Virus 2010, 2, 1681-1703; doi: 10.

3390 / v2081681
ACCESO ABIERTO

virus
ISSN 1999-4915
www.mdpi.com/journal/viruses

Revisar

Células productoras de adenovirus

Imre Kovesdi y Susan J. Hedley *

VectorLogics, Inc., 550 11th Street South, Birmingham, AL35294, EE. UU.; Correo
electrónico: ikovesdi@vectorlogics.com

* Autor a quien debe dirigirse la correspondencia; Correo electrónico: shedley@vectorlogics.com ; Tel .: +

1-205-933-8378; Envíe por fax: + 1-205-933-5836.

Recibido: 16 de junio de 2010; en forma revisada: 30 de julio de 2010 / Aceptado: 13 de agosto de 2010 /

Publicado: 16 de agosto de 2010

Resumen: Los vectores de adenovirus (Ad), en particular los del serotipo 5, son muy atractivos para una
amplia gama de aplicaciones de terapia génica, vacunas y viroterapia (como se analiza con más detalle
en este número). El virus Ad5 de tipo salvaje puede replicarse en numerosos tipos de tejidos, pero para
utilizar vectores Ad con fines terapéuticos, el genoma viral requiere modificación. En particular, si el
genoma viral se modifica de tal manera que se interfiere con el ciclo de vida viral, se requiere una línea
celular productora específica para proporcionar transcomplementación para superar la modificación y
permitir la producción viral. Esto puede ocurrir de dos formas; uso de una línea celular productora que
contiene secuencias adenovirales específicas incorporadas en el genoma celular para
trans-complementar, o uso de una línea celular productora que complementa naturalmente el genoma
del vector Ad modificado. Esta revisión se concentra en las líneas celulares productoras que
complementan los vectores adenovirales no replicantes, comenzando con la línea celular histórica
HEK293 desarrollada en 1977 para los vectores Ad de primera generación. Además, se aborda el
problema de la contaminación por adenovirus competentes para la replicación (RCA) en preparaciones
virales a partir de células HEK293, lo que conduce al desarrollo de líneas celulares alternativas. Además,
se discuten nuevas líneas celulares para vectores Ad más complejos y vectores Ad de serotipos
alternativos.

Palabras clave: líneas celulares productoras; adenovirus; Vectores publicitarios; RCA

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1. Células productoras para vectores publicitarios de primera generación que no se replican

Muchos vectores terapéuticos Ad5 no se replican (o replican deficientes) por lo que el genoma se elimina en la
región E1 a menudo en combinación con la región E3 para proporcionar espacio para casetes de expresión génica
alternativos (vectores Ad de primera generación, ver Figura 1). La región E1 codifica proteínas necesarias para la
expresión de los otros genes tempranos y tardíos, iniciando así el ciclo de vida viral. Por lo tanto, cuando la región E1
se reemplaza con un casete de expresión para producir el producto génico que es útil en terapia, como genes
suicidas, antígenos y anticuerpos, se requiere una línea de células productoras que contenga secuencias de
adenovirus E1 para complementar esta región. Sin embargo, la región E3, que codifica productos que contrarrestan
los mecanismos de defensa del huésped, es prescindible y no es esencial para la replicación viral. in vitro, por lo que
no es necesario transcomplementar para E3 [1].

Figura 1. Estructuras del genoma de vectores adenovíricos de primera y segunda generación y de alta capacidad. Los

promotores se indican mediante triángulos negros, las unidades de transcripción temprana y tardía se indican

mediante flechas gruesas y delgadas, respectivamente. Las repeticiones de terminales invertidas (ITR) se indican

mediante cuadrados negros y se indica la señal de empaquetado, Ψ. Las secuencias no adenovirales en el genoma de

alta capacidad se indican con una línea delgada, mientras que los transgenes en todos los genomas se indican con

recuadros con rayas diagonales. a Se utiliza una gran cantidad de sistemas diferentes con una capacidad adicional

específica. Para los vectores de segunda generación, se utilizó la deleción de 3 loci de genes y un tamaño de genoma

conservador del 103% para estas estimaciones.

Para complementar la trans por la falta de E1, la línea celular histórica ha sido HEK293 [2, 3] (Tabla 1). La línea
celular de riñón embrionario humano (HEK) 293 se desarrolló hace más de 30 años mediante la inserción de la
secuencia E1A y E1B [2], desde los nucleótidos (nt) 1 al 4344, en el cromosoma 19 en 19q13.2 [4].
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Tabla 1. Líneas celulares productoras complementarias E1 una.

Línea celular Secuencia de anuncios de células parentales Promotor 3 'Fin Árbitro

Requisito Requisito
HEK293 Humano 1 hasta 4344 No aplica N / A [2]
embrionario (N / A)

riñón (HEK)
911 Humano 79 - 5789 N/A N/A [5]
embrionario

retinoblastos

(SU)
pTG6559 A549 505-4034 muPGK Conejo • - [6]
promotor gen de la globina

poliA
PER.C6 SU 459-3510 huPGK Hepatitis B [7]
promotor virus poliA
GH329 HeLa 511-3924 huPGK sí [8]
promotor

N52.E6 Primario 505-3522 muPGK Empalme SV40 [9]

humano promotor aceptor y
amniocitos poliA
HeLa-E1 HeLa 542-3526 CMV bGH poliA [10]
UR HEL 299 459-3510 RSV-LTR TK poliA [11]
VLI-293 B HEK293 1 al 4344, N/A Hepatitis B [12]
inserción de virus poliA en

espaciador en 3510 insertar

a
Estas líneas celulares productoras de E1 contienen secuencias E1A y E1B contiguas. Dos líneas celulares productoras de E1

adicionales, que tienen E1A y E1B insertadas por separado [13, 14], se analizan en el cuerpo del texto como un método

alternativo a este método histórico.

B
Aunque esta línea celular es nueva, todavía contiene las secuencias E1A y E1B contiguas con un poliA del virus de la

hepatitis B en el extremo 3 'que termina la transcripción de E1B.

La desventaja de la línea celular HEK293 es el potencial de generación de contaminación por adenovirus de

replicación competente (RCA) dentro de la preparación viral. Esto puede ocurrir porque muchos vectores Ad de
primera generación se eliminan de nt 400 a 3500 y, por lo tanto, aún conservan una homología significativa con
el ADN celular, lo que permite que se produzca un evento de recombinación de doble cruce [15].
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(Figura 2). Si bien la ocurrencia de RCA es muy baja en los primeros pases del virus [16], esto es problemático para la
producción viral a gran escala y aplicaciones clínicas [15-19] debido a problemas de seguridad en un producto
terapéutico. En 2001, la FDA estableció que la preparación de vectores adenovirales con replicación defectuosa
contiene menos de 1 RCA en 3 x 10 10 partículas virales (Comité Asesor de Modificadores de Respuesta Biológica). A
pesar de este problema, HEK293 fue y sigue siendo una importante línea de células huésped para el desarrollo de
vectores de anuncios, incluido el desarrollo de bancos de células maestras y el desarrollo y optimización de los
procesos de fabricación de anuncios [20].

Figura 2. Generación de RCA en células HEK293. Las regiones complementarias de la secuencia de Ad5
en el vector y el genoma HEK293 están alineadas en la parte superior de la figura. Estas regiones
permiten que se produzca la recombinación homóloga y el rescate de adenovirus competentes
recombinantes.

En los años 90, se estaban desarrollando líneas celulares alternativas productoras de E1 (Tabla 1). Uno de los
primeros fue la línea celular 911 generada por la incorporación de Ad5 nt 79 - 5789 en el genoma de células de
retinoblastos embrionarios humanos (HER) [5] mediante transfección de plásmidos. Se determinó que la línea celular
911 superaba a HEK293 en la formación de placas y la obtención de rendimientos y, en consecuencia, se convirtió en
otra línea celular favorecida. A pesar del atractivo de estas características, el nivel de contaminación por RCA se
mantuvo similar al de HEK293. Casi al mismo tiempo, se desarrolló una línea celular que complementa a E1 a partir de
células de carcinoma de pulmón A549 [6]. Esta línea celular había incorporado una secuencia de Ad5 reducida
(nt505-4034) bajo la regulación de un promotor no Ad, fosfoglicerato quinasa (PGK). Sin embargo, la producción de
virus en esta línea celular fue escasa, aunque no está claro si esto se debe a una deleción de 1 pb en la región E1B,
aboliendo la expresión de la proteína E1B-55kDa u otra razón. A pesar de esto, la estrategia general de utilizar
secuencias más pequeñas de Ad5 E1 condujo al desarrollo de la línea celular PER.C6 [7].
Al igual que la línea celular 911, PER.C6 también se basa en células HER. La secuencia de Ad5 incorporada en
el genoma celular eran las secuencias que codifican E1A- y E1B, nt 459-3510, bajo el control del promotor PGK
humano para compensar la eliminación del promotor E1A endógeno 5 '. Además, la región codificante de la
proteína pIX de la cápside menor que está en la región 3 'que sigue a la región codificante de E1B 55-kDA
también se eliminó en esta construcción. El fragmento más pequeño de la secuencia de Ad5 así incorporado en
la línea celular tiene una homología limitada con muchos vectores adenovirales deficientes en E1 y la
recombinación homóloga doble no es posible cuando se usa un vector Ad diseñado apropiadamente.
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eliminando así RCA. Sin embargo, estudios posteriores indicaron que aún puede producirse una recombinación no convencional poco común si el

genoma del vector Ad no coincide perfectamente. Solo es necesario que exista un pequeño tramo de homología entre el ADN celular y el genoma del

vector para permitir la recombinación [15] (Figura 3), lo que da como resultado un ARCA atípico o pseudo. Se determinó que si bien la partícula

contiene secuencias E1 intactas, el virus no puede replicarse por sí solo, ya que las deleciones genómicas también ocurren en otras partes del vector y

se han denominado partículas virales positivas para E1 dependientes de ayuda (HDEP) [15,21]. Estos factores indican que el diseño del vector Ad

todavía requiere la consideración y eliminación de cualquier fragmento superpuesto para evitar que estos eventos ocurran incluso cuando se usan

células PER.C6. Sin embargo, PER. C6 es probablemente la línea celular mejor diseñada y más favorable para el desarrollo de vectores Ad5 de primera

generación para el desarrollo clínico hasta la fecha. Se han establecido y evaluado bancos de células maestras PER.C6 para la producción de vectores

cGMP (revisado [22]). Una desventaja importante de esta línea celular es que, a diferencia de HEK293, que está disponible más libremente para la

comunidad científica, PER.C6 actualmente tiene costos / usos de licencia estrictos que impiden que muchos laboratorios trabajen con esta línea celular.

Además, la línea PER.C6 se considera menos robusta que la línea celular HEK293 ya que es menos adaptable al cultivo libre de suero para la producción

de vectores Ad a gran escala. Una desventaja importante de esta línea celular es que, a diferencia de HEK293, que está disponible más libremente para

la comunidad científica, PER.C6 actualmente tiene costos / usos de licencia estrictos que impiden que muchos laboratorios trabajen con esta línea

celular. Además, la línea PER.C6 se considera menos robusta que la línea celular HEK293 ya que es menos adaptable al cultivo libre de suero para la

producción de vectores Ad a gran escala. Una desventaja importante de esta línea celular es que, a diferencia de HEK293, que está disponible más libremente para la c

Figura 3. Efecto del diseño vectorial sobre la producción libre de RCA en la línea celular PER.C6. En vector
# 1 hay un tramo corto de homología con la secuencia PER.C6 Ad5 que permite la recombinación
homóloga. Esto da como resultado una RCA atípica. Cuando el vector no tiene homología (Vector
nº 2) no se produce ninguna recombinación homóloga y la producción viral está libre de RCA.
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Debido al problema de la RCA y al problema de la licencia potencial, varios otros laboratorios han desarrollado
células complementarias E1 que contienen segmentos de ADN E1 adenovíricos más pequeños que las células HEK293
y pueden propagar vectores a títulos altos similares a los observados en HEK293 [8-11] (Tabla 1). Todas estas líneas
celulares tienen homología de secuencia reducida o eliminada entre el ADN celular y el genoma viral para evitar la
oportunidad de que se produzca el cruce de recombinación homóloga doble. Estas líneas celulares se basan en
amniocitos primarios humanos, células HEL 299 de pulmón embrionario humano o HeLa con la región E1A
incorporada impulsada por un promotor alternativo (como se detalla en la Tabla 1). Desafortunadamente, la línea
celular HeLa no está permitida para uso comercial debido a su alta tumorigenicidad.
Se ha cuestionado el requisito de la secuencia pIX en las células productoras de vectores de anuncios
de primera generación [6, 8]. De las líneas celulares más recientes que contienen secuencias E1A / E1B
contiguas, solo PER.C6 y UR carecen de secuencias pIX. La presencia de secuencias de pIX parciales en
otras líneas celulares podría influir potencialmente en el RCA, sin embargo, se ha informado que todas
tienen una reducción significativa de RCA [8-10] ya que se requiere una recombinación no homóloga en el
extremo 5 'con respecto a las líneas celulares futuras La secuencia pIX que se está desarrollando
probablemente debería excluirse. Se ha descrito que pIX tiene muchas funciones diferentes (revisado
[23,24]), incluido el empaquetamiento del genoma [25,26] que conduce a partículas infecciosas / no
infecciosas [26] y como activador de la transcripción [27,28]. Se cree que pIX es prescindible para la
replicación viral [27, 28] aunque este puede ser solo el caso en HEK293 en lugar de líneas celulares que
carecen de secuencias pIX como PER.C6 [24, 29]. Sin embargo, el problema principal con pIX es que es
una proteína de la cápside menor, y aunque la ausencia de pIX no afecta el ensamblaje de la cápside, la
termoestabilidad se reduce significativamente debido a la falta de incorporación de la cápside [30]. Lo
más importante es que se requiere pIX para estabilizar la cápside y proporcionar la resistencia a la
temperatura que se necesita para la fabricación comercial. Por lo tanto, es esencial que pIX se exprese a
un nivel suficientemente alto para que la incorporación de la cápside logre un vector comercialmente
viable. En el caso de los anuncios de primera generación, esto es preferible del vector,

Además de la línea celular HEK293 que se generó con ADN de Ad5 cortado, la estrategia principal para generar
líneas celulares productoras para la complementación trans de E1 ha involucrado la inserción de la secuencia
contigua de E1A y E1B en el genoma de la línea celular utilizando sistemas basados en plásmidos de ADN. Sin
embargo, se están adoptando enfoques nuevos y novedosos para reducir y eliminar el RCA, mientras se mantiene la
complementación trans. Un enfoque utilizó la integración de genes adenovirales E1A y E1B en el genoma A549 en
ubicaciones separadas [13]. Esto se logró mediante la coinfección de células con dos vectores retrovirales, uno para
cada gen. Se demostró que dos de los clones estables obtenidos, Ac51 y Ac139 eran complementarios de E1 y
apoyaban la producción de adenovirus defectuosos en E1 sin generación de RCA. Además, los niveles de títulos
alcanzados coincidieron con los observados en las células HEK293 y PER.C6. En una estrategia similar, se generó una
línea de células productoras, SL0003, mediante la incorporación secuencial de los genes E1A y E1B en las células A549
[14]. En lugar de utilizar vectores retrovirales para la administración, esta estrategia utilizó plásmidos de ADN. Al igual
que con Ac51 y Ac139, SL0003 podría soportar una producción de alto nivel de títulos sin la generación de RCA.

Se está explorando un enfoque único en nuestro propio laboratorio como un medio alternativo para superar la
RCA. En este caso, la secuencia de Ad5 en las células HEK293 se modificaría para contener una secuencia espaciadora
de ADN grande de ~ 8 kb, insertada en nt3510 (Figura 4). Para lograr esta modificación, el espaciador
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El plásmido está diseñado para contener secuencias E1 de Ad5 homólogas alrededor de la

secuencia espaciadora para permitir la recombinación homóloga en el genoma HEK293. La
inserción de ADN espaciador después de nt 3510 aún permitiría la complementación trans
de las funciones E1A / E1B en los vectores Ad con deleción E1, pero si se produjera una
recombinación homóloga entre el vector Ad5 y el genoma HEK293 modificado, el genoma
del vector Ad5 sería demasiado grande para ser empaquetados (Figura 4). Los genomas del
vector Ad5 hasta un 105% del tamaño normal del genoma aún pueden empaquetarse con
éxito [33], mientras que en este caso el tamaño del genoma sería ~ 114% mayor de lo
normal. Sin embargo, una preocupación es que el genoma de Ad podría sufrir
reordenamientos resultando en genomas competentes de replicación más pequeños que
podrían empaquetarse [33] y esto tendría que ser evaluado cuidadosamente una vez que se
establezca la línea celular.

Figura 4. Producción de vector libre de RCA en células 293-VLI. Se incorporará una secuencia
de ADN de ~ 8 kb que contiene genes ventajosos, el espaciador, en la secuencia de Ad HEK293
en nt3510. Si bien esto no evita la recombinación homóloga debido a la retención de
homología entre el genoma y el vector Ad, el empaquetamiento del vector Ad se suprimirá
debido al tamaño aumentado.

Los vectores Ad de primera generación son el vector caballo de batalla para muchas estrategias de terapia génica y de
vacunas, aunque tienen limitaciones, como se explica en las siguientes secciones. Las líneas celulares de empaquetamiento
complementarias de E1 desarrolladas para producir estos vectores forman la base de todas las líneas celulares utilizadas con
otros tipos de vectores Ad con genoma eliminado. El aspecto más importante que surge de este trabajo es la superación del
RCA, y esto se basa no solo en la cantidad de secuencias de Ad5 E1 que se incorporan al genoma de la línea celular, sino
también en el diseño cuidadoso de los genomas del vector en sí. Por lo tanto el futuro
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para el desarrollo de nuevas líneas celulares es la incorporación de genes ventajosos en el genoma para mejorar la
productividad, adaptabilidad y robustez como se describe para el modelo 293-VLI.

2. Células productoras para vectores publicitarios de segunda generación que no se replican

Los vectores Ad de segunda generación contienen más deleciones del genoma, en las regiones E2 y / o E4
(ver Figura 1). La región E2 codifica tres proteínas esenciales que controlan la replicación viral, la proteína de
unión al ADN (DBP) transcrita de la región E2A y la proteína terminal y la ADN polimerasa viral de E2B (revisado
[34]). Los productos E4 son esenciales para la infección viral productiva, pero de los varios productos de marco
de lectura abierto (ORF) posibles (revisados [35]) codificados en esta región, se ha determinado que solo uno,
ORF3 u ORF6, es absolutamente necesario para el crecimiento viral exitoso cultivo de tejidos [36-39]. La
eliminación de cualquiera de E2 o E4 inactivará la síntesis de novo de proteínas virales implicadas en la
replicación del ADN viral. Aunque las proteínas E1 se eliminan de los vectores de primera generación, la
entrega de títulos altos de vectores con deleción E1, y la presencia de factores similares a E1 en muchas células
puede permitir la expresión de otras proteínas virales [40-42]. Estas proteínas virales normalmente iniciarían
una fuerte respuesta inmune que amortigua la eficacia de un vector Ad de primera generación [43-45]. Además
de reducir la respuesta inmunitaria y, por tanto, mejorar la seguridad del vector, un beneficio adicional de la
eliminación de estos genes es que se pueden incorporar casetes de expresión más grandes en el genoma,
aumentando el tamaño de ~ 6 kb a ~ 9 kb.
A principios de los 80 y principios de los 90 se demostró que los vectores Ad defectuosos en E2 [46,47]
y los vectores Ad defectuosos en E4 [48] podían propagarse en líneas celulares transcomplementarias
basadas en células HeLa y Vero, respectivamente. Desde entonces, se ha generado una amplia gama de
líneas celulares, basadas en células A549 modificadas con HEK293, 911 y E1, para permitir la propagación
de vectores Ad que carecen de genes de las regiones E2 y / o E4, además de la deleción E1 estándar (Tabla
2). [31,49-61]. Una de las principales diferencias con las líneas celulares que complementan E1, donde E1A
y E1B se expresan constitutivamente, es que varias de estas líneas celulares se basan en el uso de
unidades de transcripción condicionalmente activas o productos génicos para controlar la expresión de
estas proteínas como productos virales de Las regiones E2A y E4 son tóxicas para las células. Por ejemplo,

Las líneas celulares que complementan E2 expresan productos virales E2A (DBP) o E2B (Ad ADN polimerasa y / o
proteína terminal precursora). Se requiere que DBP se exprese a niveles altos para una replicación viral exitosa y, por
lo tanto, la mayoría de las líneas celulares que complementan E2A se preparan con elementos de control. La línea
293-C2 [56] se construyó con expresión génica constitutiva, pero este grupo finalmente desarrolló una línea celular
alternativa, E2T, que se basaba en elementos de control de tetraciclina [61]. El sistema de tetraciclina se basa en dos
casetes insertados de manera estable en el genoma, el casete de proteína transactivadora (tTA) y el tet secuencias de
operador en la región promotora de CMV del casete E2A. En presencia de tetraciclina, E2A no se expresa, pero en
ausencia, E2A se expresa. La producción viral en 293-C2 es aproximadamente de 10 a 30 veces inferior a la de los
vectores de tipo salvaje E2 [56], mientras que E2T en ausencia de tetraciclina produjo rendimientos virales de vectores
Ad suprimidos por E2A similares a los de los vectores E2 salvajes [61] . Otras líneas celulares E2A, 293-E2A [59] y
AE1-2a [53] se basan en elementos que responden a glucocorticoides, como el promotor del virus del tumor mamario
(MMTV), la repetición terminal larga y el promotor del virus del tumor mamario del ratón (pMAM), respectivamente,
con expresión inducida por dexametasona. Cinética de crecimiento de
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un vector Ad E1 / E2A en 293-E2A era similar al de un vector Ad de primera generación comparativo, pero las
partículas infecciosas se redujeron de 5 a 30 veces con este sistema [59]. En la línea celular AE1-2a, se observó un
retraso en el efecto citopático con un vector Ad eliminado E1 / E2A / E3, pero los rendimientos de partículas
infecciosas fueron comparables a los niveles de un vector Ad de primera generación en este caso [53].

Tabla 2. Líneas celulares productoras complementarias E1 / E2 y E1 / E4.

Línea celular De los padres E2 o E4 Viral Inducible Refs

Células Complementatio Productos Sistema

norte

VL2-20 y HEK293 E4 Todos los ORF Glucocorticoide [31]

VK10-9 a
293-E4 HEK293 E4 Todos los ORF acampar [49]
C7 LP-293 E2B Pol y pTP B No [50,57]

293-ORF6 HEK293 E4 ORF6 Metal C [51]

MT-ORF6 HEK293 E4 ORF6 Metal [52]
MMTV-ORF6 HEK293 E4 ORF6 Glucocorticoide [52]
AE1-2a A549 D E2A DBP Glucocorticoide [53]
293-pTP HEK293 E2B pTP Tetraciclina [54]
IGRP2 HEK293 E4 ORF6 y 7 Glucocorticoide [55]
293-C2 HEK293 E2A DBP No [56]
911E4 911 E4 Todos los ORF Tetraciclina [58]
293-E2A HEK293 E2A DBP Glucocorticoide [59]
293-E4 HEK293 E4 Todos los ORF sí mi [59]
293-E4ORF6 + 7 HEK293 E4 ORF6 y 7 Tetraciclina [59]
A70.S54 AE1-2a E2A / E4 DBP / Todo ORF Glucocorticoide [60]
E2T HEK293 E2A DBP Tetraciclina [61]

a
Estas líneas también expresan pIX bajo el control del promotor metaloteineno inducible por metales.
B
La línea celular C7 se generó primero para expresar solo la ADN polimerasa de Ad [50] y luego se modificó para expresar la

proteína terminal precursora [57].

C
Inducible por zinc.
D
La línea celular AE1-2A se basa en A549 que también codifica la región E1 (552 a 4090) bajo el control de un promotor de

elemento de respuesta a glucocorticoides mínimo (GRE5).

mi
El casete E4 estaba bajo el control del promotor E4 homólogo inducible por E1A.

Se sabe que el ARNm de E2B se expresa en niveles bajos en células infectadas con Ad [62] y, por lo tanto, se cree
que las líneas celulares que expresan niveles bajos de estos productos virales serán más apropiadas en
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complementando eliminaciones en vectores Ad. Teniendo esto en cuenta, se han generado dos líneas celulares principales.
La línea celular C7 se generó secuencialmente para expresar la proteína ADN polimerasa Ad2 de 140 kDa [50] y la proteína
terminal precursora (pTP) [57]. Ambos genes se expresan constitutivamente bajo el elemento promotor de repetición
terminal larga del virus del sarcoma de Rous y el crecimiento celular y la viabilidad no se vieron afectados. Los virus que
contienen mutaciones en la región E2B se complementaron con éxito con la línea celular C7 para permitir la propagación
viral a niveles similares a los vectores de tipo salvaje E2B. 293-pTP, que se complementa solo con el pTP, utiliza un sistema
regulador de tetraciclina, en el que la línea celular contiene la proteína represora de tetraciclina / transactivadora de VP16
(tTA) y el pTP está bajo el control de un promotor dependiente de tetraciclina [54]. Se descubrió que este sistema mejora el
crecimiento celular y la viabilidad con respecto a una versión anterior de 293-pTP que expresó constitutivamente pTP [63]. Se
demostró que estas células 293-pTP controladas por tetraciclina complementan eficazmente un vector pTP Ad sensible a la
temperatura cuando las células expresan niveles altos e inducibles de pTP.

Los estudios iniciales con vectores eliminados E1 / E4 utilizaron la incorporación de E4 de longitud completa en líneas celulares [31,49]. Las células

VL2-20 y VK10-9, que contienen E4 de longitud completa controlada por el promotor MMTV inducible por dexametasona, fueron permisibles para la

propagación de un vector E4 eliminado, pero se observó un retraso en el CPE y se obtuvieron rendimientos 10 veces menores [31]. Sin embargo, se

informó de otra línea celular que expresa E4 de longitud completa, con el casete E4 bajo el control de un promotor de inhibina alfa de ratón que

contiene un elemento de respuesta cAMP que demostró que los rendimientos de los vectores eliminados E1 / E4 obtenidos eran comparables a los

vectores eliminados E1 [49]. En 1996, dos grupos desarrollaron líneas celulares E4-ORF6 confirmando que solo se requiere un marco de lectura abierto

E4 para complementar la región E4. Estas líneas celulares, 293-ORF6 [51] y MT-ORF6 [52], se basaron en células HEK293 con ORF6 bajo el control de un

promotor de metaloteineno de oveja inducible por zinc. En MMTV-ORF6 [52], el E4 ORF6 estaba bajo el control del promotor de MMTV como elementos

inducibles. Se informó que un vector Ad eliminado E1 / E4 se propagaba con las líneas MT-ORF6 y MMTV-ORF6 [52], pero los rendimientos no se

compararon con un vector eliminado E1. En las células 293-ORF6, los rendimientos del vector Ad suprimido E1 / E4 fueron equivalentes a los niveles del

vector suprimido E1 [51]. Aunque se informó que estas líneas celulares que expresan E4-ORF4 complementan con éxito la deleción de E4, a partir de

1996 se generaron varias otras líneas celulares que expresan E4 y E4-ORF6 + 7 de longitud completa [55,58-60]. IGRP2 [55], con ORF6 + 7 bajo el control

de la repetición terminal larga MMTV, 911E4 [58] bajo un sistema de tetraciclina, y 293-E4 [59] bajo el promotor E4 inducible homólogo de E1A y

294-E4ORF6 + 7 [59] bajo un sistema de tetraciclina mostraron resultados similares en cuanto a que se redujo el rendimiento de los vectores E1 / E4

suprimidos. Sin embargo, A70.S54, una línea celular que complementa el vector con triple deleción (E1 / E2A / E4) fue capaz de producir este vector

como niveles comparables a los vectores E4 de tipo salvaje [60]. Algunas de las diferencias observadas en los rendimientos y el crecimiento viral se

deben no solo a la línea celular utilizada, sino también a las diferencias en el diseño del vector. Por ejemplo, un pequeño inserto colocado en la región

E4 eliminada puede aumentar los niveles de producción hasta en 30 veces [51]. una línea celular que complementa el vector con triple deleción (E1 /

E2A / E4) fue capaz de producir este vector como niveles comparables a los vectores E4 de tipo salvaje [60]. Algunas de las diferencias observadas en

los rendimientos y el crecimiento viral se deben no solo a la línea celular utilizada, sino también a las diferencias en el diseño del vector. Por ejemplo,

un pequeño inserto colocado en la región E4 eliminada puede aumentar los niveles de producción hasta en 30 veces [51]. una línea celular que

complementa el vector triple eliminado (E1 / E2A / E4) fue capaz de producir este vector como niveles comparables a los vectores E4 de tipo salvaje [60].

Algunas de las diferencias observadas en los rendimientos y el crecimiento viral se deben no solo a la línea celular utilizada, sino también a las diferencias en el diseño

A pesar del extenso desarrollo de líneas celulares y vectores Ad de segunda generación a lo largo de 1995 a 2000,
muchos de estos vectores han pasado a un segundo plano. Los rendimientos de estos vectores pueden reducirse en
comparación con los respectivos vectores de primera generación, dependiendo de la línea celular y el sistema de vectores
utilizados. Además, los estudios comparativos entre E2A o E4 y sus respectivos vectores isogénicos con deleción de E1
indican que las deleciones de E2A confieren una mejora limitada [59,64,65] mientras que los resultados son más
controvertidos con respecto a las deleciones de E4 [52,59,66,67]. Aunque puede observarse una toxicidad atenuada hacia los
vectores, generalmente no se observa una expresión transgénica estable. Por tanto, estos vectores tienen
Virus 2010, 2 1691

ha sido reemplazado por vectores Ad de alta capacidad (HC-Ad) para la expresión transgénica a largo plazo (revisado [68]).
Sin embargo, varias de las líneas celulares productoras se han utilizado para otros fines, como se ve en las dos secciones
siguientes, pero solo la línea productora de segunda generación, 293-ORF6 [51] se ha utilizado en producciones GMP.

3. Células productoras para vectores publicitarios de alta capacidad

Los vectores HC-Ad, los denominados anuncios "eviscerados", forman la tercera clase de vectores Ad
no replicativos (consulte la Figura 1). Con estos vectores, todos los genes virales se eliminan dejando solo
las secuencias que actúan en cis necesarias para la replicación y el empaquetamiento del ADN viral, lo que
permite una gran incorporación de genes terapéuticos o múltiples genes. Además, además de la
inmunidad preexistente, se elimina esencialmente la respuesta inmune adicional a la producción de
proteína viral de novo. Estos vectores cuando se usan en vivo dan lugar a una expresión transgénica de
alto nivel a largo plazo combinada con una toxicidad insignificante (revisión [68]). La principal desventaja
de estos vectores es la producción compleja debido a la necesidad no solo de una línea celular productora
adecuada, sino también de un vector Ad complementario, el llamado vector Ad auxiliar (HAd), que
proporciona las proteínas de empaquetamiento necesarias de la partícula viral. . Hasta ahora, el proceso
no se ha simplificado a sólo el HC-Ad y una línea celular productora que puede transcomplementar todo
el genoma del Ad, ya que es probable que exista toxicidad asociada con la expresión de todas las
proteínas virales dentro de la célula [60]. El requisito del HAd provoca el problema de la contaminación del
HAd cuando se utilizan células productoras complementarias de E1.
Para reducir la contaminación de HAd, se desarrolló un sistema auxiliar dependiente que implicaba generar
una línea celular que expresa Cre recombinasa, 293Cre4, en combinación con la modificación de HAd para
contener loxP sitios que flanquean el sitio de envasado [69]. Debido a la expresión de Cre recombinasa en la
línea de células productoras, la señal de empaquetamiento se escinde evitando así el empaquetamiento del
ADN del virus auxiliar. Se han diseñado varios sistemas comparables basados en Cre- [70-75] y / o FLP- [76,77]
basados en el sistema 293Cre4 Cre / Lox. Existen diferencias fundamentales entre HAd, HC-Ad, líneas celulares
y protocolos entre laboratorios, sin embargo, el diseño de vectores y la discusión general del protocolo están
fuera del ámbito de esta revisión en particular. Con respecto a las líneas celulares productoras, las líneas que
expresan recombinasa Cre o FLPe se derivaron de líneas celulares productoras E1 como HEK293 [70,77-79] y
PER.C6 [75], o células productoras 293 que complementan E2A, E2T [72] y C7 [73] (Tabla 3). Generalmente, la
introducción del casete de recombinasa Cre o FLPe se realizó mediante transfección del plásmido apropiado. En
el caso del desarrollo de PER.C6-Cre, este se realizó utilizando un vector retroviral.
Cabe señalar que incluso con este tipo de sistema, la contaminación no se elimina por completo (generalmente se
observa de 0,1% a 1%), pero la separación física del HC-Ad y HAd mediante ultracentrifugación con CsCl puede solucionar
este problema. En el caso de preparaciones pequeñas, esto es generalmente aceptable; sin embargo, para la producción de
vectores de grado clínico a escala industrial deben tomarse más medidas [78], especialmente porque parte de esta
contaminación puede contener HAd competente en el envasado. Palmer & Ng, 2003 [78] han descrito modificaciones
adicionales al HAd como un medio para mejorar el problema de la contaminación invirtiendo la señal de empaquetamiento
con respecto al HC-Ad, haciendo que los genomas recombinantes sean demasiado grandes para ser empaquetados si
ocurre una recombinación homóloga [80 ]. RCA todavía es potencialmente un problema con estos vectores y, por lo tanto,
PER. Las células C6 que expresan Cre son una línea celular útil para prevenir esto [75]. Otro problema con el
Virus 2010, 2 1692

La producción de HC-Ad es que normalmente se alcanzan niveles bajos de títulos debido al uso de cultivos
celulares adherentes. La línea celular que expresa 116 Cre se derivó de un subclon de células HEK293, 293N3S
[81] que se pueden cultivar en suspensión y esto mejora en gran medida los niveles de títulos [78], como se ha
visto con cultivos en suspensión de PER.C6-Cre [ 75]. Aunque estos vectores son complejos de producir, su
mayor incorporación de casete, expresión mejorada y problemas de menor inmunidad impulsan su desarrollo.

Tabla 3. Líneas celulares productoras de vectores de Ad de alta capacidad que utilizan el sistema de recombinasa.

Línea celular Células parentales Vector de anuncio Recombinase Refs

sistema de complementación

293Cre4 HEK293 E1 Cre recombinasa [69]

293cre415 a 293Cre4 E1 Cre recombinasa [79]
CRE8 HEK293 E1 Cre recombinasa [70]
CreE E2T E1 / E2A Cre recombinasa [72]
293FLP HEK293 E1 Recombinasa FLPe [76]
293CreFLP 293Cre4 E1 ya sea B [76]
293-FLPe6 HEK293 E1 Recombinasa FLPe [77]
C7-Cre C7 E1 / E2B Cre recombinasa [73]
116 293N3S C E1 Cre recombinasa [78]
PER.C6-Cre PER.C6 E1 Cre recombinasa [75]
a
Chen et al., 1996 [79] desarrolló la línea celular como se describe en la tabla, pero Sandig et al., 2000 [71] utilizó la línea celular en

un sistema de anuncios dependiente de auxiliares Cre / lox. Todas las demás líneas celulares documentadas en la tabla han sido

desarrolladas por los grupos a los que se hace referencia en la tabla.

B
Esta línea celular se puede utilizar con recombinasa Cre o FLPe.
C
Este es un subclon de HEK293 que puede cultivarse como una línea celular adherente o en suspensión [81].

4. Líneas celulares productoras de nuevos serotipos de vectores de anuncios

Dentro de la población humana hay títulos elevados de anticuerpos neutralizantes preexistentes contra los
serotipos Ad5 y Ad2 [82-85] debido a la exposición general a Ads. Por tanto, aunque la mayor parte de la investigación
y el desarrollo de los vectores Ad ha utilizado los serotipos Ad5 y Ad2, la eficacia de estos vectores puede verse
seriamente comprometida [86-89]. Una observación adicional es que tras la readministración la toxicidad hepática
aumenta [90] y, en la sangre humana, los anticuerpos neutralizantes pueden activar el complemento e inducir
reacciones inflamatorias [91]. En un intento por evitar este problema, se están investigando vectores Ad derivados de
diferentes serotipos humanos [83,84,92-104] y animales [105-110], para los cuales la población humana tiene una
menor prevalencia de anticuerpos neutralizantes, se están investigando actualmente. Las versiones que no se
replican de serotipos alternativos enfrentan problemas similares a los de la primera,
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serotipo, con respecto a qué línea celular productora es adecuada para lograr la producción y propagación del vector.

Los adenovirus del subgrupo B humano, en particular, Ad11 y Ad35, están emergiendo como fuertes
competidores para replicar vectores defectuosos [83,84,93,95,96,98,100]. Los vectores Ad35 y Ad11 suprimidos
por E1 no pueden propagarse en líneas celulares productoras de E1 normales, aunque el Ad35 suprimido
únicamente por E1A puede propagarse en PER.C6 [83]. Por lo tanto, se tomaron dos enfoques iniciales para
propagar vectores con deleción de E1. Uno utilizó líneas celulares productoras de segunda generación
existentes tras la observación de que los vectores Ad7 (otro adenovirus del subgrupo B) podrían propagarse en
la línea celular complementaria de E4, 293-ORF6 [92,94]. VK10-9, que complementa las deleciones E1 / E4 [31],
produjo rendimientos de Ad35 que fueron ligeramente inferiores a los observados con Ad5 [95] y A70.S54 [60],
una línea celular complementaria de triple deleción (E1 / E2A / E4 ),
En el segundo enfoque, se han derivado nuevas líneas celulares de empaquetamiento CRE35G3 [93] y PER.C6 / 55K [84] que expresan proteínas

Ad5 E1 y Ad35 E1B-55kDa. Estas líneas celulares permiten la propagación satisfactoria de vectores Ad35 defectuosos en E1 a títulos virales similares a

los de Ad5. También se desarrolló una línea celular de empaquetamiento de Ad11, 293-Ad11-E1B55K, que se produjo transfectando y generando un

clon estable a partir de células 293 con un plásmido que contenía el gen E1B55K de Ad11 bajo el control de PGK humana [98]. Este enfoque de línea de

empaquetamiento E1B55K también se ha utilizado para la construcción de otro serotipo del subgrupo B, Ad3 con deleción de E1 en el que las células

911 se modificaron para expresar el gen E1B55K de Ad3 [97]. Si bien los rendimientos de producción de estos virus defectuosos coinciden con los de

Ad5, Se ha observado que los vectores Ad35 y Ad11 tienen un aumento de partícula viral a partículas infecciosas en comparación con Ad5 cuando se

propagan en las respectivas líneas E1B55K. Este efecto se atribuye a las propiedades del receptor celular, ya que los virus del subgrupo B, como Ad3,

Ad11 y Ad35, utilizan el receptor CD46 para la infección en lugar del CAR que utilizan todos los demás serotipos de Ad [111-113]. Una ventaja

importante demostrada a partir de los estudios con Ad35 y Ad11 es que el Ad35 o Ad11 con capacidad de replicación está ausente en las preparaciones

virales debido a la falta de homología entre el ADN genómico del virus y las líneas celulares de empaquetamiento E1B55K. Ad11 y Ad35 utilizan el

receptor CD46 para la infección en lugar del CAR que utilizan todos los demás serotipos de Ad [111-113]. Una ventaja importante demostrada a partir

de los estudios con Ad35 y Ad11 es que el Ad35 o Ad11 con capacidad de replicación está ausente en las preparaciones virales debido a la falta de

homología entre el ADN genómico del virus y las líneas celulares de empaquetamiento E1B55K. Ad11 y Ad35 utilizan el receptor CD46 para la infección en lugar del CA

Recientemente, se ha desarrollado una nueva estrategia para Ad35 que se basa en una modificación adicional del genoma del vector Ad [100]. Se

ha informado de que la proteína Ad5 E1B55kDa forma un complejo con las proteínas E4 ORF6 para aumentar la exportación selectiva de ARNm viral

tardío [114-116]. La observación de que los vectores Ad35 suprimidos por E1 sólo se propagan en líneas celulares que expresan E4-ORF6 o Ad35

E1B55K indica que para que se produzca una replicación viral satisfactoria, estas proteínas deben derivar del mismo subgrupo. Por lo tanto, los

vectores Ad35 con E1 eliminado se han modificado aún más para tener la región E4 reemplazada con Ad5 E4-ORF6 y esto permite la propagación viral

en células PER.C6 no modificadas [100] mientras que anteriormente solo los vectores con E1A eliminado se podían propagar en esta línea celular. . El

principal beneficio de modificar los vectores de esta manera permite la propagación en líneas celulares bien establecidas y aprobadas por la

reglamentación, lo que da como resultado un paso menos cuando se mueve el nuevo vector Ad a través de la aprobación reglamentaria. Esta

metodología de cambio de serotipo E4 también se ha aplicado al desarrollo de un vector de serotipo Ad49 del subgrupo D [101,103], así como a

vectores de vacuna Ad recombinantes derivados de varios virus del subgrupo B (Ad11, Ad50) y del subgrupo D (Ad26, Ad48) [ 103]. Sin embargo, otros

serotipos humanos que se han utilizado pueden propagarse en células productoras de E1 y células productoras de E1 / E4. Esto incluye un serotipo del

subgrupo D diferente, Ad19a que se eliminó E1 / E3 y se propagó a niveles de peso en las células HEK293 [102], una vacuna basada en el serotipo Ad6

del subgrupo C que se puede propagar en Esta metodología de cambio de serotipo E4 también se ha aplicado al desarrollo de un vector Ad49 del

serotipo del subgrupo D [101,103], así como a los vectores de la vacuna Ad recombinante derivados de varios virus del subgrupo B (Ad11, Ad50) y del

subgrupo D (Ad26, Ad48) [ 103]. Sin embargo, otros serotipos humanos que se han utilizado pueden propagarse en células productoras de E1 y células

productoras de E1 / E4. Esto incluye un serotipo del subgrupo D diferente, Ad19a que se eliminó E1 / E3 y se propagó a niveles de peso en las células HEK293 [102], una
Virus 2010, 2 1694

Células PER.C6 [99] y un serotipo del subgrupo F, Ad41, que cuando se elimina E1 todavía puede propagarse en
células 293-ORF6 [104].
Se han desarrollado varios serotipos no humanos derivados de fuentes bovinas [106], caninas [105,107] y simias [108-110,117] como posibles

vectores Ad con deleción E1 para su uso como vectores de administración de genes o vacunas para terapias humanas. En el caso de los vectores

bovinos, BAV-3 y caninos, CAV-2, células productoras de E1 especializadas basadas en líneas celulares de especies apropiadas, como células retinianas

fetales y de riñón bovino que expresan secuencias E1 de Ad5 [106] y células de riñón canino que expresan el CAV-2 E1 [105], se han desarrollado para

empaquetar y propagar estos vectores. Los vectores Ad derivados del chimpancé del subgrupo E pueden propagarse en células HEK293 y, por lo tanto,

pueden cultivarse con métodos estándar [108,109]. Sin embargo, al igual que con Ad11, Ad35 y otros vectores humanos del subgrupo B, los vectores

Ad derivados del chimpancé del subgrupo B no pueden propagarse en líneas celulares productoras de E1 regulares. En este caso, en lugar de

desarrollar nuevas líneas de células productoras, se utiliza un enfoque de vector quimérico. Esta estrategia involucra la porción central del genoma,

que alberga varias de las proteínas estructurales que se derivan del virus del subgrupo B, pero las regiones flanqueantes son de un virus que no es del

subgrupo B, lo que permite que estos vectores quiméricos se propaguen en células HEK293 [110,117]. Además, esta estrategia es similar a la de

modificar la región E4 de los virus humanos del subgrupo B, para permitir la propagación en líneas celulares bien caracterizadas. pero las regiones

flanqueantes son de un virus que no es del subgrupo B, lo que permite que estos vectores quiméricos se propaguen en células HEK293 [110,117].

Además, esta estrategia es similar a la de modificar la región E4 de los virus humanos del subgrupo B, para permitir la propagación en líneas celulares

bien caracterizadas. pero las regiones flanqueantes son de un virus que no es del subgrupo B, lo que permite que estos vectores quiméricos se

propaguen en células HEK293 [110,117]. Además, esta estrategia es similar a la de modificar la región E4 de los virus humanos del subgrupo B, para permitir la propag

Una de las observaciones interesantes que surgen del uso de líneas celulares productoras para serotipos de Ad
alternativos es que en muchos casos hubo un cambio desde el desarrollo de nuevas líneas productoras hacia otras
modificaciones del genoma del vector. Si bien parecía necesario generar líneas productoras especializadas para los
virus humanos del subgrupo B, una vez que se delineó su estructura y biología, se observó que es más sencillo
incorporar más modificaciones de vectores en la región E4 que permitan su propagación en un pozo. caracterizó la
línea celular complementaria de E1. Este paradigma también se utilizó con respecto a los vectores de anuncios
basados en simios y vale la pena considerarlo si existe una necesidad rápida de mover un nuevo vector de anuncios
de la mesa a la cama.

5. Conclusiones

A lo largo de las últimas 3 décadas, se ha desarrollado una amplia gama de líneas celulares
productoras para la producción de vectores Ad. Todavía hay solo unas pocas líneas celulares aprobadas
para la producción de GMPc de vectores Ad5 con replicación defectuosa, ya que los requisitos
reglamentarios incluyen un proceso muy extenso de bancos y pruebas de células. Hasta donde sabemos
en la actualidad, solo las líneas celulares HEK293, PER.C6, N52.E6, 293-ORF6 y 293FLP tienen aprobación
para la producción de cGMP de vectores Ad no replicantes, aunque las células A549 no modificadas han
sido aprobadas para la producción de cGMP de replicar vectores de anuncios. Mientras que otros
laboratorios desarrollan líneas celulares adicionales, ya sea como herramientas de investigación para
generar nuevos vectores de anuncios, para superar el RCA o problemas de licencias,

referencias y notas

1. Wold, W .; Tollefson, A .; Hermiston, unidad de transcripción T. E3 de adenovirus. En El Molecular

Repertorio de adenovirus. Bohm, P., Doerfler W., Eds .; Springer-Verlag: Berlín, Alemania, 1993;
págs. 237-278.
Virus 2010, 2 1695

2. Graham, FL; Smiley, J .; Russell, WC; Nairn, R. Características de una línea celular humana
transformada por ADN de adenovirus humano tipo 5. J. Gen. Virol. 1977, 36, 59-74.
3. Shaw, G .; Morse, S .; Ararat, M .; Graham, FL Transformación preferencial de células neuronales humanas por
adenovirus humanos y el origen de las células HEK 293. Faseb J. 2002, dieciséis, 869-871.
4. Louis, N .; Evelegh, C .; Graham, FL Clonación y secuenciación de las uniones celular-víricas de la línea
celular 293 transformada con adenovirus humano tipo 5. Virología 1997, 233, 423-429.
5. Fallaux, FJ; Kranenburg, O .; Cramer, SJ; Houweling, A .; Van Ormondt, H .; Hoeben, RC; Van Der Eb, AJ
Caracterización de 911: una nueva línea de células auxiliares para la titulación y propagación de vectores
adenovirales con deleción de la región 1 temprana. Tararear. Gene Ther. 1996, 7, 215-222.
6. Imler, JL; Chartier, C .; Dreyer, D .; Dieterle, A .; Sainte-Marie, M .; Faure, T .; Pavirani, A .; Mehtali, M. Nuevas
líneas celulares de complementación derivadas de células A549 de carcinoma de pulmón humano apoyan el
crecimiento de vectores de adenovirus con deleción E1. Gene Ther. 1996, 3, 75-84.
7. Fallaux, FJ; Bout, A .; van der Velde, I .; van den Wollenberg, DJ; Hehir, KM; Keegan, J .; Auger, C .; Cramer,
SJ; van Ormondt, H .; van der Eb, AJ; Valerio, D .; Hoeben, RC Las nuevas células auxiliares y los vectores de
adenovirus con deleción de la región 1 temprana emparejados evitan la generación de adenovirus con
capacidad de replicación. Tararear. Gene Ther. 1998, 9, 1909-1917.
8. Gao, GP; Engdahl, RK; Wilson, JM Una línea celular para la producción de alto rendimiento de vectores de
adenovirus con deleción E1 sin la aparición de virus con capacidad de replicación. Tararear. Gene Ther. 2000,
11, 213-219.
9. Schiedner, G .; Hertel, S .; Kochanek, S. Transformación eficiente de amniocitos humanos primarios mediante funciones
E1 de Ad5: generación de nuevas líneas celulares para la producción de vectores adenovirales. Tararear. Gene Ther. 2000,
11, 2105-2116.
10. Kim, JS; Lee, SH; Cho, YS; Park, K .; Kim, YH; Lee, JH Desarrollo de una línea celular de empaquetamiento
para la propagación del vector de adenovirus de replicación deficiente. Exp. Mol. Medicina. 2001, 33, 145-149.
11. Xu, Q .; Arévalo, MT; Pichichero, ME; Zeng, M. Una nueva línea celular complementaria para la propagación
de adenovirus con deleción E1 incompetente para la replicación. Citotecnología 2006, 51, 133-140. Hedley,
12. SJ VectorLogics, Inc., Birmimgham, AL, EE. UU. Obra inédita. 2010.
13. Farson, D .; Tao, L .; Ko, D .; Li, Q .; Brignetti, D .; Segawa, K .; Mittelstaedt, D .; Harding, T .; Yu,
CORRIENTE CONTINUA; Li, Y. Desarrollo de nuevas células complementarias E1 para la producción de adenovirus libres de

adenovirus con capacidad de replicación. Mol. El r. 2006, 14, 305-311.

14. Howe, JA; Pelka, P .; Antelman, D .; Wilson, C .; Cornell, D .; Hancock, W .; Ramachandra, M .; Avanzini, J .;
Horn, M .; Wills, K .; Sutjipto, S .; Ralston, R. Emparejar funciones complementarias de células
transformadas con expresión estable de genes virales seleccionados para la producción de vectores de
adenovirus con deleción E1. Virología 2006, 345, 220-230.
15. Murakami, P .; Pungor, E .; Archivos, J .; Hacer, L .; van Rijnsoever, R .; Vogels, R .; Bout, A .; McCaman,
M. Un solo tramo corto de homología entre el vector adenoviral y la línea celular de empaquetamiento puede dar lugar a

partículas E1 positivas dependientes de la ayuda y que inducen el efecto citopático. Tararear. Gene Ther. 2002,

13, 909-920.
Lochmuller,
dieciséis. H .; Jani, A .; Huard, J .; Prescott, S .; Simoneau, M .; Massie, B .; Karpati, G .; Acsadi,
G. Aparición de adenovirus con capacidad de replicación temprana que contiene la región 1 en reservas de
adenovirus recombinantes defectuosos en la replicación (delta E1 + delta E3) durante múltiples pases en células
293. Tararear. Gene Ther. 1994, 5, 1485-1491.
Virus 2010, 2 1696

17. Hehir, KM; Armentano, D .; Cardoza, LM; Choquette, TL; Berthelette, PB; White, GA; Couture, LA;
Everton, MB; Keegan, J .; Martin, JM; Pratt, DA; Smith, diputado; Smith, AE; Wadsworth, SC
Caracterización molecular de variantes de vectores de adenovirus con capacidad de replicación y
modificaciones del genoma para prevenir su aparición. J. Virol. 1996, 70, 8459-8467. Smith, JG;
18. Eck, SL Caracterización molecular de un vector adenoviral resultante de recombinación tanto
homóloga como no homóloga. Cancer Gene Ther. 1999, 6, 475-481.
19. Zhu, J .; Grace, M .; Casale, J .; Chang, AT; Musco, ML; Bordens, R .; Greenberg, R .; Schaefer,
MI.; Indelicato, SR Caracterización de aislados de adenovirus competentes para la replicación a partir de la producción
a gran escala de un vector adenoviral recombinante. Tararear. Gene Ther. 1999, 10, 113-121.
20. Lusky, M. Producción de buenas prácticas de fabricación de vectores adenovirales para ensayos clínicos. Tararear.
Gene Ther. 2005, dieciséis, 281-291.
21. Murakami, P .; Havenga, M .; Fawaz, F .; Vogels, R .; Marzio, G .; Pungor, E .; Archivos, J .; Hacer, L .;
Goudsmit, J .; McCaman, M. Estructura común de partículas raras E1 positivas de replicación deficiente en
lotes de vectores adenovirales. J. Virol. 2004, 78, 6200-6208.
22. Nichols, WW; Lardenoije, R .; Ledwith, BJ; Brouwer, K .; Manam, S .; Vogels, R .; Kaslow, D .;
Zuidgeest, D .; Bett, AJ; Chen, L .; Van Der Kaaden, M .; Galloway, SM; Hill, RB; Machotka,
SV; Anderson, CA; Lewis, J .; Martínez, D .; Lebron, J .; Russo, C .; Valerio, D .; Bout, A. Propagación de
vectores adenovirales: uso de células PER.C6. En Vectores adenovirales para terapia génica.
Curiel, DT, Douglas, JT, Eds; Prensa académica: San Diego, EE. UU., 2002; págs. 129-166. Parks, RJ
23. Adenovirus protein IX: una nueva mirada a una proteína antigua. Mol. El r. 2005, 11, 19-25. Vellinga, J .; Van
24. der Heijdt, S .; Hoeben, RC La cápside de adenovirus: mayor progreso en proteínas menores. J. Gen. Virol. 2005,
86, 1581-1588.
25. Ghosh-Choudhury, G .; Haj-Ahmad, Y .; Graham, FL Protein IX, un componente menor de la cápside del
adenovirus humano, es esencial para el empaquetado de genomas completos. Embo J. 1987, 6,
1733-1739.
26. Sargent, KL; Ng, P .; Evelegh, C .; Graham, FL; Parks, RJ Desarrollo de un virus auxiliar con deleción de pIX de
tamaño restringido para la amplificación de vectores de adenovirus dependientes de auxiliares. Gene Ther.
2004, 11, 504-511.
27. Rosa-Calatrava, M .; Grava.; Puvion-Dutilleul, F .; Chatton, B .; Kedinger, C. El análisis funcional de la
proteína IX del adenovirus identifica los dominios implicados en la estabilidad de la cápside, la actividad
transcripcional y la reorganización nuclear. J. Virol. 2001, 75, 7131-7141.
28. Sargent, KL; Meulenbroek, RA; Parks, RJ La activación de la expresión génica adenoviral por la proteína IX
no es necesaria para la replicación eficaz del virus. J. Virol. 2004, 78, 5032-5037.
29. Tang, DC; Zhang, J .; Toro, H .; Shi, Z .; Van Kampen, KR Adenovirus como portador para el desarrollo
de vacunas contra la influenza aviar libres del virus de la influenza. Exp. Rev. Vacunas 2009, 8,
469-481.
30. Colby, WW; Se pueden ensamblar viriones de Shenk, T. Adenovirus tipo 5 en vivo en ausencia de
polipéptido IX detectable. J. Virol. 1981, 39, 977-980.
31. Krougliak, V .; Graham, FL Desarrollo de líneas celulares capaces de complementar mutantes de
adenovirus tipo 5 defectuosos en E1, E4 y proteína IX. Tararear. Gene Ther. 1995, 6, 1575-1586.
Virus 2010, 2 1697

32. Vellinga, J .; Uil, TG; de Vrij, J .; Rabelink, MJ; Lindholm, L .; Hoeben, RC Un sistema para la generación
eficiente de líneas celulares auxiliares productoras de proteína IX de adenovirus. J. Gene Med. 2006, 8,
147-154.
33. Bett, AJ; Prevec, L .; Graham, FL Capacidad de empaquetamiento y estabilidad de vectores de adenovirus
humano tipo 5. J. Virol. 1993, 67, 5911-5921. Ginsberg, HS Los adenovirus. Plenum Press: Nueva York, EE. UU.,
34. 1984.
35. Weitzman, MD Funciones de las proteínas del adenovirus E4 y su impacto en los vectores virales. Parte delantera.
Biosci. 2005, 10, 1106-1117.
36. Hemstrom, C .; Nordqvist, K .; Pettersson, U .; Virtanen, A. El producto génico de la región E4 del
adenovirus tipo 5 modula la acumulación de ciertos polipéptidos virales. J. Virol. 1988, 62,
3258-3264.
37. Bridge, E .; Ketner, G. Control redundante de la expresión génica tardía del adenovirus por la región temprana 4.
J. Virol. 1989, 63, 631-638.
38. Huang, MM; Al oír, la región temprana 4 de P. Adenovirus codifica dos productos génicos con efectos
redundantes en la infección lítica. J. Virol. 1989, 63, 2605-2615.
39. Ketner, G .; Bridge, E .; Virtanen, A .; Hemstrom, C .; Pettersson, U. Complementación de mutantes de
adenovirus E4 mediante expresión transitoria de ADNc de E4 y plásmidos de deleción. Ácidos nucleicos
Res. 1989, 17, 3037-3048.
40. Nevins, JR Mecanismo de activación de la transcripción viral temprana por el producto del gen adenovirus E1A. Célula
1981, 26, 213-220.
41. Gaynor, RB; Berk, AJ Cis-actuando inducción de la transcripción de adenovirus. Célula 1983, 33, 683-693.
42. Imperiale, MJ; Kao, HT; Feldman, LT; Nevins, JR; Strickland, S. Control común del gen de choque térmico y
genes de adenovirus tempranos: evidencia de una actividad celular similar a E1A. Mol. Célula. Biol. 1984, 4, 867-874.

43. Yang, Y .; Nunes, FA; Berencsi, K .; Furth, EE; Gonczol, E .; Wilson, JM La inmunidad celular a los antígenos
virales limita los adenovirus con deleción E1 para la terapia génica. Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU
1994, 91, 4407-4411.
44. Gilgenkrantz, H .; Duboc, D .; Juillard, V .; Couton, D .; Pavirani, A .; Guillet, JG; Briand, P .; Kahn, A. Expresión
transitoria de genes transferidos en vivo en el corazón utilizando vectores adenovirales de primera
generación: papel de la respuesta inmune. Tararear. Gene Ther. 1995, 6, 1265-1274.
45. Yang, Y .; Su, Q .; Wilson, JM Papel de los antígenos virales en las respuestas inmunitarias celulares destructivas a las células

transducidas por vectores de adenovirus en pulmones de ratón. J. Virol. 1996, 70, 7209-7212.

46. Klessig, DF; Grodzicker, T .; Cleghon, V. Construcción de líneas celulares humanas que contienen y expresan el
gen de la proteína de unión al ADN de adenovirus mediante cotransformación con el gen tk de HSV-1.
Virus Res. 1984, 1, 169-188.
47. Brough, DE; Cleghon, V .; Klessig, DF Construcción, caracterización y utilización de líneas celulares que expresan de
manera inducible la proteína de unión al ADN del adenovirus. Virología 1992, 190, 624-634. Weinberg, DH; Ketner, G.
48. Una línea celular que apoya el crecimiento de un mutante de deleción de la región temprana 4 defectuoso del
adenovirus humano tipo 2. Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU 1983, 80, 5383-5386. Wang, Q .; Jia, XC; Finer, MH Una línea
49. celular de empaquetamiento para la propagación de vectores de adenovirus recombinantes que contienen dos
deleciones letales de la región del gen. Gene Ther. 1995, 2, 775-783.
Virus 2010, 2 1698

50. Amalfitano, A .; Begy, CR; Chamberlain, JS Líneas celulares de empaquetamiento de adenovirus mejoradas para apoyar
el crecimiento de vectores de entrega de genes con replicación defectuosa. Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU
1996, 93, 3352-3356.
51. Brough, DE; Lizonova, A .; Hsu, C .; Kulesa, VA; Kovesdi, I. Un sistema de línea celular de vector de transferencia génica
para la complementación funcional completa de las regiones tempranas de adenovirus E1 y E4. J. Virol.
1996, 70, 6497-6501.
52. Gao, GP; Yang, Y .; Wilson, JM Biología de vectores de adenovirus con deleciones E1 y E4 para terapia
génica dirigida al hígado. J. Virol. 1996, 70, 8934-8943.
53. Gorziglia, MI; Kadan, MJ; Yei, S .; Lim, J .; Lee, GM; Luthra, R .; Trapnell, BC La eliminación de E1 y E2 de
los vectores de adenovirus mejora aún más las perspectivas de en vivo terapia génica humana. J.
Virol. 1996, 70, 4173-4178.
54. Langer, SJ; Schaack, J. 293 líneas celulares que expresan de forma inducible altos niveles de proteína terminal
precursora de adenovirus tipo 5. Virología 1996, 221, 172-179.
55. Yeh, P .; Dedieu, JF; Orsini, C .; Vigne, E .; Denefle, P .; Perricaudet, M. Transcomplementación dual eficiente
de las regiones de adenovirus E1 y E4 de una línea celular derivada de 293 que expresa una unidad
funcional E4 mínima. J. Virol. 1996, 70, 559-565.
56. Zhou, H .; O'Neal, W .; Morral, N .; Beaudet, AL Desarrollo de una línea celular complementaria y un
sistema para la construcción de vectores de adenovirus con E1 y E2a eliminados. J. Virol. 1996, 70,
7030-7038.
57. Amalfitano, A .; Chamberlain, JS Aislamiento y caracterización de líneas celulares de empaquetamiento que
coexpresan el adenovirus E1, la ADN polimerasa y las proteínas preterminales: implicaciones para la terapia
génica. Gene Ther. 1997, 4, 258-263.
58. Él, TC; Zhou, S .; da Costa, LT; Yu, J .; Kinzler, KW; Vogelstein, B. Un sistema simplificado para
generar adenovirus recombinantes. Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU 1998, 95, 2509-2514.
59. Lusky, M .; Cristo, M .; Rittner, K .; Dieterle, A .; Dreyer, D .; Mourot, B .; Schultz, H .; Stoeckel, F .; Pavirani, A
.; Mehtali, M. In vitro y en vivo biología de vectores de adenovirus recombinantes con E1, E1 / E2A o E1 / E4
eliminados. J. Virol. 1998, 72, 2022-2032.
60. Gorziglia, MI; Lapcevich, C .; Roy, S .; Kang, Q .; Kadan, M .; Wu, V .; Pechan, P .; Kaleko, M. Generación de un
vector de adenovirus que carece de E1, E2a, E3 y todos los de E4 excepto el marco de lectura abierto
3. J. Virol. 1999, 73, 6048-6055.
61. Zhou, H .; Beaudet, AL Un nuevo sistema de vector con la línea celular E2a inducible para la producción de un título
más alto y vectores adenovirales más seguros. Virología 2000, 275, 348-357.
62. Chow, LT; Corredor, TR; Lewis, JB Patrones de empalme complejos de ARN de las regiones tempranas del
adenovirus-2. J. Mol. Biol. 1979, 134, 265-303.
63. Schaack, J .; Guo, X .; Como y; Karlok, M .; Chen, C .; Ornelles, D. Adenovirus tipo 5 precursor terminal de
proteínas que expresan líneas celulares 293 y HeLa. J. Virol. 1995, 69, 4079-4085.
64. O'Neal, WK; Zhou, H .; Morral, N .; Aguilar-Cordova, E .; Pestaner, J .; Langston, C .; Mull, B .; Wang, Y .; Beaudet,
AL; Lee, B. Comparación toxicológica de vectores adenovirales eliminados en E2a y de primera generación que
expresan alfa1-antitripsina después de la administración sistémica. Tararear. Gene Ther. 1998,
9, 1587-1598.
Virus 2010, 2 1699

sesentaCristo,
y cinco. M .; Louis, B .; Stoeckel, F .; Dieterle, A .; Grava.; Dreyer, D .; Kintz, J .; Ali Hadji, D .; Lusky, M .;
Mehtali, M. Modulación de las propiedades inflamatorias y hepatotoxicidad de los vectores de
adenovirus recombinantes por los productos del gen viral E4. Tararear. Gene Ther. 2000, 11,
415-427.
66. Brough, DE; Hsu, C .; Kulesa, VA; Lee, GM; Cantolupo, LJ; Lizonova, A .; Kovesdi, I. La activación de la
expresión transgénica por la región temprana 4 es responsable de un alto nivel de expresión transgénica
persistente a partir de vectores de adenovirus. en vivo. J. Virol. 1997, 71, 9206-9213.
67. Wang, Q .; Greenburg, G .; Manojo, D .; Farson, D .; Más fino, MH Expresión transgénica persistente en hígado de
ratón siguiendo en vivo transferencia de genes con un vector de adenovirus delta E1 / delta E4. Gene Ther. 1997, 4,
393-400.
68. Segura, MM; Alba, R .; Bosch, A .; Chillon, M. Avances en la investigación de vectores adenovirales dependientes de
ayudantes. Curr. Gene Ther. 2008, 8, 222-235.
69. Parques, RJ; Chen, L .; Anton, M .; Sankar, U .; Rudnicki, MA; Graham, FL Un sistema de vector de
adenovirus auxiliar dependiente: eliminación del virus auxiliar por escisión mediada por Cre de la señal de
empaquetamiento viral. Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU 1996, 93, 13565-13570.
70. Hardy, S .; Kitamura, M .; Harris-Stansil, T .; Dai, Y .; Phipps, ML Construcción de vectores de
adenovirus mediante recombinación Cre-lox. J. Virol. 1997, 71, 1842-1849.
71. Sandig, V .; Youil, R .; Bett, AJ; Franlin, LL; Oshima, M .; Maione, D .; Wang, F .; Metzker,
ML; Savino, R .; Caskey, CT Optimización del sistema de adenovirus dependiente de ayuda para la
producción y la potencia en vivo. Proc. Natl. Acad. Sci. EE.UU 2000, 97, 1002-1007.
72. Zhou, H .; Zhao, T .; Pastore, L .; Nageh, M .; Zheng, W .; Rao, XM; Beaudet, AL Una línea celular que
expresa Cree y un virus con doble deleción E1 / E2a para la preparación de un vector de adenovirus
auxiliar dependiente. Mol. El r. 2001, 3, 613-622.
73. Barjot, C .; Hartigan-O'Connor, D .; Salvatori, G .; Scott, JM; Chamberlain, JS Crecimiento del vector adenoviral
eviscerado utilizando virus auxiliares con deleción E1 / E2b / E3. J. Gene Med. 2002, 4, 480-489.
74. Reddy, PS; Sakhuja, K .; Ganesh, S .; Yang, L .; Kayda, D .; Brann, T .; Pattison, S .; Golightly, D .; Idamakanti,
N .; Pinkstaff, A .; Kaloss, M .; Barjot, C .; Chamberlain, JS; Kaleko, M .; Connelly, S. Expresión sostenida del
factor VIII humano en ratones con hemofilia A después de la administración sistémica de un vector
adenoviral gutless. Mol. El r. 2002, 5, 63-73.
75. Sakhuja, K .; Reddy, PS; Ganesh, S .; Cantaniag, F .; Pattison, S .; Limbach, P .; Kayda, DB; Kadan, MJ;
Kaleko, M .; Connelly, S. Optimización de la generación y propagación de vectores adenovirales
gutless. Tararear. Gene Ther. 2003, 14, 243-254.
76. Ng, P .; Beauchamp, C .; Evelegh, C .; Parks, R .; Graham, FL Desarrollo de un sistema FLP / frt para generar
vectores adenovirales auxiliares dependientes. Mol. El r. 2001, 3, 809-815.
77. Umana, P .; Gerdes, CA; Stone, D .; Davis, JR; Ward, D .; Castro, MG; Lowenstein, PR La eficiente
recombinasa FLPe permite la producción escalable de vectores adenovirales auxiliares dependientes con
una contaminación insignificante por virus auxiliares. Nat. Biotechnol. 2001, 19, 582-585.
78. Palmer, D .; Ng, P. Sistema mejorado para la producción de vectores adenovirales dependientes de auxiliares. Mol. El r. 2003,
8, 846-852.
79. Chen, L .; Anton, M .; Graham, FL Producción y caracterización de líneas celulares 293 humanas que
expresan la recombinasa Cre de sitio específico. Somat. Célula. Mol. Gineta. 1996, 22, 477-488.
Virus 2010, 2 1700

80. Ng, P .; Evelegh, C .; Cummings, D .; Graham, FL Los niveles de Cre limitan la eficiencia de escisión de la señal de
empaquetamiento en el sistema de vector adenoviral dependiente de ayuda Cre / loxP. J. Virol. 2002, 76,
4181-4189.
81. Graham, FL Crecimiento de células 293 en cultivo en suspensión. J. Gen. Virol. 1987, 68, 937-940.
82. Chirmule, N .; Proper, K .; Magosin, S .; Qian, Y .; Qian, R .; Wilson, J. Respuestas inmunes a adenovirus
y virus adenoasociados en humanos. Gene Ther. 1999, 6, 1574-1583.
83. Seshidhar Reddy, P .; Ganesh, S .; Limbach, diputado; Brann, T .; Pinkstaff, A .; Kaloss, M .; Kaleko,
METRO.; Connelly, S. Desarrollo del adenovirus serotipo 35 como vector de transferencia génica. Virología 2003,
311, 384-393.
84. Vogels, R .; Zuijdgeest, D .; van Rijnsoever, R .; Hartkoorn, E .; Damen, I .; de Bethune, diputado;
Kostense, S .; Penders, G .; Helmus, N .; Koudstaal, W .; Cecchini, M .; Wetterwald, A .; Sprangers,
METRO.; Lemckert, A .; Ophorst, O .; Koel, B .; van Meerendonk, M .; Quax, P .; Panitti, L .; Grimbergen,
J .; Bout, A .; Goudsmit, J .; Havenga, M. Vectores de adenovirus humano tipo 35 de replicación deficiente para la
transferencia génica y la vacunación: infección eficaz de células humanas y derivación de la inmunidad de
adenovirus preexistente. J. Virol. 2003, 77, 8263-8271.
85. Nwanegbo, E .; Vardas, E .; Gao, W .; Whittle, H .; Sol, H .; Rowe, D .; Robbins, PD; Gambotto,
A. Prevalencia de anticuerpos neutralizantes de los serotipos adenovirales 5 y 35 en las poblaciones
adultas de Gambia, Sudáfrica y Estados Unidos. Clin. Diagn. Laboratorio. Immunol. 2004, 11,
351-357.
86. Smith, TA; Blanco, BD; Gardner, JM; Kaleko, M .; McClelland, A. La inmunosupresión
transitoria permite la administración intravenosa repetitiva con éxito de un vector de
adenovirus. Gene Ther. 1996, 3, 496-502.
87. Ophorst, DO; Kostense, S .; Goudsmit, J .; De Swart, RL; Verhaagh, S .; Zakhartchouk, A .; Van Meijer, M .;
Sprangers, M .; Van Amerongen, G .; Yuksel, S .; Osterhaus, AD; Havenga, MJ Un vector adenoviral de tipo 5
que lleva una fibra de tipo 35 como vehículo de vacuna: direccionamiento de DC, neutralización cruzada e
inmunogenicidad. Vacuna 2004, 22, 3035-3044.
88. Lemckert, AA; Sumida, SM; Holterman, L .; Vogels, R .; Truitt, DM; Lynch, DM; Nanda, A .; Ewald,
BA; Gorgone, DA; Lifton, MA; Goudsmit, J .; Havenga, MJ; Barouch, DH Inmunogenicidad de
regímenes de refuerzo primarios heterólogos que implican vectores de vacuna de adenovirus
recombinante de serotipo 11 (Ad11) y Ad35 en presencia de inmunidad anti-ad5. J. Virol.
2005, 79, 9694-9701.
89. Sumida, SM; Truitt, DM; Lemckert, AA; Vogels, R .; Custers, JH; Addo, MM; Lockman,
S.; Peter, T .; Peyerl, FW; Kishko, MG; Jackson, SS; Gorgone, DA; Lifton, MA; Essex, M .; Walker, BD;
Goudsmit, J .; Havenga, MJ; Barouch, DH Los anticuerpos neutralizantes contra los vectores de vacuna de
adenovirus del serotipo 5 se dirigen principalmente contra la proteína hexona de adenovirus.
J. Immunol. 2005, 174, 7179-7185.
90. Vlachaki, MT; Hernández-García, A .; Ittmann, M .; Chhikara, M .; Aguilar, LK; Zhu, X .; Teh,
BS; Butler, EB; Woo, S .; Thompson, TC; Barrera-Saldana, H .; Aguilar-Cordova, E. Impacto de la
preinmunización en la expresión y toxicidad del vector adenoviral en un modelo de cáncer de ratón
subcutáneo. Mol. El r. 2002, 6, 342-348.
Virus 2010, 2 1701

91. Cichon, G .; Boeckh-Herwig, S .; Schmidt, HH; Wehnes, E .; Muller, T .; Pring-Akerblom, P .; Burger, R.

Activación del complemento por adenovirus recombinantes. Gene Ther. 2001, 8, 1794-1800.
92. Abrahamsen, K .; Kong, HL; Mastrangeli, A .; Brough, D .; Lizonova, A .; Crystal, RG; FalckPedersen, E.
Construcción de un vector E1A de adenovirus tipo 7a. J. Virol. 1997, 71, 8946-8951. Gao, W .; Robbins,
93. PD; Gambotto, A. Adenovirus humano tipo 35: secuencia de nucleótidos y desarrollo de vectores. Gene
Ther. 2003, 10, 1941-1949.
94. Nan, X .; Peng, B .; Hahn, TW; Richardson, E .; Lizonova, A .; Kovesdi, I .; Robert-Guroff, M.
Desarrollo de un sistema de cósmidos Ad7 y generación de un virus recombinante env / rev
Ad7deltaE1deltaE3HIV (MN). Gene Ther. 2003, 10, 326-336.
95. Sakurai, F .; Mizuguchi, H .; Yamaguchi, T .; Hayakawa, T. Caracterización de in vitro y en vivo
propiedades de transferencia génica del vector adenovirus de serotipo 35. Mol. El r. 2003, 8, 813-821. Holterman,
96. L .; Vogels, R .; van der Vlugt, R .; Sieuwerts, M .; Grimbergen, J .; Kaspers, J .; Geelen,
MI.; van der Helm, E .; Lemckert, A .; Gillissen, G .; Verhaagh, S .; Custers, J .; Zuijdgeest, D .;
Berkhout, B .; Bakker, M .; Quax, P .; Goudsmit, J .; Havenga, M. Nuevo vector de replicación
incompetente derivado del adenovirus tipo 11 (Ad11) para vacunación y terapia génica: baja
seroprevalencia y no reactividad cruzada con Ad5. J. Virol. 2004, 78, 13207-13215.
97. Sirena, D .; Ruzsics, Z .; Schaffner, W .; Greber, UF; Hemmi, S. La secuencia de nucleótidos y un vector de
transferencia génica de primera generación del adenovirus humano de la especie B serotipo 3. Virología 2005,
343, 283-298.
98. Stone, D .; Ni, S .; Li, ZY; Gaggar, A .; DiPaolo, N .; Feng, Q .; Sandig, V .; Lieber, A. Desarrollo y
evaluación del adenovirus humano tipo 11 como vector de transferencia de genes. J. Virol.
2005, 79, 5090-5104.
99. Capone, S .; Meola, A .; Ercole, BB; Vitelli, A .; Pezzanera, M .; Ruggeri, L .; Davies, ME; Tafi,
R .; Santini, C .; Luzzago, A .; Fu, TM; Bett, A .; Colloca, S .; Cortese, R .; Nicosia, A .; Folgori, A. Un nuevo
vector del virus de la hepatitis C basado en adenovirus de tipo 6 (Ad6) que supera la inmunidad antiad5
preexistente e induce respuestas inmunes celulares potentes y amplias en macacos rhesus. J. Virol. 2006, 80,
1688-1699.
100. Havenga, M .; Vogels, R .; Zuijdgeest, D .; Radosevic, K .; Mueller, S .; Sieuwerts, M .; Weichold,
F.; Damen, I .; Kaspers, J .; Lemckert, A .; van Meerendonk, M .; van der Vlugt, R .; Holterman, L .; Hone, D .;
Skeiky, Y .; Mintardjo, R .; Gillissen, G .; Barouch, D .; Sadoff, J .; Goudsmit, J. Nuevos vectores del grupo B
adenovíricos de replicación incompetente: alta estabilidad del vector y rendimiento en células PER.C6. J.
Gen. Virol. 2006, 87, 2135-2143.
101. Lemckert, AA; Grimbergen, J .; Smits, S .; Hartkoorn, E .; Holterman, L .; Berkhout, B .; Barouch,
DH; Vogels, R .; Quax, P .; Goudsmit, J .; Havenga, MJ Generación de un nuevo vector adenoviral de
replicación incompetente derivado de adenovirus humano tipo 49: fabricación en células PER.C6,
tropismo e inmunogenicidad. J. Gen. Virol. 2006, 87, 2891-2899.
102. Ruzsics, Z .; Wagner, M .; Osterlehner, A .; Cook, J .; Koszinowski, U .; Burgert, HG Transposonassisted
clonación y mutagénesis sin trazas de adenovirus: desarrollo de un nuevo vector basado en la
especie D. J. Virol. 2006, 80, 8100-8113.
Virus 2010, 2 1702

103. Abbink, P .; Lemckert, AA; Ewald, BA; Lynch, DM; Denholtz, M .; Smits, S .; Holterman, L .; Damen, I .;
Vogels, R .; Thorner, AR; O'Brien, KL; Carville, A .; Mansfield, KG; Goudsmit, J .; Havenga, MJ; Barouch,
DH Seroprevalencia e inmunogenicidad comparativas de seis vectores de vacunas de adenovirus
recombinantes de serotipos raros de los subgrupos B y D. J. Virol. 2007, 81,
4654-4663.
104. Lemiale, F .; Haddada, H .; Nabel, GJ; Brough, DE; King, CR; Gall, JG Vectores de vacunas de adenovirus
novedosos basados en el serotipo 41 entérico-trópico. Vacuna 2007, 25, 2074-2084.
105. Klonjkowski, B .; Gilardi-Hebenstreit, P .; Hadchouel, J .; Randrianarison, V .; Boutin, S .; Yeh, P .; Perricaudet,
M .; Kremer, EJ Un vector adenoviral canino recombinante con deleción E1 capaz de transducción y
expresión de un transgén en células derivadas de humanos y en vivo. Tararear. Gene Ther.
1997, 8, 2103-2115.
106. Reddy, PS; Idamakanti, N .; Chen, Y .; Ballena, T .; Babiuk, LA; Mehtali, M .; Tikoo, SK Adenovirus
bovino de tipo 3 con replicación defectuosa como vector de expresión. J. Virol. 1999, 73,
9137-9144.
107. Kremer, EJ; Boutin, S .; Chillon, M .; Danos, O. Vectores de adenovirus caninos: una alternativa para la
transferencia de genes mediada por adenovirus. J. Virol. 2000, 74, 505-512.
108. Farina, SF; Gao, GP; Xiang, ZQ; Rux, JJ; Burnett, RM; Alvira, MR; Marsh, J .; Ertl, HC; Wilson, JM
Vector de replicación defectuosa basado en un adenovirus de chimpancé. J. Virol. 2001, 75,
11603-11613.
109. Roy, S .; Gao, G .; Lu, Y .; Zhou, X .; Lock, M .; Calcedo, R .; Wilson, JM Caracterización de una familia de
adenovirus de chimpancé y desarrollo de clones moleculares para vectores de transferencia de genes. Tararear.
Gene Ther. 2004, 15, 519-530.
110. Roy, S .; Zhi, Y .; Kobinger, GP; Figueredo, J .; Calcedo, R .; Miller, JR; Feldmann, H .; Wilson,
JM Generación de un vector de vacuna adenoviral basado en adenovirus de simio 21. J. Gen. Virol.
2006, 87, 2477-2485.
111. Gagar, A .; Shayakhmetov, DM; Lieber, A. CD46 es un receptor celular para adenovirus del grupo
B. Nat. Medicina. 2003, 9, 1408-1412.
112. Segerman, A .; Atkinson, JP; Marttila, M .; Dennerquist, V .; Wadell, G .; Arnberg, N. El adenovirus tipo
11 usa CD46 como receptor celular. J. Virol. 2003, 77, 9183-9191.
113. Sirena, D .; Lilienfeld, B .; Eisenhut, M .; Kalin, S .; Boucke, K .; Beerli, RR; Vogt, L .; Ruedl, C .;
Bachmann, MF; Greber, UF; Hemmi, S. El cofactor de membrana humana CD46 es un receptor del
adenovirus de la especie B serotipo 3. J. Virol. 2004, 78, 4454-4462.
114. Ornelles, DA; Shenk, T. Localización de la proteína de 55 kilodaltons de la región temprana 1B del adenovirus durante la
infección lítica: la asociación con inclusiones virales nucleares requiere la proteína de 34kilodalton de la región
temprana 4. J. Virol. 1991, sesenta y cinco, 424-429.
115. Rubenwolf, S .; Schutt, H .; Nevels, M .; Wolf, H .; Dobner, T. Análisis estructural del complejo proteico
de adenovirus tipo 5 E1B 55-kilodalton-E4orf6. J. Virol. 1997, 71, 1115-1123.
116 Weigel, S .; Dobbelstein, M. La señal de exportación nuclear dentro de la proteína E4orf6 del adenovirus
tipo 5 apoya la replicación del virus y la acumulación citoplasmática de ARNm viral. J. Virol. 2000, 74,
764-772.
Virus 2010, 2 1703

117. Roy, S .; Clawson, DS; Lavrukhin, O .; Sandhu, A .; Miller, J .; Wilson, JM Rescate de vectores adenovirales
quiméricos para expandir el repertorio de serotipos. J. Virol. Métodos 2007, 141, 14-21.

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