Ingeniería Bioquímica I

Módulo I: Biotecnología 2

TECNOLOGÍA DE LAS
FERMENTACIONES o
los BIOPROCESOS

Curso 2022
 Clasificación de los procesos
fermentativos o biotecnológicos
❑Fermentaciones o cultivos líquidos sumergidos (FLS)
El cultivo se desarrolla en biorreactores en medio líquido
con sustratos disueltos o lodos. Los organismos nadando
libremente en el medios líquidos nutritivos.
❑Fermentaciones o cultivos en sustrato sólido (FSS)
El cultivo se desarrolla sobre partículas húmedas que
constituyen el sustrato (Fte de C, N) con ausencia o casi
ausencia de agua libre. Los organismos se desarrollan como
films, agregados, películas, sobre las partículas
❑Cultivos en biofilm (CB)
El cultivo se desarrolla en forma de agregados o films sobre
soportes que constituyen superficies inertes (o sustratos), o
como agregados sumergidos o parcialmente sumergidos en
medios nutritivos (en inter-fases S-L/ A-L/ A/S). Los
organismos (por lo general un consorcio) se desarrollan
como films o agregados sobre superficies / interfases /
sumergidos
❑Cultivos en biofilm
 ❑Cultivos en biofilm
Para la obtención de productos
biotecnológicos (antibióticos, enzimas,
biomasa, etc) empelando bacterias,
levaduras, hongos filamentosos se ha
utilizado por lo general Cultivos líquidos
o FSS

Cuando se emplean cultivos puros

de una sola especie microbiana
Los microorganismos en la naturaleza no crecen solos
como cultivos puros

“Los cultivos puros solo existen en el

laboratorio “
“Los microorganismos en la naturaleza
viven en comunidades complejas”
¿Cómo viven los microorganismos en la
naturaleza?
viven adheridos a superficies dentro de
ecosistemas estructurados y NO flotando
libremente

Microorganismos viven en comunidad

Los organismos se adhieren a superficies en

ambientes húmedos mediante la secreción de
sustancias gomosas y viscosas

Biofilms microbianos
 Biofilms microbianos en la naturaleza
Superficies o interfaces
Bióticas Abióticas
Tejidos, células humanas, vegetales Materiales inertes, tierra, metales, plásticos,,
piedras, rocas, implantes médicos, superficies hielos,
aguas,
Población microbiana que va a colonizar

Una sola especie Múltiples especies, tipos de

organismos
consisten casi siempre en mezclas ricas de
muchas especies de bacterias, hongos,
algas, levaduras, protozoos, otros
microorganismos
Humedad y Nutrientes

Comunidades agregados o biofilms

 ¿Qué son los biofilms microbianos?

Los biofilms son consorcios estructurados de

células microbianas que se mantienen unidos por
hilos moleculares (azucaradas), denominados
colectivamente "sustancias poliméricas
extracelulares" o "EPS". Las células producen EPS y
se mantienen unidas y desarrollan comunidades
complejas tridimensionales, altamente resistentes.
 Comunidades microbianas ¿Dónde las encontramos?
Los biofilms microbianos constituyen la principal biomasa viviente en la Tierra
Se encuentran en todas partes en la tierra, incluso en ambientes extremos
Biofilms, pellets o agregados se encuentran
adheridos a las superficies sólidas o en la interface o liq/aire

Tierra, plantas Agua Cuerpo humano, En materiales

patógenos y saprófitos industrias

Bacterial biofilms: from the natural environment to infectious diseases. L-H Stoodley, W.
Costerton and P. Stoodley, Nature reviews microbiology 2, 2004
Biofilms - ¿Qué impacto tienen en nuestras vidas?

Figoli y col. Revista de la AQA, en prensa

 Biofilms - ¿Qué impacto tienen en nuestras vidas?
Efectos
Desarrollo de sistemas de tratamientos de agua
beneficiosos
Filtros como soporte para la adhesión y el crecimiento
microbiano en forma de biofilm adaptado para el consumo
de la materia orgánica presente en el agua. El resultado
final de la filtración biológica es una conversión de carbono
orgánico en el agua en la biomasa bacteriana

Bioremediacion: Remediación de suelos, derrames de petróleo y combustibles y aguas

subterráneas contaminados
Los consorcios microbianos (levaduras, hongos filamentosos, bacterias)
pueden metabolizar, descomponer o degradar contaminantes orgánicos
tóxicos a sustancias menos tóxicas, inocuas, o degradables: naftas, aceite
combustible, hidrocarburos del petróleo, compuestos orgánicos clorados y
nitroaromáticos. Biestimulación (siembra de organismos cultivados en el l

Alimentos - kefir
Fertilizantes,
Comunidad de bacterias,
Fijación de
levaduras, polisacáridos
Nitrógeno
https://www.cs.montana.edu/webworks/projects/stevesbook/index.html
 Biominería Efectos
beneficiosos

La biominería comprende una serie de procesos microbiológicos

por parte de consorcios que pueden ser utilizados para la
recuperación de metales a partir de los minerales.

Biolixiviación: El metal de interés se

encuentra formado sulfuros, la acción
microbiana solubiliza y libera Cu, Co, Zn,
Mo, Ni, Uranio (de baja ley)

Biooxidación: el metal de interés se

encuentra ocluido dentro de una matriz.
El consorcio microbiano degrada la matriz
y da acceso a otros agentes lixiviantes .
Para obtención de Au y Ag
Biofilms - ¿Qué impacto tienen en nuestras vidas?
Procesos industriales
Efectos
perjudiciales

biofilm mixtos principalmente

hongos filamentosos y bacterias en
Corrosión y
menor proporción
obstrucción
daños en cañerías y
equipamiento. Líneas
de agua y aire
 Biofilms - ¿Qué impacto tienen en nuestras vidas?
Efectos
Contaminación alimentos e industria alimenticia perjudiciales

Los biofilms pueden formarse en casi

cualquier lugar de una planta de
procesamiento de alimentos y su
aparición constituye una
amenaza para la seguridad alimentaria

Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes, Salmonella spp.,

Pseudomonas spp., Campylobacter spp o Bacilllus spp. E. coli,

•Presencia de microorganismos patógenos

•Contaminación del producto, pérdida de calidad y vida
útil del mismo
•Obturación de conducciones y tuberías
•Obturación y deterioro de membranas, produciendo la
reducción de permeabilidad.
 EJEMPLOS DE TECNOLOGÍAS DE PRODUCCIÓN
BIOMASA O PRODUCTOS BASADAS EN CULTIVOS
EN BIOFILM

Obtener Metales en las minas

Tratar efluentes como suelos o aguas

Producir vacunas bacterianas para peces

Producir bacterias para formular alimentos probióticos

 Sistemas de cultivo en Biofilm

Reactores tipo columna con rellenos

empaquetados

Reactores tanque agitados modificados

 Plataforma de cultivo en biofilm
Soportes abióticos en biorreactores en columna

Biofilm microbianos sobre perlas

Entrada medio de cultivo Salida aire de polipropileno

Soportes 6 cm
abióticos
como perlas, 40 cm
tierras,
arenas

Entrada aire
filtrado
Salida medio de cultivo

-Puede ser OPERADOS en condiciones batch, flujo contínuo o

semi-contínuo.
- Cultivos AXÉNICO (un solo tipo de microorganismo) o MIXTO
(couminidades de microorganismos)
Plataforma de cultivo en biofilm en columnas con distintos
rellenos (perlas de diferentes materiales, arenas, tierras)

filtro de
aire

Mangueras de
siliconas

Flujo

Columna
Reservorio para
Bomba descechos
Reservorio con
peristáltica
medio de cultivo
 Reactores en columna empaquetados
Estudio de la biorremediación de suelos y aguas subterráneas
contaminados con hidrocarburos aromaticos
Soportes abióticos:
perlas, tierras,
arenas

Soportes abióticos
cubiertos con el
sustrato de estudio,
por ejemplo
naftaleno

Microorganisos: Cultivo de comunidades microbianas degradadoras

de naftaleno, antraceno, fenantreno u otros hidrocarburos
policíclicos aromáticos o un microorganismo en particular
➢ Por qué se usa el biofilm como modelo de estudio?
➢ ¿Dónde buscar las poblaciones?
➢ ¿Qué podría estudiar?
Otros soportes abióticos empleados para la
formación de biofilm
Ensayos de adhesión y crecimiento sobre soportes

Evaluación de la
adhesión de biomasa
con colorantes como
cristal violeta
Dos columnas de vidrio rellenas con perlas de polipropileno (30 g )
“Ver si se cumplen las 3 ETAPAS de los bioprocesos”
“C” contiene el
inóculo: Suspensión
de un cultivo de 10
horas a 37 oC.
“A” solución de
inductor

Estufa “B”, contiene solución

climatizada a para lavado de los
36 °C. cultivo al finalizar el
proceso.
2h a un caudal de 20
ml/h . Remoción del
medio de cultivo
remoción y de las
células planctónicas
(libres)
Bomba peristáltica para el ingreso del
medio de cultivo fresco 20 ml/h
 Reactores tanque agitados modificados

Reactor de biofilm CDC

 Reactores tanque agitados con cupones

Reactor de biofilm CDC

 -Modelo de tanque agitado con cupones
- Modelo de estudio para investigación
- Alto shear (agitación y aireación controladas)
- Operar en batch y batch alimentado o continuo
- Cupones de varios materiales al mismo tiempo
(policarbonato, acero, vidrio…)
Permite monitorear y controlar de condiciones de
formación del biofilm:
•velocidad de agitación, temperatura, tiempo de
residencia, etc.
•Permite estudiar al mismo tiempo las células
adheridas y planctónicas
•Los cupones pueden ser muestreados a lo largo del
tiempo en un proceso de varios días
•Se pueden aplicar variedad de técnicas para
evaluar el efecto de diferentes variables del entorno
(fuente de C, N, presencia de inductores, etc.)
Producir biofilms para formular vacunas bacterianas
Ej. Stretpococcus (patógeno en peces)

Es una bacteria que puede

ocasionar infecciones muy
graves en peces (Tylapia)
Bacteria Gram positiva que s
dispone en cadenas

En pejerrey
un patógeno
común es la
Aeromonas
hydrophila
bacilo Gram
negativo
 Producir para formular vacunas bacterianas
Ej. Stretpococcus (patógeno en peces)
2) Producir algún antígeno (alguna
1) Producir el
de las proteínas de la cubierta
microorganismo
empleando una bacteria (E. coli) o
una levadura (Pichia pastoris )
RECOMBINANTES

3) Purificar
la proteína

Encapsularla en
Cosechar la Cosechar la biomasa, las nanopartículas
biomasa, bacteria bacterias o levaduras que de alginato,
atenuarlo por calor actúan como un encapsulador quitosano y
del antígeno (proteína) copolímeros
4) Crecimiento en biofilm de bacterias sobre superficies y su
aplicación para la obtención de una vacuna oral para peces

¿Por qué un biofilm?

¿Qué podría cultivar en biofilm?