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Primer Previo Enzimologia
Primer Previo Enzimologia
Profesor:
Biólogo
INGENIERIA BIOTECNOLOGIA
2018
La diferencia entre los dos tipos de colinesterasa está en sus respectivas preferencias por sustratos:
la primera hidroliza acetilcolina más rápido; la segunda hidroliza butirilcolina más rápido.
Figura 1 .Estructura de la enzima Colinesterasa.
Protocolo.
Se vuelve a homogenizar
en 30 toques en
EXTRACION DE soluciones en hielo o Se fraccionan y se
COLINESTERASA. frias en un aparato centrifuga (5.000 x g por
PotterElvehjem con una 30 minutos a 5 °C
cinta de teflon.
Se homogeniao con 20
ml de cuatro soluciones 3.1 mol deL-1 HCL mas 1
diferentes que estan en base.
frio .
Las proteasas son capaces de romper enlaces peptídicos específicos, de su proteína blanco. Esta
proteólisis limitada produce péptidos y es incapaz de reducir estos a sus aminoácidos constitutivos.
• Inespecíficas de sustrato
La función de las peptidasas es inhibida por inhibidores de la proteasa. Los inhibidores de proteasas
naturales no se deben confundir con los inhibidores de proteasas usados en la terapia anti-retroviral.
Algunos virus, incluyendo al VIH, dependen de las proteasas en sus ciclos reproductivos, por eso los
inhibidores de proteasas se desarrollan como métodos antivirales.
El medio de cultivo ya
preparado se centrifuga a
EXTRACION DE El sobrenadante se utiliza
3200 rmp x g por 1 h y se
como solucion cruda
PROTEASA. refrigera a 4 °C0 para
enzimatica.
eliminar las micelios
fungicos y las impureas.
Se disuelve en un
Precipita gradualmente El precipitado se
volumen minino de 0,1 %
hasta al 80 % con sulfato centriguda a 3200 rmp x g
TrisHCL buffer con un ph
de amonio saturado. por 30 minutos .
de 9.
Las peroxidasas son enzimas que utiliza como cofactor el grupo hemo,que usan peróxido de
hidrógeno como aceptor de electrones para catalizar una serie de reacciones oxidativas. La
mayoría de las peroxidasas hemo siguen el esquema de reacción:
Fe3 + + H2O2 -> [Fe4 + = O] R '(Compuesto I) + H2O [Fe4 + = O] R' + sustrato -> [Fe4 + = O] R
(Compuesto II) + sustrato oxidado [Fe4 + = O] R + sustrato -> Fe3 + + H2O + sustrato oxidado.
Las peroxidasas se encuentran en bacterias, hongos, plantas y animales y se pueden ver como
miembros de una superfamilia que consta de 3 clases principales. La clase III comprende las
peroxidasas de plantas secretoras, que tienen múltiples funciones específicas de tejido, por ejemplo,
eliminación de peróxido de hidrógeno de cloroplastos y citosol; oxidación de compuestos tóxicos;
biosíntesis de la pared celular; respuestas de defensa hacia herir; catabolismo del ácido indol-3-
acético (IAA); biosíntesis de etileno; y así. El amplio espectro de actividad de la peroxidasa, junto
con la participación en diversos procesos fisiológicos, está en consonancia con su relativa falta de
especificidad para los sustratos y la aparición de una variedad de isoenzimas. Las peroxidasas
vegetales son glicoproteínas monoméricas que contienen 4 puentes disulfuro conservados y 2 iones
de calcio.
Figura 2.Estrustura de la Peroxidasa.
Protocolo
La muestra se lava ,
cortan, muelen usando
un cilcel y mescladas con
EXTRACION Se filtra usando un paño
la ayuda de 2000 g de
PEROXIDASA de cincel.
buffer de fosdato con ph
7, con esto se prepara el
estracto puro.
El sobrenadante es
Para remover las llevado y filtrado con un se centrifuga 8000 rmp x
impuresas , como la filtro de papel whatmann 10 minutos , para
catalasa, se calienta a 65 y se guarda como un remover pequeñas
°C por 3 minutos estracto crudo en un vaso impuresas
de precipitado
La enzima cruda se
guarda en el refigerador y
se llava a temperatura
ambiente despues de
cada experimento.
Bibliografía.