PRÁCTICA 2

HOMOGENIZACIÓN, CENTRIFUGACIÓN Y CROMATOGRAFIA

Vazquez Flores Luis Enrique

Cuestionario previo.

1. Importancia de los métodos utilizados en Bioquímica para el análisis de

una muestra.
Los experimentos que se llevan a cabo en un laboratorio de Bioquímica tienen como objetivo
separar, caracterizar, modificar o cuantificar las biomoléculas. En la mayoría de los casos se trabaja
con muestras complejas que contienen un gran número de biomoléculas distintas. Por este
motivo, los métodos experimentales utilizados en Bioquímica tienen que ser altamente específicos
y su funcionamiento se basa en las propiedades físicas, químicas o bioquímicas de las
biomoléculas. El conocimiento cada vez más detallado de la estructura y función de las
biomoléculas permite el desarrollo de nuevos y sofisticados métodos experimentales. A su vez, los
nuevos métodos permiten adquirir nuevos conocimientos bioquímicos.

2. Homogeneización y sus diferentes tipos.

La homogeneización es el proceso de conversión de dos inmiscibles en líquidos (es decir, que no
son solubles en todas proporciones, uno en otro) en una emulsión; Cuando los dispersos y las
continuas sustancias son líquidos, el coloide se llama una emulsión). A veces dos tipos de
homogeneización se distinguen: homogeneización primaria, cuando la emulsión es creada
directamente de líquidos separados; y homogeneización secundaria, cuando la emulsión se crea
mediante la reducción de tamaño de gotas en una emulsión existente. Homogenización se logra
mediante un dispositivo mecánico llamado un homogeneizador.

3. ¿Qué son y para qué sirven el potter y el virtis?

Son técnicas de homogeneización.

Homogeneización de Potter: Técnica eficiente para la unificación de tejidos blandos como lo son el
cerebro y el hígado. Consta de un tubo de vidrio resistente, con superficie interna esmerilada, en
el que se acopla un émbolo de vidrio esmerilado o de politetrafluoroetileno que se hace rotar a
mano o mecánicamente al tiempo que el tubo sube y baja alternativamente. La homogeneización
se produce por las fuerzas de cizalla que se ejercen en la zona de contacto entre el tubo y el
émbolo. Así pues, para los tejidos blandos el potter proporciona una efectividad en la
conservación de distintas y específicas propiedades de dichas muestras biológicas.

Homogeneización con virtis: Por otra parte, la homogeneización con virtis resultó ser muy útil para
los tejidos semiduros ya que estos mismos tiendes a ser muy elásticos y resistentes a la vez y es
por esta propiedad que son muy difíciles de homogeneizarlos con el empleo del mortero o Potter,
el virtis al consistir esencialmente en una serie de hojas afiladas propulsadas a grandes velocidades
brinda fuerzas efectivas de corte para este tipo de tejidos semiduros, ayudando también en
algunos casos a la conservación intacta de las propiedades de las muestras.

4. Fundamento de la centrifugación.
La centrifugación es una técnica de separación que se utiliza para aislar o concentrar partículas
suspendidas en un líquido aprovechando la diferente velocidad de desplazamiento según su
forma, tamaño o peso al ser sometidas a una fuerza centrífuga .

5. Explique el fundamento de la cromatografía

La cromatografía comprende un conjunto de técnicas que tienen como finalidad la separación de
mezclas basándose en la diferente capacidad de interacción de cada componente en otra
sustancia. De forma general, consiste en pasar una fase móvil (una muestra constituida por una
mezcla que contiene el compuesto deseado en el disolvente) a través de una fase estacionaria fija
sólida.

6. Describa como se realiza la cromatografía en papel y en columna.

En papel.

En la cromatografía sobre papel, las interacciones del soluto con el papel hacen que los
compuestos se desplacen a velocidades diferentes.

Una pequeña mancha de disolución que contiene la muestra se aplica sobre una tira de papel
cromatográfico a una distancia aproximada de un centímetro de la base. La muestra es adsorbida
en el papel. Esto significa que la muestra entra en contacto con el papel y puede establecer
interacciones. El papel es sumergido en un disolvente adecuado (etanol o agua) e introducido en
un contenedor cerrado. A medida que el disolvente asciende por el papel, encuentra la muestra
que empieza a viajar por el papel con el disolvente. Los diferentes compuestos de la muestra
recorren distancias diferentes dependiendo de la fuerza de sus interacciones químicas con el
papel. La cromatografía en papel requiere algún tiempo, habitualmente se necesitan varias horas
para completarse.

En columna

Es una técnica de purificación, puesto que permite aislar los compuestos deseados de una mezcla.
Las cromatografías en columna se suelen denominar según la naturaleza de la fase móvil:
“Cromatografía líquida” y “Cromatografía gaseosa”. En las cromatografías en columna la fase móvil
se desplaza sobre la fase estacionaria por acción de la gravedad y/o por aplicación de una presión
para que sea posible la circulación del fluido por el interior de la columna de diámetro pequeño.

7. . Rf y su utilidad
Es la relación que existe entre la distancia recorrida por el centro de la mancha y la distancia
que, simultáneamente, ha recorrido la fase móvil. Este parámetro puede tomar valores entre 0
y 1. Cuanto más cercano a 0 es el valor de Rf significa que el analito tiene afinidad por la fase
estacionaria (es muy retenido) mientras que cuanto más cercano a 1 sea el valor de Rf
significa que el analito tiene más afinidad por la fase móvil, por lo tanto, es poco retenido por
la fase estacionaria.

Distancia recorrida por el analito ( A)

RF =
Distancia recorrida por la FM

Ejemplo de cálculo de Rf

8. Pigmentos que se encuentran presentes en las hojas de espinaca

Las hojas de espinaca poseen β-caroteno y clorofila como principales componentes responsables
del color de las mismas y cantidades menores de xantofilas. El β-caroteno tiene color amarillo,
mientras que la clorofila tiene coloración verde, presentado dos variedades la a y la b que difieren
en que la tiene un grupo metilo la b un grupo formilo en el anillo de porfirina. La pérdida del ion
Mg++ en las clorofilas conduce a la formación de feofitina (a y b). Por otro lado, las xantofilas son
una familia de compuestos, derivados de los carotenos con átomos de oxígeno en la estructura y
que en la hoja de espinaca se encuentran en menor proporción que β-carotenos y clorofila.

Componentes responsables del color en la espinaca

REFERENCIAS
 McClements, David J. (2008). Basado en lípidos, emulsiones y emulsionantes. En
Akoh, Casimir C.; Min, David B. Alimentos lípidos: Química, nutrición y
biotecnología. Ciencia y tecnología (tercera Ed.). Boca Ratón, FL: CRC. p. 77.
ISBN978-1420046649
 (Mtz, 2022), https://www.clubensayos.com/Ciencia/Centrifugacion-y-
homogenizacion/2734627.html
 http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/index1.html
 https://www.dequimica.info/separacion-pigmentos-hoja-espinaca