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Lima, Perú
2018
INDICE:
UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA
Facultad de Ingeniería Ambiental
Resumen 2
Introducción 2
Objetivos 2
Marco Teórico 2
Resultados 15
Discusión de resultados 16
Conclusiones 16
Recomendaciones 17
Cuestionario 17
Fuentes de información 19
Anexos 19
Apéndice 21
RESUMEN:
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UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA
Facultad de Ingeniería Ambiental
En el presente informe “Uso del microscopio compuesto” se realizó con el fin de
conocer las partes de un microscopio compuesto además de distinguir y
diferenciar ciertas muestras específicas como son la trichoderma o Pulex irritans.
INTRODUCCIÓN:
OBJETIVOS:
GENERALES:
ESPECIFICOS:
MARCO TEÓRICO:
CONCEPTOS:
Los microscopios ópticos emplean lentes de vidrio para desviar y enfocar
los rayos de luz, produciendo imágenes aumentadas de objetos
pequeños. La resolución de un microscopio óptico se determina por la
apertura numérica de su sistema de lentes y la longitud de onda de la luz
empleada; la resolución máxima es de aproximadamente 0.2 u.m.
Los tipos más comunes de microscopios ópticos son los de campo claro,
campo oscuro, contraste de fases y de fluorescencia. Cada uno de ellos
ofrece una imagen distintiva y pueden emplearse para observar aspectos
diferentes de la morfología microbiana.
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Como la mayoría de los microorganismos son incoloros y, por ello,
difíciles de observar con el microscopio de campo claro, se suelen fijar y
teñir antes de su observación. Se puede emplear una tinción simple o
diferencial para aumentar el contraste. Algunas estructuras bacterianas
específicas, como cápsulas, endosporas y flagelos pueden también
teñirse selectivamente.
El microscopio electrónico de transmisión alcanza una gran resolución
(aproximadamente, 0.5 nm), al utilizar haces de electrones de longitud de
onda muy corta, en lugar de luz visible. Aunque los microorganismos
pueden prepararse para su observación de otras formas, se suelen
estudiar cortes finos de muestras incluidas en polímeros y tratadas con
metales pesados para mejorar el contraste.
Se pueden apreciar características externas con gran detalle por medio
del microscopio electrónico de barrido, que genera una imagen al
escanear la superficie de las muestras con un haz fino de electrones, en
lugar de proyectar electrones a través de las mismas.
Nuevos métodos de microscopía están mejorando nuestra capacidad
para observar microorganismos y moléculas. Dos ejemplos de estos
nuevos sistemas son la microscopía con focal de barrido por láser y la
microscopía con sonda de barrido.
PARTES DE UN MICROSCOPIO:
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REVÓLVER: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar,
cambiar los objetivos. La esfera se suele llamar CABEZAL Y contiene los
sistemas de lentes oculares (monoculares o binoculares (2 lentes)).
BRAZO: Es una pieza metálica de forma curvada que puede girar;
sostiene por su extremo superior al Tubo Óptico y en el inferior lleva
varias piezas importantes.
OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de
ésta.
PINZAS DE SUJECION: Parte mecánica que sirve para sujetar la
preparación. La mayoría de los microscopios modernos tienen las pinzas
adosadas a un carro con dos tornillos, que permiten un avance
longitudinal y transversal de la preparación.
CONDENSADOR: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la
preparación. El condensador de la parte de abajo también se llama
FOCO y es el que dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
TORNILLOS DE ENFOQUE: Macrométrico que aproxima el enfoque y
micrométrico que consigue el enfoque correcto.
BASE: Sujeción de todo el microscopio.
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Figura 1. Desviación de la luz por un prisma. Las líneas normales (líneas
perpendiculares a la superficie del prisma) se indican con puntos discontinuos. Al entrar
la luz en el vidrio, se desvía hacia la primera normal (el ángulo Ɵ 2 es inferior al Ɵ1).
Cuando la luz deja el vidrio y vuelve al aire, se desvía de la segunda normal (Ɵ 4 es
superior a Ɵ3). Como consecuencia, el prisma desvía la luz que pasa a su través.
que rayos paralelos de luz inciden sobre la lente, una lente convexa enfocará
estos rayos en un punto específico, el punto focal (F, en la Figura 2). La
distancia entre el centro de la lente y el punto focal se denomina distancia focal
(f, en la Figura2).
Figura 2. Función de una lente. Una lente funciona como un conjunto de
prismas. Los rayos de luz de una fuente distante se enfocan en un punto focal
F. El punto focal queda a una distancia/, distancia focal, del centro de la lente.
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El ojo humano no puede enfocar objetos a una distancia inferior a 25
cm, aproximadamente (Tabla 2.1). Esta limitación se puede superar
utilizando una lente convexa como lupa de aumento simple (o
microscopio) y manteniéndola cerca de un objeto. Una lupa de vidrio
ofrece una imagen clara a una distancia mucho más próxima y el
objeto parece mayor. La potencia de una lente está relacionada con la
distancia focal; una lente con una distancia focal corta aumentará un
objeto más que otra con una distancia focal más larga.
MICROSCOPIO ÓPTICO:
Los microbiólogos utilizan diversos microscopios ópticos en su trabajo; de campo
claro, de campo oscuro, de contraste de fases y de fluorescencia son los tipos de
microscopios más empleados. Los microscopios modernos son todos
compuestos. Es decir, la imagen aumentada que forma la lente del objetivo es
ampliada por una o más lentes adicionales.
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La parte curvada superior del brazo soporta el conjunto del cuerpo del
microscopio, al que se ajustan un portaobjetivos y uno o más oculares. Los
microscopios más modernos tienen un ocular para cada ojo y se denominan
binoculares. El cuerpo contiene una serie de espejos y prismas de manera que la
parte que contiene el ocular puede inclinarse para conseguir una mejor
observación (Figura 4). El portaobjetivos sostiene de tres a cinco objetivos con
lentes de diferente poder de aumento, que pueden girarse para colocar
cualquiera de los objetivos en posición de observación. Idealmente, un
microscopio debe ser parafocal —es decir, que mantenga la imagen enfocada,
aunque se cambie de objetivo.
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La trayectoria de la luz a través de un microscopio de campo claro se muestra en
la Figura 4. La lente del objetivo forma una imagen real aumentada en el
microscopio, y la lente del ocular magnifica aún más esta primera imagen.
Cuando se mira por un microscopio, la imagen de la muestra aumentada,
denominada imagen virtual, parece que se encuentra justo detrás de la platina, a
aproximadamente 25 cm. El aumento total se calcula multiplicando los aumentos
del objetivo y del ocular. Por ejemplo, si se utiliza un objetivo de 45x con un
ocular de 10x, el aumento total de la muestra será de 450x.
RESOLUCIÓN DE UN MICROSCOPIO:
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Las células y organismo vivos no coloreados pueden observarse simplemente
cambiando la forma en que se iluminan. Se enfoca un cono hueco de luz sobre
la muestra, de manera que no penetren en el objetivo rayos no reflejados y no
refractados. Solamente la luz que haya sido reflejada o refractada por la muestra
puede formar una imagen (Figura 5). De esta forma, el campo que rodea la
muestra aparecerá negro, mientras que el objeto quedará iluminado
intensamente (Figura 6a, b); como el fondo es oscuro, se denomina microscopio
de campo oscuro. Muchas estructuras internas pueden verse en
microorganismos eucariotas grandes (Figura 6b). Incluso, este tipo de
microscopio se emplea para identificar bacterias como Treponema pallidum, que
presenta un diámetro tan pequeño que difícilmente puede visualizarse mediante
un microscopio de campo claro (Figura 8 (7).
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El condensador de un microscopio de contraste de fases tiene un diafragma
anular, disco opaco con un anillo transparente fino, que produce un cono hueco
de luz (Figura 7). Al atravesar este cono de luz una célula, algunos rayos se
desvían debido a variaciones en la densidad y el índice de refracción de la
muestra, retrasándose en casi 'A de longitud de onda. La luz difractada se
enfoca para formar una imagen del objeto. Los rayos de luz no difractados
inciden sobre un anillo de fase en una placa cambiadora de la fase, disco óptico
especial situado en el objetivo, mientras que los rayos difractados (porque
pasaron por la muestra) no son retenidos por el anillo, atravesando la placa. Si el
anillo de fase se construye de tal forma que la luz no difractada pase a través del
mismo avanzando 'A de su longitud de onda, las ondas difractadas y no
difractadas tendrán una diferencia de fase de [h de la longitud de onda y se
anularán entre sí cuando se junten, formándose una imagen. El fondo, formado
por luz no difractada, es claro, mientras que el objeto no teñido aparece oscuro y
bien definido. Este tipo de microscopía se denomina microscopía de contraste de
fase oscura. A menudo, se emplean filtros de color para mejorar la imagen
(Figura 6c, <f). La microscopía de contraste de fases es especialmente útil para
detectar componentes bacterianos como endosporas y cuerpos de inclusión que
contienen poli-(3-hidroxibutirato, polimetafosfato, azufre u otras sustancias.
Estas sustancias son claramente visibles (Figura 6d) porque poseen índices de
refracción notablemente diferentes al del agua. Los microscopios de contraste de
fases se emplean también frecuentemente para estudiar las células eucariotas.
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RESULTADOS:
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Grupo Muestras Ocular Objetivo Aumento Descripción
observadas
N°2 Alga 10x 10x, 43x 100x, 430x Con el
mougeotia objetivo de
10x se logró
observar
varios
filamentos
del alga.
Con el
objetivo de
43x se pudo
presenciar el
diámetro de
un sol
filamento
Pulex 10x 10x 100x Con el
irritans objetivo de
10x pudo
presenciarse
parte de las
patas y la
cabeza de la
pulga.
Célula de 10x 10x 100x Con el
cebolla objetivo de
10x se pudo
presenciar
parte de la
pared
celular de la
cebolla
DISCUSIÓN DE RESULTADOS:
Alga mougeotia:
Pulex Irritans:
Con el objetivo de 10x (aumento de 100x) pudo verse la cabeza y algunas patas
de la pulga y no el cuerpo entero de la pulga como se presenció en otros
laboratorios.
Celula de cebolla:
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Con un objetivo de 10x (aumento de 100x) pudo notarse pequeñas paredes de
forma hexagonales que representarían la pared celular de la célula de la cebolla.
CONCLUSIONES:
RECOMENDACIONES:
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Al igual que la muestra Pulex Irritans se recomienda utilizar un objetivo mayor a
10x para poder ver detalladamente la pared celular de la cebolla.
CUESTIONARIO:
Modos de cálculo:
A . N =n sin θ
longitud de onda
Poder de resolución=
AN ( objetivo ) + AN (condensador )
Donde:
A.N: Apertura numérica
Fuente:
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FUENTES DE INFORMACIÓN:
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Históptica. (2009). Resolución en microscopios. 17/09/2018, de Históptica
Sitio web: https://histoptica.com/resolucion-en-microscopios/
MundoMicroscopio. (2004). El ocular del microscopio. 16/09/2018, de
MundoMicroscopio Sitio web: https://www.mundomicroscopio.com/ocular/
Históptica. (2009). Objetivos de microscopios. 17/09/2018, de Históptica
Sitio web: https://histoptica.com/objetivos-de-microscopios/
SalonHogar. (2015). Condensador. 17/09/2018, de SalonHogar Sitio web:
http://www.salonhogar.com/ciencias/microscopio/condensa.htm
Karl Wallulis. (2008). Que es un diafragma en un microscopio.
17/09/2018, de techlandia Sitio web:
http://www.cva.itesm.mx/biblioteca/pagina_con_formato_version_oct/apa.
htm
Francisco Rodriguez. (13/11/2016). El microscopio Óptico. 17/09/2018,
de Francisco Rodriguez Sitio web: https://www.franrzmn.com/el-
microscopio-optico/
Quizlet. (2015). Partes del microscopio. 17/09/2018, de Quizlet Sitio web:
https://quizlet.com/96177970/partes-del-microscopio-flash-cards/
Silvia Nancy y Alvarez Susana. (2015). Caracteristicas del trichoderma.
17/09/2018, de Biblioteca agroecologica Fundesyram Sitio web:
http://www.fundesyram.info/biblioteca.php?id=5127
ANEXOS:
1. RECONOCIMIENTO PREVIO:
Reconocer las parte importantes del microscopio.
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Observar los objetivos del microscopio y los aumentos de cada uno de
ellos.
Calcular con las diferentes combinaciones de lentes, los aumento que se
puede obtener en el microscopio.
2. ENFOQUE:
Buscar el objetivo de menor aumento, 10x y ponerlo en el tope del
revolver; el objetivo hará su ruido característico al estar en posición
correcta.
Acomodar la cara del espejo (plana para luz natural y cóncava para luz
artificial), a fin de iluminar la totalidad del campo que se observa por el
ocular.
Preparar el objeto que se va a observar (lámina)
Poner la lámina sobe la abertura de la platina, y centre el objeto que se
va a mirar.
Mirando por el costado bajar el objetivo utilizando el tornillo macrométrico
hasta que esté muy cerca de la lámina.
Mirando por el costado bajar el objetivo utilizando el tornillo macrométrico
hasta que esté muy cerca de la lámpara.
Mirar a través del microscopio y levantar el objetivo usando siempre el
tornillo macrométrico hasta ver la imagen.
Usar el tornillo micrométrico para enfocar con más nitidez.
Abrir o cerrar el diafragma para mejorar la calidad de la imagen.
3. PARA CAMBIAR DE AUMENTO:
Centrar cuidadosamente la parte que va a ser examinada.
Levantar el tubo portalentes por medio del tornillo macrométrico, cambiar
el objetivo
4. PARA OBSERVAR CON EL OBJETIVO DE INMERSIÓN:
Centrar la preparación y levantar el tubo portalentes por medio del tornillo
macrométrico y girar el revolver para colocar el objetivo de inmersión
(97x)
Colocar una gota de aceite de cedro sobre la preparación.
Mirando por el costado descender el objetivo con el tornillo macrométrico
hasta que toque la gota de aceite.
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Mirar por el ocular. Enfocar cuidadosamente utilizando el tornillo
macrométrico, afinando con el micrométrico.
Recordar que se mirar a través del microscopio requiere no solamente el
uso de los ojos, sino también de las dos manos. Unir el tornillo
micrométrico y la otra en la platina para mover la preparación.
5. CUIDADOS PARA EL USO DEL MICROSCOPIO:
El microscopio debe llevarse siempre agarrándolo con las dos manos,
una de ellas en el brazo, y la otra con la palma hacia arriba sosteniendo
la base o pie.
Los tornillos (macrométrico y micrométrico) y el revolver deben moverse
siempre con cuidado y sin apresuramiento, para evitar que los lentes se
rompan o caigan.
No se debe usar la luz solar directa como fuente de iluminación.
Nunca se debe bajar el tubo portalentes mientras se observe por él.
Para limpiar los lentes se deberá usar solo papel lente, puesto que otro
material puede rayarlos.
Ningún líquido debe mojar alguna pieza del microscopio. Las láminas que
se colocan en la platina se deberán estar siempre secas.
Después de usar el objetivo de inmersión se deberá limpiarlo con el papel
lente humedecido con alcohol isopropílico.
APÉNDICE:
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