de la estructura molecular completa.
En la obtención de la información de un espectro a otro se asignan primero las bandas principales de
esta región (a grupos funcionales); en el intervalo de 2.50-4.00 m, la absorción es característica de
las vibraciones de estiramiento del hidrógeno con los elementos de masa 19 o menores. Las
frecuencias de estiramiento C-H son especialmente útiles para establecer el tipo de compuesto
presente, por ejemplo, tal estiramiento en el CΞ C-H se presenta aproximadamente a 3.03 m, para
los compuestos aromáticos insaturados lo hace entre 3.33-3.57 m y para los compuestos alifáticos
ocurre entre 3.33-3.57 m. Cuando el C-H está unido a masas más pesadas, las frecuencias de
estiramiento del hidrógeno se traslapan a la región del triple enlace.
El intervalo de frecuencias entre 4.00-6.49 m, es llamado a menudo la región no saturada o
insaturada. Los triples enlaces y grupos similares aparecen entre 4.00-5.00 m; la frecuencia de los
dobles enlaces cae en la región de los 5.00-6.49 m.
REGION DEL INFRARROJO LEJANO

Otras absorciones, que se encuentran en la región del IR lejana a longitudes de onda mayores que
unos 50 micrómetros, corresponden a excitación puramente rotacional. A las vibraciones
vibracionales se superponen cambios rotacionales. Además, toda molécula poliatómica está sujeta a
vibraciones interatómicas, ejemplo, una molécula de agua, cada átomo de hidrógeno vibra hacia
delante y hacia atrás, hacia el átomo de oxígeno y hacia fuera de él, en gran medida como si los 2
átomos estuvieran unidos por un muelle. Está vibración de estiramiento ocurre solo en niveles de
energía discretos y los fotones que tienen precisamente la cantidad de energía necesaria exacta
para subir al sistema de uno de estos niveles vibracionales a otro son los absorbidos selectivamente.
Todas las moléculas que tienen enlaces O-H exhiben absorción debida a vibraciones de
estiramiento, y ello ocurre en la región de 2.8 a 3.3 micrómetros.
Otros átomos, como nitrógeno o carbono, que están unidos a átomos de hidrógeno, exhiben
absorciones de estiramiento de hidrógeno en la misma región general del espectro IR, de ordinario
entre 2.6 y 4.1 micrómetros. La longitud de onda exacta a la cual absorbe una molécula dada está
determinada en parte por cuales sean los otros átomos unidos a uno u otro de los átomos enlazados
por enlace directo.
Otros tipos de enlaces interatómicos dan por resultado absorción características en otras partes de la
región IR. Los átomos de carbono unidos por doble enlace – C = C --, están marcados de manera
típica por absorciones de vibración de estiramiento en la región de 5.1 a 6.6 micrómetros, y los
átomos de carbono unidos por triple enlace en la región de 4.1 a 5.1 micrómetros.
El estiramiento es sólo una de las diversas formas de vibraciones interatómicas en moléculas.
Considerando un átomo de hidrógeno enlazado a un átomo de oxígeno en el agua o a un átomo de
carbono en un compuesto orgánico, ocurre una vibración de encorvamiento en el enlace H –O o H –
C ya sea un encorvamiento hacia delante y hacia atrás en la misma relación planar con el resto de la
molécula o hacia adentro y hacia fuera de ese plano. Las absorciones debidas a vibraciones de
encorvamiento de hidrógeno se encuentran a longitudes de onda mayores que 6.6 micrómetros.
Sin embargo, la velocidad de rotación de las moléculas cambia con la vibración y, por ello, tras la
absorción, vibran más rápidamente y giran con distinta velocidad. En consecuencia, la energía de
rotación se suma o se resta de la energía de vibración y, en definitiva, la energía radiante total
absorbida por la molécula será igual a la suma algebraica de sus energías de vibración y rotación.
TRATAMIENTO DE LAS MUESTRAS PARA

ESPECTROFOTOMETRIA IR
Para espectrofotometría IR se tiene los siguientes tratamientos
a) MUESTRAS GASEOSAS, Requieren poca preparación más allá de su purificación, pero se
usa una celda de muestra con una larga longitud de celda (5-10 cm), debido a que los gases
muestran absorbancias relativamente débiles.
b) MUESTRAS LÍQUIDAS, se pueden colocar entre dos placas de una sal de alta pureza. Las
placas son transparentes a la luz IR. Algunas placas de sal son altamente solubles en agua,
la muestra, los líquidos de lavado deben pasar, antes de introducirlos entre las placas, por
un tratamiento de secado.
c) MUESTRAS SÓLIDAS, Una técnica de tratamiento consiste en triturar la muestra con un
agente aglomerante (como el nujol que es un material importante usado en espectroscopia
IR, es una parafina líquida aceitosa de alto peso molecular, inerte y tiene un espectro IR
relativamente simple, con picos mayores de 2950-2800 cm-1, 1465-1450 cm-1 y 1380-1370
cm-1) para formar una suspensión, este tratamiento emplea un mortero de ágata o mármol,
una película fina de suspensión se aplica sobre la placa de sal y se ejecuta la medición.
El segundo tratamiento consiste en una cantidad de la mezcla finamente, con una sal especialmente
purificada, esta mezcla en polvo se comprime en una prensa d mecánica para formar una pastilla
translúcida a través de la cual puede pasar el rayo de luz del espectrofotómetro.
ESPECTROS DE ABSORCIÓN
En una representación gráfica de los espectros en el eje de la ordenada se ubica la transmitancia,
esto indica que la ordenada es proporcional a la transmitancia (%), en el eje de la abscisa está
graduada en unidades de centímetros recíprocos. En algunas graficas contienen una escala de
longitud de onda y otra de número de onda; pero, sólo una de ellas puede ser lineal.
La preferencia que existe por la escala lineal en número de onda se basa en la existencia de una
proporcionalidad directa entre esta magnitud y la energía así también como la frecuencia; la
frecuencia de la radiación absorbida es a su vez la frecuencia de la vibración molecular que produce
realmente el proceso de absorción.
Una consecuencia practica del hecho de que la mayoría de las moléculas estén sujetas a tantos
estados vibracionales diferentes es que los espectros IR son muy complejos, en general mucho más
de lo que son los espectros de absorción electrónica observados en muestras líquidas y sólidas con
energía radiante visible y ultravioleta.
Cada espectro IR es una mezcla compuesta de las absorciones vibracionales procedentes de todos
los enlaces químicos en las moléculas absorbentes. El aspecto general de un espectro es
completamente diferente del de los espectros visibles y ultravioleta. Incluso, los compuestos
relativamente simples presentan en estos espectros una serie complicada de picos agudos y de
mínimos; esta multiplicidad de picos convierte el espectro en específico. A menudo se llama al
espectro IR la “HUELLA DIGITAL” del compuesto.
Espectro de absorción en el infrarrojo de una película delgada de poliestireno obtenido con

un moderno espectrofotómetro de IR. Obsérvese que la escala de abscisas cambia a partir
de 2.000 cm-
1
ALGUNOS PICOS DE ABSORCIÓN INFRARROJA

CARACTERISTICOS
En la región IR de longitudes de onda más corta (por debajo de 7.5 micrómetros) se encuentran
picos de absorción útiles para la identificación de determinados grupos funcionales.
En muchos casos, la identificación de los grupos funcionales de una molécula no es suficiente para
permitir la identificación positiva del compuesto, por lo cual hay que proceder a la comparación del
espectro completo con el de compuestos conocidos.
ELECCION DEL DISOLVENTE

No existe un único disolvente que sea transparente a través de toda la región del infrarrojo medio. En
la preparación de las muestras ningún disolvente es transparente en toda la región infrarroja del
espectro, ni existe ningún sólido transparente a esta región que posea propiedades mecánicas
adecuadas, parecidas a las de cuarzo o del cristal, y que se pueda utilizar para conseguir cubetas.
En general, para trabajar con radiación infrarroja, se tiene que evitar la presencia del agua, pues ésta
no solamente absorbe en regiones muy amplias de esta región, sino que ataca también a muchos de
los materiales empleados para la construcción de cubetas. Desde el punto de vista de su
transparencia, los disolventes más satisfactorios son el tetracloruro de carbono y el disulfuro de
carbono. El primero es útil en toda la región que alcanza hasta las 7.6 micrómetros, y el segundo lo
es desde este punto hasta los 15 micrómetros, infortunadamente, no todas las muestras son solubles
en estos líquidos, por lo cual, si hay que emplear la muestra en disolución, hay que recurrir a
disolventes de campos más restringidos de transparencia.
En general, se emplean soluciones relativamente concentradas para disminuir la importancia relativa
de la absorción debida al disolvente; ello exige cubetas estrechas, utilizándose comúnmente
espesores de cubeta de 0.1 a 1 mm.
El agua y el alcohol rara vez se utilizan, no sólo porque absorben intensamente, sino también porque
atacan a los haluros de metales alcalinos, que son los materiales más habituales utilizados en las
ventanas de las cubetas. Por estas razones también es necesario poner cuidado en secar los
disolventes usados.
APLICACIONES CUALITATIVAS
La espectroscopia de absorción infrarroja es una de las herramientas más poderosas e importantes
de las que se dispone para la identificación y determinación de la estructura de especies orgánicas,
inorgánicas y bioquímicas.
El aspecto general de un espectro de absorción infrarrojo es completamente diferente del de los
espectros ultravioletas o visibles. Incluso los compuestos relativamente simples presentan en estos
espectros una serie complicada de picos agudos y de mínimos. Ahora bien, es precisamente esta
multiplicidad de picos lo que convierte el espectro en específico; en efecto, no existen dos
compuestos que den espectrogramas idénticos. Así la identidad del espectro de una sustancia
problema con el de una sustancia patrón se acepta como prueba de su identidad de composición.
En la región infrarroja de longitudes de onda más corta (por debajo de unos 7.5 micrómetros) se
encuentran picos de absorción útiles para la identificación de determinados grupos funcionales, pues
las posiciones de los máximos correspondientes sólo son muy ligeramente afectadas por el
esqueleto carbonado al cual dichos grupos se hallan unidos. Así pues, la investigación de esta
porción del espectro proporciona una cantidad considerable de información relativa a la constitución
de la molécula en estudio.
El uso generalizado del IR para la identificación de compuestos orgánicos a partir de un espectro es

un proceso que consta de dos etapas:
La primera etapa implica la determinación de los grupos funcionales que parece más probable que
estén presentes, examinando la región de frecuencias de grupo.
La segunda etapa consiste en una comparación detallada del espectro del compuesto desconocido
con los espectros de compuestos puros que contienen todos los grupos funcionales encontrados en
la primera etapa. En este caso es particularmente útil la región de la huella dactilar. Como
consecuencia, un gran parecido en la región de la huella dactilar de los espectros de dos
compuestos constituye casi una evidencia de su identidad.
Para la identificación de los espectros se emplean las tablas de correlación que sirven como guía,
estas tablas pocas veces son suficientes para la identificación positiva de un compuesto orgánico a
partir de su espectro IR. Sin embargo, existen diversos catálogos de espectros de IR que ayudan en
la identificación cualitativa permitiendo la comparación de los espectros con los de un gran número
de compuestos puros. La búsqueda manual en grandes catálogos de espectros es lenta y tediosa.
Por este motivo, en los últimos años se han empezado a utilizar extensamente los sistemas de
búsqueda por ordenador que permita la identificación de los compuestos a partir de los datos
espectarles de IR almacenados. La posición y la magnitud relativa de los picos en el espectro del
analito se determinan y almacenan en la memoria para dar un perfil de picos, que luego se compara
con los perfiles de los compuestos puros almacenados en discos magnéticos; a continuación, el
ordenador compara los perfiles e imprime una lista de compuestos que tienen espectros similares a
los del analito. Por lo general, el espectro del analito y el del compuesto probable se muestran
simultáneamente en la pantalla del ordenador para su comparación. Los bancos de memoria de
estos instrumentos son capaces de almacenar perfiles para cientos de miles de compuestos puros.
ANÁLISIS CUANTITATIVO
Las aplicaciones cuantitativas de la espectroscopia infrarroja son mucho más limitadas que las
aplicaciones de radiación ultravioleta / visible debido a las absortividades molares bajas y lo angosto
de los picos infrarrojos y las dificultades instrumentales en la medición de transmitancia con
exactitud.
Casi todas las especies moleculares orgánicas e inorgánicas absorben en la región infrarroja. Así, la
Espectrofotometría infrarroja; ofrece la posibilidad de determinar un número extraordinariamente
grande de sustancias. Además, la singularidad de los espectros infrarrojos conduce a un grado de
especificidad que es igualado o excedido por relativamente pocos otros métodos analíticos. Esta
especificidad ha hallado particular aplicación al análisis de mezclas de compuestos orgánicos
estrechamente relacionados.
Estos métodos se aplican en el análisis de una mezcla de hidrocarburos aromáticos.
Se aplica en análisis de contaminantes atmosféricos, es decir, se determina monóxido de carbono,
cloroformo, alcohol metílico, bióxido de azufre, disulfuro de carbono, etc. Algunos análisis típicos son
la detección o determinación de parafinas, compuestos aromáticos, olefinas, acetilenos, alcoholes,
aldehídos, cetonas, ácidos carboxílicos, éteres, aminas, compuestos de azufre o haluros.
A partir del espectro infrarrojo, es posible determinar los componentes responsables del olor y sabor
de los alimentos. Otra aplicación interesante es el examen de materiales y pinturas antiguas, así por
ejemplo, a partir de la identificación del barniz utilizado en un cuadro, así como de las telas y
pigmentos de las pinturas, se pueden descubrir falsificaciones de obras de arte.
RELACION ENTRE ABSORBANCIA Y CONCENTRACIÓN

Después de decidir las condiciones para el análisis, es necesario preparar la curva de calibrado a
partir de una serie de disoluciones patrón que abarquen el intervalo de concentraciones esperado en
la muestras. Lo ideal es que los patrones de calibración tengan una composición parecida a la de las
muestras a analizar, no sólo en cuanto a la concentración del analito sino también con respecto a la
concentración de las otras especies presentes en la matriz de la muestra, para minimizar los efectos
de las distintos componentes de la muestra en la absorbancia medida.
Pero, cuando se analizan materiales complejos como suelos, minerales y plantas fósiles, la
preparación de patrones semejantes a las muestras suele ser imposible o extremadamente difícil.5
En estos casos, el método de adición estándar suele ser útil para contrarrestar los efectos de la
matriz.
INSTRUMENTACIÓN PARA MEDIDAS DE

ABSORCIÓN
La espectroscopia de absorción visible y ultravioleta tiene características semejantes por ello la
construcción del equipo instrumental en lo que se refiere a Espectrofotómetro son diseñadas para
operar en estas dos regiones. Todos los Espectrofotómetro se componen de los elementos que se
representan en el diagrama de bloques donde los materiales y los detalles de construcción dependen
del margen de longitud de onda.
Un espectrofotómetro óptico que presenta la capacidad de resolver radiaciones de diferentes
longitudes de onda, dentro del rango ultravioleta y visible. Este rango, por lo general se encuentra
dentro de los valores de 190 a los 1100 nm.
La mayoría de los instrumentos espectroscópicos de las regiones UV-visible e IR incluyen los
componentes siguientes:
 Una fuente estable de energía radiante
 Un selector de longitud de onda que aísla una región limitada del espectro
 Uno o más recipientes para la muestra
 Un detector de radiación
 Un sistema que procesa y lee la señal que consta, actualmente de una computadora
 Periféricos de salida de datos
Módulo instrumental para medir la absorción de radiación.
1.- FUENTE DE RADIACION

Para ser adecuados para las mediciones de absorción, los focos radiantes tienen que cumplir ciertos
requisitos:
A) Deben producir un haz de poder de radiación suficiente para que su detección y su medición
sean fáciles.
B) La radiación producida debe ser continua, esto es, el espectro debe contener todas las
longitudes de onda comprendidas en la región espectral que vaya a utilizarse
C) Finalmente, el foco debe ser estable, para cumplir esta condición, la intensidad del haz de
radiación debe permanecer constante durante un tiempo suficiente para proceder a la medición
de la radiación incidente y saliente.
Para la región visible se usan lámparas de proyectores, por ejemplo, lámpara de tungsteno muy
parecida a las bombillas normales y que consta de un filamento de tungsteno que se calienta al rojo
blanco en una atmósfera controlada.
Una lámpara de filamento de tungsteno es una fuente de radiación en el intervalo visible y del
infrarrojo cercano. Un filamento de tungsteno típico funciona a una temperatura cercana a los 3000 o
K y produce radiación útil en el intervalo de 320 a 2500 nm; esto comprende toda la región visible y
parte de las regiones de ultravioleta y de infrarrojo.
Las lámparas de tungsteno- halógeno, también llamadas lámparas de cuarzo –halógeno, contienen
una pequeña cantidad de yodo dentro de la cubierta de cuarzo que aísla el filamento, opera a una
temperatura de 3500 o K, con lo cual se producen intensidades mayores y aumenta el intervalo de la
lámpara hasta la región UV, y su intervalo de longitud de onda es de 240 – 2500 nm, dura el doble
de una lámpara común de tungsteno.
En la espectroscopia de ultravioleta normalmente se utiliza una lámpara de arco de deuterio en la

cual una descarga eléctrica (una chispa) hace que el deuterio se disocie y emita radiación
ultravioleta en el intervalo aproximado de 160 a 400 nm. Otra fuente de radiación ultravioleta
empleada es el tubo de descarga de hidrógeno, que está constituido por un par de electrodos
alojados en una célula de vidrio con una ventana de cuarzo, célula que contiene gas hidrógeno a
presión reducida. Al aplicar un voltaje de corriente continua o alterna a los electrodos, se provoca la
excitación de las moléculas de hidrógeno y la producción de radiación continua en la región entre
180 y 350 nm.
En la espectroscopia del infrarrojo se produce radiación infrarroja continua calentando eléctricamente
un sólido inerte. A menudo se emplea para ello una varilla de carburo de silicio, llamada Globar, que
se calienta quizá a unos 1500 o C manteniéndola entre un par de electrodos. Se obtiene entonces
energía radiante en la región de 1 a 40 micrómetros. El emisor de Nernst, que consiste en una barra
de óxidos de circonio e itrio (tierras raras) calentado por una resistencia interior que se calienta
eléctricamente a unos 1500 o C, produce radiación en la región entre 0.4 y 20 micrómetros.
FUENTES CONTINUAS PARA ESPECTROSCOPIA OPTICA
FUENTE INTERVALO LONGITUD DE TIPO DE

ONDA nm ESPECTROSCOPIA
 Lámpara de H2 y D2 160 - 380 UV
 Lámpara de tungsteno 240 - 2500 UV, V, IR cercano
halógeno
 Lámpara de tungsteno 350 - 2200 V, IR cercano
 Emisor de Nernst 400 - 20000 IR
 Alambre de nicromo 750 - 20000 IR
 Globar 1200- 40000 IR
2.- SELECCIÓN DE LA LONGITUD DE ONDA

Para la mayoría de los análisis espectroscópico, se necesita una radiación constituida por un grupo
limitado, estrecho y continuo de longitudes de onda denominado banda. Una anchura de banda
estrecha aumenta la sensibilidad de las medidas de absorbancia, puede proporcionar selectividad
tanto a los métodos de absorción como a los de emisión y, con frecuencia, es un requisito para
obtener una relación lineal entre la señal óptica y la concentración. No existe ningún selector de
longitud que se aproxime al caso ideal.
Los métodos espectroscópicos necesitan dispersar la radiación policromática en bandas que
abarquen un intervalo de valores restringido de longitud de onda. Es ventajoso emplear radiación con
una anchura de banda limitada, ya que una de las ventajas es la de proporcionar una mayor
probabilidad de que se cumpla la ley de Beer. Además, se asegura una mayor especificidad de la
medición, puesto que no interfieren las sustancias que absorben en otras regiones del espectro,
además, restringiendo la radiación exclusivamente a la porción del espectro más fuertemente
absorbida por la sustancia a analizar, se obtiene una mayor variación de absorbancia por unidad de
variación de concentración. Ello da lugar a un aumento de la sensibilidad de la medición.
Los dispositivos que se emplean para restringir la radiación a bandas limitadas se clasifican en dos
categorías. Una de ellas está constituida por los filtros y la otra categoría está constituida por los
monocromadores.
FILTROS
Un filtro es simplemente un objeto físico que absorbe radiación electromagnética de cierta
longitudes de onda en mayor grado que de otras y transmite preferencialmente fotones de las
longitudes de onda que son menos absorbidas por él.
Actúan absorbiendo grandes porciones del espectro y transmitiendo solamente regiones

relativamente limitadas alrededor de una longitud de onda; estos se utilizan principalmente en
la región visible. Para poder comparar la efectividad de los filtros resulta útil expresar el
intervalo de longitudes de onda a lo ancho del cual la transmitancia de aquéllos disminuye a
una mitad de su valor máximo; este intervalo recibe el nombre de anchura efectiva de banda.
Se emplean dos tipos de filtros para la selección de la longitud de onda, los filtros de
interferencia y los filtros de absorción.
FILTROS DE ABSORCION
Son en general más baratos, se utilizan mucho para la selección de bandas en la región
visible. Estos filtros funcionan absorbiendo ciertas zonas del espectro, los filtros de vidrio son
láminas de vidrio coloreada mediante un pigmento disuelto o disperso en la masa vítrea, son
los dispositivos más sencillos para la dispersión de la energía radiante transmite una banda de
longitud de onda bastante ancha, equivalente a 35 nm o 50 nm o más. Son usados en
instrumentos llamados foto colorímetros o fotómetro de filtros, trabajan en la región del visible.
FILTROS DE INTERFERENCIA
Los filtros que se utilizan para las mediciones de absorción comúnmente son filtros de
interferencia. Estos filtros transmiten radiación en un ancho de banda de 5 a 20 nm. Los filtros
tienen como ventajas que son sencillos, resistentes y de bajo costo. Sin embargo, un filtro sólo
puede aislar una banda de longitudes de onda, para cada banda se debe utilizar un filtro
diferente. Estos filtros operan en la región ultravioleta, visible y buena parte del infrarrojo
Los filtros de interferencia consisten en dos películas metálicas semitransparentes,

extremadamente delgadas, separadas por una capa transparente muy fina. Cuando un haz
luminoso incide casi perpendicularmente sobre este dispositivo, una cierta porción de aquel
atraviesa la primera capa metálica mientras que otra porción es reflejada. La porción que ha
penetrado sufre análogamente una reflexión parcial al incidir sobre la segunda capa. Si la
porción reflejada en esta segunda capa es de longitud de onda adecuada, será reflejada
parcialmente en la cara interior de la primera, en fase con luz de la misma longitud de onda
incidente inicial. El resultado es que la luz de esta longitud de onda se refuerza, mientras que
la de todas las otras, que no están en fase, sufre interferencia y se destruye.
Los filtros de interferencia proporcionan un grado de pureza espectral que raras veces es
alcanzado por los filtros de vidrio, alcanzando anchuras efectivas de banda del orden de 10
nm, además transmiten una cantidad mayor de luz de la longitud de onda que se desea. Para
poder comparar la efectividad de los filtros resulta útil expresar el intervalo de longitudes de
onda a lo ancho del cual la transmitancia de aquellos disminuye a una mitad de su valor
máximo; este intervalo recibe el nombre de anchura de banda.
MONOCROMADORES
Un monocromador es un dispositivo que descompone la radiación procedente de la fuente de
radiación en sus longitudes de onda componentes y proporciona el modo de aislar éstas en bandas
muy estrechas. La luz que ingresa por una rendija, es colimada por una lente o un espejo sobre un
prisma o una red de difracción, que la dispersan. Otra lente o espejo permite enfocar cualquier
porción del espectro resultante sobre una rendija de salida. La mayoría de los monocromadores
tienen ventanas de entrada y de salida que se colocan para proteger los componentes del polvo y los
vapores corrosivos del laboratorio
La anchura efectiva de banda de la radiación que emerge de un monocromador depende de varios
rasgos estructurales del aparato, y de la longitud de onda. En las regiones ultravioleta y visible se
suelen obtener anchuras de bandas que van, según los casos, desde unas décimas nm hasta quizás
unos 10 nm.
Monocromador de Prisma
La dispersión en un prisma tiene lugar a causa del fenómeno de la refracción. Al depender la
velocidad de la luz del medio que atraviesa, ésta sufre refracción al pasar de un medio a otro. La
magnitud de este efecto depende del ángulo que forma el rayo incidente con la interfase, de la
longitud de onda de la radiación, y de los índices de refracción de ambos medios.
El fenómeno de la dispersión se produce a causa de que el índice de refracción de la sustancia que
constituye el prisma depende de la longitud de onda. Esta variación del índice de refracción es más
pronunciada a longitudes de onda más cortas, por lo cual, al atravesar un prisma, un haz de luz
policromática se descompone en sus componentes, siendo las longitudes de onda más cortas
dispersadas en mayor grado que las más largas.
El material de que están constituidos los prismas depende de la porción de espectro que se tenga
que estudiar. Para la región entre 350 y 2000 nm se suele emplear el vidrio, pero el cuarzo tiene un
campo de utilidad más extenso, que va de unas 180 a unas 4000 nm.
VENTAJAS DE USAR PRISMAS
Las principales ventajas de usar prismas son:
 Cubre un amplio rango de longitudes de onda desde 185 hasta los 2500 nm
 No se requieren filtros de corte como en los monocromadores de rejilla de difracción
 Asegura una alta dispersión con una alta resolución en el rango ultravioleta (desde los 185 hasta
los 300 nm)
DESVENTAJAS
Se requiere un complicado sistema para obtener una escala lineal de longitud de onda. Esto se debe
a que la dispersión del prisma varía con la longitud de onda
 No puede obtenerse una resolución uniforme a un determinado ancho de banda fija. Esto se
debe a que la dispersión del prisma no es lineal
Redes de Difracción
La luz policromática se puede dispersar también por medio de redes de difracción. Son muy
empleadas en espectrofotometría, una rejilla de difracción para la región ultravioleta y visible tiene
una superficie extremadamente pulida sobre la cual se hallan grabados un gran número de surcos
equidistantes paralelos, las redes de difracción suelen tener entre 2000 y 6000 líneas por milímetro.
Una rejilla para el infrarrojo requiere una cantidad de líneas considerablemente menor, es decir, que
en la región del IR lejano con 20 A 30 líneas por milímetro. Cuando la red es iluminada descompone
a la radiación en tantos haces como líneas, cada una de éstas, en efecto, se comporta como si fuera
un minúsculo foco luminoso, emitiendo radiación en todas direcciones. Éste es precisamente el
efecto que explica los fenómenos de difracción de la luz al incidir ésta sobre una arista aguda o al
pasar por una rendija estrecha.
Montaje de monocromadores
Los monocromadores proporcionan reducción de gran fuerza espectral, la longitud puede elegirse a
voluntad del operador, es decir, permite la variación continua en la longitud de la radiación con un
ancho de banda muy estrecha.
Los componentes básicos de un monocromador son:
a. Rendija de entrada
Llamadas también ranuras son espacios muy finos y discretos que permiten el paso de un haz
de radiación monocromática. Estas entradas de entrada no solo permiten el paso de radiación
monocromática de valores discretos, sino que también impiden el paso de radiación de
diferentes longitudes de onda que no se deseen para el análisis.
b. Lente o espejo colimador
Por lo general estos lentes están hechos de un material plástico recubiertos por un baño de
plata o de cualquier otra superficie altamente reflectante. Los lentes son biconvexos y por lo
general se encuentran por pares, ubicados a la entrada y salida de radiación (antes de la
muestra y después de ella). La principal función de los lentes es la de enfocar la radiación
hacia diferentes partes del instrumento (celda de muestra, monocromador, detector).
c) Elemento dispersor
Es la parte del monocromador que separa la radiación polcromática en sus componentes más
simples en ranos de longitud de onda estrechas y pueden ser:}
 Filtros
 Prismas
 Rejillas de difracción
Los componentes básicos de un monocromador se complementan en los montajes básicamente los

montajes en mayor uso en la espectroscopia del visible y el ultravioleta son:
Montaje Ebert
Tiene un gran espejo cóncavo (colimador) que cumple doble función, orienta el haz policromático
hacia la rejilla o prisma dispersor, la otra función consiste en interceptar el haz dispersado por el
prisma o rejilla orientado hacia la rendija de salida.
El montaje tipo Ebert
Montaje de Czerney-Turner
Como se muestra en la figura, en los monocromadores hay dos clases de elementos dispersores:
redes de reflexión y prismas. Para la explicación se muestra un haz constituido por sólo dos
longitudes de ondas, λ 1 y λ 2 (( λ1 >λ2 ). Esta radiación entra en el monocromador por una abertura
estrecha rectangular o rendija, se colima y, seguidamente incide sobre la superficie del elemento
dispersante con un ángulo dado. La radiación dispersada se enfoca en el plano focal AB, donde
aparecen como dos imágenes rectangulares de la rendija de entrada (una para λ 1 y otra para λ2)
3.- RECIPIENTES PARA LAS MUESTRAS
El compartimiento de celdas es la parte física del instrumento en la cual se alojarán las celdas de
absorción. Este por lo general es un espacio que presenta uno o más contenedores de muestra Las
celdas o cubetas que contienen las muestras deben estar construidas con materiales transparentes a
la radiación de la región espectral de interés. Deben tener sus ventanas perfectamente paralelas y
perpendiculares al haz de radiación, para disminuir las pérdidas por reflexión.
Las celdas se deben fabricar con materiales adecuados. La sílice fundida o el cuarzo es
transparente desde 190 nm en la región del ultravioleta hasta cerca de 3 a 4 micrómetros (µm) en la
región de infrarrojo. Los vidrios de boro silicato pueden utilizarse desde 350 nm hasta 2000 nm
también existen celdas de material de plástico, de bajo costo, que se utilizan en la región visible. La
sustancia que se utiliza más comúnmente para la fabricación de celdas para la región infrarrojo es el
cloruro de sodio cristalino, pero es soluble en agua y en algunos otros disolventes y la dureza y
resistencia química no es tan buena, alternativamente se puede emplear celdas de bromuro de
potasio.
Las celdas utilizadas en espectrofotometría ultravioleta - visible, por lo general tienen 1 cm de

espesor, aunque se puede utilizar celdas desde 0.1 o menos hasta 10 cm o más. Las celdas que se
utilizan para los estudios de líquidos y soluciones en la región infrarroja, tienen trayectorias menores
de 1 mm por lo general. Debido a la tendencia de los disolventes a absorber, las cubetas para el IR
suelen ser muchos más estrechas (0.1 a 1 mm) que las empleadas en las regiones ultravioleta y
visible; los caminos ópticos en el IR requieren, por lo común, concentraciones de muestra de 0.1 a 10
por 100, la cubetas se llenan o vacían con una jeringa hipodérmica.
La calidad de los datos de absorbancia depende críticamente de la forma en que se usan y

mantienen los juegos de celdas igualadas. Las huellas dactilares, la grasa u otros depósitos sobre la
pared de la celda alteran sus características de transmisión, por ello es importante la limpieza antes
y después de su uso, tampoco debe tocarse la superficie de las ventanas durante su manipulación.
4.- DETECTORES
Es la parte del instrumento que recibe la intensidad de radiación monocromática de la muestra, y la
transforma a un valor de señal eléctrica. Esta señal eléctrica es medida y comparada con respecto a
un valor de referencia (blanco de control), para presentar un valor numérico que el operador pueda
comprender
Los detectores más usados en fotometría de absorción con el visible y ultravioleta son las celdas
capa barrera, fototubos y fotomultiplicadores. Estos dispositivos tienen la función de Convertir la
energía radiante en energía eléctrica, respondiendo rápidamente a la energía radiante de amplia
banda de longitud de onda aún de mínima potencia. Es decir son de alta sensibilidad, y que se mide
después con aparatos normales de medida.
Fotocelda
La celda fotovoltaica se usa principalmente para detectar y medir radiación de la región visible.
Su zona de trabajo es la región visible trabaja más o menos entre 260nm - 780nm, esto
abarca aproximadamente el intervalo en el cual es sensible el ojo humano, ordinariamente, la
corriente producida por una celda fotovoltaica es bastante grande para poder medirse con un
galvanómetro lo que no requiere amplificación.
La longitud de onda donde tiene máxima sensibilidad es a 500 nm. Se usan ampliamente en
los instrumentos simples y portátiles en los cuales la resistencia y el bajo costo son los
factores más importantes. Este tipo de instrumentos proporciona datos analíticos confiables
para los trabajos de rutina.
Tienen como inconveniente de carecer de sensibilidad a bajos niveles y de presentar baja
iluminación de su corriente de salida, es decir, manifiesta fatiga
Fototubo
Debido a la facilidad con que se puede amplificar su respuesta, son detectores de radiación
potencialmente mucho más sensible que las células de capa o fotovoltaica y que responden a
la
Radiación no solo visible sino también a la radiación ultravioleta. Zona de trabajo es de 180 -
1000 nm
Fotomultiplicador
Es el tipo de detector mas usado, este detector utiliza el fenómeno de la " foto emisión" para
generar un pequeño flujo de corriente, el cual es amplificado y medido en forma proporcional a
la cantidad de radiación incidente sobre el detector. Para la medición de baja potencia radiante
este detector ofrece ventajas si se compara con los anteriores detectores. Es un tipo de
fototubo en la que la señal primaria resultante de la fotoemisión es amplificada internamente
con un factor de amplificación que puede alcanzar valores de hasta 10 8. Opera en la región
visible y ultravioleta en el intervalo de 180 - 1100 nm. Dentro de las ventajas que presenta se
puede mencionar, alta sensibilidad en todo rango, repetitibilidad de la señal, y bajo nivel de
ruido
DETECTORES COMUNES PARA ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIÓN
TIPO Intervalo longitud onda nm Tipo de espectroscopia
DETECTORES DE FOTONES
 Fototubos 150 -- 1000 UV - V e IR cercano
 Tubos fotomultiplicadores 150 - 1000 UV - V e IR cercano
 Celdas fotoconductoras 1000 - 50000 Absorción IR
5 .- UNIDAD DE LECTURA
Es la parte del instrumento que permite ver los diferentes datos que pueden conseguirse con el
espectrofotómetro. La forma de presentación de datos incluye accesorios tales como: Leds (diodos
emisores de luz), pantallas de cristal líquido (LCD), tubos de rayos catódicos (CRTs), medidores
análogos, etc.
Por lo general todos los equipos modernos presentan una pantalla gráfica que permite ver tanto el
barrido espectral, como los datos cuantificados. La computadora personal se ha vuelto parte
indispensable de todo equipo moderno. La PC aumenta las capacidades de trabajo y las funciones
del instrumento, permitiéndole realizar, trabajos automatizados, procesamiento y cálculos
matemáticos veloces y una inmejorable presentación de los mismos.
Un periférico de datos se refiere a las diferentes formas en las cuales los datos se dan a conocer. El
periférico más usado para la salida de datos es la impresora, otras formas de salida de datos es por
medio de dispositivos magneto ópticos (disquetes o tarjetas de memoria)
INSTRUMENTOS TIPICOS
Existen en el comercio una variedad de instrumentos para realizar medidas de absorbancia en las
regiones ultravioletas y visibles del espectro. Los más simples de estos aparatos son los
colorímetros, en los que el ojo humano funciona como transductor o detector. Los más complejos son
los espectrofotómetros registradores de doble haz, que cubren toda la gama del espectro, desde
aproximadamente 185 nm hasta 3 000 nm, pero los más comunes oscilan entre 200 a 1100 nm.
Fotocolorímetros
El fotómetro proporciona un instrumento sencillo y relativamente económico para realizar análisis de
absorción. Comodidad, facilidad de mantenimiento y resistencia de mantenimiento y resistencia son
propiedades de un fotómetro de filtro. Existen en el mercado fotómetros de un solo y de doble haz.
Diagramas esquemáticos de un fotómetro de un solo haz y un fotómetro de doble haz
FOTOMETROS DE UN SOLO HAZ

Es un instrumento que consta de una lámpara de filamento de tungsteno, una lente para
proporcionar un haz luminoso paralelo, un filtro óptico con un ancho de banda grosero de 20 hasta
40 nm, un porta muestra de material de vidrio y una célula fotovoltaica. La corriente producida se
indica con un microamperímetro, que contiene una escala de 0 a 100 % T. La emisión de la radiación
debe ser fija y constante, para lo cuál dispone de un estabilizador de corriente, un lente colimante
orienta la radiación que va a dar un filtro que es del color complemento al color de la muestra. La
zona de trabajo es la región visible entre 400 -750 nm.
Desventajas:
- Lámpara tiene un periodo de vida media de 1 000 horas.
- La fotocelda con el tiempo pierde sensibilidad, la razón es que muchas veces
encendemos el aparato sin filtro o simplemente experimenta un fenómeno de fatiga.
- Es conveniente utilizar estabilizadores a parte del que ya tiene incluido el aparato.
- Operan solamente en la región visible
Ventajas:
- Son instrumentos de costo económico

- Presenta una precisión moderada
- Utiliza un filtro del color complemento de la muestra
- En algunos instrumentos se emplea transformador porque vienen de fábrica a 110 voltios
- Entre mayor número de filtros tenga el fotocolorímetro presenta una mayor precisión.
- Son útiles en trabajos de rutina.
Diagramas esquemáticos de un fotómetro de un solo haz y un fotómetro de

doble haz
ESPECTROFOTÓMETROS
Los métodos espectrofotométricos utilizan un espectrofotómetro que se utilizan para la región visible,
ultravioleta e infrarrojo. En los aparatos que se utilizan solamente para la radiación visible se emplea
óptica de cristal, mucho menos cara, existen instrumentos diseñados para operar en un intervalo de
380 a 800 nm presentando mayor precisión y exactitud.
Una versión moderna de un espectrofotómetro opera en la región visible y ultravioleta, por lo que
poseen dos fuentes de radiación: una lámpara de halógeno de cuarzo para el intervalo visible y una
lámpara para el ultravioleta, el intervalo de longitudes de onda es de 200 hasta 1100 nm. El sistema
de monocromación toma el nombre de arreglos ópticos u óptica asociada y está constituida por
rendijas, una de entrada y otra de salida, la de entrada permite el ingreso de radiación policromática
visible u ultravioleta; y la de salida permite el paso de la radiación monocromática. Comprende
también lentes colimantes que orientan el haz de radiación en dirección del dispersor que puede ser
un prisma o rejillas emparrilladas, cuyo material puede ser de vidrio (visible) o de cuarzo fundido
(visible y ultravioleta).
En el sistema de detección emplean fototubos o fotomultiplicadores de alta precisión. El instrumento
de lectura es un medidor o una unidad digital; también se puede adquirir un registrador como
accesorio. Los espectrofotómetros pueden ser de un haz simple y de doble haz.
ESPECTROFOTOMETRO DE DOBLE HAZ

Muchos fotómetros y espectrofotómetros modernos se basan en diseños de doble haz. El haz
luminoso proveniente de la fuente de radiación atraviesa el sistema de monocromación de la luz
mediante un filtro o monocromador, este haz se divide en 2 haces por un espejo en forma de V,
llamado divisor de haz. ( el divisor de haz es la parte del instrumento que se encarga de dividir el
haz de radiación en dos haces, los cuales se intercalan e forma ordenada y a frecuencia constante,
generando dos caminos o pasos ópticos denominados, haz de muestra y haz de referencia. Su
finalidad es monitorear en forma casi continua la absorción de la muestra como la de la referencia;
de esta forma cualquier cambio que se produzca en el sistema eléctrico, químico o físico), afecte
tanto a la referencia como a la muestra).
Un haz pasa a través de la solución de referencia a un fotodetector, y el segundo atraviesa
simultáneamente la muestra a un segundo fotodetector acoplado. Los dos haces producidos son
amplificados, y su proporción (o el logaritmo de su proporción) se determina electrónicamente y se
exhibe en el dispositivo de lectura o en la gráfica del registrador, en unidades digitales de
absorbancia o de porcentaje de transmitancia.
Componentes ópticos de un Espectrofotómetro

Componente Región Región Región infrarroja
Ultravioleta Visible
Fuente de Lámpara de descarga de Lámpara de filamento Globar (SiC), filamento de
radiación hidrogeno o deuterio de Wolframio. Nernst
Dispersión de Prisma de cuarzo; red de Prisma de vidrio, red de Prisma de NaCl, KBr, Li, F,
longitudes de difracción. difracción, filtros. CaF2, según la longitud de
onda. onda
Lentes, células Lentes de cuarzo células, Lentes de vidrio, Ventanas de las células
espejos. espejos de aluminio. células, espejos de del mismo material que el
plata o aluminio. prisma, espejos de luminio
Detector Fotomultiplicador, Fotomultiplicador, Termopila, bolómetros,
fotoconductor célula fotoemisiva. fofoconductor(PbS o
PbTe)
Diseños instrumentales para fotómetros y espectrofotómetros: a) instrumentos de haz sencillo, b)

instrumento de doble haz con haces separados en el espacio, c) instrumentos de doble haz con
haces separados en el tiempo.
ESPECTROFOTOMETROS PARA INFRARROJO

En principio, los aparatos del IR no difieren grandemente de los instrumentos empleados para medir
la absorción de longitudes de onda más cortas. En detalle, no obstante, los espectrofotómetros para
esta región poseen una serie de rasgos característicos.
Como fuente de radiación se suele emplear sólidos calientes como el filamento de Nernst o lámpara
de Globar ( SiC ), como dispersores de longitud de onda se utilizan prismas de cloruro de sodio,
bromuro de potasio, floruro de calcio, según la longitud de onda, lo importante es que tienen que ser
materiales transparentes al infrarrojo, un detalle importante es que el vapor de agua ataca a la mayor
parte de estos materiales, por lo cual hay que tener grandes precauciones para evitar los daños
debidos a esta causa. Para enfocar la radiación IR se utilizan espejos cóncavos, antes que lentes,
con el fin de reducir las pérdidas de potencia de radiación; los detectores más utilizados son los
bolómetros termopares y thermistores.
NEFELOMETRIA Y TURBIDIMETRIA
Son dos campos analíticos estrechamente relacionados con La espectroscopia del visible, tanto en el
aspecto teórico como experimental. Se llama turbidez a la propiedad óptica de una muestra que
hace que la radiación sea dispersada y absorbida más que transmitida en línea recta a través de la
muestra, la turbidez es ocasionada por la presencia de materia suspendida en un líquido.
En la turbidimetría se mide la cantidad de luz que pasa a través de una solución, a mayor turbiedad
es menor la cantidad de luz transmitida.
FUNDAMENTO
El fundamento de estas técnicas es la dispersión de la luz por partículas no transparentes
suspendidas en un líquido, por ejemplo, precipitados y suspensiones coloidales. La teoría de la
dispersión de la luz es complicada por otros parámetros de la muestra tales como la forma de la
partícula, la absorción molecular, la concentración de la muestra y la distribución de tamaño de los
dispersores.
Hay dos métodos para medir la turbidez de una muestra, la turbidimetría y la nefelometría. Un
turbidímetro mide la cantidad de radiación que pasa a través de una muestra en la dirección de
avance, en forma análoga a la espectrofotometría de absorción, es decir, por turbidimetría se
determina la cantidad de luz no dispersada. En estos métodos se puede llevar a cabo a cualquier
longitud de onda de la luz, los procedimientos de los métodos estándar para la determinación de
sulfatos por análisis turbidimétricos recomiendan una longitud de onda de 420 nm, esto produce un
análisis más sensible, debido a que la luz de esta longitud de onda se dispersa más que la luz roja,
que tiene longitudes de onda mayores.
En nefelometría se mide la cantidad de radiación dispersada por las partículas, es decir, en una
muestra turbia. Estas mediciones se hacen a un ángulo medido respecto de la dirección del haz de
radiación que atraviesa la muestra, usualmente 45 o ó 90 o.
Se señala también que la nefelometría es un método para medir la intensidad de una radiación
dispersa en un ángulo de 90 o con respecto a la fuente. Este procedimiento analítico se basa en la
dispersión de la radiación que atraviesan las partículas de materia, cuando la luz atraviesa un medio
transparente en el que existe una suspensión de partículas sólidas, se dispersa en todas direcciones
y como consecuencia se observa turbia.
FACTORES DEL PROCEDIMIENTO NEFELOMETRICO

La dispersión no supone la pérdida neta de potencia radiante, solo es afectada la dirección de la
propagación, porque la intensidad de la radiación es la misma en cualquier ángulo.
La intensidad depende de algunas variables como, por ejemplo, el número de partículas
suspendidas, el tamaño que presentan, su forma de presentación, los índices refractivos de la
partícula y del medio dispersante, y la longitud de onda de la radiación dispersada.
Estos métodos pueden ser también apropiados para ensayos cuantitativos que usan complejos
antígeno-anticuerpo, o para medir la cantidad de proteínas en fluidos. Las medidas turbidimétricas y
nefelométricas ocupan una posición destacada en los laboratorios clínicos.
Generalmente el procedimiento considera tres factores:
 LA CONCENTRACION
Si mayor sea el número de partículas en suspensión, mayor es la radiación dispersada
 TAMAÑO DE LA PARTÍCULA
Se toma en consideración factores como pH, la velocidad y orden de la mezcla, concentración de los
reactivos, duración del estado de reposo y la fuerza iónica.
 LONGITUD DE ONDA
Generalmente las muestras se iluminan con luz blanca, pero si estas presentan color, se debe
escoger una porción del espectro electromagnético en la absorción del medio se reduzca al mínimo.
INSTRUMENTACIÓN
Es un instrumento para medir partículas suspendidas en un líquido. Para medir muy pequeñas
cantidades de turbidez (transmitancias de muestra mayores que 90 o), como el análisis de aguas
potables y aguas negras, el método nefelométrico es el más adecuado.
Un instrumento típico de flujo directo, se hace empleando una fotocelda colocada en un ángulo de 90
o
con respecto a una fuente luminosa. Este ángulo es el más sensible a las variaciones en el tamaño
de partícula, también exhibe un sistema óptico simple que está relativamente exento de radiación
parásita.
La densidad de partículas es entonces una función de la luz reflejada por las partículas a la
fotocelda, cuanta más luz se refleje en una determinada densidad de partículas depende de las
propiedades de las partículas como su forma, color y reflectividad.
En otros casos se utiliza un instrumento de dispersión superficial. Cuando un rayo de luz muy
estrecho alcanza la superficie de la muestra con un ángulo muy pequeño, parte del rayo se refleja en
la superficie y escapa hacia una trampa de luz. La porción remanente pasa al interior de la muestra
con un ángulo de 45 o aproximadamente. Si hay partículas de turbidez presentes se produce
dispersión de radiación y parte de la radiación dispersada alcanza el detector, localizado ligeramente
arriba de la muestra.
En Turbidimetría se puede emplea un fotómetro de filtro, la cantidad de luz que no se absorbe se
mide en unidades de absorbancia.
Estos instrumentos pueden medir con precisión trazas de turbidez en unidades de NTU
(nephelometric turbidity unit)
Son dos campos analíticos estrechamente relacionados con La espectroscopia del visible, tanto en el
aspecto teórico como experimental.
APLICACIONES
Generalmente la nefelometría y la turbidimetría se utilizan en el análisis de la calidad química del
agua, para determinar la claridad y para el control de los procesos de tratamiento.
Las aplicaciones de la nefelometría y de la turbidimetría son muy diversas. Algunas determinaciones
involucran sistemas que son turbios aun antes de entrar en el laboratorio analítico, tales como en la
determinación de material suspendido en aguas. Mediciones de la claridad de bebidas y fármacos
son típicas de este tipo de determinación nefelométrica simple.
Por nefelometría se puede determinar, por ejemplo, calcio o bario precipitándolos como fosfato o
sulfato. De la cantidad e intensidad de radiación dispersada por los metales precipitados se obtiene,
respectivamente, la cantidad y concentración de estos metales en la muestra.
Cuando se utilizan estas técnicas con fines cuantitativos se suelen construir curvas de calibrado con
muestras de concentraciones conocidas. Estas muestras (precipitados o suspensiones) deben
prepararse bajo condiciones rigurosamente controladas, ya que la cantidad de luz dispersada
depende no sólo de la concentración sino también del tamaño y número de partículas implicadas.
Para que la luz dispersada pueda utilizarse comparativamente, es necesario que tanto el número de
partículas como su tamaño sean del mismo orden. Además, la longitud de onda de luz que es
dispersada más eficazmente depende también del tamaño de las partículas.
Bajo ciertas condiciones controladas, se puede lograr que el tamaño de la partícula en la suspensión
sea reproductible y, en consecuencia, que esta técnica sea de aplicación analítica.
ANALISIS DE MEZCLAS DE SUSTANCIAS ABSORBENTES

La ley de Beer también se puede aplicar a un medio que contenga más de una clase de sustancias
absorbentes, siempre que no haya interacción entre las distintas especies, la absorbancia es total
para un sistema de multicomponentes.
La absorbancia total de una disolución, a una longitud de onda determinada, es igual a la suma de
las absorbancias que presentan los componentes individuales. Esta relación hace posible la
determinación cuantitativa de los constituyentes individuales de la mezcla, incluso si su espectro se
solapa.
Si se tiene los espectros M y N, no existe ninguna longitud de onda en la cual la absorbancia de esta
mezcla se deba exclusivamente a uno de los componentes, así, la determinación bien de M ó N es
imposible con una única medida. Sin embargo, las absorbancias de la mezcla a las dos longitudes de
onda; λ ‘λ’’ se puede expresar de la siguiente manera:
A’ = ε’ M b C M + ε’ N b C N (a λ ‘)
A ‘’ = ε ‘’M b C M + ε’’ N b C N (a λ ‘’)
Las cuatro absortividades molares pueden calcularse a partir de disoluciones estándar individuales
de M y de N. o mejor a partir de las pendientes de sus representaciones gráficas de la ley de Beer.
Las absorbancias de la mezcla A’ y A’’, se pueden medir experimentalmente, al igual que b, el
espesor de la cubeta. Así, a partir de estas dos ecuaciones, se pueden calcular fácilmente las
concentraciones de los constituyentes individuales, C M y C N.
Estas relaciones son válidas sólo si se cumple la ley de Beer y si dos componentes se comportan de
manera independiente el uno del otro. La mayor exactitud en un análisis de este tipo se alcanza
cuando se seleccionan longitudes de onda en las que las diferencias entre las absortividades
molares sean grandes.
METODO DE ADICION ESTANDAR

El método de la adición estándar es especialmente útil para analizar muestras complejas en las que
la probabilidad de que se produzcan efectos debidos a la matriz es considerable. Se utiliza este
método cuando es difícil o imposible duplicar la matriz de la muestra, en general, la muestra es
“seleccionada” con una cantidad o cantidades conocidas de disolución estándar del analito.
Este método puede aplicarse de diferentes formas. Una de las más habituales implica la adición de
diferentes volúmenes de una disolución patrón a varias alícuotas de la muestra del mismo tamaño.
Este proceso se conoce como adición de muestra (spiking). Después, cada disolución se lleva a un
volumen fijo antes de efectuar la medida. Hay que tener en cuenta que cuando la cantidad de
muestra es limitada, las adiciones estándar se pueden llevar a cabo por adiciones sucesivas de
volúmenes del patrón a un único volumen del problema exactamente medido. Las medidas, se van
haciendo en la muestra original y después de cada adición del patrón en la muestra.
Según Holler-West-Holler-Crouch, en el método de adiciones estándar, una cantidad conocida de

una disolución estándar de analito se añade a una porción de la muestra. Las respuestas son
medidas antes y después de la adición y utilizadas para obtener la concentración del analito.
En la mayoría de las versiones del método de la adición estándar, la matriz de la muestra es casi
idéntica después de cada adición y la única diferencia es la concentración de analito, o la
concentración de reactivo analítico. Como los patrones se preparan en alícuotas de la muestra, todos
los demás componentes de la mezcla de la reacción serán iguales.
En este método varias alícuotas idénticas Vx de la disolución problema con una concentración Cx se
transfieren a matraces aforados de volumen Vr. A cada uno de ellos, se le añade un volumen variable
(Vs ml) de una disolución patrón del analito que tiene una concentración conocida Cs. Se añaden
entonces los reactivos adecuados y cada disolución se diluye hasta un volumen determinado.
Se realizan las medidas instrumentales en cada una de esas disoluciones dando una señal S en el
instrumento. Si la respuesta del instrumento es proporcional a la concentración, como debe ser para
que el método de la adición estándar sea aplicable, se puede escribir que:
S = k VsCs + k VxCx
Vt Vt
Este método puede utilizarse cuando no se dispone de tiempo para preparar la curva de calibrado, o
ahorrar muestra, o bien cuando se carece de información acerca del disolvente de la muestra, o
también cuando es imposible suprimir interferencias físicas o químicas en la matriz de la muestra.
El método supone la adición de uno ó más volúmenes iguales de disolución estándar a alícuotas de
la muestra del mismo tamaño. Después cada disolución se diluye hasta un volumen fijo antes de
medir su absorbancia.
En el método de adiciones múltiples se añaden cantidades de la disolución estándar del analito a

varias porciones de la muestra y se obtiene una curva de calibración para las varias adiciones.

Unidad# 4 Espectroscopia Del Ultravioleta e Infrarrojo

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Unidad# 4 Espectroscopia Del Ultravioleta e Infrarrojo

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ANALISIS QUIMICO 2 INGENIERÍA BIOTECNOLOGICA Ing.

Armando Salinas Sánchez 50

Según su longitud de onda, se distinguen varios subtipos de rayos ultravioleta:

Nombre Abreviación Longitud de onda (nm) Energía por fotón (eV)

Ultravioleta cercano NUV 400 – 200 3,10 – 6,30

Onda larga UVA 400 – 320 6,30 – 3,87

Onda media UVB 320 – 280 3,87 – 4,43

Onda corta UVC 283 - 200 4,43 – 6,20

Ultravioleta lejano FUV, VUV 200 – 10 6,20 - 124

En forma general la radiación UV se clasifica en tres bandas de longitudes de onda:

 UV – A (ONDA LARGA): de 320 nm - 380 nm. Es la más próxima al espectro

 UV – B (ONDA MEDIA): de 280 nm – 320 nm, también abundante en la radiación

 UV – C (ONDA CORTA): de 100 nm – 280 nm, peligrosas para ojos y piel de

SUSTANCIAS QUE ABSORBEN EN LA REGIÓN ULTRAVIOLETA

de energía necesaria para un tránsito electrónico desde el estado fundamental, E o a un estado

h : constante de plank (6,63 x 10E-34 J. s)

TIPOS DE ELECTRONES QUE PRODUCEN ABSORCIÓN

Distribución electrónica de los orbitales moleculares sigma y pi.

Algunos espectros típicos de absorción en el ultravioleta

GRUPOS FUNCIONALES ORGANICOS QUE ABSORBENEN LA

CARACTERÍSTICAS DE ABSORCIÓN DE ALGUNOS CROMÓFOROS

Características de absorción de compuestos aromáticos

Disolventes para las regiones Ultravioleta y Visible

absorción se solapan considerablemente; la curva de absorción se encuentra influenciada, no sólo

En la determinación de impurezas en muestras orgánicas, tales como residuos de plantas

REGIONES DEL ESPECTRO INFRARROJO

REGIONES DE LA ESPECTROSCOPIA DEL INFRARROJO

Región Intervalo de Intervalo de Intervalo de

Debemos recordar que 1 m (micrómetro = 10 –6 m = 10 –4 cm = 1  (micra)

REGIÓN DEL INFRARROJO CERCANO (IRC)

REGION DEL INFRARROJO INTERMEDIO (IRI)

REGION DEL INFRARROJO LEJANO

TRATAMIENTO DE LAS MUESTRAS PARA

Espectro de absorción en el infrarrojo de una película delgada de poliestireno obtenido con

ALGUNOS PICOS DE ABSORCIÓN INFRARROJA

ELECCION DEL DISOLVENTE

El uso generalizado del IR para la identificación de compuestos orgánicos a partir de un espectro es

RELACION ENTRE ABSORBANCIA Y CONCENTRACIÓN

INSTRUMENTACIÓN PARA MEDIDAS DE

Módulo instrumental para medir la absorción de radiación.

1.- FUENTE DE RADIACION

En la espectroscopia de ultravioleta normalmente se utiliza una lámpara de arco de deuterio en la

FUENTES CONTINUAS PARA ESPECTROSCOPIA OPTICA

FUENTE INTERVALO LONGITUD DE TIPO DE

2.- SELECCIÓN DE LA LONGITUD DE ONDA

Actúan absorbiendo grandes porciones del espectro y transmitiendo solamente regiones

Los filtros de interferencia consisten en dos películas metálicas semitransparentes,

Los componentes básicos de un monocromador se complementan en los montajes básicamente los

El montaje tipo Ebert

3.- RECIPIENTES PARA LAS MUESTRAS

Las celdas utilizadas en espectrofotometría ultravioleta - visible, por lo general tienen 1 cm de

La calidad de los datos de absorbancia depende críticamente de la forma en que se usan y

DETECTORES COMUNES PARA ESPECTROSCOPIA DE ABSORCIÓN

TIPO Intervalo longitud onda nm Tipo de espectroscopia

FOTOMETROS DE UN SOLO HAZ

- Son instrumentos de costo económico

Diagramas esquemáticos de un fotómetro de un solo haz y un fotómetro de

ESPECTROFOTOMETRO DE DOBLE HAZ

Componentes ópticos de un Espectrofotómetro

Diseños instrumentales para fotómetros y espectrofotómetros: a) instrumentos de haz sencillo, b)

ESPECTROFOTOMETROS PARA INFRARROJO

FACTORES DEL PROCEDIMIENTO NEFELOMETRICO

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