UNIVERSIDAD CIENTÍFICA DEL SUR

FACULTAD DE: CIENCIAS DE LA

SALUD
CARRERA: MEDICINA HUMANA

LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
CURSO: BIOQUÍMICA
PRÁCTICA: N° 3

GRUPO: 2L2
PROFESOR:

● SALAZAR SANCHEZ, JUAN ALBERTO

INTEGRANTES:
● ALVAREZ CONCHA, ARACELY PATRICIA
● ANTON GUERRERO, JHON FABRIZZIO
● CHAVEZ CORNEJO, VERÓNICA ILLARIY
● CAMPOS LAGUNA YAMILETH CLARIVELL
● RUEDA GONZALEZ, ARIANA NICOL
● CIEZA RAMIREZ JHOBELY MICHALY
● LECAROS RÍOS CAMILA XIMENA

2021
 FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

En el presente informe se realizará el análisis de los factores que afectan la actividad

enzimática, con lo explicado en clase y con la investigación realizada por el grupo; la cual
nos llevó a saber que los factores de afección en la actividad enzimática pueden ser la
temperatura, el pH del medio, concentración de sustratos o enzimas y por último los efectos
de inhibidores y activadores; estos factores pueden acelerar o disminuir la actividad
enzimática, pero hay que tener en cuenta también que los valores excesivas de pH o
temperatura pueden llevar a la desnaturalización de las enzimas. Por eso, para explicar
dichos efectos se utilizó a la albúmina como medio experimental para así ver los cambios
que los factores enzimáticos dan en su actividad.

Objetivos:

- Conocer los factores que afectan la actividad enzimática.

- Explicar la actividad enzimática de la pepsina sobre la actividad de la albúmina.
- Explicar el efecto de un factor enzimático sobre la actividad de la pepsina.
- Determinar el Km y Vmáx experimental de la pepsina para la albúmina a partir de la
gráfica de Vi contra [S].

Factores que afectan la actividad enzimática:

1. Concentración de sustrato
a) Velocidad máxima: La tasa o velocidad de una reacción es el número de
moléculas de sustrato que se convierte en producto por unidad de tiempo. la
velocidad por lo general se expresa como micromoles de producto formadas por
minuto. La velocidad de una reacción catalizada por enzimas aumenta con la
concentración de sustrato hasta que se alcanza una velocidad máxima. la
nivelación de la velocidad de reacción con altas concentraciones de sustrato
refleja la saturación con su trato de todos los sitios de Unión disponibles en las
moléculas de enzimas presentes (1).
b) Forma de la curva de cinética enzimática: la mayoría de las enzimas. Presenta
una cinética de michaelis- menten, en la cual la Gráfica de la velocidad inicial de
reacción contra la concentración de sustrato es hiperbólica. en contraste, las
enzimas alostéricas no siguen la cinética de michaelis- menten y presentan una
curva sigmoidea Qué es semejante en forma a la curva de disociación de oxígeno
a la hemoglobina (1).
2. Temperatura
a) Incremento de la velocidad con la temperatura: La velocidad de la reacción
aumenta con la temperatura hasta que se alcanza una velocidad máxima. Este
incremento es el resultado de un mayor número de moléculas de sustrato tenga
suficiente energía para pasar sobre la Barrera energética y formar los productos
de la reacción (1).
b) Reducción de la velocidad y con el aumento de temperatura: Una mayor
elevación de temperatura causa una disminución en la velocidad de reacción
como resultado de una desnaturalización de la enzima inducida por la
temperatura.
 La temperatura óptima para la mayoría de las enzimas humanas está entre 35 y
40 grados centígrados. las enzimas humanas comienzan a desnaturalizarse a
temperaturas por arriba de 40 grados centígrados, sin embargo las bacterias
termoliticos que se encuentran en las aguas termales tienen temperaturas
óptimas de 70° centígrados (1).
3. PH
A. Efecto de pH sobre la ionización del sitio activo: La concentración de protones
afecta a la velocidad de reacción en diversas formas. primero, el proceso catalítico
por lo general requiere que la enzima y el sustrato tengan grupos químicos
específicos ya sea en estado ionizado o no ionizado con el fin de interactuar. Por
ejemplo, la actividad catalítica puede requerir que un grupo amino de la enzima se
encuentra en forma protonada. Dado que este grupo está desprotonado a PH
alcalino la tasa de la reacción disminuye (1).
B. Efecto del PH sobre la desnaturalización de las enzimas: Los pH extremos
también pueden producir la desnaturalización de las enzimas, por estructura de las
moléculas proteicas catalíticamente activas depende del carácter iónico de las
cadenas laterales de los aminoácidos (1).
C. pH óptimo variable: el pH al cual se obtiene la máxima actividad enzimática es
diferente para las distintas enzimas y con frecuencia refleja la concentración de
protones a la cual la enzima Funciona en el cuerpo. Por ejemplo, la Pepsina, una
enzima digestiva en el estómago tiene su máximo nivel de actividad a pH 2,
Mientras que otras enzimas diseñadas para funcionar a pH neutro se
desnaturalizan en un ambiente ácido (1).

Materiales:
- 8 tubos de ensayo: Se utiliza para contener muestras líquidas, y preparar
soluciones, conlleva el uso de pinzas de madera si se expone a altas temperaturas
durante un largo tiempo, de lo contrario, las manos para sostenerlo, en casos en los
cuales no exista peligro alguno (2).
- Agua destilada (mL): Reactivo, limpia de electrolitos, sales minerales,
microorganismos y otras sustancias contaminantes, Además es buena conductora
de la electricidad (2).
- HCI 1N (MnL): Es soluble en agua y alcohol, es un líquido transparente con un
fuerte olor acre. Se utiliza como reactivo en diferentes reacciones químicas y en la
preparación de muestras para análisis requeridas en laboratorio (3).
- Albúmida 5%(MmL):
- Pepsina 2% P/V (mL): Es una endopeptidasa, actúa sobre grupos amino de
aminoácidos aromáticos hidrolizando las proteínas a polipéptidos de alto PM (3).

Parte experimental:
1. Primero se enumera los 8 tubos de ensayo (13×100mm)
2. Se añaden los siguientes reactivos:
● agua destilada
● HCL 1N
● Albúmina 5%
● Pepsina 2% P/V
Tal como indica la tabla:
3. Se procede a mezclar cada tubo
4. Se lee todos los tubos a través del espectrómetro. Se tiene que considerar las
absorbancias como lectura inicial.
5. Se debe incubar todos los tubos a 37° C por 5 minutos.
(El tubo número nueve contiene pepsina al 2% = 4 ml)
6. Se debe añadir 0.5 ml de pepsina a cada tubo
(Del tubo número 9 se va a proceder a añadir a los tubos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 y 8.)

7. Se Incuba la nueva mezcla de los tubos a 37° C por 5 minutos o hasta que el tubo 1
tenga una tonalidad más clara.

8. Se detiene la reacción poniéndolo en baño de hielo a los tubos.

9. Se procede a leer los tubos en el espectrómetro y se considera las nuevas
absorbancias como lectura final.
10. Para que al final con la Vmáx se pueda encontra la 1/2Vmáx y realizar la
representación gráfica de Michaelis-Menten; también la representación gráfica de
doble recíproco para la pepsina usando como sustrato a la albúmina (%)
Resultados:
- Cuando la concentración de la albúmina fue de 2.23% el Km para la pepsina en esta
concentración fue de 0.190
- La velocidad máxima de 0.380 se alcanzó con una concentración de albúmina de
4.25%
- Se realizó una representación gráfica doble recíproco o más conocido como la
representación de Lineweaver-Burk. En el gráfico se forma una línea recta en la que
el eje de X está representada por 1/(S) y el eje Y por 1/V. Luego de esto se obtuvo
que para la pepsina la Vmax fue de 0.38 con un Km de 3.33%.

Conclusiones:
- Logramos conocer algunos factores que afectan la actividad enzimática, como la
temperatura, pH y concentración de sustratos o enzimas, como se observó al
realizar la parte experimental.
- La pepsina degradará a la albúmina a aminoácidos y se dará una reacción
catabólica.
- Un factor que afecta la actividad enzimática de la pepsina es el pH, ya que el
ambiente óptimo donde esta enzima pueda funcionar, es el ácido. (pH 1,8 -3)
- Haciendo la representación de Lineweaver-Burk. Se obtuvo para la pepsina la Vmax
fue de 0.38 con un Km de 3.33%.

Referencias Bibliográficas:
1. Lippincott, Illustrated, Reviews. Enzimas.Bioquímica: 7ª edición. Wolters Kluwer: 81,
2017

2. General Q, Científico P, Materia L, Atómica T, Orgánica Q, Bases Á et al. Tubo de Ensayo »

TP - Laboratorio Químico [Internet]. TP - Laboratorio Químico. 2021 [cited 25 April 2021].
Available from:
https://www.tplaboratorioquimico.com/laboratorio-quimico/materiales-e-instrumentos-de-un-la
boratorio-quimico/tubo-de-ensayo.html

3. [Internet]. Scielo.org.pe. 2021 [cited 25 April 2021]. Available from:

http://www.scielo.org.pe/pdf/afm/v69n3/a03v69n3.pdf