CAP1: CINETICA DE LAS REACCIONES ENZIMATICAS

CINETICA DE LAS REACCIONES ENZIMÁTICAS HOMOGENEAS

CINETICA ENZIMATICA: Rama de la enzimología relacionada con los factores que
afectan la proporción en que se lleva a cabo una reacción enzimática.

Los factores que afectan: Concentración de ligandos: [ S ] - [ P ] - [ Inhibidores ] -

[ E ], pH, T.

Objeto de la Cinética Enzimática: Obtener conocimiento acerca de la naturaleza

de una reacción enzimática.

- Cómo se realiza la trayectoria de la reacción enzimática

- Como afecta la presencia de diferentes ligandos
- Identificar diferentes tipos de [ E-S] y su incidencia en el tipo de reacción Estructurales: no establecen enlace con el sustrato
- Identificar intermediarios estables De fijación: Establecen enlaces débiles con el sustrato y lo fijan
- Determinar constantes cinéticas Catalizadores: Establecen enlaces con el sustrato. Son los responsables de la
- Inferenciar su aplicación en sistemas in vitro, in vivo y en mecanismos de transformación.
regulación
- Deducir conclusiones por efectos observados cuando varían las
condiciones en las que se realiza una reacción enzimática: pH,
temperatura, concentración de enzimas, con presencias de inhibidores.

ENZIMA: Compuestos en su gran mayoría son proteínas que aceleran la velocidad

de reacciones, intervienen en procesos químicos, catalizadores biológicos que
disminuyen la E de activación, son reutilizables, actúan específicamente.

Interacción iónica
(puente de hidrogeno)
E-S
 Estas en un medio acido por lo cual no está en su
OTROS FACTORES QUE AFECTAN LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA forma óptima para interactuar.
Efecto del pH sobre el ciclo catalítico:
FORMA DE ESPECIES IONICAS INADECUADAS

Disminución de pH: se tiene que analizar EFECTO DE PREINCUBACION ANTES DE UNIR E Y S

las zonas de la enzima, hay zonas por
donde puede fluctuar el pH: zonas por Velocidad de Rx,
- formación de especies iónicas
inadecuadas. (zonas no tan
favorables para la interacción E-S.
- desnaturalización enzimática.

Consideración: se hace previa incubación de E-S aparte

EFECTO PH SOBRE VELOCIDAD DE REACCIÓN ENZIMÁTICA

- Los sitios activos están formados por enlaces ionizables

- Deben encontrarse en la adecuada forma iónica para mantener la
conformación del centro activo
- Los sustratos contienen formas ionizables y sólo una forma iónica del
sustrato puede enlazar a la enzima
- El efecto del pH puede verse en curvas de pH vs Velocidad pero son
incompletos o dan información inexacta
- Habría que determinar porqué la velocidad disminuye a los lados de la
velocidad máxima alcanzada

Efecto de la [Enzima] sobre el ciclo catalítico

Efecto [E] sobre Velocidad de reacción enzimática

- La velocidad de reacción es proporcional a la [E], esta relación puede

utilizarse para cuantificar la concentración de E presente
- El efecto es linear siempre que se midan velocidades iniciales verdaderas
en un período corto de tiempo
- Las [E] a nivel intracelular oscilan entre 1 x 10-12 a 1x 10 -7 M
- La [E] es un factor significativo porque a muy bajas [] puede disociarse en
oligómeros o monómeros menos estables

Efecto de la Temperatura sobre el ciclo catalítico:

EFECTO DE LA TEMPERATURA:

- La velocidad de reacción se incrementa, a medida que aumenta la

temperatura.
- Existe una temperatura crítica asociada a una caída de la velocidad (50o a
60oC).
- La temperatura afecta la estabilidad de la enzima y los diversos
parámetros cinéticos: Km, Vmax, Ki, etc.
- Si la enzima absorbe excesiva energía se rompe la estructura terciaria y la
enzima se desnaturaliza.
- La temperatura óptima es aquella en que la enzima muestra una actividad
constante en un periodo de tiempo igual al del ensayo.
Efecto de la temperatura sobre la velocidad de reacción
Control de la actividad enzimática

Alosterismo

Los moduladores son compuestos químicos que al unirse a la enzima pueden

aumentar o disminuir la actividad catalítica de la enzima /( Moduladores positivos
Teoría alostérica Premio Nobel 1965: y Moduladores negativos)
Estudios que permitieron comprender el mecanismo de participación de las
enzimas en la regulación del metabolismo

Denominadas enzimas reguladoras o alostéricas, se demostró que son una

herramienta de la célula para controlar sus procesos o la cantidad de
metabolito a producir y cuando producir

No son enzimas michaelianas ,muestran una cinética sigmoidal y no

hiperbólica rectangular como las enzimas michaelianas

Alosterismo- Principios