Lisosomas, degradación y muerte celular

LISOSOMAS
 Organelas citoplasmáticas limitadas por una sola membrana.
 Descubiertas por Christian de Duve.
 Presentes en todas las células eucariotas.
 Contienen 50-60 enzimas hidrolíticas (hidrolasas)
 Son los degradadores de residuos o desechos de la célula.
 Su función catabólica es complementada por organelas asociadas a los lisosomas (LROs).
 Matriz lisosomal ácida (PH 4,8) favorable para actividad enzimática.
 2 clases de proteínas son esenciales para su funcionamiento:
o Hidrolasas lisosomales.
o Proteínas integrales de la membrana lisosomal (LMPs)
 Tienen enzimas hidrolíticas que son elaboradas en el RER y modificadas en el aparato de
Golgi.
 Degradan material procedente de:
o Endocitosis
o Fagocitosis
o Autofagia
 Participan en:
o Degradación en volumen
o Procesamiento pro-proteínas
o Procesamiento de antígenos (lisosomas se comen a las bacterias por fagocitosis)
o Degradación de la matriz extracelular
o Iniciación de apoptosis
 Dentro del lisosoma vamos a encontrar: enzimas hidrolíticas, lipasas, glucosidasas,
proteasas, nucleasas (enzimas que destruyen a las células)
 Proteínas integrales de la membrana lisosomal (LMPs), aprox. 25 en lisosomas de
mamífero.
 Cumplen diversas funciones:
o Acidificación del lumen lisosomal.
o Importación de proteínas desde el citosol.
o Fusión de membranas.
o Transporte de productos de degradación al citoplasma.
 Las más abundantes:
o Proteína de membrana asociada al lisosoma 1 (LAMP1).
o Proteína de membrana asociada al lisosoma 2 (LAMP2).
o Proteína integral de membrana lisosomal 2 (LIMP2).
o Tetraspanin CD63.
o Bomba de protones tipo vacuolar.

FAGOCITOSIS
3 procesos durante la fagocitosis:
o Fagolisosomas: Fagosoma + Lisosoma primario
o Endosomas tardíos: lisosoma primario + endosoma temprano o endosoma
o Autofagolisosomas: cuando la célula encuentra organelas que ya no funcionan, esta forma
un autofagosoma, que se une al lisosoma para dar un autofagolisosoma

Eventos durante la fagocitosis: Formación del fagolisoma

Vamos a encontrar células especializadas en fagocitosis que tienen gran cantidad de lisosomas.
Por ejemplo, los Macrófagos (glóbulos blancos) de medula ósea
Funciones:
 Defensa
 Alimentación

Las enzimas contenidas en los lisosomas destruyen el contenido del fagolisosoma

La actividad en los fagolisosomas esta mediado por 2 mecanismos: oxigeno dependiente y
oxigeno independiente. En ambos casos el objetivo es la destrucción del contenido fagocitado
Fagocitosis: etapas
 Quimiostaxis: Factores del complemento. Prod bacteriano y Prod celulares
 Adherencia: participan las opsoninas
 Ingestión
 Digestión

Biogénesis lisosomal:
 Requiere integración de vías endocítica y biosintética.
 Frecuentemente emerge del aparato de Golgi.
 En algunos casos se desarrolla gradualmente a partir de endosomas tardíos

Las células contienen múltiples sistemas para degradar proteínas

 El Sistema Ubiquitin-proteasoma
 El Sistema Lisosomal
 El Sistema Intra-mitochondria
 Calpainas (Ca2+-dependiente de proteases)
 Caspasas
 Proteasas de membranas

Importancia clinica
Muchas enfermedades neurológicas y otras son causadas por la acumulación de proteínas o
sustancias que no han sido degradadas correctamente, más que por la degradación de proteínas
con estructuras anormales.
 Enfermedad de Alzheimer (por la acumulación de b-amyloid, tau)
 Enfermedad de Huntington (Huntingtin)
 Enfermedad de Parkinson (a-synuclein)
 Enfermedad de ALS “Lou Gerhig’s” (SOD)
 Enfermedad de la espina-Bulbar y atrofia muscular (receptores de andrógenos).
 Enfermedad por Priones “Mad Cow disease” (prión)

Rol fisiológico de la degradación intracelular de proteínas permite:

 Control de calidad
 Procesamiento antigénico
 Regulación en funciones celulares
 Adaptación a estadios fisiológicos o patológicos

DEGRADACIÓN DE PROTEINAS MAL PLEGADAS

  Mal plegada = no funcional. Desnaturalizada
 Se rompe enlaces covalentes, no covalentes, disulfuro; a través de la Chaperona-n
glucanasa-ubiquitina o los Proteosomas.
El modelo ubiquitin-proteosoma para la degradación de proteínas tiene 2 fases
 Modificación del substrato por Ubiquitín
 Degradación del substrato por el proteosoma
 La ubiquitina se encarga de licuar la proteína. Y esta proteína expulsará péptidos y
aminoácidos

Ubiquitina: es una proteína de 76 aminoácidos. Mr = 8,000. Altamente conservada. Ampliamente

distribuida. Tiene en su extremo carboxilo terminal a la glycina
Proteínas Ubiquitinadas son degradadas por el Proteasoma
Proteosoma reconoce la cadena poliubiquitina y no la proteina; de esta forma se produce la
ruptura de la proteina dando como origen a los péptidos y aminoacidos y a monoubiquitinas.
La especifidad para ubiquitinación se lleva a cabo con múltiples enzimas de conjugación, trabajo que valió
el premio nobel 2004

Estructura de un proteosoma
 Imagen de microscopía electrónica del proteosoma 26 S de levadura S. cerevisae
 Representación esquemática de la estructura y función del proteosoma 26 S

Muerte celular
APOPTOSIS (Muerte celular programada)
 Primera denominación: necrosis por contracción (shrinkage necrosis). En1972 Ker la
denominó apoptosis. Del griego “caer o morir como caen los pétalos o las hojas en otoño”
 Ocurre durante toda la vida. Fundamental en la homeostasis. De crucial importancia
durante el desarrollo. H. Robert Horvitz (1986) investigó el modelo genético implicado en la
muerte celular programada, usando un sistema modelo conocido y caracterizado, el
nemátodo Caenorhabditis elegans.
 La apoptosis, a diferencia de la necrosis, consume ATP, cuya energía es utilizada para la
activación de unas enzimas llamadas caspasas, cuya activación en cascada producen los
efectos que podemos ver en la célula.
 No induce respuesta inflamatoria.
 Cambios morfológicos (se ocasiona la apoptosis cuando)
o Pérdida de adhesión celular
o Contracción celular por pérdida de agua y Na+ (célula deshidratada)
o Condensación de cromatina a nivel nuclear (estructuras en media luna)
o Núcleo se rompe en múltiples fragmentos ADN + PROTEINA =
CROMATINA
o Fragmentación del DNA (piezas de 180-200 pb)
o Se mantiene integridad de la membrana plasmática
o Formación de cuerpos apoptóticos que son rápidamente reconocidos y fagocitados
por macrófagos o por células vecinas sin pérdida de su contenido.
 Cambios Morfológicos: encogimiento nuclear y celular, condensación de cromatina
(picnosis), formación de yemas, fragmentación nuclear (cariorrexis) y formación de cuerpos
apoptóticos.
 Bioquímica: permeabilización de la membrana mitocondrial (PMM) y/o activación masiva
de la caspasas.
Procesos en los que interviene la apoptosis
  En toda etapa del desarrollo o reparación tisular en donde se produzcan células en exceso.
 Eliminación de linfocitos.
 Eliminación de células infectadas y tumorales

Etapas de la apoptosis
Activación (inducción negativa/positiva)
 Interviene receptores de muerte (Fas, TNF / factores necrosis tumoral) o normales
(glutamato)
 Rutas de transducción celular (intervienen mensajeros: Ca 2+, radicales libres, proteínas
codificadas por genes supresores)

Decisión (la toma la mitocondria)

Ejecución (permite la degradación de proteínas y ácidos nucleicos) y liberación de Caspasas
Vías que conducen a la apoptosis
Vía intrínseca (mitocondrial)
 Controlada por la interacción de proteínas pro-apoptóticas y anti-apoptóticas de la familia
BCL2.
 Regulada por la caspasa 9 (daño celular abrumador).
 Iniciadores de la vía:
o Incremento intracelular de ROS (lisosomas unidos a organelas)
o DNA dañado, por ejemplo, en células cancerígenas donde se altera el ADN
o Respuesta de proteínas no plegadas
o Privación de factores de crecimiento

Vía extrínseca (receptor muerte)

 Inicia cuando miembros de la superfamilia TNF se unen a receptores muerte de la
superficie celular.
 Receptores de membrana de superfamilia de receptores TNF (CD95, DR3 y DR4), inducen
el reclutamiento proximal del complejo activador de caspasa.
 Se activa la caspasa-8 y caspasa-10
 Las caspasa 8 y caspasa 9 activadas movilizan a su vez a las caspasas 3, 6 y 7, proteasas
que inician la demolición de la célula a través de la degradación de numerosas proteínas y
la activación de DNAsas.

Familia de proteínas BCL2

 Anti-apoptótico: BCL2, BCL-XL, BCLW, MCL1, A1, BOO/DIVA
 Pro-apoptótico: BAX, BAK, BIM, BID, PUMA

NECROSIS (Muerte celular accidental)

 No hay ATP
 Cuando las células sufren daños tales como quemaduras, accidentes, radiaciones,
traumas, infecciones, etc. se produce necrosis.
 La muerte no ocurre de forma ordenada, de manera general el núcleo no presenta cambios
aparentes.
 Las mitocondrias aparecen dañadas, el agua y iones fluyen hacia el citoplasma y la célula
se hincha, con lo que termina por romperse liberando el contenido celular quedando en el
medio proteasas y señales que atraen células del sistema inmunitario, por lo que tiene
lugar una reacción inflamatoria en la zona.
Características morfológicas:
 Edema nuclear y mitocondrial.
 Formación de prolongaciones en la superficie celular.
 Desagregación de ribosomas.

Características morfológicas (si persiste la noxa o agente patógeno):

 Se acentúan más los cambios.
 “Burbujeo” extremo en la superficie celular.
 Gran dilatación mitocondrial. (inflamación)
 Ruptura de la membrana. (la célula se destruye)
 Disolución de las organelas y núcleo.
 Degeneración lisosomal

Se da respuesta a una noxa.

El estímulo de la muerte es la causa directa de la defunción celular.
Muerte celular por agresión externa (física, química o biológica).
Gran respuesta inflamatoria en el lugar de la injuria.
Cambios generalmente desde parte externa hacia la interna.
Autofagia
 Proviene del griego que significa “comerse uno mismo”
 Proceso por el cual la célula recicla sus propias organelas y componentes
macromoleculares no esenciales, redundantes o dañados.
 Respuesta de autofagia es adaptativa al stress sub-letal. (célula se cansa y se destruye)
 Participa en:
o Supresión del crecimiento del tumor. (la autofagia evita el crecimiento de un tumor)
o Supresión de proteínas tóxicas mal plegadas. (proteínas mal plegadas no sirven)
o Eliminación de microorganismos intracelulares. (cuando una bacteria ingresa a la
célula, esta se suicida, proceso de autofagia)
o Presentación de antígenos (como bacterias)

 A lo largo del desarrollo cualquier organismo necesita deshacerse de ciertas estructuras y

crear otras. Durante un proceso de metamorfosis
Tres formas de autofagia:
 Macroautofagia (en cuerpos grandes)
 Microautofagia (en cuerpos pequeños)
 Autofagia mediada por chaperonas

Regula formación de autofagosoma:

 Fosfatidilinositol 3 kinasa (PI3K)
 Beclin-1 (BECN1)
 mTOR (sirolimus)

Aspectos fisiológicos y moleculares

Estadios de autofagia:
 Vesículas nucleares
 Elongación vesicular: que va permitir la formación del autocromosoma
 Fusión de una doble membrana (auto-fagosoma/lisosoma) formación del auto-lysosoma:
permite la degradación de contenido a través de las enzimas lisosomales cathepsin B, D, L