Calentamiento de nanopartículas metálicas

con láser mediante aplicaciones fototérmicas.

Xiaoming Liu, et al.
Equipo 2:
Anna Almazán
Leslie Bojórquez
Enrique Ceceña
Manuel Cota
Nadia Yahia

1
Introducción
Según la Organización Mundial de la Salud,
el cáncer ha sido la causa de 7.9 millones de
muertes (2007), y se estima que para el
2030 esta cifra aumente a 12 millones de
muertes. [2*] Fig 1. Organización Mundial de la Salud. Fuente

Actualmente se emplean varios tratamientos como cirugías,

quimioterapia y radiación. Desgraciadamente estos llegan a causar
efectos secundarios negativos, por lo que se busca una alternativa cuyo
objetivo sea destruir células cancerígenas sin dañar los tejidos sanos.
[2*] 2
El uso de nanopartículas en el
tratamiento del cáncer ha probado ser de
gran utilidad en una gran variedad de
áreas como lo son la terapia de
hipertermia [7-12] y en la administración
de medicamentos [3][4], las cuales han
ayudado a mejorar la especificidad sin
provocar efectos secundarios negativos.

Ademas, al combinar nanopartículas con

la orientación de biomoléculas se ha
obtenido una mayor especificidad así
como mayor eficacia en el tratamiento. Fig 1. Imagen de una célula cancerígena. Fuente

3
 El método de calentamiento por láser, mejor conocido como ablación fototérmica, ha
sido uno de los procedimientos menos invasivos al tratar tumores profundos, el cual lo
hace uno de los mejores candidatos para el tratamiento de hipertermia.

Esto se ha observado en experimentos para terapia

fototérmica, como el realizado por Hirsch et al, [14]
en el cual se probó la eficacia en el incubamiento de
nanocáscaras de oro y silicio que se calientan con un
láser de 820 nm en el infrarrojo cercano.

Los resultados demostraron que un carcinoma de

cáncer de mama incubado con nanocáscaras se
había debilitado bajo los efectos del laser NIR,
mientras que el carcinoma sin nanocáscaras no
sufrio ningun efecto. [14][15] Fig 2. Imagen de un carcinoma de cáncer de
mama. Fuente

4
Antes de utilizar el método de ablación fototérmica se deben
tomar en cuenta algunos aspectos ya que la absorción y
dispersión de una partícula dependen del material, tamaño y
forma del objeto que se irradiara, así como la longitud de
onda del láser.

● El calentamiento de un material puede variar

dependiendo de la longitud de onda.
● Se debe escoger un láser cuya intensidad no sea
atenuada por el mismo objeto que se busca calentar.

Para evitar errores en el tratamiento es necesario asegurar

que la concentración y absorción de las nanopartículas sean
los adecuados para calentar el interior del tumor.

5
Nanopartículas Metálicas
El tamaño de las nanopartículas permite el contacto con biomoléculas en la superficie y
dentro de las células de manera que se pueden estudiar sus propiedades fisicoquímicas
y bioquímicas. Además, estas facilitan el transporte de sustancias de manera no
invasiva. [9*]
Con el tiempo se han podido modificar estas nanopartículas, de modo que al
combinarlas con metales como el oro y hierro para ser usadas como agentes
diagnosticos y terapeuticos. [9*]
● Nanopartículas de Oro: sus propiedades ópticas facilitan la dispersión de la luz así
como la conversión de luz absorbida a calor.
● Nanopartículas de Hierro: Estas presentan propiedades ópticas similares al oro, y
son ideales para el proceso de etiquetado molecular.

6
Plasmones de Superficie
● Oscilaciones colectivas de los electrones
de conducción en su última capa de
valencia.
● Los plasmones pueden generarse cuando
es aplicado un campo eléctrico sobre un
metal, o mediante el impulso de los
fotones.
● Los plasmones de superficie son ondas de
densidad de carga presentes en la
superficie de los metales.
● Es muy poco el tiempo que tardan en su
propagación por la superficie del metal.

7
Plasmones de Superficie
● Fenómeno óptico en el cual luz incidente
con polarización p, excita una onda de
densidad de carga superficial.
● Se lleva a cabo cuando las cargas libres
presentes en la interfaz de dos medios con
constantes dieléctricas de signos opuestos
oscilan, tal como un metal (típicamente
oro y plata) y un dieléctrico.
● La longitud de onda de resonancia
depende del metal, de sus parámetros
geométricos (ancho, alto), estado de
polarización de la luz incidente y
propiedades ópticas del medio ambiente.

8
Principios de calentamiento de láser y ablación fototérmica.

En la imagen de la izquierda nos encontramos con el

método de Hipertermia.

● Las nanopartículas biocompatibles están recubiertas en la

superficie con biomoléculas funcionales que pueden
acoplarse a la superficie de las células cancerosas.
● El calor producido por la energía del láser absorbida
provoca un aumento de temperatura localizado que
puede alterar la membrana o provocar necrosis
celular.

9
Necrosis vs Apoptosis
Necrosis Apoptosis

Serie de eventos que conducen a la Proceso ordenado en el cual se

ruptura de la membrana descompone el contenido de la
citoplasmática y la consecuente célula y se empaca en paquetes
salida de material intracelular lo que pequeños de membrana para su
desencadena una reacción “recolección” por las células
inflamatoria inmunes.

10
Comparación de características citomorfológicas de los procesos de
muerte celular: apoptosis y necrosis. Adaptada de Elmore (2007)
Característica Apoptosis Necrosis

Número de células Células individuales o Generalmente grandes

pequeños grupos de células cantidades

Volumen celular Encogimiento celular HInchamiento celular, citólisis

Efecto en integridad de Membrana celular intacta Membrana celuar

membrana plasmática comprometida

Efecto en citoplasma Retenido en cuerpos Liberado al espacio

apoptóticos extracelular

Efecto en núcleo Condensación de cromatina Fragmentación del núcleo y

cromatina

Procesos de inflamación No hay presencia de Inflamación usualmente

tisular inflamación presente
11
Usamos la teoría de Mie para cuantificar la SPR por la dispersión y la absorción de la
luz por partículas pequeñas en términos de su extinción, dispersión y absorción.
Donde obtenemos las siguientes ecuaciones:

Que son utilizadas para la absorción y dispersión.

12
Preparación de las nanopartículas
y nanocables
Se estudian tres materiales en el
trabajo: nanopartículas de Oro
(AuNP), nanopartículas de Plata
(AgNP) y nanocables de Plata
(AgNW).

AuNP’s se sintetizan por reducción

de citratos con ayuda de
ultrasonido.

13
Preparación de las nanopartículas y nanocables
En la preparación de las nanopartículas de
oro se siguieron los siguientes pasos:

1. Se tomaron moles de ácido

tetracloroaurico ( ) y se
disolvieron en 190 ml de Agua
Desionizada.
a. Para eso, de acuerdo a la masa molecular,
se vierten 0.01698 g de
2. Se calienta la mezcla hasta hervir.

14
Preparación de las nanopartículas y nanocables
2. Mientras se calienta la solución y se mezcla
con un agitador magnético, se vierten 10 ml de
citrato de sodio () al 0.5%.

La solución que se vierte se genera sabiendo que:

Para 50 ml de solvente, es necesario agregar 0.25 g

de citrato de sodio.

15
Preparación de las nanopartículas y nanocables
3. La solución se mantuvo en mezcla durante 30 min. Hasta que la reacción
se completó.

16
Preparación de las nanopartículas y nanocables
4. Una vez la reacción adquirió su color rojo vino. Se vuelven a realizar
concentraciones con el resultado original de: 150,100, 75, 50, 25 μmol/L con el mismo
solvente de antes.
Para ello sabemos que el peso molecular de la solución final es de: 18.022 g/mol
Se obtiene esto mediante la conservación de materia.

5. Finalmente, se procede a limpiar mediante un baño ultrasónico durante 3

minutos. Este consiste en agitar las partículas que no nos interesan y que estas se
adhieran a metales, cerámicas, etc.

17
B. Khodashenas (2019)

18
Preparación de las nanopartículas y nanocables
Para obtener las AgNP’s,

1) Se sintetizaron con 15 ml de EG puro

calentado hasta 153ºC por una hora.
2) Se hizo una mezcla de 240 ml EG con 4mM
FeCl3

Para el cloruro de hierro (162.2 g/mol) se necesitan

agregar moles (0.116784 g)

19
Preparación de las nanopartículas y nanocables
3. Se suelta la solución de FeCl3 gota por gota al
matraz caliente durante 15 min.

4. Se prepara una solución de 0.15 M de PVP

(112.889 g/mol )(polividona) en EG (62.07 g/mol).
Con estos pesos moleculares para la concentración
se necesitan:

Es decir, 1.693 g de PVP disueltos en 100 ml de EG.

5. Se vierten 2.25 ml de esta última solución.

20
Preparación de las nanopartículas y nanocables
6. Se añaden 4.5 ml de 0.094 M AgNO3 (169.87
g/mol) en EG, al frasco. Esto es:

Añadir 1.59677 g de nitrato de plata en 100 ml de

EG.

7. La solución se deja reaccionar por dos horas

mientras mezclada hasta enfriarse a temperatura
ambiente (20ºC)

21
Preparación de las nanopartículas y nanocables
Para cambiar la morfología de las
nanoestructuras de plata, es necesario
modificar la razón entre PVP y iones de
plata. Una razón alta nos provee de
nanopartículas, mientras que una razón
baja nos provee de nanocables.

Los productos obtenidos se lavan tres

veces con acetona y dos veces con
etanol.

22
Preparación de las nanopartículas y nanocables
Las nano-estructuras resultantes purificadas se
dispersaron etanol para lo que seguía.

Finalmente, se hicieron concentraciones de 150, 75,

50 y 25 micromolares para los tres tipos de cuerpos.

23
Preparación de las nanopartículas y nanocables
La morfología de los nanomateriales se observó mediante un microscopio electrónico de
barrido (SEM, Hitachi, S-4800) y un microscopio electrónico de transmisión (TEM, Jeol
JEM-2010).
-El microscopio electrónico de barrido (MEB) utiliza un haz focalizado de electrones de
alta energía para generar una serie de señales en la superficie de las muestras sólidas.
-Los TEM emplean un haz de electrones de alto voltaje para crear una imagen. Un cañón
de electrones situado en la parte superior de un TEM emite electrones que viajan a
través del tubo de vacío del microscopio. Este haz atraviesa la muestra, que es muy fina,
y los electrones se dispersan o chocan con una pantalla fluorescente situada en la parte
inferior del microscopio.

24
Investigación experimental de calentamiento con láseres
A. Montaje experimental y estrategia de
calentamiento

❖ 1. Se colocó una cubeta (“cuvette”)

sobre un sustrato (una “capa”)
aislante del calor en una cámara de
Fig. Cubeta. Fuente
protección contra la radiación.
❖ 2. Los láseres de estado sólido, luz
púrpura de 450 nm y luz verde de 532
nm, se dirigieron desde el orificio
del techo de la cámara a cada grupo
de muestras.
Fig. Cámara de protección contra
radiación. Fuente

25
Investigación experimental de calentamiento con láseres
A. Montaje experimental y estrategia
de calentamiento

❖ 3. En el exterior de la cámara se
fijó una cámara termográfica que
detectaba la señal infrarroja de la
muestra calentada para
examinar el gradiente de
temperatura dentro de la Fig. Cámara termográfica. Fuente

muestra.
❖ 4. Mientras tanto, la medición
precisa de la temperatura se
llevó a cabo utilizando un sensor
de temperatura de fibra óptica de
cuatro canales. Fig. Sensor de temperatura de fibra 26
óptica. Fuente
Investigación experimental de calentamiento con láseres
A. Montaje experimental y estrategia de calentamiento

❖ 5. El calentamiento de los nanofluidos se llevó a cabo en

varios pasos. Las muestras se prepararon a 0, 25, 50, 75,
100, 125 y 150 µmol/L.
❖ 6. Se fijaron tres fibras ópticas en la pared interior de la
cubeta evitando la iluminación directa de los sensores en la
punta de la fibra óptica.
❖ 7. El láser se encendió a su máxima potencia (500 mW
para 532 nm, 300mW para 450 nm) e iluminó cada
muestra durante 10 minutos.
❖ 8. El registro de la temperatura se llevó a cabo con un
software de adquisición de datos automático. La cámara
termográfica registró la imagen térmica IR de la muestra
después de 10 minutos.
27
Investigación experimental de calentamiento con láseres
B. Láser de luz púrpura de 450 nm

Los perfiles de temperatura de las suspensiones de AgNP, AuNP y AgNW después de 10 minutos de calentamiento
con láser de 450 nm se presentan en la Fig. 4. El área de la cubeta llena de muestras está marcada con un rectángulo
en línea punteada. Para las dispersiones de AgNP y AuNP, se observa que con el aumento de la concentración,
hay una tendencia a que el brillo del área de la muestra aumente. Sin embargo, en el caso de las dispersiones de
AgNW, el brillo no presenta demasiadas diferencias. Además, se observa que la temperatura no es uniforme en la
zona de la muestra. La región que va de la capa media a la superior parece más brillante, lo que indica que la capa
superior está más calentada.

28
Investigación experimental de calentamiento con láseres
C. Láser de luz verde de 532 nm
En la Fig. 6 se presentan los perfiles de temperatura de las AgNPs, AuNPs y AgNWs tras 10
minutos de calentamiento con láser de 532 nm. Se pueden hacer observaciones similares a las
del calentamiento con láser de 450 nm.

29
Investigación experimental de calentamiento con láseres
D. Estudio en función del tamaño de las AuNPs

Para estudiar el efecto fototérmico dependiente del tamaño, también se realizaron mediciones en muestras de
AuNPs con un tamaño mayor de 50 nm que la muestra de 20 nm estudiada anteriormente. Los aumentos de
temperatura se representan en la Fig. 8.

Se observa en la Fig. 8(a) que para el calentamiento con láser de 450 nm, el aumento máximo de temperatura
para la capa superior es de 9.3 ◦C, que es un par de centígrados menor que el de la dispersión de AuNP de 20nm.
Por el contrario, el aumento de temperatura de la capa inferior es ligeramente superior al de la dispersión de 20
nm de AuNP. Según la Fig. 8(b), el efecto de calentamiento del láser de 532 nm es más importante que el del láser
de 450 nm. El aumento de temperatura máximo para la capa superior es de 23.7 ◦C. Sin embargo, sigue siendo
inferior al de la dispersión de 20 nm de AuNP. De nuevo, el aumento de la temperatura de la capa inferior es
ligeramente superior al de la dispersión de 20 nm de AuNP.

30
Simulación Teórica
● Se simuló usando un programa proporcionado por Pennsylvania State
Centre for Nanoscale Science.

● La simulación se basó en la teoría de Mie, usando el modelo teórico para

explicar el efecto de dependencia con la concentración.

● Radio considerado: 2.5 nm, 5 nm and 7.5 nm.

● Longitudes de onda usadas: 400 nm a 600 nm.

31
Simulación Teórica

● La simulación fue casi

consistente con los resultados
experimentales.
● Con radio de 0-25 nm para las
partículas, se observa el efecto
dependiente del tamaño
esperado.
● Con radio mayor a 25 nm, el
efecto de absorción no
necesariamente incrementa
con el tamaño, llegando a un
pico en 40 nm de radio.
32
Simulación Teórica

● La simulación fue casi

consistente con los resultados
experimentales.
● Con radio de 0-25 nm para las
partículas, se observa el efecto
dependiente del tamaño
esperado.
● Con radio mayor a 25 nm, el
efecto de absorción no
necesariamente incrementa
con el tamaño, llegando a un
pico en 40 nm de radio.
33
Simulación Teórica
Hay discrepancia entre los resultados simulados y
experimentales.

34
Simulación Teórica

La teoría de Mie indica que las AuNPs con radio de 25 nm deben absorber más energía que con
radio de 10 nm. El experimento indicó lo contrario.
Se le puede atribuir a 2 factores:
● El número de partículas en la muestra de AuNPs con diámetro grande es menor que el
número con diámetro pequeño, dada una misma concentración molar. Se recomienda,
entonces, usar concentración por número de partículas para analizar el efecto de
dependencia al tamaño.
● La eficiencia de conversión fototérmica es dependiente del tamaño. Ésta eficiencia para
las AuNPs decreció de 0.8 a 0.65 cuando el diámetro de las AuNPs incrementó de 5 nm a
50 nm.
Por lo tanto, aunque las partículas más grandes absorben más, el efecto de absorción
disminuye y puede ser por los factores previos.

35
Simulación Teórica
La intensidad disminuye conforme aumenta la profundidad en la
muestra, y disminuye más rápido conforme aumenta el factor de
atenuación. También cambia la absorción dependiendo de la
profundidad.

36
Resultados y Discusión

● Con láser de longitud de onda fija, la eficiencia de absorción varía con el material.

○ PERO mayor factor de atenuación causa menos calentamiento en capas interiores y los tumores
no se calientan uniformemente.

○ Materiales con mayor factor de atenuación se usan para tumores superficiales.

● A distintas longitudes de onda, los tejidos exhiben distinta atenuación. Se debe

escoger un láser de longitud de onda adecuada.

37
 Conclusiones
Se compararon suspensiones de AuNP, AgNP y AgNW. Se observó que
las suspensiones de AuNP se calientan más por láseres de 450 nm y 532
nm que las de AgNP. Además, AgNW son díficlmente calentadas por las
dos longitudes de onda . Inclusive, las muestras no se calientan
uniformemente, exhiben un fenómeno de calentamiento por capas. El
estudio de AuNP’s por tamaño indicó que el que la eficiencia de
absorción de nanopartículas únicas es proporcional al diámetro en el
rango de los 0-50 nm.
El modelo teórico predice que para una profundidad dada existe un
coeficiente de atenuación donde la proporción de calentamiento tiene
un pico. El tamaño de un tumor que puede ser tratado es entonces
determinado por el coeficiente optimizado de atenuación.
38
Referencias del Artículo
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