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Todo lo que debería saber sobre balanzas

y pipetas
Dr. Matias Di Paolo
Capacitación y Aplicaciones

WEBINAR

2 de septiembre de 2021

Pipetas & Balanzas

Versión 1,2 – Septiembre 2021
M1-1
 Objetivos

• Reforzar los conceptos de precisión y exactitud aplicadas a

medidas de peso y volumen.
• Conocer los procedimientos para el uso correcto de:
• Balanzas de laboratorio
• Pipetas automáticas de desplazamiento directo y pistón de aire.
• Transmitir los cuidados y recomendaciones para el uso y
mantenimiento de balanzas analíticas y pipetas

Conceptos claves

Precisión
&
Exactitud

Pipetas & Balanzas

Versión 1,2 – Septiembre 2021
M1-2
 Precisión y exactitud
Exactitud: se refiere a la cercanía de una medición o estimación al valor
VERDADERO.

Precisión: (o varianza) se refiere al grado de cercanía de una serie de

medidas.
Exactitud Exactitud
Valor
“real” Precisión

Veracidad
Alta veracidad Alta veracidad
baja precisión Alta precisión

baja veracidad baja veracidad

↑ 𝐏𝐫𝐞𝐜𝐢𝐬𝐢ó𝐧 ↓ 𝐏𝐫𝐞𝐜𝐢𝐬𝐢ó𝐧 ↑ 𝐏𝐫𝐞𝐜𝐢𝐬𝐢ó𝐧 ↓ 𝐏𝐫𝐞𝐜𝐢𝐬𝐢ó𝐧 baja precisión Alta precisión
↑ 𝐞𝐱𝐚𝐜𝐭𝐢𝐭𝐮𝐝 ↑ 𝐞𝐱𝐚𝐜𝐭𝐢𝐭𝐮𝐝 ↓ 𝐞𝐱𝐚𝐜𝐭𝐢𝐭𝐮𝐝 ↓ 𝐞𝐱𝐚𝐜𝐭𝐢𝐭𝐮𝐝 precisión

Precisión y exactitud
Exacto
NO Preciso

Preciso ¿Cómo nos afecta?

NO Exacto

Exacto
Preciso

¿Como se ven la precisión

y exactitud en el pipeteo?

Pipetas & Balanzas

Versión 1,2 – Septiembre 2021
M1-3
 La Balanza de
laboratorio

Tipos de balanzas

Resoluciones típicas o valores de escala

Denominación Digito (g) Decimales

Ultramicrobalanzas 0,1 µg 0,0000001 7

Microbalanzas 1 µg 0,000001 6

Para experimentos en Semimicrobalanzas 0,01 mg 0,00001 5

reacciones a microescala
Balanzas analíticas 0,1 mg 0,0001 4

Balanzas de precisión
1 g a 1 mg 1 a 0,001 0a3
(granataria)

Capacidades de pesada de 100 a 200 g con una precisión de 0.001 g o de 2 kg con

una precisión de hasta 0.01 g.
Con un error de pesada aceptable en experimentos en cantidades de sustancias
generalmente no inferiores a 1 g.

Pipetas & Balanzas

Versión 1,2 – Septiembre 2021
M1-4
 TIPOS DE BALANZAS

Lugar de instalación
No exponer a
cambios de
Tratar con cuidado temperatura y
corrientes de aire

Al mover verificar el nivel

Mesada estable y
Ver condiciones ambientales de instalación anti vibraciones

Pipetas & Balanzas

Versión 1,2 – Septiembre 2021
M1-5
 Resumen
Condición Motivo
Ser estable, antivibraciones, antimagnética,
Mesada
antiestática
Condiciones ambientales controladas
Ubicación (humedad y temperatura), sin corrientes de
aire
Temperatura Estable (10-40°C), lejos de fuentes de calor
Humedad Constante (45-65%)
sin incidencia de luz directa, lejos de focos
Luz
luminosos (calor)
Lejos de corrientes de aire y lugares de
Aire
transito

Elementos contenedores para solidos

vidrio
plástico

Papel para pesar

Papel aluminio

porcelana Hacer dos pliegues, en forma de cruz,

para que tome una forma de pirámide.

Para pesar un sólido, se pondrá un recipiente de pesada (navecilla de pesada o pesa

sustancias) sobre el plato de la balanza y luego ajuste a cero presionando el botón de tara
correspondiente.

Pipetas & Balanzas

Versión 1,2 – Septiembre 2021
M1-6
 Antes de pesar

3°
1° 2°

nivelar
Escoger el material adecuado
Verificar la calibración

4°

No mojar pesar Ni calientes ni fríos

BALANZAS USUALES – descripción

Pipetas & Balanzas

Versión 1,2 – Septiembre 2021
M1-7
 Nivelar

Consideraciones
Absorción humedad Electroestática
Fuerza ascensional dinámica
evaporación

𝑷𝒆𝒔𝒐𝑭𝒓𝒊𝒐 > 𝑷𝒆𝒔𝒐𝑪𝒂𝒍𝒊𝒆𝒏𝒕𝒆 Ej. Utilizar un soporte metálico

Pesar a temperatura ambiente
Tapa o boca pequeña

Fuerza ascensional estática Gravitacional Magnetismo

Aire Vacío
𝑽𝒐𝒍𝒂𝒈𝒖𝒂 > 𝑽𝒐𝒍𝒑𝒆𝒔𝒂 ⇒ +𝒂𝒊𝒓𝒆 𝒅𝒆𝒔𝒑𝒍𝒂𝒛𝒂𝒅𝒐
+𝒂𝒊𝒓𝒆 𝒅𝒆𝒔𝒑𝒍𝒂𝒛𝒂𝒅𝒐 ⇒ +𝒇𝒖𝒆𝒓𝒛𝒂 𝒂𝒔𝒄𝒆𝒏𝒔𝒐𝒓𝒊𝒂𝒍 calibrar
Aislar base no magnética

Pipetas & Balanzas

Versión 1,2 – Septiembre 2021
M1-8
 ¿Cómo pesar?

Procedimiento
• Encender la balanza y dejar estabilizar
• Verificar la limpieza
• Cubrir con papel el área en donde se va a abrir el reactivo a pesar
• Realizar la pesada
• Verificar la limpieza de la balanza y del área de trabajo
• Apagar la balanza al finalizar
• Guardar el material pesado

Materiales necesarios
• Balanza
• Papel
• Pincel
• Espátula
• Guantes (cuando sea necesario)

Pipetas & Balanzas

Versión 1,2 – Septiembre 2021
M1-9
 Errores típicos
• No dejar estabilizar
• No cerrar las puertas
• No considerar los limites inferior y superior de pesos
• No escoger la balanza correcta

Elemento contenedor, no adecuado

Sustancias por fuera del recipiente

Procedimiento no adecuado
Balanza NO
nivelada para pesar líquidos

Unidades

Pipetas & Balanzas

Versión 1,2 – Septiembre 2021
M1-10
 Consejos y cuidados
• Balanza siempre conectada:
• DEJAR EN MODO STAND BY, para pesadas de forma inmediata. Así los mecanismos están atemperados.
• Antes de usarla por primera vez debes dejarla conectada entre 3 y 12 horas. Durante este tiempo se ajustan
parámetros y los valores de calibración.

• Colocar la muestra siempre en el centro del plato:

• Se evitan generar errores por desplazamiento de la muestra

• Tener paciencia y esperar a que estabilice

• Siempre las sustancias a temperatura ambiente
• Cerrar las compuertas (o abrir solo lo necesario)
• Limpiar luego de usar (si es necesario)

Cuidados y mantenimiento
Verificar
calibración vigente

Pipetas & Balanzas

Versión 1,2 – Septiembre 2021
M1-11
 Resumen balanzas
• Verificar que este en Stand by
• Verificar que este NIVELADA
• Verificar que la calibración este vigente
• De ser necesario chequear con una pesa certificada (si cuenta con una)
• Utilizar la balanza adecuada según lo que se desea pesar
• Verificar fecha y hora correcta (normas GMP)
• Verificar las unidades
• Escoger el recipiente para pesar adecuado
1. Colocar el recipiente y tarar
2. Pesar
3. Limpiar si es necesario

Pipetas automáticas

Pipetas & Balanzas

Versión 1,2 – Septiembre 2021
M1-12
 Pipetas no tan usuales

Pipetas de desplazamiento positivo

Medios muy viscosos, como soluciones de

proteínas altamente concentradas, aceites,
resinas y grasas.

Medios con alta presión de vapor como

alcoholes, éteres e hidrocarburos.

Medios que tienden a formar espuma,

como las soluciones tensioactivas.

Pipetas & Balanzas

Versión 1,2 – Septiembre 2021
M1-13
 PIPETAS AUTOMÁTICAS – DESCRIPCIÓN

Botón Pipetas automáticas típicas

Volumen a
dispensar

Resorte cuerpo Pistón

Pistón Resorte

O-ring

barril

boquilla

tip

Pipetas & Balanzas

Versión 1,2 – Septiembre 2021
M1-14
 Cuando parece simple hay que prestar más atención
33 participantes de siete laboratorios cada uno repitió el muestreo de 300 µL de agua destilada 10 veces ANTES y
DESPUÉS de leer el folleto, y se analizaron los efectos del entrenamiento sobre la veracidad y precisión de los resultados
del pipeteo.

La precisión técnica La veracidad del pipeteo

del personal del mejoró
laboratorio es tan significativamente
crítica como la después del
calidad de los entrenamiento,
instrumentos y independientemente de
equipos utilizados la experiencia

Antes Después Accred Qual Assur (2014) 19:459–463

Entrenamiento DOI 10.1007/s00769-014-1083-2

Cuando parece simple hay que prestar más atención

33 participantes de siete laboratorios C/U 10 veces agua destilada (300 µL) ANTES y DESPUÉS de leer el folleto y luego se
analizó exactitud y precisión de los resultados del pipeteo.

Asegúrese de operar el pulsador lentamente

y sin problemas.

1. Presione el botón pulsador hasta la primera posición de

parada.
2. Deje que el botón de empuje se mueva hacia arriba
suavemente hasta la posición de reposo. Sostenga la pipeta Cada nueva punta debe
3. Presione el botón pulsador hasta la primera posición de verticalmente y enjuagarse previamente (3
parada. sumerja la punta en el a 4 veces) con el líquido
líquido. que se va a pipetear.
4. Presione el botón de empuje a la posición del segundo
paso para eliminar el líquido restante de la punta. Accred Qual Assur (2014) 19:459–463
DOI 10.1007/s00769-014-1083-2

Pipetas & Balanzas

Versión 1,2 – Septiembre 2021
M1-15
 PIPETAS AUTOMÁTICAS – técnicas de pipeteo y puntas (TIP)

Procedimiento
1. Elegir la pipeta con el rango de volumen adecuado

3. colocar el tip adecuado

Transparentes 2 a 10 μl
Amarillas de 10 a 100 μl
Azules de 100 a 1000 μl

P10 (0.5 a 10 μl)

P20 (2 a 20 μl)
P200 (20 a 200 μl) Cuando utilice una
P1000 (200 a 1000 μl) pipeta, utilice siempre
P5000 (1000 a 5000 μl) una punta desechable

2. Seleccionar el
volumen a dispensar

Pipetas & Balanzas

Versión 1,2 – Septiembre 2021
M1-16
 Procedimiento
5. Bajar hasta el 1er tope

4. Seleccionar el volumen

Fuera del
liquido

Utilice la perilla de ajuste de volumen con una

fuerza ligera y nunca gire la perilla si siente
resistencia.

Procedimiento
6. Sumergir en el liquido con el 7. Suba suavemente
embolo en el primer tope hasta el tope superior

Pipetas & Balanzas

Versión 1,2 – Septiembre 2021
M1-17
 Procedimiento

8. Presione suavemente
hasta el 1er tope

9. Presione suavemente
hasta el 2do tope

Si ya hay líquido en el recipiente receptor, sostenga la pipeta de modo que la punta esté justo
por encima de su superficie o ligeramente por encima del fondo del recipiente

Procedimiento

11. Descartar el tip

10. Suba lentamente

hasta el tope superior

Pipetas & Balanzas

Versión 1,2 – Septiembre 2021
M1-18
 Resumen de como pipetear y cuidados
Carga Descarga

Tope superior

1er tope

2do tope

Rango de Profundidad de Tiempo de

volumen (µl) inmersión (mm) espera (s)
0,1-1 1-2 1
>1-100 2-3 1

mm
>100-1000 2-4 1
>1000 3-6 3

Verificar calibración vigente Volumetric Measurement in the Laboratory BRAND GMBH + CO KG

Errores usuales

Ajuste de la
punta o tip

Elegir bien el rango de la pipeta según

el volumen a dispensar

Pipetas & Balanzas

Versión 1,2 – Septiembre 2021
M1-19
 Errores usuales
Presión de vapor:
Densidad:
Error sistemático de pipeta de diferentes densidades de
líquido calibrada con agua
Error sistemático [%]

↑presión
Agua vapores
1 mg/µl Ácido sulfúrico
1,8 mg/µl goteo
Etanol
0,8 mg/µl

viscosidad:
Densidad [mg/µl]
50 µl de glicerol al 85%

Sustancias
pipeta
peligrosas:

Volumen [µl]
f
cono i
l
aerosol t
tip directo
r
o inverso
¿sangre? # pipeteo Desplazamiento positivo

Calibración - Ajuste
Calibración:
En el sentido más estricto consiste en determinar el volumen real entregado.
El procedimiento de calibración debe ser rápido y simple, eliminando posibles fuentes de error.

Ajuste:
Consiste en corregir la desviación de la medida valor del valor nominal.

Las pruebas para instrumentos de manipulación de líquidos se realizan de acuerdo

con las normas DIN EN ISO 8655
Los instrumentos volumétricos se prueban gravimétricamente.

La precisión requerida depende en gran medida de las circunstancias de cada aplicación, el

usuario debe determinar los intervalos para las pruebas de rutina.

Recomendamos una prueba de la pipeta accionada por pistón cada 3 a 12 meses

Pipetas & Balanzas

Versión 1,2 – Septiembre 2021
M1-20
 Calibración o Verificación
La norma ISO 8655 establece los criterios estándar por los cuales se debe calibrar
una pipeta
• Límites de error según el volumen
• Rango de volúmenes a ensayar (3)
• Número de ensayos por volumen (10)
• Controles ambientales para la medición

Calibración de pipetas a lo largo del tiempo

Error sistemático [%]

Calibración o Verificación
La norma ISO 8655 requiere que se prueben 3 volúmenes durante la calibración:
10%, 50% y 100% del volumen máximo de la pipeta.
Error sistemático

Límite de error superior

Límite de error inferior
La calibración de una pipeta no
Pipeta ideal es lineal desde el volumen
Pipeta Cliente mínimo al máximo.

% del volumen nominal

¿Con qué frecuencia debería calibrar?

• Lo decide el usuario según sus estándares de calidad sobre la frecuencia de calibración.
• Puede variar según el número de usuarios
• La frecuencia de uso de las pipetas, (como los tipos de líquidos dispensados)
• Tolerancias aceptadas.
• Es recomendable la calibración al menos una vez al año.

Pipetas & Balanzas

Versión 1,2 – Septiembre 2021
M1-21
 Calibración o Verificación
Elementos:

Agua Agua desionizada o destilada debe coincidir con la temperatura ambiente en 0,5 °C
Recipiente Adecuado, con tapa según volumen a medir
Termómetro Error en la medición de ± 0,2 °C
Termohigrómetro Que pueda asegurar la humedad relativa del aire entre 40 – 60 %

Balanza Volumen pipeta (µl) Resolución (mg) Repetibilidad, linealidad y

incertidumbre estándar (mg)
1 < V ≤ 10 0,001 0,002
10 < V ≤ 100 0,01 0,02
100 < V ≤ 1000 0,1 0,2
1 ml < V ≤ 50 ml 0,1 0,2

Todos los elementos de medición empleados deben encontrarse calibrados y certificados según la legislación
vigente

Calibración o Verificación
Pasos:
I. Verificar el tipo de instrumento y la capacidad nominal
1. II.
III.
Anotar el número de serie
Si el instrumento está sucio o dañado, desmóntelo y límpielo o repárelo
IV. Dejar el instrumento y accesorios en la sala de pruebas durante al menos 2 horas para ajustarla a la
temperatura ambiente.

I. Colocar una nueva punta de pipeta.

2. II. Enjuagar previamente la punta una vez con líquido de prueba (agua destilada / desionizada)
III. Verificar fugas

I. Determinar la temperatura del líquido para la prueba.

II. Colocar una nueva punta de pipeta.
III. Acondicionar el instrumento: aspire y libere el líquido de prueba cinco veces. (mejora la precisión de la
3. prueba)
IV. Tarar el recipiente vacío, descargar la pipeta. Leer y anotar el valor.
V. Repetir diez veces, con el valor ensayado.
VI. Repetir a valores 100%, 50% y 10% del volumen nominal.

Los valores obtenidos solo indicaran la masa (peso) del volumen pipeteado
Para obtener el volumen real, se deben realizar algunos cálculos

Pipetas & Balanzas

Versión 1,2 – Septiembre 2021
M1-22
 Calibración o Verificación
Cálculos:
Los valores obtenidos pesando durante la prueba gravimétrica son valores
de masa del volumen dispensado sin la corrección del empuje del aire.

La masa media (𝑋) se multiplica por un factor de corrección (Z, unidades de

μl/mg) para obtener el volumen medio (𝑉 ) entregado.

𝟏𝟎
Masa 𝑿𝒊 Volumen
promedio: 𝑿= promedio: 𝑽=𝑿∗𝒁
𝟏𝟎
𝟏

Desvío ∑𝟏𝟎 𝟐
𝒔=𝒁∗ 𝟏 𝑿𝒊 𝑿
estándar 𝟗
volumétrico:

[El factor Z combina la densidad del agua a la temperatura de prueba y los efectos de la presión atmosférica. Para una
temperatura típica de 21,5 ° C y una presión de aire de 1013 mbar (hPa), Z = 1,0032 μl / mg]

Calibración o Verificación
Verificación:

Coeficiente de
variación porcentual:
𝒔 ∗ 𝟏𝟎𝟎
𝑪𝑽 % =
𝑽
Exactitud:
𝑽 − 𝑽𝒏𝒐𝒎𝒊𝒏𝒂𝒍
𝑽% = ∗ 𝟏𝟎𝟎
𝑽𝒏𝒐𝒎𝒊𝒏𝒂𝒍

Pipetas & Balanzas

Versión 1,2 – Septiembre 2021
M1-23
 Resumen pipetas automáticas

• Verificar el estado general de las mismas

• Funcionamiento del pulsador (que se mueva con
libertad)
• Verificar la vigencia de la certificación
• Comprobar utilizando la balanza y pesando agua (de ser
necesario)
• Utilizar la pipeta adecuada según el volumen a dispensar
• Verificar el correcto ajuste del tip con la punta de la pipeta

Conclusiones

Tomarse un tiempo y leer los manuales

Controlar:
• El estado general

• Determinar el periodo de calibración

• Controlar la vigencia de la certificación

• Nivel de las balanzas

• Ajuste de las puntas en las pipetas automáticas

Pipetas & Balanzas

Versión 1,2 – Septiembre 2021
M1-24
 Pipetas & Balanzas
Versión 1,2 – Septiembre 2021
M1-25